專利名稱：牻牛兒草中老鶴草素的分離提純方法以及分離出的高純老鶴草素的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及櫳牛兒草中所含有有效活性成分的高純度的分離提純方法，以及利用該方法而得到的活性成分在功能性食品，食品原料，食品添加劑，健康食品，醫(yī)藥品，醫(yī)藥護(hù)膚品，以及化妝品等方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
猶牛兒草學(xué)名Geraniumnepakense Sweet sunsp. Thunbergii (Sieb. et Zucc.Hara)，是一種多年生的老鶴草屬的草本植物，在中國和日本都是具有代表性的藥草之一，一般在山野之間野生為主，取其上半部分自然干燥之后用水煎煮可以止瀉，防便秘，和清熱解毒等作用，由于效果很好，在民間也一直廣泛的使用。另外有文獻(xiàn)報(bào)道其用水和酒精分離出的精制液，可以用在止汗劑，化妝品，醫(yī)藥護(hù)膚品等或可以跟其他草藥一起共同使用。但是，這些方法基本都是用水和酒精對櫳牛兒草進(jìn)行抽提，用其抽提液或抽出物跟其他草藥混合使用，單獨(dú)使用櫳牛兒草中特定有效成分的功能的報(bào)道還沒有。另外對市場上買的干燥櫳牛兒草中的有效成分進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)其中含有的有效成分老鶴草素(Geraniin)是非常低的，這跟栽培方法，收割季節(jié)和干燥工序的有關(guān)系。用水或酒精抽提櫳牛兒草的時(shí)候，主要有效成分老鶴草素會(huì)隨著加熱時(shí)間而分解成為柯里拉京(Corilagin)，鞣花酸和沒食子酸，而導(dǎo)致老鶴草素的含量大大減少。另外在對老鶴草素和其分解物以及櫳牛兒草的活性研究中，發(fā)現(xiàn)老鶴草素是其中活性最高的。然而，至今為止還沒有公開報(bào)道對櫳牛兒草中真正有活性的老鶴草素的有效提純和應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種櫳牛兒草中老鶴草素的分離提純方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷。本發(fā)明是通過如下的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種櫳牛兒草中老鶴草素的分離提純方法，包括如下步驟將櫳牛兒草在含有有機(jī)酸的水溶液或酒精水溶液或甲醇水溶液中進(jìn)行提取步驟，然后采用超臨界抽出法、膜處理法、透析膜處理法、再結(jié)晶法、離心分離法、合成樹脂吸收法、離子交換樹脂法的至少一種進(jìn)行提純步驟，得到高純老鶴草素。所述提純步驟包括將提取液經(jīng)過合成樹脂法進(jìn)行處理后，以10-60ml/min的速度通過活性化色譜柱后，水洗；用體積濃度為10-40% v/v乙醇，以10-60ml/min的速度洗脫后回收；得到的溶析液使用逆滲透膜進(jìn)行膜處理，真空濃縮；用10-50%v/v乙醇，在1_15°C下通過結(jié)晶法進(jìn)行精制，結(jié)晶物回收后，再次用40-80%v/v乙醇進(jìn)行溶解，得到的溶解液通過真空濃縮干固，得到聞純老鶴早素。所述活性化色譜柱最好是HP-20型號的色譜柱，并且用質(zhì)量濃度4_10%Na0H水溶液以10-60ml/min的速度通液后水洗。然后，用質(zhì)量濃度4_10%H2S04水溶液以10_60ml/min的速度通液后水洗； 所述逆滲透膜優(yōu)選膜面積O. 6-1. 2m2，NaCl阻止率55-80% ；所述膜處理優(yōu)選在循環(huán)壓力8-15kg/cm2，循環(huán)流量5_10L/min的條件下進(jìn)行；所述高純老鶴草素中老鶴草素質(zhì)量含量為50-99. 9% ；所述有機(jī)酸可以是一元酸、二元酸或多元酸，如醋酸，酒石酸，蘋果酸，琥珀酸等，優(yōu)先多元酸，最好是檸檬酸；所述櫳牛兒草可以是干燥或者未干燥的，并且最好選擇葉子部分，因?yàn)檠芯堪l(fā)現(xiàn)該部位中老鶴草素含量最高。櫳牛兒草可采用野生，也可以栽培，最好是采用如下方法栽培環(huán)境溫度控制在10-20度左右，把櫳牛兒草的種子播種到定植用的容器中，定植4周后長成的5-8公分的幼苗移植到鋪有塑料薄膜的地里，按每列5-8株，株間15-25公分定植，取定植10-12周后的櫳牛兒草。采用上述方法栽培的櫳牛兒草在定植10-12周后收割為最佳，其葉子中含有的有效成分最聞。本發(fā)明可把櫳牛兒草中的有效成分老鶴草素在不被分解的情況下的提取出來，方法簡單易行，效率高。本發(fā)明還公開了上述方法制備的高純老鶴草素的應(yīng)用，研究發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明得到的高純老鶴草素可阻礙黑色素生成，因此可作為美白化妝品添加劑，起到美白效果；其還具有優(yōu)異的抗氧化效果，因此可作為功能性食品、保健食品、醫(yī)藥品、準(zhǔn)藥品中的添加劑；高純老鶴草素還具有抑制堿性磷酸酶(ALP)活性的效果，從而可應(yīng)用于消除狐臭、體臭的腋下除臭劑。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖
給出本發(fā)明較佳實(shí)施例，以詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)方案。實(shí)施例I櫳牛兒草的栽培日中氣溫約在15度左右的3-4月左右，把櫳牛兒草的種子3-5粒播種到定植用的杯子中，定植4周后長成的6公分的幼苗移植到鋪有塑料薄膜的地里(寬130公分，高30公分,長25米)，按每列6株,株間15公分定植。定植后每隔2周采摘5-6株,測定每株各部位的新鮮部分的重量和老鶴素的含量。結(jié)果見表1，根據(jù)表I的結(jié)果，各部位中，葉子中所含老鶴素的含量最高，另外，新鮮重量最多的是在定植11周后收割為最佳時(shí)機(jī)，葉子中含有有效成分最聞。表I定植后新鮮的櫳牛兒草重量和老鶴草素的含量(％)
權(quán)利要求
1.一種櫳牛兒草中老鶴草素的分離提純方法，其特征在于，包括如下步驟將櫳牛兒草在含有機(jī)酸的水溶液或酒精水溶液或甲醇水溶液中進(jìn)行提取步驟，然后采用超臨界抽出法、膜處理法、透析膜處理法、再結(jié)晶法、離心分離法、合成樹脂吸收法、離子交換樹脂法的至少一種進(jìn)行提純步驟，得到高純老鶴草素。
2.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述提純步驟包括將提取液經(jīng)過合成樹脂法進(jìn)行處理后，以10-60ml/min的速度通過活性化色譜柱后，水洗；用體積濃度為10-40%v/v乙醇，以10-60ml/min的速度洗脫后回收；得到的溶析液使用逆滲透膜進(jìn)行膜處理，真空濃縮；用10-50%v/v乙醇，在1_15°C下通過結(jié)晶法進(jìn)行精制，結(jié)晶物回收后，再次用40-80%v/v乙醇進(jìn)行溶解，得到的溶解液通過真空濃縮干固，得到高純老鶴草素。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述活性化色譜柱最好是HP-20型號的色譜柱，并且用質(zhì)量濃度4-10%Na0H水溶液以10_60ml/min的速度通液后水洗。然后，用質(zhì)量濃度4-10%H2S04水溶液以10-60ml/min的速度通液后水洗。
4.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述逆滲透膜優(yōu)選膜面積O.6-1. 2m2，NaCl阻止率55-80%。
5.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述膜處理優(yōu)選在循環(huán)壓力8-15kg/cm2，循環(huán)流量5-10L/min的條件下進(jìn)行。
6.如權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述高純度老鶴草素中老鶴草素質(zhì)量含量為50-99. 9%。
7.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述有機(jī)酸選自檸檬酸，醋酸，酒石酸，蘋果酸或琥珀酸的至少一種。
8.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述櫳牛兒草是干燥或者未干燥，選擇葉子部分。
9.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，櫳牛兒草采用如下方法栽培環(huán)境溫度控制在10-20度左右，把櫳牛兒草的種子播種到定植用的容器中，定植4周后長成的5-8公分的幼苗移植到鋪有塑料薄膜的地里，按每列5-8株，株間15-25公分定植，取定植10-12周后的櫳牛兒草。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述方法制備的高純老鶴草素在美白化妝品、功能性食品、保健食品、醫(yī)藥品、準(zhǔn)藥品、腋下除臭劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供一種牻牛兒草中老鶴草素的分離提純方法，包括如下步驟將牻牛兒草在含有機(jī)酸的水溶液或酒精水溶液或甲醇水溶液中進(jìn)行提取，然后采用超臨界抽出法、膜處理法、透析膜處理法、再結(jié)晶法、離心分離法、合成樹脂吸收法、離子交換樹脂法等至少一種進(jìn)行提純步驟，得到高純老鶴草素。本發(fā)明可把牻牛兒草中的有效成分老鶴草素在不被分解的情況下的提取出來，方法簡單易行，效率高。分離出的高純老鶴草素因具有超強(qiáng)的抗氧化效果，阻礙黑色素形成效果，特定酶的活性阻礙效果，和具有SOD活性作用效果等功能，可廣泛應(yīng)用于美白化妝品、功能性食品、保健食品、醫(yī)藥品、準(zhǔn)藥品、腋下除臭劑等。
文檔編號A61Q15/00GK102924541SQ20121044545
公開日2013年2月13日 申請日期2012年11月8日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月8日
發(fā)明者鐘旭東, 市龍?zhí)?申請人:食味添(上海)科技貿(mào)易有限公司