專利名稱：：酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子在制備美容化妝品中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明提供了酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的新用途，尤其是公開了酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子在制備美容化妝品中的用途，同時(shí)還提供了其生產(chǎn)工藝，屬于生物美容制品
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：本發(fā)明涉及的酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(AcidFibroblastGrowthFactor,簡(jiǎn)稱aFGF)，是由機(jī)體多種細(xì)胞所分泌的一種促細(xì)胞分裂生長(zhǎng)因子。aFGF能刺激和調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、成肌細(xì)胞、成骨細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞等多種起源于中胚層、神經(jīng)外胚層的細(xì)胞分化增殖，在胚胎發(fā)育、組織愈合中起重要作用。目前aFGF的研究或應(yīng)用均局限在促進(jìn)損傷(尤其是神經(jīng)損傷)的修復(fù)方面，尚未見有其在美容方面的研究或應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明公開了一種酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子在制備關(guān)容化妝品中的用途。本發(fā)明還提供了由酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子制成的美容化妝品，具有美容護(hù)膚的效果。本發(fā)明的技術(shù)解決方案包括1、以酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子為主要活性成分，采用特殊的真空冷凍干燥工藝及常規(guī)的美容化妝品生產(chǎn)工藝制成化妝品。2、本發(fā)明還提供了一種含有aFGF為主要活性成分的美容化妝品(重量份數(shù)比)aFGF110萬AU活性穩(wěn)定劑4~8g活性促進(jìn)劑0.33g蛋白酶抑制劑0.10.6g透皮吸收促進(jìn)劑0.l2g所用的蛋白酶抑制劑為硼酸亮氨酸、硼酸纈氨酸、硼酸丙氨酸、N-乙酰半胱氨酸中的任意一種。所用的透皮吸收促進(jìn)劑為月桂氮卓酮、丙二醇、巰基乙酸鈣中的任意一種。所用的活性穩(wěn)定劑為透明質(zhì)酸、甘露醇、右旋糖苷的任意一種；所用的活性促進(jìn)進(jìn)劑為水溶性膠原蛋白。所述的美容化妝品的制備方法，包括以下步驟在aFGF中加入活性穩(wěn)定劑、活性促進(jìn)劑、蛋白酶抑制劑及透皮吸收促進(jìn)劑的任意一種或多種，用純化水配制成水溶液，再采用真空冷凍干燥工藝制成凍干粉。本發(fā)明的技術(shù)方案中涉及以下成分活性成分aFGF活性穩(wěn)定劑透明質(zhì)酸、甘露醇、右旋糖苷；活性促進(jìn)劑水溶性膠原蛋白；蛋白酶抑制劑硼酸亮氨酸、硼酸纈氨酸、硼酸丙氨酸、N-乙酰半胱氨酸；透皮吸收促進(jìn)劑佐恩(月桂氮卓酮，Azone)、丙二醇、巰基乙酸鈣。在上述的活性成分中加入活性穩(wěn)定劑、活性促進(jìn)劑、蛋白酶抑制劑及透皮吸收促進(jìn)劑中的任意一種或多種，用低溫純化水配制成水溶液，并置于冰浴中，待分裝。將上述配制而得的水溶液，分裝到西林瓶中，置于真空冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行凍干后即得。專用溶媒的制造透皮吸收促進(jìn)劑0.12份蛋白酶抑制劑(U0.6份活性穩(wěn)定劑4~8份丙三醇2~6份pH5.07.4PBS溶液加至100份按上述比例將透皮吸收促進(jìn)劑、蛋白酶抑制劑、活性穩(wěn)定劑混合，用PBS溶液溶解，加入丙三醇，混勻，分裝，加塞，用流通蒸汽滅菌后即得。凍干粉的制劑制造按上述比例將活性成分、活性穩(wěn)定劑、活性促進(jìn)劑和/或活性穩(wěn)定劑和域蛋白酶抑制劑和/或透皮吸收促進(jìn)劑，用低溫純化水配制成水溶液，并置于冰浴中；將上述配制而得的水溶液，分裝到西林瓶中，將膠塞半加塞，置于真空冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行凍干。凍干工藝及條件為開啟真空冷凍干燥機(jī)，對(duì)制品進(jìn)行預(yù)冷，將制品溫度降至-60°C，降溫時(shí)間為4-5小時(shí)。啟動(dòng)真空泵，將箱內(nèi)真空度抽至0.3Mbar。加溫，升華，升華時(shí)間為14-18小時(shí)，升華完畢，壓塞，箱內(nèi)充入無菌氣體，開箱，取出制品，軋蓋，入庫。產(chǎn)品形式為凍干粉加專用溶媒，使用時(shí)需用專用溶媒作溶解劑。專用溶媒的配方及工藝為將透皮吸收促進(jìn)劑、蛋白酶抑制劑、活性穩(wěn)定劑，用pH5.07.4PBS溶液溶解，加入丙三醇，混勻，分裝，加塞，用10(TC流通蒸汽滅菌30分鐘后即得?；钚苑€(wěn)定劑可用其中的一種或幾種，但三種活性穩(wěn)定劑及一種活性促進(jìn)劑同時(shí)使用效果最佳。透皮吸收促進(jìn)劑及蛋白酶抑制劑在組方中每次一般只用其中的一種，也可幾種合用，其效果類似。以下實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明的美容效果1材料活性成分aFGF，為市售品，也可采用基因工程法自行生產(chǎn)。使用前要進(jìn)行活性測(cè)定，aFGF活性測(cè)定采用的是細(xì)胞增殖/MTT法?；钚苑€(wěn)定劑透明質(zhì)酸、甘露醇、右旋糖苷。市售，化學(xué)純?；钚源龠M(jìn)劑水溶性膠原蛋白，市售，純度大于95%。蛋白酶抑制劑硼酸亮氨酸、硼酸纈氨酸、硼酸丙氨酸、N-乙酰半胱氨酸，市售，化學(xué)純。透皮吸收促進(jìn)劑佐恩(月桂氮卓酮，Azone)、丙二醇、巰基乙酸鈣。市售，化學(xué)純。蛋白酶胃蛋白酶、胰蛋白酶，市售，化學(xué)純。2方法2.1凍干粉制劑的制造參見上文2.2專用溶媒的制造參見上文2.3抗蛋白酶降解試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)品將上述制造的含有活性成分的凍干粉制劑用專用溶媒溶解，制成水溶液，并測(cè)定其活性成分的活性，以此活性值作為100%。對(duì)照品除不含有蛋白酶抑制劑外，其余同實(shí)驗(yàn)品。用純化水制成水溶液，并測(cè)定其活性成分的活性，以此活性值作為100%。蛋白酶溶液將胃蛋白酶及胰蛋白酶，用純化水配成含1%胃蛋白酶及1%的胰蛋白酶的混合水溶液。分別取實(shí)驗(yàn)品及對(duì)照品各20ml，分別加入蛋白酶溶液0.5ml，混勻，置37'C水浴中孵育，分別于不同的時(shí)間取樣，進(jìn)行活性測(cè)定。2.4穩(wěn)定性試驗(yàn)取上述制得的含有活性成分的凍干粉制劑，分別置于室溫及7'C冰箱中，分別于放置不同的時(shí)間后取樣，進(jìn)行含量及活性測(cè)定。2.5美容效果試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)品含有aFGF的凍干制劑空白對(duì)照品不含aFGF的凍干制劑市售對(duì)照品市售某品牌嫩膚去鈹美容產(chǎn)品實(shí)驗(yàn)品及空白對(duì)照品，在使用前均用專用溶媒溶解，之后，涂布于面部皮膚，并用特定的方法(已申報(bào)實(shí)用新型專利)進(jìn)行皮膚導(dǎo)入。分別進(jìn)行如下美容效果試驗(yàn)2.5.1嫩膚、去皺試驗(yàn)選取4055歲老年人120人，男女各半。隨機(jī)分為3組，每組40人，男女各半。每組分別使用上述實(shí)驗(yàn)品或?qū)φ掌罚B續(xù)2個(gè)月，然后分別評(píng)價(jià)其嫩膚、去皺的美容效果。2.5.2祛斑試驗(yàn)選取2035歲面部有色斑的女性120人，隨機(jī)分為3組，每組40人。每組分別使用上述實(shí)驗(yàn)品或?qū)φ掌罚B續(xù)2個(gè)月，然后分別評(píng)價(jià)其祛斑效果。2.5.3祛痘試驗(yàn)選取1825歲面部有青春痘的人80人，男女各半，隨機(jī)分為2組，每組40人，男女各半。每組分別使用上述各實(shí)驗(yàn)品或空白對(duì)照品，連續(xù)2個(gè)月，然后分別評(píng)價(jià)其祛痘效果。2.5.4安全性試驗(yàn)在上述嫩膚去鈹試驗(yàn)、祛斑試驗(yàn)及祛痘試驗(yàn)中，同時(shí)觀察其對(duì)皮膚的刺激性、過敏性及其它不良反應(yīng)。3結(jié)果3.1凍干粉制劑的制造結(jié)果經(jīng)上述工藝制造出來的凍干粉制劑，外觀呈疏松的塊狀或粉狀，呈白色或類白色。加水極易溶解，溶解后呈澄清透明的溶液。經(jīng)微生物學(xué)檢測(cè)，未檢出活的微生物，為無菌溶液。超過國(guó)家有關(guān)化妝品的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。3.2專用溶媒的制造結(jié)果經(jīng)上述工藝制造出來的專用溶媒，外觀澄清透明。經(jīng)微生物學(xué)檢測(cè)，未檢出活的微生物，為無菌溶液。超過國(guó)家有關(guān)化妝品的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。3.3抗蛋白酶降解試驗(yàn)結(jié)果表1抗蛋白酶降解試驗(yàn)結(jié)果組另'J37'C不同孵育時(shí)間后的活性保留值(％)10分鐘30分鐘1小時(shí)2小時(shí)3小時(shí)實(shí)驗(yàn)組10096.388.779.872.5對(duì)照組19.211.41.800由上表可以看出，實(shí)驗(yàn)組在37'C溫度下與胃蛋白酶及胰蛋白酶共同作用30分鐘后，其活性基本不下降，作用1小時(shí)后，其活性仍降低很少。而對(duì)照組在與蛋白酶共同作用10分鐘后，其活性即只剩原來的五分之一以下。結(jié)果說明，本發(fā)明之制品具有良好的抗蛋白酶降解作用。而用本品進(jìn)行美容護(hù)膚時(shí)，制品在皮膚上的停留并導(dǎo)入的時(shí)間不超過IO分鐘，故本發(fā)明之制品的抗蛋白酶降解作用的時(shí)間是足夠的。3.4穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表2穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果項(xiàng)目存放時(shí)間(月)361218243036aFGF含量保留值(W常溫99.799.899.499.398.697.398.07'C99.799.899.599.899.099.399.1aFGF活性保留值(50常溫10010099.296.692.372.363.57'C10010010098.792.283.879.2從上表可以看出，本發(fā)明之制品，在常溫放置及7'C下放置至36個(gè)月時(shí)，其含量均未見明顯變化；在常溫下放置至18個(gè)月時(shí)，其活性未見明顯變化；在7'C下放置至24個(gè)月時(shí)，其活性仍未見明顯變化。結(jié)果表明，本發(fā)明之制品，可在常溫下保存18個(gè)月，如置于7'C以下，則保存時(shí)間更長(zhǎng)，可長(zhǎng)達(dá)2年以上。3.5美容效果試驗(yàn)結(jié)果3.5.1嫩膚、去皺試驗(yàn)結(jié)果表3嫩膚、去皺試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>由上表可以看出，aFGF有良好的嫩膚去皺效果；不含有aFGF的空白對(duì)照組，沒有嫩膚去鈹?shù)男Ч?；aFGF組的美容效果均顯著優(yōu)于市售對(duì)照品組。3.5.2祛斑試驗(yàn)結(jié)果表4祛斑試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>由上表可以看出，aFGF組具有較好的祛斑效果。3.5.3祛痘試驗(yàn)結(jié)果表5祛痘試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>由上表可以看出，aFGF組具有較好的祛痘效果。3.6安全性試驗(yàn)結(jié)果表6安全性試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>經(jīng)320人使用后，未發(fā)現(xiàn)對(duì)皮膚有刺激性，只發(fā)現(xiàn)7人面部輕度過敏，有2人局部發(fā)癢或潮紅。本發(fā)明將aFGF應(yīng)用于美容時(shí)，解決了三個(gè)關(guān)鍵性難題，否則其將無法實(shí)際應(yīng)用。即(1)aFGF在常溫下及普通化妝品劑型中難以保持其生物學(xué)活性。在常溫下放置短時(shí)間后，其即失去其生物學(xué)活性，故其生產(chǎn)、運(yùn)輸、保存都成為不可逾越的鴻溝，使其實(shí)際應(yīng)用難以實(shí)現(xiàn)。另外，其發(fā)揮生物學(xué)活性需特定的pH值、離子強(qiáng)度及溫度，故制成霜?jiǎng)┑瘸Ｒ娀瘖y品劑型，其將不具有任何生物學(xué)活性。(2)aFGF易被蛋白酶降解而失去活性。aFGF的化學(xué)本質(zhì)為蛋白多肽類，人皮膚表面存在大量的蛋白酶，在aFGF接觸皮膚后，會(huì)很快被皮膚表面的蛋白酶降解而失去活性。(3)aFGF難以透皮吸收。aFGF均是大分子生物活性物質(zhì)，在正常情況下，其難以透過皮膚進(jìn)行吸收。本發(fā)明成功地解決了上述難題，使aFGF應(yīng)用于美容成為現(xiàn)實(shí)。本發(fā)明的有益效果在于將aFGF用于外用美容，通過補(bǔ)充促進(jìn)細(xì)胞代謝和增殖的生物活性因子，從根本上改善皮膚的生理狀態(tài)，促進(jìn)皮膚組織的修復(fù)和代謝；使皮膚異常細(xì)嫩年輕；淡化色斑，平復(fù)皺紋；減輕日曬對(duì)皮膚的損傷。故嫩膚美容效果顯著，且安全可靠，無副作用。將透皮吸收促進(jìn)劑應(yīng)用于aFGF的美容組方中，解決了aFGF難以透皮吸收的問題，顯著地提高了其美容效果。將蛋白酶抑制劑應(yīng)用于aFGF的美容組方中，解決了aFGF易被蛋白酶降解的問題，保持了aFGF的活性，促進(jìn)了aFGF的吸收，顯著地提高了其嫩膚美容的效果。將aFGF制成凍干粉制劑，解決了其在常溫下易失去活性的問題。該配方制成的凍干粉劑，可在常溫下可保持活性18個(gè)月；在07。C冷庫中，可保持活性2年以上。故可常溫運(yùn)輸和保存，如置于冷庫或冰箱中保持，效果更佳。解決了aFGF生產(chǎn)、運(yùn)輸和保存時(shí)無法保持活性的問題，使aFGF的實(shí)際應(yīng)用成為現(xiàn)實(shí)。其制造工藝合理，適合于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。具體實(shí)施例方式通過以下實(shí)施例進(jìn)一歩舉例描述本發(fā)明，并不以任何方式限制本發(fā)明，在不背離本發(fā)明的技術(shù)解決方案的前提下，對(duì)本發(fā)明所作的本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易實(shí)現(xiàn)的任何改動(dòng)或改變都將落入本發(fā)明的權(quán)利要求范圍之內(nèi)。主要材料活性成分aFGF?？勺孕兄圃欤部赏赓徺彨@得。其自行制造的主要工藝過程為將aFGF的基因工程菌在發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，離心棄菌體取上清，鹽析。離心，取沉淀。將沉淀復(fù)溶，用層析法進(jìn)行純化，收集aFGF峰，置-2(TC低溫冰柜中凍存。取樣進(jìn)行純度及活性測(cè)定?；钚苑€(wěn)定劑透明質(zhì)酸、甘露醇、右旋糖苷，市售，化學(xué)純?；钚源龠M(jìn)劑水溶性膠原蛋白，市售，純度大于95%。蛋白酶抑制劑硼酸亮氨酸、硼酸纈氨酸、硼酸丙氨酸、N-乙酰半胱氨酸，市售，化學(xué)純。透皮吸收促進(jìn)劑佐恩(月桂氮卓酮，Azone)、丙二醇、巰基乙酸鈣。市售，化學(xué)純。實(shí)施例l:量取aFGF12萬AU、透明質(zhì)酸16g、甘露醇38g、右旋糖苷38g、水溶性膠原蛋白l6g、純化水加至100ml;將上述各成分溶解于低溫純化水中，分裝，凍干，即得。實(shí)施例2:量取aFGF23萬AU、透明質(zhì)酸16g、甘露醇38g、右旋糖苷388g、水溶性膠原蛋白l6g、純化水加至100ml，將上述各成分溶解于低溫純化水中，分裝，凍干，即得。實(shí)施例3:量取aFGF45力'AU、甘露醇38g、右旋糖苷38g、水溶性膠原蛋白16g、純化水加至100ml，將上述各成分溶解于低溫純化水中，分裝，凍干，即得。實(shí)施例4:量取aFGF67萬AU、甘露醇38g、右旋糖苷38g、透明質(zhì)酸16g、純化水加至100ml，將上述各成分溶解于低溫純化水中，分裝，凍干，即得。實(shí)施例5:量取aFGF89萬AU、甘露醇38g、水溶性膠原蛋白16g、透明質(zhì)酸16g、純化水加至100ml，將上述各成分溶解于低溫純化水中，分裝，凍干，即得。實(shí)施例7:量取aFGF10萬AU、甘露醇38g、透明質(zhì)酸16g、純化水加至100ml，將上述各成分溶解于低溫純化水中，分裝，凍干，即得。權(quán)利要求1、酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子在美容化妝品中的應(yīng)用。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的美容化妝品，其特征在于:酸性成纖維細(xì)胞刺激因子110萬AU活性穩(wěn)定劑48g活性促進(jìn)劑0.33g蛋白酶抑制劑0.10.6g透皮吸收促進(jìn)劑0.l2g。3、權(quán)利要求2所述的美容化妝品，其特征在于所述的蛋白酶抑制劑為硼酸亮氨酸、硼酸纈氨酸、硼酸丙氨酸、N-乙酰半胱氨酸中的任意一種。4、權(quán)利要求2所述的美容化妝品，其特征在于所述的透皮吸收促進(jìn)劑為月桂氮卓酮、丙二醇、巰基乙酸鈣中的任意一種。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述美容化妝品的制備方法，包括以下步驟酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子中加入活性穩(wěn)定劑、活性促進(jìn)劑、蛋白酶抑制劑、透皮吸收促進(jìn)劑中的任意一種或多種，用純化水配制成水溶液，再采用真空冷凍干燥工藝制成凍干粉；冷凍干燥工藝及條件為對(duì)制品進(jìn)行預(yù)冷，使其降至-6(TC，降溫時(shí)間為4-5小時(shí)；抽真空至0.3Mbar;加溫，升華，升華時(shí)間為14-18小時(shí)；至制品中的水分升華完畢，壓塞，箱內(nèi)充入無菌氣體。全文摘要本發(fā)明公開了一種酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子在制備美容化妝品中的用途，同時(shí)還提供了其生產(chǎn)工藝。本發(fā)明利用生物技術(shù)美容，將酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子用于外用美容，通過補(bǔ)充促進(jìn)表皮細(xì)胞代謝和增殖的生物活性因子，從根本上改善皮膚的生理狀態(tài)，促進(jìn)表皮組織的修復(fù)和代謝；可使皮膚異常細(xì)嫩年輕，淡化色斑，平復(fù)皺紋，減輕日曬對(duì)皮膚的損傷，嫩膚美容效果顯著，且安全可靠，無副作用。文檔編號(hào)A61Q19/00GK101548935SQ20091006695公開日2009年10月7日申請(qǐng)日期2009年5月15日優(yōu)先權(quán)日2009年5月15日發(fā)明者馮來坤申請(qǐng)人:馮來坤