專利名稱：包含甲殼質(zhì)衍生物的接觸性透鏡護(hù)理組合物的制作方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及處理接觸性透鏡用產(chǎn)品領(lǐng)域。此發(fā)明特別涉及對(duì)接觸性透鏡的清潔性能的增加，和改善透鏡在佩戴于眼中時(shí)的舒適度。
在本發(fā)明之前已有多種組合物和方法被用于清潔接觸性透鏡。此前的組合物和方法包含清潔劑如表面活性劑、螯合劑和蛋白水解酶。本發(fā)明特別涉及從接觸性透鏡上清除蛋白質(zhì)沉淀。此類沉淀的首要成分是溶菌酶。
溶菌酶是人類淚液中的主要蛋白質(zhì)組分之一。它是扮演殺微生物劑角色的酶，其通過降解微生物細(xì)胞壁N-乙酰胞壁酸和N-乙酰葡糖胺單元間的糖苷連接而起作用。因此，溶菌酶在人類淚液中的存在是對(duì)抗眼部感染的自然防御機(jī)制。不幸的是，當(dāng)接觸性透鏡被放置于眼中時(shí)，透鏡被淚液持續(xù)的沖洗會(huì)引起溶菌酶在透鏡上的沉淀。溶菌酶是一種蛋白質(zhì)，接觸性透鏡上的溶菌酶沉淀一般由蛋白質(zhì)、脂類和其他材料的混合物組成。這些沉淀將變成結(jié)合于透鏡之上，從而很難清除。
蛋白水解酶(如胰酶制劑)用于清除接觸性透鏡的蛋白沉淀還算有效。然而，考慮到成本、方便程度和其他因素，采用包含蛋白水解酶的清潔性組合物被一些接觸性透鏡佩戴者認(rèn)為是不受歡迎的接觸性透鏡處理方法。因此，過去十年中，蛋白水解酶產(chǎn)品在清除接觸性透鏡蛋白沉淀方面的應(yīng)用大大減少了。被用作接觸性透鏡每日性清潔和消毒的“多用途”溶液中所包含的配位劑大量取代了這些產(chǎn)品。例如，美國專利號(hào)5,858,937(Richard等人)描述了多用途溶液中的聚膦酸酯在清除蛋白沉淀中的應(yīng)用，而美國專利號(hào)5,370,744(Chowhan等人)描述了羧酸鹽(如檸檬酸鹽)用于同一目的的應(yīng)用。雖然含有此類配位劑的多用途溶液獲得了商業(yè)上的成功，但對(duì)改良的溶液尤其是能更有效防止和清除蛋白沉淀的溶液的需求還存在。本發(fā)明致力于滿足這一需求。
本發(fā)明基于以下發(fā)現(xiàn)，即甲殼質(zhì)和甲殼質(zhì)衍生物通過在透鏡上形成酶-底物復(fù)合物而能有效地從接觸性透鏡上清除蛋白沉淀。還發(fā)現(xiàn)甲殼質(zhì)和其衍生物增強(qiáng)接觸性透鏡的光滑度，防止角膜上皮細(xì)胞干燥。所有這些功能提高了接觸性透鏡佩戴者的眼部舒適度。
進(jìn)一步了解關(guān)于甲殼質(zhì)與其衍生物的背景，下列出版物可供參考Yamada，H and Imoto，T.″A convenient synthesis of glycol chitin，a substrate of lysozyme″，Carbohydrate Research，92，160-162(1981).
Senju，R.and Okimasu，S.″Studies on Chitin.Part I.On theglycol ation of Chitin and the Chemical Structure of glycolchitin″，J.of the Agricultural Chemical Society of Japan，23，432-437(1950).
Kurita，K.″Chemical Modification of Chitin″，J.of SyntheticOrganic Chemistry Japan)，42，567-574(1984).
Tokura，S.，Nishi，N.，Tsutaumi，A.，and Somori，0.″Studies onChitin VIII.Some Properties of Water Soluble ChitinDerivatives″，Polymer J，15，485-489(1983).
Nishimura，S-I.，Nishi，N.，and Tokura，S.″Bioactive ChitinDerivatives.Activation of Mouse-peritoneal macrophages by O-(Carboxymethyl)Chitins″，Carbohydrate Research，146，251-258(1986).
Hjerde，R.J.N.，Varum，K.M.，Grasdalen，H.，Tokura，S.，andSmidsrod，O.″Chemical composition of O-(carboxymethyl)-chitins in relation to lysozyme degrdation rates″，CarbohydratePolymers，34，131-139(1997).
Stokke，B.T.，Varum，K.M.，Holme，H.K.，Hjerde，R.J.N.，andSmidsrod，O.″Sequence specificities for lysozymedepolymerization of partially N-acetylated chitosans″，Can.J.Chem.，73，1972-1981(1995).
Nordtveit，R.J.，Varum，K.M.，and Smidsrod，O.″Degradationof fully water-soluble，partially N-acetylated chitosans withlysozyme″，Carbohydrate Polymers，23，253-260(1994).
Dung，P.，Milas，M.，Rnaudo，M.，and Desbrieres，J.″Watersoluble derivatives obtained by controlled chemicalmodifications of chitosan″，Carbohydrate Polymers，24，209-214(1994).
Kristiansen，A.，Varum，K.M.，and Grasdalen，H.″Competitivebinding of highly de-N-acetylated chitosans and N.N′-diacetylchitobiose to lysozyme from chickrn egg whitesyudiedby1H NMR spetroscopy″，Carbohydrate Research，289，143-150(1996).
Hayshi，K.，Yamasaki，N.and Funatsu M.″Muramidase catalyzedhydrolysis of glycol chitin″Agr.Biol.Chem.，28，517-523(1964).
Hayshi，K.，F(xiàn)ujimoto，N.，Kugimiya，M.and Funatsu M.，″Theenzyme-substrate complex of lysozyme with chitin derivatives″，J.Biochemistry，65，401-405(1969).
Bernkop-Schnurch，A.and Kast，C.E.，″Chemically modifiedchitosans as enzyme inhibitors″，Adv.Drug Deli.Rev.52，127-137(2001).
甲殼質(zhì)是在諸如蝦、蟹和龍蝦的甲殼類動(dòng)物的殼中發(fā)現(xiàn)的天然產(chǎn)生的生物聚合物，可用強(qiáng)酸性或強(qiáng)堿性的水溶液從這些殼中分離。既然此類來源制得的甲殼質(zhì)在中性pH的水溶液中無法正常溶解，為了商業(yè)應(yīng)用，多種化學(xué)修飾就被用以增強(qiáng)甲殼質(zhì)的溶解性。例如，甲殼質(zhì)可去乙酰基化的化得到去乙?；募讱べ|(zhì)，它在組合物水溶液中相對(duì)可溶。水溶性經(jīng)改良的甲殼質(zhì)衍生物也可通過乙二醇化、糖化、羧甲基化和該領(lǐng)域技術(shù)人員所知的其它類似化學(xué)修飾的方法加以制備。
既然甲殼質(zhì)是N-乙酰-D-葡糖胺單體通過β-(1→4)糖苷鍵連接形成的線性多聚物，和與微生物細(xì)胞壁中發(fā)現(xiàn)的多糖具有結(jié)構(gòu)相似性，那么它就容易與溶菌酶結(jié)合，而在通過β-(1→4)糖苷鍵連接的N-乙酰葡糖胺單元處降解。水性基質(zhì)中可溶的甲殼質(zhì)衍生物如乙二醇甲殼質(zhì)因此而被用作定量測定溶菌酶活性的底物。
甲殼質(zhì)與甲殼質(zhì)衍生物可能的工業(yè)用途在幾篇以前的專利出版物中得到了闡述。那些出版物指出甲殼質(zhì)和它的衍生物可以用作清潔劑和化妝品的成分，以及用作遞送藥物至眼部和其他組織的載體。已有建議提出由甲殼質(zhì)或甲殼質(zhì)衍生物制成接觸性透鏡。進(jìn)一步了解關(guān)于此類甲殼質(zhì)和甲殼質(zhì)衍生物以前的應(yīng)用和建議的應(yīng)用的相關(guān)背景，下列專利出版物可用作參考美國專利號(hào)4,826,826(Conti)；歐洲專利申請公開號(hào)0 356 060(Mosbey)；國際公開號(hào)WO 00/60038(Cantoro)；國際公開號(hào)WO 00/30609(Gurny等人)；
國際公開號(hào)WO 94/13774(Powell等人)；美國專利號(hào)5,773,021(Gurtler等人)；歐洲專利申請公開號(hào)0 737 602(Gruber)；美國專利號(hào)5,747,475(Nordquist等人)；美國專利號(hào)5,015,632(Nelson)；美國專利號(hào)5,422,116(Yen等人)；國際公開號(hào)WO 00/14155(Ucheegbu)；日本專利公開號(hào)JP 63193999(Kao Corp.)；日本專利公開號(hào)JP 63096111(Kanebo Ltd.)；日本專利公開號(hào)JP 59106409(Ichimaru Pharcos.Inc.)；和日本專利公開號(hào)JP 56094322(Mitsubishi Rayon Co.，Ltd.)。
去乙?；募讱べ|(zhì)或去乙?；募讱べ|(zhì)衍生物在幫助防止溶液的微生物污染方面的用途，在美國專利申請公開號(hào)US 2002/0177577A1中被描述。
發(fā)明概述本發(fā)明基于如下發(fā)現(xiàn)，即某些甲殼質(zhì)衍生物可作為溶菌酶底物而發(fā)揮功能，當(dāng)含有這些試劑的水溶液被應(yīng)用于接觸性透鏡時(shí)，甲殼質(zhì)衍生物特異性地結(jié)合到透鏡上的溶菌酶上并形成酶-底物復(fù)合物。由于該復(fù)合物的形成而發(fā)生的溶菌酶構(gòu)象變化，提供了一種機(jī)制以便從透鏡表面拉出溶菌酶和促進(jìn)透鏡清潔。
本發(fā)明組合物中包含的甲殼質(zhì)衍生物也表現(xiàn)出對(duì)透鏡表面的潤滑效應(yīng)，從而增進(jìn)接觸性透鏡佩戴者的舒適度。
甲殼質(zhì)衍生物也穩(wěn)定淚液膜，防止角膜上皮細(xì)胞的干燥。
基于上述概括的發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供接觸性透鏡護(hù)理溶液，其具有獨(dú)特清潔機(jī)制，同時(shí)也提供潤滑和防止干燥性能。
本發(fā)明提供清潔接觸性透鏡和增進(jìn)在人類患者眼部佩戴時(shí)的透鏡舒適度的組合物與方法。組合物可采用多種形式，例如清潔、消毒和保存接觸性透鏡的多用途溶液在眼中進(jìn)行清潔的產(chǎn)品，或重濕滴劑。
發(fā)明詳述甲殼質(zhì)是N-乙酰-D-葡糖胺(N-乙酰-2-氨基-2-脫氧-D-吡喃型葡萄糖)單位通過β-D(1→4)糖苷鍵連接成的高分子量線性聚合物。所有殘基完全由N-乙酰葡糖胺形成。它高度不溶，幾乎無化學(xué)活性，在生理pH值水平為非離子化狀態(tài)。
甲殼質(zhì)有時(shí)和去乙?；募讱べ|(zhì)混淆在一起，但這兩種物質(zhì)實(shí)際上在幾個(gè)方面非常不同。去乙酰基化的甲殼質(zhì)是β-(1→4)-2-氨基-2-脫氧-D-吡喃型葡萄糖的線形聚合物，其所有殘基完全由N-葡糖胺組成。它可溶，在生理pH值水平主要帶正電荷。去乙?；募讱べ|(zhì)不能完成本文中所述的接觸性透鏡清潔功能。
已知溶菌酶通過斷開細(xì)胞壁中發(fā)現(xiàn)的多糖的糖苷鍵而殺死微生物。既然甲殼質(zhì)和它的衍生物具有與細(xì)胞壁中發(fā)現(xiàn)的多糖相似的結(jié)構(gòu)，因而這些物質(zhì)也易受溶菌酶水解，和已經(jīng)被用作溶菌酶底物(例如，乙二醇甲殼質(zhì)已廣泛用于溶菌酶活性的定量化)。
本發(fā)明涉及從接觸性透鏡上清除蛋白沉淀的獨(dú)特方法。該方法基于上述討論的溶菌酶與本文所述的甲殼質(zhì)衍生物之間的酶-底物相互作用。此相互作用導(dǎo)致溶菌酶的構(gòu)象變化，這將引起溶菌酶與接觸性透鏡的帶負(fù)電荷的表面之間的結(jié)合變得松散，因此促進(jìn)溶菌酶沉淀從透鏡上被清除。
本發(fā)明組合物包含這樣的一種或多種甲殼質(zhì)衍生物，即在pH值6.5-8.5的水溶液中可溶，能與溶菌酶結(jié)合及作為溶菌酶的底物而發(fā)揮功能。
本發(fā)明所用的甲殼質(zhì)衍生物優(yōu)選非離子化的，以避免或與(i)在接觸性透鏡消毒液中采用的陽離子殺微生物劑(如polyquaternium-1或PHMB)或與(ii)制作多種軟接觸性透鏡的聚合物的陰離子位點(diǎn)之間的離子相互作用。甲殼質(zhì)衍生物可包含陰離子官能基團(tuán)如羧化部分，但帶大量正電荷的衍生物如去乙?；募讱べ|(zhì)在本發(fā)明中不適用。(甲殼質(zhì)的N-去乙?；幕瘜?dǎo)致去乙酰基化的甲殼質(zhì)的形成。相對(duì)甲殼質(zhì)而言，去乙酰基化的甲殼質(zhì)部分或充分地去乙?；幕?，并且與甲殼質(zhì)不同，去乙酰基化的甲殼質(zhì)沿其多聚鏈包含有自由的氨基基團(tuán)。)通過上述的酶-底物相互作用和甲殼質(zhì)衍生物陰離子基團(tuán)與溶菌酶陽離子位點(diǎn)間的離子相互作用兩種方式，包含陰離子基團(tuán)的甲殼質(zhì)衍生物在清除溶菌酶沉淀中發(fā)揮功能。
本發(fā)明所用的甲殼質(zhì)衍生物包括但不局限于其羥基或氨基被烷基化、乙?；鸵叶蓟男揎椥约讱べ|(zhì)聚合物，和通過酸水解、堿水解或酶水解得到的水可溶性甲殼質(zhì)水解產(chǎn)物。優(yōu)選的甲殼質(zhì)衍生物是乙二醇甲殼質(zhì)、丙二醇甲殼質(zhì)、羥丙基甲殼質(zhì)、羧甲基甲殼質(zhì)、部分去乙?；幕募讱べ|(zhì)和2至500個(gè)N-乙酰葡糖胺單元的寡聚甲殼質(zhì)。衍生物在pH6.5至pH8.5的相對(duì)中性pH值水溶液中可溶。聚合物分子量為500到10,000,000道爾頓，粘度為2到3000cps(25℃)。
本發(fā)明可能采用的甲殼質(zhì)衍生物或者是商業(yè)上可購得(例如，乙二醇甲殼質(zhì)可從Seikagaku America，a Division of Associates ofCape Cod，Inc.，F(xiàn)almouth，MA，and Vanson HaloSource of Redmond，Washington購得，羧甲基甲殼質(zhì)和50％去乙酰基化的化的甲殼質(zhì)為KoYo Chemical Co.，LTD.，Tokyo，Japan的產(chǎn)品)；或者通過在科學(xué)文獻(xiàn)中描述的方法能夠制備(例如，Ryoichi Senju and SatoshiOkimasu，Nippon Nogeikagaku Kaishi，volume 23 pages 432-437，(1950)；Keisuke Kurita，J Synthetic Organic Chemistry Japan，volume 42 pages 567-574，(1984)；和Seiichi Tokura，Norio Nishi，Akihiro Tsutsumi，and Oyin Somorin，Polymer J，volume 15，pages485-489(1983))。
一般地，將本發(fā)明組合物配制為液體。除上述甲殼質(zhì)衍生物外，組合物可包含多種其它成分，如眼科上可接受的消毒劑或防腐劑、緩沖劑、張力調(diào)節(jié)劑、表面活性劑、螯合劑和/或多價(jià)螯合劑、助溶劑等。
本發(fā)明組合物包含的一種或多種甲殼質(zhì)衍生物的劑量足以促進(jìn)蛋白質(zhì)沉淀從接觸性透鏡上的清除。本文中用“有效量”表示。特殊組合物所需濃度依賴于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的因素，例如，對(duì)于組合物所選定的一種或多種甲殼質(zhì)衍生物，所選衍生物的分子量，和對(duì)于組合物所期望的粘度。
對(duì)特殊甲殼質(zhì)衍生物的理想分子量和組合物期望粘度的選擇能被該領(lǐng)域技術(shù)人員容易地確定。本發(fā)明組合物通常將具有2到3000cps(25℃)范圍內(nèi)的粘度。優(yōu)選的粘度范圍是大約5到15cps。本發(fā)明的接觸性透鏡清潔組合物通常將包含數(shù)量為重量/體積百分比(″w/v％″)從大約0.01％到10％，優(yōu)選大約0.1到1w/v％的一種或多種甲殼質(zhì)衍生物。
本發(fā)明組合物可包含除上述甲殼質(zhì)衍生物外的多種其他成分，如表面活性劑、螯合劑、緩沖劑、張力調(diào)節(jié)劑、殺微生物防腐劑和接觸性透鏡消毒劑。
本發(fā)明組合物所用的表面活性劑可以是陽離子表面活性劑、陰離子表面活性劑、非離子表面活性劑或兩性的表面活性劑。優(yōu)選的表面活性劑是中性或非離子表面活性劑，其出現(xiàn)的數(shù)量可高至5w/v％。合適的表面活性劑的實(shí)例包括但不局限于聚乙二醇醚或脂肪酸酯，乙二胺的聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物(例如，poloxamines如Tetronic1304或1107)，聚氧丙烯-聚氧乙烯二醇非離子嵌段共聚物(例如，poloxamers如PluronicF-127)，和對(duì)異辛基聚乙烯苯酚甲醛聚合物(如Tyloxapol)。
優(yōu)選的螯合劑和/或多價(jià)螯合劑的實(shí)例包括乙二胺四乙酸(EDTA)和它的鹽，及檸檬酸和它的鹽。其它該領(lǐng)域技術(shù)人員已知的螯合劑和/或多價(jià)螯合劑也可采用。多價(jià)螯合劑的通常用量為大約0.025到2.0w/v％。
合適的助溶劑的實(shí)例包括甘油、丙二醇和聚乙二醇。
可被整合進(jìn)組合物的合適的緩沖劑實(shí)例包括但不局限于堿金屬鹽例如碳酸、醋酸、硼酸、磷酸和檸檬酸的鉀鹽或鈉鹽，以及弱酸如乙酸和硼酸。優(yōu)選的緩沖劑是堿金屬硼酸鹽如硼酸鈉或硼酸鉀。其他pH值調(diào)節(jié)劑如無機(jī)酸和堿也可以采用。例如，鹽酸、氫氧化鈉、多種生物緩沖劑(如HEPES和PIPES)、三乙醇胺或BIS-TRIS可以以適合于眼用組合物的濃度加以采用。上述緩沖劑的通常用量為大約0.1到大約2.5w/v％，優(yōu)選大約0.5到大約1.5％w/v％張力調(diào)節(jié)劑的實(shí)例包括離子性試劑如氯化鈉與氯化鉀，和非離子性試劑如甘油、山梨醇與甘露醇。張力調(diào)節(jié)劑用于將組合物的重量摩爾滲透壓濃度調(diào)節(jié)至更近似于人類淚液，和調(diào)節(jié)至與接觸性透鏡材料相容。相對(duì)于含有離子性殺微生物劑(如polyquaternium-1和PHMB)的組合物，優(yōu)選采用非離子性試劑，以避免可能對(duì)這些試劑活性產(chǎn)生負(fù)面影響的離子相互作用。本發(fā)明組合物將通常具有大約200到400毫滲透壓摩爾每千克水(″mOsm/kg″)的重量摩爾滲透壓濃度，更優(yōu)選大約280到320mOsm/kg。
合適的殺微生物劑包括但不局限于那些通常用于多用途接觸性透鏡護(hù)理溶液或其它眼用溶液的殺微生物劑，例如polyquaternium-1，一種聚合性季銨化合物；肉豆蔻酰胺丙基二甲胺(″MAPDA″)，一種N，N-二烷基，N′-烷基，乙二胺；聚亞己基雙胍(″PHMB″)或聚氨丙基雙胍(PAPB)，一類聚合性雙胍；和過氧化氫。本發(fā)明可采用的殺微生物劑也包括共同未決的美國專利申請系列號(hào)09/581,952和對(duì)應(yīng)于國際(PCT)公開號(hào)WO 99/32158)中所述的氨基雙胍，其全部的內(nèi)容在此被合并在本說明書中以作參考。優(yōu)選的殺微生物劑是polyquaternium-1、MAPDA和WO 99/32158中被確定為“化合物1號(hào)”的氨基雙胍。
計(jì)劃用作CLC產(chǎn)品的本發(fā)明組合物將含有一種或多種的眼科臨床可接受的殺微生物劑以防止組合物的微生物污染的有效量(本文中用“防腐有效量”表示)，或者可通過顯著減少存在于透鏡上的活體微生物數(shù)目而有效地對(duì)接觸性透鏡消毒的有效量(本文中用“消毒有效量”表示)。
保存眼藥組合物以防止微生物污染或?qū)佑|性透鏡消毒所需的殺微生物活性水平，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是熟知的，這是基于個(gè)人經(jīng)驗(yàn)和官方公開的標(biāo)準(zhǔn)例如那些在美國藥典(“USP”)和其它國家的類似出版物中公布的。
本發(fā)明組合物優(yōu)選配制為用于處理接觸性透鏡的多用途溶液，但也可配制為單獨(dú)的清潔產(chǎn)品或用于再濕潤接觸性透鏡的產(chǎn)品(如復(fù)濕類滴液)而非多用途溶液。
本發(fā)明組合物和方法通過下列實(shí)施例而進(jìn)一步加以闡明。
實(shí)施例1發(fā)明的代表性組合物下列表1和表2中所示制劑是本發(fā)明組合物的代表。所示所有濃度以重量/體積百分比表示。制劑根據(jù)已知程序制備。
表1
也制備了兩種載體，但未在上表中顯示出。第一種載體除了不包含檸檬酸鹽或甲殼質(zhì)衍生物外，其他成分與上表1中顯示的制劑相同。其pH值為7.0，在下面用制劑號(hào)“9198-17J”表示。第二種載體也被制備出。除了也含有0.6w/v％的檸檬酸鈉和pH值為7.5之外，它與第一種載體制劑相同；此第二種載體在下面以制劑號(hào)″8874-90H″表示。
表2
制劑號(hào)9198-09H不包含甲殼質(zhì)衍生物，因此代表了用于表2中所述的其它組合物的載體。
實(shí)施例2測定清潔功效的方法和程序?qū)嵤├?中所述組合物從接觸性透鏡上清除蛋白質(zhì)沉淀的能力通過下述程序進(jìn)行評(píng)估。
I.透鏡沉積步驟AcuvueTM透鏡被選出用于評(píng)估。每個(gè)透鏡浸入盛有5ml溶菌酶溶液的玻璃小瓶中，37℃恒溫培育24小時(shí)。培育之后，經(jīng)過沉積的透鏡取出后通過浸入三個(gè)盛有50ml去離子水的連續(xù)的燒杯而進(jìn)行漂洗以除去多余的溶菌酶。
II.清潔步驟被污染的透鏡分別浸在盛于玻璃小瓶的5ml每一種測試溶液中，并與其一起于室溫?fù)u動(dòng)16小時(shí)。浸潤/清潔時(shí)段后，透鏡被從各自的測試溶液中取出，通過浸入三個(gè)盛有20ml Unisol4鹽溶液的連續(xù)的燒杯而進(jìn)行漂洗。不包括透鏡的機(jī)械摩擦作為清潔護(hù)理的一部分(下面用“無摩擦”護(hù)理表示)。經(jīng)清潔的透鏡隨后被送入下述的提取步驟。
III.溶菌酶的提取和測定處理過和未處理過(作為對(duì)照)的透鏡隨后都在玻璃小瓶中用5ml包含乙腈/水/三氟乙酸(500/500/1，v/v)的提取溶液進(jìn)行提取。提取通過室溫下用旋轉(zhuǎn)播床搖動(dòng)小瓶至少2小時(shí)(通常過夜)來進(jìn)行。
透鏡提取物和透鏡浸潤液中的溶菌酶定量測定通過由自動(dòng)取樣器和電腦操作的熒光分光光度計(jì)完成。每一樣品的2ml等分試樣的熒光強(qiáng)度通過分別將激發(fā)/發(fā)射波長設(shè)置在280nm/346nm，激發(fā)/發(fā)射波寬設(shè)置在2.5nm/10nm，光電倍增管的靈敏度設(shè)置在950伏特來測量。
溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)曲線通過將溶菌酶原始溶液用提取溶液或每個(gè)單獨(dú)的測試溶液稀釋至濃度在0到60μg/ml之間而建立。熒光測量采用那些與應(yīng)用于透鏡提取物和透鏡浸潤液相同的儀器設(shè)置來進(jìn)行。根據(jù)由線性溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的斜率，計(jì)算得出所有樣品的溶菌酶濃度。
IV.清潔功效測試溶液的清潔功效通過計(jì)算除去蛋白質(zhì)的百分比而測定。
V.結(jié)果上述評(píng)估的結(jié)果在下列表3和表4中給出。
表3包含甲殼質(zhì)衍生物的組合物的清潔功效使用上述表1中的溶液所獲得的結(jié)果如下
表4包含甲殼質(zhì)衍生物的組合物的清潔功效使用上述表2中的溶液所獲得的結(jié)果如下
實(shí)施例3日常性清潔物的增強(qiáng)甲殼質(zhì)衍生物可增強(qiáng)用于接觸性透鏡日常性清潔的已有產(chǎn)品的清潔效用，此增強(qiáng)能力通過上述實(shí)施例2所述的程序進(jìn)行評(píng)估，除了被污染的透鏡在水浴搖床/培育器中用測試溶液處理的時(shí)段歷時(shí)更短(即10分鐘和30分鐘)之外。被評(píng)估的組合物通過將乙二醇甲殼質(zhì)和羧甲基甲殼質(zhì)加入含有兩種作為清潔劑的表面活性劑的Clerz；PlusLens Drops(Alcon Laboratories，Inc.)中而制備。結(jié)果在下表5中給出。
表5具有和不具有甲殼質(zhì)衍生物的再濕潤/舒適性滴液的清潔功效
以上顯示的結(jié)果確認(rèn)了乙二醇甲殼質(zhì)和羧甲基甲殼質(zhì)增強(qiáng)了基于表面活性劑的清潔劑的清潔功效。
實(shí)施例4在升高的溫度下對(duì)清潔性的增強(qiáng)本發(fā)明制劑在升高的溫度下對(duì)接觸性透鏡的清潔性能也被評(píng)估。測試溶液在可商業(yè)購買的鹽水溶液(Unisol4)中包含有濃度為0.2w/v％的乙二醇甲殼質(zhì)(″EGC″)。溶液pH值為7.45，重量摩爾滲透壓濃度為229mOsm。所用清潔程序基本上與實(shí)施例2中的一樣，除了被污染的透鏡在水浴搖床/培育器中用測試溶液浸潤5小時(shí)是在三個(gè)不同溫度(室溫/25℃，37℃，和50℃)下進(jìn)行。下列表6中給出的結(jié)果證明在升高的溫度下加速了清潔過程。結(jié)果以被清除的溶菌酶的數(shù)量(即微克)表示。
表6對(duì)于乙二醇-甲殼質(zhì)的清潔功效的溫度效應(yīng)
*使用Acuvue透鏡，其用溶菌酶于37℃沉積24小時(shí)**“無摩擦(No-rub)”護(hù)理于不同溫度下進(jìn)行5小時(shí)實(shí)施例5防止干燥性能的測量含有甲殼質(zhì)衍生物的制劑的防止干燥的性能通過下述方法評(píng)估，即采用存活力染料3-[4，5-二甲基噻唑-2-基]-2，5-二苯基四唑鎓溴化物(MTT)和人類角膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)物(CEPI 17)進(jìn)行的方法。MTT為四唑鎓鹽，應(yīng)用它發(fā)展出了對(duì)哺乳類細(xì)胞存活與增殖的定量顯色分析。分析檢測出活細(xì)胞而不是死亡的細(xì)胞。暴露于測試溶液后，放置于氣流罩(airflow hood)中干燥，隨后測量細(xì)胞的存活度，通過這些操作并采用前述方法測量本發(fā)明組合物防止干燥的性能。
在包含96或48孔的細(xì)胞培養(yǎng)板上進(jìn)行分析。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到匯合階段時(shí)，除去培養(yǎng)基，向每一孔中的細(xì)胞中加入測試溶液。暴露于37℃中10分鐘后，除去溶液，將細(xì)胞放入氣流罩中干燥30到60分鐘。l00或200微升MTT溶液隨后被加入每一孔中，平板于37℃培育4小時(shí)。培育之后，存活細(xì)胞產(chǎn)生的MTT甲藍(lán)色晶體變?yōu)榭梢?。從孔中小心除去溶液后，加入等分試樣的酸性異丙醇以溶解藍(lán)色沉淀物。570nm的微量培養(yǎng)板讀數(shù)機(jī)被用于測定有色溶液的強(qiáng)度。同一板中帶血清/培養(yǎng)基的孔和帶載體溶液的孔也被測量，以分別作為存活和死亡總量的對(duì)照。結(jié)果在下表7和表8中給出表7在Unisol4載體中的甲殼質(zhì)衍生物的干燥保護(hù)
表8在Polyquaternium-1制劑中的甲殼質(zhì)衍生物的干燥保護(hù)
*細(xì)胞CEPI 17，p97，人類角膜上皮細(xì)胞系*使用MTT生存能力化驗(yàn)法和40分鐘干燥的化驗(yàn)*載體山梨醇/硼酸/氯化鈉/檸檬酸鹽/Polyquaternium-1(1.5％/0.6％/0.32％/0.6％/11ppm)，pH7.0實(shí)施例6對(duì)乙二醇甲殼質(zhì)存在條件下Polyquaternium-1的殺微生物活性的評(píng)估甲殼質(zhì)衍生物對(duì)殺微生物劑Polyquaternium-1的殺微生物活性的可能影響得到了評(píng)估。評(píng)估中所使用的溶液的配方在下表9中顯示。測試程序如下0.1ml接種體(108菌落形成單位/ml)被首先加入10ml含Polyquaternium-1和乙二醇甲殼質(zhì)的消毒溶液中。測試全過程中，溶液都在室溫下保溫。每種微生物和測試溶液被獨(dú)立測試。對(duì)每種微生物測試一套4個(gè)復(fù)制(n＝8)樣品。在選定的時(shí)間間歇6小時(shí)和24小時(shí)，1ml含有白色假絲酵母(Candida albicans)，粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratia marcescens)，和金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的經(jīng)接種的測試溶液被除去，用消毒過的0.9％氯化鈉空白稀釋液進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南盗邢♂?。傾倒板用含0.07％Asolectin和0.5％聚山梨酯80的大豆酪蛋白消化瓊脂制得。在時(shí)間點(diǎn)0，除去體積為1.0ml的對(duì)照鹽溶液，用恢復(fù)性培養(yǎng)基和空白稀釋液制備系列稀釋傾倒板。時(shí)間點(diǎn)0的對(duì)照鹽溶液記數(shù)作為初試記數(shù)。傾倒板在30℃-35℃培育適當(dāng)?shù)臅r(shí)間。隨后測定每一時(shí)間間歇的存活生物體數(shù)目。測試結(jié)果表示為呈對(duì)數(shù)減少并列于下表9中。
表9乙二醇甲殼質(zhì)對(duì)于Polyquaternium-1制劑的抗微生物活性的功效
實(shí)施例7對(duì)商業(yè)用接觸性透鏡消毒溶液的清潔功效的增強(qiáng)乙二醇甲殼質(zhì)(″EGC″)對(duì)可商業(yè)購買的多用途溶液的清潔功效的增強(qiáng)能力，根據(jù)實(shí)施例2中所述的程序而被評(píng)估。被測試的溶液如下1.OPTI-FREEExpressMulti-Purpose Disinfecting Solution(″OPFX/MPDS″)，Alcon Laboratories，Inc.銷售；2.OPTI-FREERinsing，Disinfecting and Storage Solution(″OPF/RDS″)，Alcon Laboratories，Inc.銷售；3.SOLOCare Plus Multi-Purpose Solution(″SOLOCare Plus″)，CibaVision銷售；4.COMPLETETMMoisture Plus Multi-purpose Solution(″CompleteMoisture Plus″)，Allergan銷售；和5.ReNu MultiplusTMMulti-Purpose Solution with HydranateTMProtein Remover(″ReNu Multiplus″)，Bausch & Lomb，Inc.銷售。
評(píng)估結(jié)果在下表10中顯示表10
結(jié)果證明乙二醇甲殼質(zhì)的加入增強(qiáng)了溶液的清潔功效。
實(shí)施例8對(duì)Polyquaternium-1/MAPDA制劑清潔功效的增強(qiáng)乙二醇甲殼質(zhì)對(duì)含有殺微生物劑Polyquaternium-1和MAPDA的多用途溶液的清潔功效的增強(qiáng)能力，根據(jù)實(shí)施例2中所述的程序而被評(píng)估。溶液組成和清潔功效評(píng)估結(jié)果在下表11中顯示
表1權(quán)利要求
1.清潔接觸性透鏡的水性組合物，包括有效量的甲殼質(zhì)衍生物和所述甲殼質(zhì)衍生物的眼科臨床可接受的水性載體，該甲殼質(zhì)衍生物在pH6.5-8.5的水溶液中可溶，且能與溶菌酶結(jié)合并作為溶菌酶底物發(fā)揮功能。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中甲殼質(zhì)衍生物是非離子化的。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中甲殼質(zhì)衍生物包括了陰離子官能基團(tuán)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中甲殼質(zhì)衍生物的分子量為500至10,000,000道爾頓。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中甲殼質(zhì)衍生物選自乙二醇甲殼質(zhì)，丙二醇甲殼質(zhì)，羥丙基甲殼質(zhì)，羧甲基甲殼質(zhì)，部分去乙?；募讱べ|(zhì)，含有2到500個(gè)N-乙酰葡糖胺單元的甲殼質(zhì)寡聚物，和它們的組合。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中甲殼質(zhì)衍生物包括乙二醇甲殼質(zhì)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中組合物是用于清潔和消毒接觸性透鏡的多用途溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中組合物是用于再濕潤接觸性透鏡的產(chǎn)品。
9.處理接觸性透鏡的方法，其包括將清潔組合物應(yīng)用于透鏡，所述組合物包括有效量的甲殼質(zhì)衍生物和所述甲殼質(zhì)衍生物的眼科臨床可接受的水性載體，該甲殼質(zhì)衍生物在pH6.5-8.5的水溶液中可溶，且能與溶菌酶結(jié)合并作為溶菌酶底物發(fā)揮功能。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中甲殼質(zhì)衍生物是非離子化的。
11.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中甲殼質(zhì)衍生物包括了陰離子官能基團(tuán)。
12.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中甲殼質(zhì)衍生物的分子量為500至10,000,000道爾頓。
13.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中甲殼質(zhì)衍生物選自乙二醇甲殼質(zhì)，丙二醇甲殼質(zhì)，羥丙基甲殼質(zhì)，羧甲基甲殼質(zhì)，部分去乙酰化的甲殼質(zhì)，含有2到500個(gè)N-乙酰葡糖胺單元的甲殼質(zhì)寡聚物，和它們的組合。
14.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中甲殼質(zhì)衍生物包括乙二醇甲殼質(zhì)。
15.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中組合物是用于清潔和消毒接觸性透鏡的多用途溶液。
16.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中組合物是用于再濕潤接觸性透鏡的產(chǎn)品。
全文摘要
描述了包含甲殼質(zhì)衍生物的組合物用于處理接觸性透鏡的應(yīng)用。所述組合物特別有用于從接觸性透鏡上去除蛋白質(zhì)沉積物，但也用于潤滑透鏡表面和提高配戴在眼睛上時(shí)透鏡的舒適度，所述甲殼質(zhì)衍生物優(yōu)選為非離子化的(例如，乙二醇甲殼質(zhì))，和通過作為包含在沉積物中的溶菌酶的底物發(fā)揮功能以促進(jìn)蛋白質(zhì)沉積物從接觸性透鏡上的去除。
文檔編號(hào)C11D1/00GK1732254SQ200380107393
公開日2006年2月8日 申請日期2003年12月10日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月23日
發(fā)明者洪博學(xué), D·L·梅多斯, H·A·凱特爾森, G·R·歐文 申請人:愛爾康公司