丹酚酸a在制備治療急性腎損傷藥物中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種丹酚酸A在制備治療急性腎損傷藥物中的應(yīng)用，屬于中藥有效成分的用途技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明通過(guò)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)證明，丹酚酸A可有效減輕腎小管壞死和腎小管微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，增加血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)，抑制微血管密度的減少，改善缺血缺氧程度，從而減輕急性腎損傷大鼠腎臟組織損傷。因此，丹酚酸A可以用作制備治療急性腎損傷藥物，從而開辟了丹酚酸A的新用途。
【專利說(shuō)明】
丹酚酸A在制備治療急性腎損傷藥物中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及一種丹酚酸A在制備治療急性腎損傷藥物中的應(yīng)用，屬于中藥有效成分的用途技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]急性腎損傷(AKI)是臨床最常見的急危重癥之一。AKI與患者病死率、慢性腎臟疾病(CKD)的發(fā)生以及維持性透析率密切相關(guān)。據(jù)報(bào)道，在急危重患者中，AKI的發(fā)生率高達(dá)25%，死亡率為15-60% ^KI會(huì)延長(zhǎng)住院時(shí)長(zhǎng)，增加醫(yī)療花費(fèi)，并且影響長(zhǎng)期腎臟功能，已經(jīng)成為全球公共健康問(wèn)題[1][2]。在我國(guó)，住院成人患者AKI發(fā)病率高達(dá)11.6%，顯著增加住院死亡率[2]。同時(shí)，未識(shí)別的AKI患者高達(dá)74.2%，這也意味著不能及時(shí)接受治療的患者眾多。而在AKI患者中，進(jìn)行腎替代治療的患者比例(RRT)高達(dá)59.3 %[3]。可見，AKI已成為我國(guó)巨大的醫(yī)療負(fù)擔(dān)。如何有效的預(yù)防和治療AKI成為目前迫切需要解決的問(wèn)題。
[0003]當(dāng)前，AKI的治療方法主要為對(duì)癥支持療法和腎替代療法，尚無(wú)任何有效的治療措施以減輕組織損傷、促進(jìn)修復(fù)和防止慢性纖維化的發(fā)生，AKI發(fā)生后仍主要依靠腎臟自身的康復(fù)[4]。到目前為止，AKI的治療藥物無(wú)明顯突破。因此，研究AKI時(shí)組織損傷和修復(fù)機(jī)制，尋找治療靶點(diǎn)以改善AKI預(yù)后，已成為當(dāng)前腎臟病的研究熱點(diǎn)。
[0004]AKI時(shí)組織損傷和修復(fù)涉及多種復(fù)雜的機(jī)制和效應(yīng)細(xì)胞，包括腎小管上皮細(xì)胞損傷調(diào)控的免疫炎癥反應(yīng)、腎小管周圍微血管(PTC)內(nèi)皮損傷加重缺血及炎癥反應(yīng)、AKI后持續(xù)免疫炎癥反應(yīng)失調(diào)導(dǎo)致炎癥反應(yīng)放大，進(jìn)一步加重腎小管上皮損傷。而在其中，最容易讓人忽略，但卻非常重要的因素是PTC內(nèi)皮損傷。微血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)和功能受損使腎臟微循環(huán)血量減少，炎癥反應(yīng)加重。同時(shí)，微血管結(jié)構(gòu)破壞導(dǎo)致管周毛細(xì)血管網(wǎng)密度減低，微血管密度減低可導(dǎo)致腎小管間質(zhì)缺氧，加重腎小管上皮細(xì)胞損傷，抑制其修復(fù)，進(jìn)而促進(jìn)腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生和發(fā)展[4]。因此，能夠促進(jìn)微血管內(nèi)皮修復(fù)或保護(hù)微血管內(nèi)皮、重建微循環(huán)的治療措施對(duì)于改善AKI腎臟病變可能會(huì)有積極的作用。
[0005]丹酚酸A(SAA)為我國(guó)傳統(tǒng)活血化瘀中藥丹參的主要水溶性活性成分，具有較強(qiáng)的抗炎、抗氧化、抗血小板和抗血栓功能[5]。多項(xiàng)研究證明，丹酚酸A可有效減輕動(dòng)物大腦和心肌缺血-再灌注損傷，降低組織缺血缺氧程度，改善微循環(huán)[5]。在內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)方面，丹酚酸A能夠減輕游離脂肪酸導(dǎo)致的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷[6]，降低缺氧/復(fù)氧損傷的腦部微血管內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1表達(dá)從而發(fā)揮腦保護(hù)作用m。另外，丹酚酸A還有顯著的抗肝、肺纖維化的作用[8][9]?；谏鲜龅し铀酇的藥理作用，可推測(cè):對(duì)于AKI，丹酚酸A也可能具有一定的減輕腎組織損傷，促進(jìn)修復(fù)和抑制后期腎臟纖維化的作用。目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)丹酚酸A治療AKI方面的報(bào)道，進(jìn)行相關(guān)方面的研究，開發(fā)對(duì)AKI具有積極防治作用的藥物具有重大的現(xiàn)實(shí)意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種丹酚酸A在制備治療急性腎損傷藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明通過(guò)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)證明，丹酚酸A可有效減輕腎小管壞死和腎小管微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，增加血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)，抑制微血管密度的減少，改善缺血缺氧程度，從而減輕急性腎損傷大鼠腎臟組織損傷。因此，丹酚酸A可以用作制備治療急性腎損傷藥物，從而開辟了丹酚酸A的新用途。
[0007]本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題的技術(shù)方案如下:丹酚酸A在制備治療急性腎損傷藥物中的應(yīng)用。
[0008]本發(fā)明通過(guò)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)證明，丹酚酸A可有效減輕腎小管壞死和腎小管微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，增加血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)，抑制微血管密度的減少，改善缺血缺氧程度，從而減輕急性腎損傷大鼠腎臟組織損傷。因此，丹酚酸A可以用作制備治療急性腎損傷藥物，從而開辟了丹酚酸A的新用途。
[0009]在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還可以做如下改進(jìn)。
[0010]進(jìn)一步，所述丹酚酸A的可藥用鹽在制備治療急性腎損傷藥物中的應(yīng)用。
[0011]進(jìn)一步，所述治療急性腎損傷藥物為減輕腎小管壞死和血管內(nèi)皮損傷、增加血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)、降低缺氧誘導(dǎo)因子Ict表達(dá)改善缺氧環(huán)境的藥物。
[0012]采用上述進(jìn)一步的有益效果是:丹酚酸A可有效減輕腎小管壞死和腎小管微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，增加VEGF的表達(dá)，抑制微血管密度的減少，改善缺血缺氧程度，從而減輕急性腎損傷大鼠腎臟組織損傷，這對(duì)于促進(jìn)腎病轉(zhuǎn)歸，改善急性腎損傷預(yù)后具有重要的臨床意義。
[0013]進(jìn)一步，所述急性腎損傷的原因?yàn)槿毖?、藥物、毒素、重大?chuàng)傷、外科手術(shù)中的一種或多種。
[0014]進(jìn)一步，所述丹酚酸A由以下制備方法得到:以質(zhì)量濃度為1.0%的丹參多酚酸鹽溶液為原料，添加檸檬酸三鈉調(diào)pH至6.0，于125°(:、0.15MPa條件下轉(zhuǎn)化4小時(shí)，冷卻至室溫后，鹽酸調(diào)PH至2.0-3.0，得到丹酚酸A溶液;將上述丹酚酸A溶液依次過(guò)HPD100樹脂富集與純化、CG161樹脂分離與純化、硅膠柱色譜精細(xì)純化，即得到所述丹酚酸A。
[0015]本發(fā)明的有益效果是:
[0016]本發(fā)明公開了丹酚酸A或其可藥用鹽在治療AKI中的應(yīng)用，明確丹酚酸A可有效減輕腎小管壞死和腎小管微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，增加VEGF的表達(dá)，抑制微血管密度的減少，改善缺血缺氧程度，從而減輕急性腎損傷大鼠腎臟組織損傷，這對(duì)于促進(jìn)腎病轉(zhuǎn)歸，改善急性腎損傷預(yù)后具有重要的臨床意義。
【附圖說(shuō)明】
[0017]圖1為本發(fā)明的丹酚酸A對(duì)大鼠血清肌酐(SCr)含量的影響。
[0018]圖中，與假手術(shù)組比較，###P〈0.001,與模型組比較，*P〈0.05，***P〈0.001。
[0019 ]圖2為本發(fā)明的丹酚酸A對(duì)大鼠血清(BUN)含量的影響。
[0020]圖中，與假手術(shù)組比較，###P〈0.001,與模型組比較廣P〈0.0l0[0021 ]圖3為本發(fā)明的丹酚酸A對(duì)大鼠尿液IQM-1含量的影響。
[0022]圖中，與假手術(shù)組相比，##P〈0.01,與模型組相比，*P〈0.05廣P〈0.01。
[0023]圖4為本發(fā)明的丹酚酸A對(duì)腎組織病理?yè)p傷的影響。
[0024]圖5為本發(fā)明的丹酚酸A對(duì)大鼠腎臟病理?yè)p傷評(píng)分的影響。
[0025]圖中，與假手術(shù)組比較，###P〈0.001；與模型組比較廣P〈0.01廣*P〈0.001。
[0026]圖6為本發(fā)明的丹酚酸A對(duì)大鼠血漿VffF含量的影響。
[0027]圖中，與假手術(shù)組比較，##P〈0.01,與模型組比較，*P〈0.05廣P〈0.01。
[0028]圖7為本發(fā)明的丹酚酸A對(duì)大鼠腎小管周圍微血管內(nèi)皮的影響。
[0029]圖8為本發(fā)明的丹酚酸A對(duì)大鼠腎小管周圍微血管密度的影響。
[0030]圖9為本發(fā)明的丹酚酸A對(duì)腎小管周圍微血管密度半定量分析圖。
[0031 ]圖中，與假手術(shù)組比較，###P〈0.001；與模型組比較廣P〈0.01廣*P〈0.001。
[0032]圖10為本發(fā)明的丹酚酸A對(duì)腎小管上皮細(xì)胞VEGFA表達(dá)的影響。
[0033]圖11為本發(fā)明的丹酚酸A對(duì)大鼠腎小管上皮細(xì)胞VEGFA表達(dá)半定量分析圖。
[0034]圖中，與假手術(shù)組相比，##P〈0.01，與模型組相比，*P<0.05,林P〈0.01, *林P〈0.001。
[0035]圖12為本發(fā)明的丹酚酸A對(duì)大鼠腎組織HIF-Ια表達(dá)的影響。
[0036]圖13為本發(fā)明的腎組織HIF-Ια表達(dá)半定量分析。
[0037]圖中，與假手術(shù)組比較，###P〈0.001;與模型組比較廣*P〈0.001。
[0038]圖14為本發(fā)明的丹酚酸A對(duì)血小板活化的影響。
[0039]圖15為本發(fā)明的丹酚酸A對(duì)活化血小板數(shù)目定量分析。
[0040]圖中，與假手術(shù)組比較，##?〈0.01;與模型組比較，>〈0.05，，〈0.01，*，〈0.001。
【具體實(shí)施方式】
[0041]以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實(shí)例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。
[0042]實(shí)施例1丹酚酸A的制備
[0043]丹參多酚酸鹽300克加水稀釋至濃度為1.0%(以丹參乙酸鎂計(jì))，用檸檬酸三鈉調(diào)pH至6.0，于125°C、0.15MPa條件下轉(zhuǎn)化4小時(shí)，冷卻至室溫后鹽酸調(diào)pH至2.0-3.0，依法測(cè)定丹酚酸A含量;樣品液過(guò)HPD100樹脂柱，依次用水、25 %乙醇溶液洗脫(棄去)，再用40 %乙醇溶液洗脫收集丹酚酸A，依法測(cè)定丹酚酸A含量，減壓濃縮至丹酚酸A濃度約15.0-30.0mg/ml;濃縮液過(guò)CG161樹脂柱，依次用20 %乙醇溶液洗脫(棄去)，再用35 %乙醇溶液洗脫收集丹酚酸A，減壓濃縮至丹酚酸A濃度約50.0mg/ml;鹽酸調(diào)pH至2_3，以等體積乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，減壓濃縮，加2.5倍量硅膠(80-120目)拌勻，干燥，濕法上硅膠柱(200-300目，2.5倍量)，以正己烷-乙酸乙酯(6:4和5:5)洗脫，收集正己烷-乙酸乙酯(5:5)洗脫液，減壓濃縮至干，加水適量分散，再減壓濃縮，干燥，即得丹酸酸A 180.2克，含量96.6 % (夕卜標(biāo)法)。
[0044]實(shí)施例2丹酚酸A對(duì)腎缺血-再灌注引起的急性腎損傷的保護(hù)作用
[0045]1.給藥
[0046]雄性SD大鼠(體重220_250g)適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為6個(gè)組:正常組、假手術(shù)組、缺血-再灌注損傷模型組、丹酚酸A各給藥組(2.5、5、10mg/kg)，分組結(jié)束后開始給藥，正常組、假手術(shù)組及缺血-再灌注損傷組分別尾靜脈注射等量葡萄糖，丹酚酸A各劑量組分別尾靜脈注射給予相應(yīng)劑量的藥物。每天一次，連續(xù)給藥5天，于第5次給藥后2h開始手術(shù)。
[0047]2.腎缺血再灌注模型的建立
[0048]大鼠術(shù)前禁食不禁水12h(于第5次給藥前1h禁食)，10%水合氯醛(0.3mL/100g)腹腔注射麻醉，腹部備皮，碘伏消毒后，腹部正中切口 3?4cm，從恥骨聯(lián)合上方Icm至劍突下方。將腹腔腸管翻至腹腔外，用生理鹽水浸濕的無(wú)菌紗布包裹保護(hù)，暴露雙側(cè)腎臟，充分顯露雙側(cè)腎蒂，保護(hù)輸尿管，距腎門0.5cm處用無(wú)創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)腎蒂，觀察腎臟由鮮紅色逐漸變?yōu)榘导t色。將腸管還納至腹腔，用3把血管鉗鉗夾腹壁，夾閉腹腔，以防止體溫下降和水分散失。60min后去除血管鉗，打開腹腔，將腹腔腸管翻至腹腔外，暴露腎臟。松開動(dòng)脈夾，恢復(fù)灌流，肉眼可見腎動(dòng)脈充盈，腎臟由暗紅色變?yōu)轷r紅色，表明再灌注成功(紫黑色轉(zhuǎn)鮮紅色證明腎血流恢復(fù))；如果松開動(dòng)脈夾5min未恢復(fù)紅潤(rùn)，則視為再灌注失敗，棄去不用。然后逐層縫合切口。閉合腹后觀察2h，動(dòng)物能正?；顒?dòng)和進(jìn)食說(shuō)明建造模型成功。假手術(shù)組只暴露雙側(cè)腎蒂(不結(jié)扎)，暴露60min后再關(guān)閉切口，不做腎缺血處理。術(shù)后大鼠放于24-29°C環(huán)境，密切觀察大鼠的生命體征，自由飲食、飲水。
[0049]3.觀察指標(biāo)及測(cè)定方法
[0050]I)血清肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)含量:腹主動(dòng)脈取血5mL，室溫靜置2h后，以3000r/min離心15min，分離血清，分裝，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)各組血清肌酐和尿素氮的含量。
[0051]2)腎組織病理?yè)p傷和定量分析:在取血前，取左腎固定在4%的多聚甲醛中，石蠟包埋，5μπι切片，HE染色，于光鏡下觀察腎組織病理變化，進(jìn)行腎小管損傷評(píng)分。按下列標(biāo)準(zhǔn)對(duì)腎小管損傷進(jìn)行評(píng)分:0分(正常)，1分(輕微損傷:腎小管受損〈5%)，2分(輕度損傷:腎小管受損5-25% )，3分(中度損傷:腎小管受損25-75% )，4分(重度損傷:腎小管受損>75% )作半定量分析，計(jì)算其平均值作為腎小管損傷程度的評(píng)價(jià)指標(biāo)。
[0052]3)腎組織超微結(jié)構(gòu)檢查:約Imm3的皮質(zhì)組織固定于2.5%的戊二醛中，然后固定于四氧化鋨，梯度脫水，環(huán)氧樹脂包埋。超微切片，檸檬酸鉛和乙酸雙氧鈾染色，于電鏡下觀察腎組織超微結(jié)構(gòu)變化。
[0053]4)免疫組織化學(xué)檢測(cè):取石蠟塊，制成5μπι切片，進(jìn)行脫蠟，逐級(jí)乙醇梯度脫水，然后將切片置于檸檬酸緩沖液中，于微波爐中加熱進(jìn)行抗原修復(fù)。之后在4°C條件下，與CD34、HIF-Ια以及VEGFA抗體孵育12-18h。然后進(jìn)行DAB顯色，蘇木精復(fù)染，逐級(jí)乙醇梯度脫水，最后采用二甲苯透明處理，中性樹脂封片后進(jìn)行鏡檢。采用圖像pro-plus 6.0軟件進(jìn)行半定量分析:每組內(nèi)每張切片隨機(jī)挑選10處視野進(jìn)行拍照。拍照時(shí)盡量讓組織充滿整個(gè)視野，保證每張照片的背景光一致。應(yīng)用Image-Pro Plus6.0軟件選取相同的棕黃色作為判斷所有照片陽(yáng)性的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)每張照片進(jìn)行分析得出每張照片陽(yáng)性的累積光密度值(Ι00)<Χ034標(biāo)記的切片將根據(jù)Weidner的方法進(jìn)行腎小管周圍微血管密度的分析:任何被抗體染色單個(gè)或成簇的內(nèi)皮細(xì)胞與周圍的組織和細(xì)胞清楚分離的，都記為一個(gè)單一的血管，面積大于8個(gè)紅細(xì)胞面積的血管不予以計(jì)數(shù)。每一個(gè)標(biāo)本先低倍鏡(X 10)下選3個(gè)微血管高密度的區(qū)域即“熱點(diǎn)”，每個(gè)高密度區(qū)計(jì)數(shù)3個(gè)400倍視野下的微血管計(jì)數(shù)，取其平均值為腎小管周圍微血管密度值。
[0054]5)尿腎損傷分子-UKIM-1)和血漿血管性血友病因子(vWF)的含量:腹主動(dòng)脈取血，3.8%枸鹽酸鈉抗凝(血量:抗凝劑=9:1)，3000rpm離心lOmin，取上清即為血楽。尿樣直接從膀胱收集。采用ELISA試劑盒測(cè)定KIM-1和vWF含量。
[0055]6)血小板活化情況:腹主動(dòng)脈取血，3.8%枸鹽酸鈉抗凝(血量:抗凝劑=9:1)，然后以100rpm離心5min，取上清即為富血小板血漿。取富血小板血漿，加入PE-CD61和APC-CD62P抗體，在21°C條件下，暗處孵育20min。然后加等體積的I %多聚甲醛固定20min，使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，最后采用Flowjo軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
[0056]結(jié)果
[0057]1.丹酚酸A對(duì)大鼠SCr和BUN的影響
[0058]SCr和BUN為臨床常用的評(píng)價(jià)腎臟損傷的標(biāo)志物，測(cè)定二者含量可反映腎臟損傷情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，處死大鼠，腹主動(dòng)脈取血，離心，取血清，分別測(cè)定SCr和BUN含量。結(jié)果分別如圖1和圖2所示。模型組動(dòng)物SCr和BUN水平明顯升高，丹酚酸A給藥能降低SCr和BUN的含量，表明丹酚酸A可減輕腎臟損傷程度。
[0059]2.丹酚酸A對(duì)尿液KIM-1含量的影響
[0060]IQM-1為腎小管損傷的特異性標(biāo)志物，檢測(cè)尿液中KM-1水平可間接評(píng)價(jià)腎損傷特另Ij是腎小管損傷情況。再灌注24h后，取尿，采用ELISA試劑盒檢測(cè)KIM-1含量。結(jié)果如圖3所示，與假手術(shù)組相比，模型組動(dòng)物尿液ΙΠΜ-1含量明顯升高。和模型組相比，丹酚酸A各給藥組能降低尿中MM-1含量，并且呈劑量依賴性。
[0061 ] 3.丹酚酸A對(duì)大鼠腎臟組織病理?yè)p傷及損傷評(píng)分的影響
[0062]再灌注24小時(shí)后，處死大鼠，取腎組織固定于4%的多聚甲醛，石蠟包埋，切片，HE染色，于光鏡下觀察組織病理?yè)p傷并進(jìn)行評(píng)分。如圖4和圖5所示，正常組和假手術(shù)組腎臟組織腎小管結(jié)構(gòu)保持正常；模型組出現(xiàn)明顯的急性腎小管壞死，主要表現(xiàn)為腎小管上皮細(xì)胞脫落、壞死以及管型形成。給予丹酚酸A治療后，急性腎小管壞死程度明顯減輕，腎小管壞死評(píng)分呈劑量依賴性降低。
[0063]4.丹酚酸A對(duì)血漿VffF的作用
[0064]再灌注24h后，取血，采用ELI SA試劑盒檢測(cè)血漿vWF含量。如圖6所示，與假手術(shù)組相比，模型組血漿vWF含量明顯升高。和模型組相比，丹酚酸A各給藥組能降低血漿中vWF的含量。
[0065]5.丹酚酸A對(duì)腎小管周圍微血管內(nèi)皮的作用
[0066]透射電鏡結(jié)果顯示，正常組和假手術(shù)組腎小管周圍微血管保持正常，內(nèi)皮細(xì)胞無(wú)損傷出現(xiàn)。模型組腎小管周圍微血管內(nèi)皮出現(xiàn)明顯損傷，內(nèi)皮表面不平滑，內(nèi)皮細(xì)胞間接觸不緊密，基底膜增厚分層以及內(nèi)皮細(xì)胞表面有微絨毛突起的形成。與模型組相比，丹酚酸A各給藥組能明顯減輕微血管內(nèi)皮損傷，內(nèi)皮細(xì)胞間接觸緊密，內(nèi)皮細(xì)胞表面的微絨毛突起減少，如圖7所示。
[0067]6.丹酚酸A對(duì)腎小管周圍微血管密度的影響
[0068]與假手術(shù)組相比，模型組腎小管周圍微血管密度明顯降低。丹酚酸A各給藥組呈劑量依賴性抑制腎小管周圍微血管密度的降低，如圖8和圖9所示。
[0069]7.丹酚酸A對(duì)VEGFA表達(dá)的影響
[0070]VEGFA在腎小管上皮細(xì)胞上的表達(dá)情況與腎小管周圍的微血管密度密切相關(guān)。模型組動(dòng)物腎小管上皮細(xì)胞VEGFA表達(dá)明顯降低。與模型組相比，丹酚酸A明顯增加VEGFA的表達(dá)量，如圖10和圖11所示。
[0071 ] 8.丹酚酸A對(duì)HIF-Ια表達(dá)的影響
[0072]HIF-1a對(duì)低氧環(huán)境非常敏感，可以作為反映低氧水平的一個(gè)標(biāo)志物。模型組中，HIF-1a在腎小管細(xì)胞核中高表達(dá)。然而，在丹酚酸A組中，HIF-1a的表達(dá)明顯降低。丹酚酸A明顯改善腎低氧環(huán)境，如圖12和13所示。
[0073]9.丹酚酸A對(duì)血小板活化的作用
[0074]結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比，模型組的P-選擇素陽(yáng)性表達(dá)的血小板數(shù)明顯增多，表明活化血小板數(shù)增多。與模型組相比，丹酚酸A各給藥組P-選擇素陽(yáng)性表達(dá)的血小板數(shù)呈劑量依賴性減少。丹酚酸A能明顯抑制血小板的活化，如圖14和15所示。
[0075]由此可見，丹酚酸A可有效減輕腎小管壞死和腎小管微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，增加血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)，抑制微血管密度的減少，改善缺血缺氧程度，從而減輕急性腎損傷大鼠腎臟組織損傷。因此，丹酚酸A可以用作制備治療急性腎損傷藥物中，從而開辟了丹酚酸A的新用途。
[0076]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0077]參考文獻(xiàn)
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【主權(quán)項(xiàng)】
1.丹酚酸A在制備治療急性腎損傷藥物中的應(yīng)用。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述丹酚酸A的可藥用鹽在制備治療急性腎損傷藥物中的應(yīng)用。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述治療急性腎損傷藥物為減輕腎小管壞死和血管內(nèi)皮損傷、增加血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)、降低缺氧誘導(dǎo)因子Ia表達(dá)改善缺氧環(huán)境的藥物。4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述急性腎損傷的原因?yàn)槿毖?、藥物、毒素、重大?chuàng)傷、外科手術(shù)中的一種或多種。5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述丹酚酸A由以下制備方法得到:以質(zhì)量濃度為1.0%的丹參多酚酸鹽溶液為原料，添加檸檬酸三鈉調(diào)pH至6.0，于125 °C、.0.15MPa條件下轉(zhuǎn)化4小時(shí)，冷卻至室溫后，鹽酸調(diào)pH至2.0-3.0，得到丹酚酸A溶液;將上述丹酚酸A溶液依次過(guò)HPD100樹脂富集與純化、CG161樹脂分離與純化、硅膠柱色譜精細(xì)純化，即得到所述丹酚酸A。
【文檔編號(hào)】A61K31/216GK106074487SQ201610495121
【公開日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年6月28日
【發(fā)明人】范華英, 劉珂, 楊明艷, 張作凱, 高振芳, 王學(xué)凱, 郎躍武
【申請(qǐng)人】煙臺(tái)大學(xué)