一種元和正胃片及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種元和正胃片，由大黃300g、龍膽300g、木香300g、延胡索200g、薄荷25g、甘草200g、丁香20g、碳酸氫鈉600g作為原料藥制成，采用特定的濃縮和干燥設(shè)備，制備得到的元和正胃片中延胡索乙素含量高，并發(fā)現(xiàn)元和正胃片在制備抑制中國倉鼠肺CHL細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
【專利說明】
一種元和正胃片及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及中藥提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種元和正胃片及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 元和正胃片活血散瘀，消腫止痛。用于跌打損傷，瘀血腫痛?，F(xiàn)有技術(shù)中的制備方 法，工藝粗糙、落后，雜質(zhì)多，有效成分含量低，導(dǎo)致患者用量過大，不方便服用，嚴(yán)重影響了 本品在臨床上應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 發(fā)明目的：為了解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種元和正胃片及其制備 方法。
[0004] 技術(shù)方案:本發(fā)明的目的是通過如下的方案實(shí)現(xiàn)的：
[0005] 一種元和正胃片，由大黃300g、龍膽300g、木香300g、延胡索200g、薄荷25g、甘草 200g、丁香20g、碳酸氫鈉600g作為原料藥制成，其特征在于制備方法為:取大黃300g、龍膽 300g、木香300g、延胡索200g、薄荷25g、甘草200g、丁香20g，加藥材10倍重量的水，浸泡 〇. 5h，煎煮1小時，過濾，藥渣再加入藥材8倍重量的水，煎煮1小時，藥液濾出，合并兩次煎煮 液，濃縮至60°C相對密度為1.05，加乙醇使含醇量的體積百分比達(dá)75%，攪拌，靜置，過濾， 濾液濃縮至65°C時相對密度為1.25,并回收乙醇，得濃縮液，使用微波萃取，得萃取液，繼續(xù) 濃縮，將濃縮液進(jìn)行干燥，加入碳酸氫鈉600g，制粒，壓片，即得元和正胃片。
[0006] 所述元和正胃片制備方法中所述微波萃取方法為:將水提醇沉后的濃縮液投入微 波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，每次加入的70 % 乙醇的量為濃縮液重量的2倍，得萃取液，濃縮，優(yōu)選條件為:微波萃取功率500W，每次萃取6 分鐘。
[0007] 所述元和正胃片，上述制備方法中三次濃縮使用裝置，包括罐體，設(shè)置在所述罐體 上的進(jìn)料口和設(shè)置在所述罐體底部的出料管，在所述罐體內(nèi)設(shè)有攪拌軸，在所述攪拌軸上 設(shè)有攪拌槳，在所述罐體的頂部設(shè)有與所述攪拌軸相連接的攪拌電機(jī)，在所述罐體的內(nèi)壁 上設(shè)有環(huán)形凹槽，所述環(huán)形凹槽的底端靠近所述罐體的底壁，在所述環(huán)形凹槽內(nèi)設(shè)有環(huán)形 旋轉(zhuǎn)塊，在所述罐體的側(cè)壁內(nèi)設(shè)有驅(qū)動電機(jī)，在所述驅(qū)動電機(jī)的主軸上設(shè)有驅(qū)動齒盤，在所 述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊的外環(huán)面上設(shè)有與所述驅(qū)動齒盤相齒合的齒槽，在所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊的內(nèi)環(huán)面 上均勻設(shè)有至少三條刮筋，所述刮筋的底壁抵壓在所述罐體的底壁上端面上，在所述罐體 上設(shè)有與所述驅(qū)動電機(jī)相連接的調(diào)節(jié)器。
[0008] 所述元和正胃片，上述制備方法中濃縮裝置所述環(huán)形凹槽的頂壁與底壁均勻設(shè)有 滾珠，所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊的上端面和下端面抵壓在所述滾珠上。
[0009] 所述元和正胃片，上述制備方法中濃縮裝置所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊與所述環(huán)形凹槽的連 接面上設(shè)有密封金屬條，所述滾珠設(shè)置在所述密封金屬條與環(huán)形凹槽的內(nèi)側(cè)端。
[0010] 所述元和正胃片，上述制備方法中濃縮裝置所述出料管上還設(shè)有冷卻器，在所述 罐體內(nèi)設(shè)有水份測定儀。
[0011]所述元和正胃片，上述制備方法中干燥使用裝置，包括箱體，設(shè)置在所述箱體內(nèi)的 物料架和設(shè)置在所述箱體頂部的進(jìn)風(fēng)管和出風(fēng)管，其特征在于:在所述箱體的側(cè)壁內(nèi)設(shè)有 與所述進(jìn)風(fēng)管相連通的進(jìn)風(fēng)通道，在所述箱體的側(cè)壁上設(shè)有與所述進(jìn)風(fēng)通道相連通的風(fēng) 孔，所述出風(fēng)管穿過所述箱體的頂壁連通箱體內(nèi)與箱體外部，在所述箱體的側(cè)壁內(nèi)還設(shè)有 調(diào)溫腔和滅菌腔，在所述調(diào)溫腔內(nèi)設(shè)有電加熱塊，所述進(jìn)風(fēng)通道穿過所述調(diào)節(jié)腔和滅菌腔 設(shè)置，在所述箱體的底壁內(nèi)設(shè)有旋轉(zhuǎn)腔，在所述旋轉(zhuǎn)腔內(nèi)設(shè)有旋轉(zhuǎn)電機(jī)，所述旋轉(zhuǎn)電機(jī)的主 軸與所述物料架相連接，在所述物料架內(nèi)設(shè)有震動凹槽，在所述物料架的頂面設(shè)有盛放板， 在所述盛放板與所述震動凹槽之間設(shè)有震動裝置。
[0012] 所述元和正胃片，上述制備方法中干燥使用裝置所述震動裝置包括驅(qū)動電機(jī)，設(shè) 置在所述驅(qū)動電機(jī)主軸上的偏心輪，所述偏心輪的輪邊抵壓在所述盛放板的底面中心，在 所述盛放板的底部與所述震動凹槽的底壁之間設(shè)有拉簧，所述拉簧以所述偏心輪為中心對 稱設(shè)置。
[0013] 所述元和正胃片，上述制備方法中干燥使用裝置所述箱體內(nèi)設(shè)有溫度傳感器，在 所述箱體的側(cè)壁內(nèi)設(shè)有與所述溫度傳感器相連接的驅(qū)動器，所述驅(qū)動器與所述電加熱塊的 控制端相連接，在所述箱體上還設(shè)有箱門。
[0014] 所述元和正胃片在制備抑制中國倉鼠肺CHL細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
[0015]現(xiàn)有技術(shù)中，元和正胃片采用醇提的方法，工藝粗糙、落后，雜質(zhì)多，導(dǎo)致患者用量 過大，不方便服用，本發(fā)明制備的元和正胃片中延胡索乙素得率增加，含量高。本發(fā)明中的 濃縮設(shè)備結(jié)構(gòu)簡單、操作便捷，在加熱濃縮時，可以通過驅(qū)動電機(jī)驅(qū)動環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊旋轉(zhuǎn)，從 而使刮筋在罐體的底面刮動，從而可有效的防止罐體的底壁結(jié)塊，一定程度上可提高加熱 濃縮效率，解決了傳統(tǒng)技術(shù)中藥濃縮設(shè)備罐底容易結(jié)塊從而影響加熱效率的技術(shù)不足，使 用穩(wěn)定性好，藥物的有效成分穩(wěn)定不被破壞。本干燥設(shè)備結(jié)構(gòu)簡單、操作簡單快捷，其采用 箱體側(cè)壁進(jìn)行送風(fēng)，并增設(shè)了電加熱塊，可以根據(jù)箱內(nèi)的溫度進(jìn)行調(diào)節(jié)，從而保證了干燥溫 度的穩(wěn)定性，而且設(shè)有旋轉(zhuǎn)電機(jī)和震動裝置，可以在加熱的同時對盛放板進(jìn)行旋轉(zhuǎn)和震動， 從而可防止藥局部干燥，從而一定程度上可以提高干燥的效率，解決了傳統(tǒng)技術(shù)的干燥裝 置干燥效率低的技術(shù)不足。并發(fā)現(xiàn)元和正胃片在制備抑制中國倉鼠肺CHL細(xì)胞增殖藥物中 的應(yīng)用。
【附圖說明】
[0016] 為了使本發(fā)明的內(nèi)容更容易被清楚的理解，下面根據(jù)具體實(shí)施例并結(jié)合附圖，對 本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，其中：
[0017] 圖1為本發(fā)明濃縮裝置的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0018] 圖2為本發(fā)明干燥裝置的結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 以下通過實(shí)施例形式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不應(yīng)將此 理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均 屬于本發(fā)明的范圍。
[0020] 實(shí)施例1
[0021 ]由大黃300g、龍膽300g、木香300g、延胡索200g、薄荷25g、甘草200g、丁香20g、碳酸 氫鈉600g作為原料藥制成，其特征在于制備方法為:取大黃300g、龍膽300g、木香300g、延胡 索200g、薄荷25g、甘草200g、丁香20g，加藥材10倍重量的水，浸泡0.5h，煎煮1小時，過濾，藥 渣再加入藥材8倍重量的水，煎煮1小時，藥液濾出，合并兩次煎煮液，濃縮至60°C相對密度 為1.05，加乙醇使含醇量的體積百分比達(dá)75%，攪拌，靜置，過濾，濾液濃縮至65°C時相對密 度為1.25，并回收乙醇，得濃縮液，使用微波萃取，得萃取液，繼續(xù)濃縮，將濃縮液進(jìn)行干燥， 加入碳酸氫鈉600g，制粒，壓片，即得元和正胃片。
[0022]所述元和正胃片的制備方法，所述微波萃取方法為:將水提醇沉后的濃縮液投入 微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率400W，萃取2次，每次8分鐘，每次加入的70%乙醇 的量為濃縮液重量的2倍，得萃取液，濃縮。
[0023]見圖1:所述元和正胃片的制備方法，上述三次濃縮裝置，包括罐體1，設(shè)置在所述 罐體1上的進(jìn)料口 2和設(shè)置在所述罐體1底部的出料管3，在所述罐體1內(nèi)設(shè)有攪拌軸4，在所 述攪拌軸4上設(shè)有攪拌槳5,在所述罐體1的頂部設(shè)有與所述攪拌軸4相連接的攪拌電機(jī)6,在 所述罐體1的內(nèi)壁上設(shè)有環(huán)形凹槽7,所述環(huán)形凹槽7的底端靠近所述罐體1的底壁，在所述 環(huán)形凹槽7內(nèi)設(shè)有環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊8,在所述罐體1的側(cè)壁內(nèi)設(shè)有驅(qū)動電機(jī)9,在所述驅(qū)動電機(jī)9的 主軸上設(shè)有驅(qū)動齒盤10,在所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊8的外環(huán)面上設(shè)有與所述驅(qū)動齒盤10相齒合的 齒槽11，在所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊8的內(nèi)環(huán)面上均勻設(shè)有至少三條刮筋12,所述刮筋12的底壁抵壓 在所述罐體1的底壁上端面上，在所述罐體1上設(shè)有與所述驅(qū)動電機(jī)9相連接的調(diào)節(jié)器13,調(diào) 節(jié)器為市場上已使用結(jié)構(gòu)，只需要按照其連接要求連接使用即可。在使用時通過控制驅(qū)動 電機(jī)，使驅(qū)動電機(jī)帶動環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊旋轉(zhuǎn)，從而使刮筋在環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊的帶動下在罐體的底壁 頂面刮動，從而可以槳聚積在罐體底壁頂面的藥渣刮松，從而可防止結(jié)塊。
[0024] 在所述環(huán)形凹槽7的頂壁與底壁均勻設(shè)有滾珠14,所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊8的上端面和下 端面抵壓在所述滾珠14上。設(shè)有滾珠，可以保證環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊的正常旋轉(zhuǎn)，減少環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊與 環(huán)形凹槽之間的摩擦，從而提高使用壽命和使用穩(wěn)定性。
[0025] 在所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊8與所述環(huán)形凹槽7的連接面上設(shè)有密封金屬條15,所述滾珠設(shè) 置在所述密封金屬條與環(huán)形凹槽的內(nèi)側(cè)端。
[0026] 在所述出料管上還設(shè)有冷卻器16,在所述罐體內(nèi)設(shè)有水份測定儀17。
[0027]見圖2:所述元和正胃片的制備方法，上述干燥使用裝置，包括箱體1，設(shè)置在所述 箱體1內(nèi)的物料架2和設(shè)置在所述箱體1頂部的進(jìn)風(fēng)管3和出風(fēng)管4,在所述箱體1的側(cè)壁內(nèi)設(shè) 有與所述進(jìn)風(fēng)管3相連通的進(jìn)風(fēng)通道5,在所述箱體1的側(cè)壁上設(shè)有與所述進(jìn)風(fēng)通道5相連通 的風(fēng)孔6,進(jìn)風(fēng)孔設(shè)置在側(cè)壁上，可以保證通風(fēng)的均勻性，而且可以大大提高與藥物的接觸 面積，所述出風(fēng)管4穿過所述箱體1的頂壁連通箱體1內(nèi)與箱體1外部，在所述箱體1的側(cè)壁內(nèi) 還設(shè)有調(diào)溫腔7和滅菌腔8,在所述調(diào)溫腔7內(nèi)設(shè)有電加熱塊9,設(shè)有電加熱塊可以根據(jù)需要 對進(jìn)風(fēng)管的溫度進(jìn)行調(diào)節(jié)，保證干燥溫度的穩(wěn)定性，所述進(jìn)風(fēng)通道5穿過所述調(diào)節(jié)腔7和滅 菌腔8設(shè)置，在所述箱體1的底壁內(nèi)設(shè)有旋轉(zhuǎn)腔10,在所述旋轉(zhuǎn)腔10內(nèi)設(shè)有旋轉(zhuǎn)電機(jī)11，所述 旋轉(zhuǎn)電機(jī)11的主軸與所述物料架2相連接，在所述物料架2內(nèi)設(shè)有震動凹槽12，在所述物料 架2的頂面設(shè)有盛放板13,在所述盛放板13與所述震動凹槽12之間設(shè)有震動裝置14。
[0028]所述震動裝置14包括驅(qū)動電機(jī)141，設(shè)置在所述驅(qū)動電機(jī)141主軸上的偏心輪142， 所述偏心輪142的輪邊抵壓在所述盛放板13的底面中心，在所述盛放板13的底部與所述震 動凹槽12的底壁之間設(shè)有拉簧15,所述拉簧以所述偏心輪為中心對稱設(shè)置，在使用時通過 偏心輪的抵壓使盛放板上升，當(dāng)偏心輪的凹部抵壓盛放板時，盛放板在拉簧的作用下復(fù)位， 在下落過程中使物材脫離盛放板之后再跌落在盛放板上實(shí)現(xiàn)物料的震動。
[0029] 在所述箱體1內(nèi)設(shè)有溫度傳感器16,在所述箱體的側(cè)壁內(nèi)設(shè)有與所述溫度傳感器 相連接的驅(qū)動器17,所述驅(qū)動器與所述電加熱塊的控制端相連接。溫度傳干器和驅(qū)動器為 市場上已有的現(xiàn)有技術(shù)，其在使用連接時只需要按照對應(yīng)的連接說明連接即可。
[0030] 在所述箱體上還設(shè)有箱門18。
[0031] 實(shí)施例2
[0032]由大黃300g、龍膽300g、木香300g、延胡索200g、薄荷25g、甘草200g、丁香20g、碳酸 氫鈉600g作為原料藥制成，其特征在于制備方法為:取大黃300g、龍膽300g、木香300g、延胡 索200g、薄荷25g、甘草200g、丁香20g，加藥材10倍重量的水，浸泡0.5h，煎煮1小時，過濾，藥 渣再加入藥材8倍重量的水，煎煮1小時，藥液濾出，合并兩次煎煮液，濃縮至60°C相對密度 為1.05，加乙醇使含醇量的體積百分比達(dá)75%，攪拌，靜置，過濾，濾液濃縮至65°C時相對密 度為1.25，并回收乙醇，得濃縮液，使用微波萃取，得萃取液，繼續(xù)濃縮，將濃縮液進(jìn)行干燥， 加入碳酸氫鈉600g，制粒，壓片，即得元和正胃片。
[0033]所述元和正胃片的制備方法，所述微波萃取方法為:將水提醇沉后的濃縮液投入 微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率600W，萃取2次，每次4分鐘，每次加入的70%乙醇 的量為濃縮液重量的2倍，得萃取液，濃縮。
[0034]濃縮和干燥裝置同上。
[0035] 實(shí)施例3
[0036]由大黃300g、龍膽300g、木香300g、延胡索200g、薄荷25g、甘草200g、丁香20g、碳酸 氫鈉600g作為原料藥制成，其特征在于制備方法為:取大黃300g、龍膽300g、木香300g、延胡 索200g、薄荷25g、甘草200g、丁香20g，加藥材10倍重量的水，浸泡0.5h，煎煮1小時，過濾，藥 渣再加入藥材8倍重量的水，煎煮1小時，藥液濾出，合并兩次煎煮液，濃縮至60°C相對密度 為1.05，加乙醇使含醇量的體積百分比達(dá)75%，攪拌，靜置，過濾，濾液濃縮至65°C時相對密 度為1.25，并回收乙醇，得濃縮液，使用微波萃取，得萃取液，繼續(xù)濃縮，將濃縮液進(jìn)行干燥， 加入碳酸氫鈉600g，制粒，壓片，即得元和正胃片。
[0037]所述元和正胃片的制備方法，所述微波萃取方法為:將水提醇沉后的濃縮液投入 微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率500W，萃取2次，每次6分鐘，每次加入的70%乙醇 的量為濃縮液重量的2倍，得萃取液，濃縮。
[0038]濃縮和干燥裝置同上。
[0039] 上述實(shí)施例中原料均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。
[0040] 實(shí)施例4:本發(fā)明元和正胃片中延胡索乙素含量測定實(shí)驗(yàn)研究資料
[0041 ] 1.1實(shí)驗(yàn)藥物:本發(fā)明元和正胃片:按實(shí)施例1-3方法制備。對照組采用普通濃縮方 法制備元和正胃片提取物。
[0042] 1.2儀器:高效液相色譜儀系統(tǒng)包括高效液相色譜儀(Waters 515) ;P200高壓栗； Waters 2487紫外檢測器及GJ605型高壓六通進(jìn)樣閥；色譜柱為Kromasil C18色譜柱(250mm X 4.6mm，5μπι);數(shù)據(jù)采集及處理采用HS色譜數(shù)據(jù)工作站V4.0+(杭州英譜科技）
[0043] 1.3測定條件:照高效液相色譜法（中國藥典2000年版二部附錄V D)測定。色譜柱： Kromasil C18色譜柱（250mmX4.6mm，5ym);流動相為甲醇--0· 1%磷酸（用三乙胺調(diào)pH至 6) (60:40)，等度，流速:lmL/min;柱溫:30 °C ;檢測波長:280nm;進(jìn)樣:20yL.
[0044] h 4實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0045]各實(shí)施例制備的元和正胃片中延胡索乙素含量測定結(jié)果 [0046]
[0047]根據(jù)上表的試驗(yàn)結(jié)果可知，本發(fā)明實(shí)施例1-3制備的元和正胃片中延胡索乙素含 量明顯高于對照組。
[0048]實(shí)施例5:本發(fā)明元和正胃片抑制中國倉鼠肺CHL細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究資料 [0049] 1實(shí)驗(yàn)材料
[0050] 1.1實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株
[00511中國倉鼠肺CHL細(xì)胞，吉林省正和藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞庫，DMEM+ 10%FBS常規(guī)培養(yǎng)。
[0052] 1.2實(shí)驗(yàn)藥物
[0053]研究藥物:本發(fā)明元和正胃片:按實(shí)施例1方法制備。
[0054] 藥液儲液：稱取100mg元和正胃片，溶于5ml無水乙醇中，0.2μηι濾器過濾，500μ1 doff管分裝，_20°C存儲，同時0.2μπι濾器過濾無水乙醇以備對照組之用。
[0055] 1.3實(shí)驗(yàn)試劑
[0056] DMEM(GIBC0公司Cat ·Νο · 12100-061Lot ·Νο · 758137);胎牛血清（浙江天杭生物科 技有限公司Lot. No. 100419) ;NaHC03(上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat. No. 11810-033Lot.No. 1088387) ;Trypsin(AMRES ⑶公司批號：2010/04) ;EDTA(AMRESC0 公司批號： 2009/10) ;Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0 公司批號：2010242) ;Streptomycin Sulfate (AMRESC0公司批號：2010382);無水乙醇（南京化學(xué)試劑有限公司批號： 080310182) ;MTT(Biosharp批號：0793) ;PBS(實(shí)驗(yàn)室自配）；
[0057] 1.4實(shí)驗(yàn)器材
[0058]萊卡倒置顯微鏡(德國Leica型號:DM1L);可見-紫外光微孔板檢測儀(美國MD公司 型號：SPECTRA MAX 190) ;C02培養(yǎng)箱(FORMA型號:3111);超凈臺（蘇凈集團(tuán)安泰公司制造 型號：SW-CJ-ZFD);純水儀(美國Spring公司型號：S/N 020579);精密移液器(法國吉爾森公 司型號：P2);電子天平（德國賽多利斯有限公司型號：BT323S);全自動高壓滅菌鍋（日本 SANYO公司型號：MLS-30 20);臺式電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司型號： DHG9123A);冰箱（西門子公司型號:KG18V21TI);液氮罐(CBS型號：2001);低速離心機(jī)(上海 安亭科學(xué)儀器廠型號：ΚΑ-1000) ;0 · 2μπι濾器（MILLIP0RE型號：SLGP033RB); 10cm培養(yǎng)皿 (NEST公司）、96孔培養(yǎng)板(NEST公司）；細(xì)胞計數(shù)板;離心管、移液管、Tips若干。
[0059] 2實(shí)驗(yàn)方法
[0060] 1)中國倉鼠肺CHL細(xì)胞用DMEM+10%FBS于37°C、5%⑶2進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)（10cm培養(yǎng) 皿），當(dāng)細(xì)胞生長至對數(shù)期時，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml 0.25 %胰蛋白 酶-0.04 %EDTA，37 °C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細(xì)胞后將其轉(zhuǎn) 入離心管中，lOOOrpm離心5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3 X 104個/ml。
[0061 ] 2)將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180μ1，培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中 (37°C，5%C02)常規(guī)培養(yǎng)。
[0062] 3)根據(jù)細(xì)胞生長情況，一般長至50%-70%，加入元和正胃片溶液，繼續(xù)培養(yǎng)24h。
[0063] 4)24h 后加入 20μ1 MTT 溶液（5mg/ml，即0·5%ΜΤΤ)，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。
[0064] 5)4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200μ1二甲基亞砜，置搖床 上低速振蕩l〇min，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。
[0065] 6)同時設(shè)置本底(不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液），對照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介 質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜），每組設(shè)定6個復(fù)孔。
[0066] 7)結(jié)果以藥物對細(xì)胞的抑制率表示：
[0067] 細(xì)胞增值抑制率（％ )=(對照孔0D值-給藥孔0D值)/對照孔0D值X 100%。實(shí)驗(yàn)重 復(fù)3次。
[0068] 3統(tǒng)計處理
[0069] 米用Microsoft Excel 2003軟件中的相關(guān)分析和Student t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以mean土 S.D.表示。
[0070] 4實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0071] MTT法實(shí)驗(yàn)后統(tǒng)計結(jié)果顯示，與對照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時，對中國倉鼠肺 CHL細(xì)胞增殖抑制有差異(P〈0.05)，劑量在10mg/ml時該差異具有顯著性0〈〇.〇1)，當(dāng)劑量 達(dá)到15-20mg/ml時有極顯著性差異(P〈0.001)。
[0072] 元和正胃片對中國倉鼠肺CHL細(xì)胞增殖抑制影響研究(5T±SD)
[0073]
[0074] 汪：與對照姐K牧，;林KU.UUi
[0075] 5實(shí)驗(yàn)結(jié)論
[0076]元和正胃片可以抑制中國倉鼠肺CHL細(xì)胞增殖，減少中國倉鼠肺CHL細(xì)胞的細(xì)胞生 長數(shù)目，該作用呈劑量依賴性。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種元和正胃片，由大黃300g、龍膽300g、木香300g、延胡索200g、薄荷25g、甘草 200g、丁香20g、碳酸氫鈉 600g作為原料藥制成，其特征在于制備方法為:取大黃300g、龍膽 300g、木香300g、延胡索200g、薄荷25g、甘草200g、丁香20g，加藥材10倍重量的水，浸泡 〇. 5h，煎煮1小時，過濾，藥渣再加入藥材8倍重量的水，煎煮1小時，藥液濾出，合并兩次煎煮 液，濃縮至60°C相對密度為1.05，加乙醇使含醇量的體積百分比達(dá)75%，攪拌，靜置，過濾， 濾液濃縮至65°C時相對密度為1.25,并回收乙醇，得濃縮液，使用微波萃取，得萃取液，繼續(xù) 濃縮，將濃縮液進(jìn)行干燥，加入碳酸氫鈉600g，制粒，壓片，即得元和正胃片。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述元和正胃片，其特征在于上述制備方法中所述微波萃取方法為： 將水提醇沉后的濃縮液投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率400-600W，萃取2次， 每次4-8分鐘，每次加入的70%乙醇的量為濃縮液重量的2倍，得萃取液，濃縮，優(yōu)選條件為： 微波萃取功率500W，每次萃取6分鐘。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述元和正胃片，其特征在于上述制備方法中三次濃縮使用裝置，包 括罐體，設(shè)置在所述罐體上的進(jìn)料口和設(shè)置在所述罐體底部的出料管，在所述罐體內(nèi)設(shè)有 攪拌軸，在所述攪拌軸上設(shè)有攪拌槳，在所述罐體的頂部設(shè)有與所述攪拌軸相連接的攪拌 電機(jī)，在所述罐體的內(nèi)壁上設(shè)有環(huán)形凹槽，所述環(huán)形凹槽的底端靠近所述罐體的底壁，在所 述環(huán)形凹槽內(nèi)設(shè)有環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊，在所述罐體的側(cè)壁內(nèi)設(shè)有驅(qū)動電機(jī)，在所述驅(qū)動電機(jī)的主 軸上設(shè)有驅(qū)動齒盤，在所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊的外環(huán)面上設(shè)有與所述驅(qū)動齒盤相齒合的齒槽，在 所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊的內(nèi)環(huán)面上均勻設(shè)有至少三條刮筋，所述刮筋的底壁抵壓在所述罐體的底 壁上端面上，在所述罐體上設(shè)有與所述驅(qū)動電機(jī)相連接的調(diào)節(jié)器。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述元和正胃片，其特征在于上述制備方法中濃縮裝置所述環(huán)形凹 槽的頂壁與底壁均勻設(shè)有滾珠，所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊的上端面和下端面抵壓在所述滾珠上。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述元和正胃片，其特征在于上述制備方法中濃縮裝置所述環(huán)形旋 轉(zhuǎn)塊與所述環(huán)形凹槽的連接面上設(shè)有密封金屬條，所述滾珠設(shè)置在所述密封金屬條與環(huán)形 凹槽的內(nèi)側(cè)端。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述元和正胃片，其特征在于上述制備方法中濃縮裝置所述出料管 上還設(shè)有冷卻器，在所述罐體內(nèi)設(shè)有水份測定儀。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述元和正胃片，其特征在于上述制備方法中干燥使用裝置，包括箱 體，設(shè)置在所述箱體內(nèi)的物料架和設(shè)置在所述箱體頂部的進(jìn)風(fēng)管和出風(fēng)管，其特征在于:在 所述箱體的側(cè)壁內(nèi)設(shè)有與所述進(jìn)風(fēng)管相連通的進(jìn)風(fēng)通道，在所述箱體的側(cè)壁上設(shè)有與所述 進(jìn)風(fēng)通道相連通的風(fēng)孔，所述出風(fēng)管穿過所述箱體的頂壁連通箱體內(nèi)與箱體外部，在所述 箱體的側(cè)壁內(nèi)還設(shè)有調(diào)溫腔和滅菌腔，在所述調(diào)溫腔內(nèi)設(shè)有電加熱塊，所述進(jìn)風(fēng)通道穿過 所述調(diào)節(jié)腔和滅菌腔設(shè)置，在所述箱體的底壁內(nèi)設(shè)有旋轉(zhuǎn)腔，在所述旋轉(zhuǎn)腔內(nèi)設(shè)有旋轉(zhuǎn)電 機(jī)，所述旋轉(zhuǎn)電機(jī)的主軸與所述物料架相連接，在所述物料架內(nèi)設(shè)有震動凹槽，在所述物料 架的頂面設(shè)有盛放板，在所述盛放板與所述震動凹槽之間設(shè)有震動裝置。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述元和正胃片，其特征在于上述制備方法中干燥使用裝置所述震 動裝置包括驅(qū)動電機(jī)，設(shè)置在所述驅(qū)動電機(jī)主軸上的偏心輪，所述偏心輪的輪邊抵壓在所 述盛放板的底面中心，在所述盛放板的底部與所述震動凹槽的底壁之間設(shè)有拉簧，所述拉 簧以所述偏心輪為中心對稱設(shè)置。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述元和正胃片，其特征在于上述制備方法中干燥使用裝置所述箱 體內(nèi)設(shè)有溫度傳感器，在所述箱體的側(cè)壁內(nèi)設(shè)有與所述溫度傳感器相連接的驅(qū)動器，所述 驅(qū)動器與所述電加熱塊的控制端相連接，在所述箱體上還設(shè)有箱門。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述元和正胃片在制備抑制中國倉鼠肺CHL細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng) 用。
【文檔編號】A61J3/10GK106038724SQ201610543918
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年7月11日
【發(fā)明人】李洋
【申請人】南京多寶生物科技有限公司