一種治療腸易激綜合征的中藥提取物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種治療腸易激綜合征的中藥提取物及其制備方法，該中藥提取物取蒼術1.6?1.8重量份、陳皮1重量份、姜半夏1重量份、厚樸1重量份、藿香1重量份、茯苓1重量份，通過超臨界CO2技術萃取揮發(fā)油，并用β?環(huán)糊精包合技術對揮發(fā)油包合，采用正交設計L9(34)試驗篩選醇提工藝及水提工藝，優(yōu)選出最佳工藝條件。本發(fā)明的中藥提取物治療腸易激綜合征效果顯著，制備工藝穩(wěn)定，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】
-種治療腸易激綜合征的中藥提取物及其制備方法
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于中藥技術領域，具體設及一種治療腸易激綜合征的中藥提取物及其制 備方法。
【背景技術】
[0002] 腸易激綜合征是一種臨床上最常見的胃腸功能素亂性疾病，該疾病無胃腸道器質(zhì) 性病變的綜合征，缺乏可W解釋癥狀的形態(tài)學改變和生化異常，具有慢性、常持續(xù)存在或間 歇發(fā)作。本病的發(fā)病率高，并有逐年上漲的趨勢。其病因和發(fā)病機制尚未完全闡明，現(xiàn)普遍 認為是由多種發(fā)病機制共同作用的結果。祖國醫(yī)學并沒有IBS運一病名，根據(jù)其臨床表現(xiàn)， 將其歸屬于"腹痛"、"泄瀉"、"郁證"等范疇。其病因與感受外邪、情志失調(diào)、飲食不節(jié)及臟腑 虛弱等有關。
[0003] 腸易激綜合征的發(fā)病率高，其中腹瀉型腸易激綜合征約占45-50%。由于腸易激綜 合征臨床表現(xiàn)個體差異較大，目前西醫(yī)并沒有一種藥物對腸易激綜合癥治療完全有效，主 要是對癥治療和綜合治療。近年來很多報道中采用中醫(yī)藥治療腹瀉型腸易激綜合征，臨床 實踐證明治療療效明顯，不良反應少，復發(fā)率低，顯示出中醫(yī)治療該病有明顯優(yōu)勢。
[0004] 經(jīng)過文獻分析及實際調(diào)查結果顯示，中醫(yī)藥的治療主要分為中藥湯劑、中成藥、針 灸治療，W及中西醫(yī)結合治療。目前較為普遍的是中藥湯劑，效果不明顯，亟待開發(fā)針對腹 瀉型的腸易激綜合征，并且療效確切、安全穩(wěn)定，服用方便的中成藥。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明對古方進行了繼承和發(fā)展，采用超臨界C〇2技術萃取揮發(fā)油，并用β-環(huán)糊精 包合技術對揮發(fā)油包合，采用正交設計L9(34)試驗篩選醇提工藝及水提工藝，優(yōu)選出最佳工 藝條件，加入適量輔料制成顆粒劑，本發(fā)明的治療腸易激綜合征的中藥提取物制備工藝穩(wěn) 定，療效確切、安全穩(wěn)定，服用方便。
[0006] 本發(fā)明的目的是通過W下方式實現(xiàn)的：
[0007] -種治療腸易激綜合征的中藥提取物，其特征在于該中藥提取物是通過W下步驟 制備得到的：
[000引取蒼術1.6-1.8重量份、陳皮1重量份、姜半夏1重量份、厚樸1重量份、蕾香1重量 份、巧等1重量份；
[0009] 1)提取揮發(fā)油:蒼術和陳皮采用二氧化碳超臨界萃取，萃取壓力為25-35MPa，萃取 溫度36-48°C，萃取時間1-化，C〇2流量為20-24HZ，所得揮發(fā)油除水后備用，藥渣另存；
[0010] 2)醇提:取厚樸、姜半夏，與蒼術、陳皮兩味提取揮發(fā)油后的藥渣，加總重6-10倍量 的濃度為70-90%的乙醇，提取1-3次，每次加熱保持微沸1-2小時，合并醇提液，靜置，濾過， 藥渣備用，醇提液減壓濃縮至60°C時的相對密度為1.25~1.30的清膏；
[00川 3)水提:取蕾香、巧等與上述醇提后的藥渣，加6-10倍量的水，加熱保持微沸1-2小 時，提取1-3次，合并水提液，靜置，濾過，水溶液減壓濃縮至60°C時的相對密度為1.25~ 1.30的清膏；
[001^ 4)揮發(fā)油的包合:按照揮發(fā)油:β-環(huán)糊精l:4-8ml/g的比例稱取β-環(huán)糊精，將β-CD 加入水研勻，倒入膠體磨中，邊研磨邊緩慢連續(xù)滴加用無水乙醇溶解的揮發(fā)油，娠磨20- 40min，將得到的混合溶液于4°C下靜置2地W上，抽濾，蒸饋水清洗至不再有液滴滴下時，真 空干燥，得包合物；
[0013] 5)混合:將醇提清膏、水提清膏、揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物混合，干燥即得。
[0014] 優(yōu)選步驟1)中萃取壓力為25MPa，萃取溫度48 °C，萃取時間化，C〇2流量為20化。
[0015] 優(yōu)選步驟2)醇提步驟中乙醇濃度為70 %，溶媒倍量8倍，每次加熱保持微沸1.5小 時，提取2次。
[0016] 優(yōu)選步驟3)水提步驟中水的倍量8倍，加熱保持微沸2小時，提取2次。
[0017]優(yōu)選步驟4)中揮發(fā)油與β-環(huán)糊精的比例化：6ml/g。
[001引優(yōu)選步驟4)中β-CD與其5倍量的水研勻，揮發(fā)油與無水乙醇按照體積比1:1比例溶 解。
[0019] 優(yōu)選步驟4)中娠磨時間為40min，真空干燥溫度為40°C。
[0020] 所述的中藥提取物可W與藥學接受的輔料制成各種制劑，其劑型可W是丸劑、片 劑、散劑、顆粒劑或膠囊劑。
[0021] 上述治療腸易激綜合征的中藥提取物的制備方法包括W下步驟：
[0022] 取蒼術1.6-1.8重量份、陳皮1重量份、姜半夏1重量份、厚樸1重量份、蕾香1重量 份、巧等1重量份；
[0023] 1)提取揮發(fā)油:蒼術和陳皮采用二氧化碳超臨界萃取，萃取壓力為25-35MPa，萃取 溫度36-48°C，萃取時間1-化，C〇2流量為20-24HZ，所得揮發(fā)油除水后備用，藥渣另存；
[0024] 2)醇提:取厚樸、姜半夏，與蒼術、陳皮兩味提取揮發(fā)油后的藥渣，加總重6-10倍量 的濃度為70-90%的乙醇，提取1-3次，每次加熱保持微沸1-2小時，合并醇提液，靜置，濾過， 藥渣備用，醇提液減壓濃縮至60°C時的相對密度為1.25~1.30的清膏；
[0025] 3)水提:取蕾香、巧等與上述醇提后的藥渣，加6-10倍量的水，加熱保持微沸1-2小 時，提取1-3次，合并水提液，靜置，濾過，水溶液減壓濃縮至60°C時的相對密度為1.25~ 1.30的清膏；
[0026] 4)揮發(fā)油的包合:按照揮發(fā)油:β-環(huán)糊精l:4-8ml/g的比例稱取β-環(huán)糊精，將β-CD 加入水研勻，倒入膠體磨中，邊研磨邊緩慢連續(xù)滴加用無水乙醇溶解的揮發(fā)油，娠磨20- 40min，將得到的混合溶液于4°C下靜置2地W上，抽濾，蒸饋水清洗至不再有液滴滴下時，真 空干燥，得包合物；
[0027] 5)混合:將醇提清膏、水提清膏、揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物混合，干燥即得。
[0028] 上述中藥提取物在制備治療腸易激綜合征的藥物中的應用。
[0029] 本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明提供的中藥提取物具有治療腸易激綜合征的作用，可 用于制備治療腸易激綜合征的藥物，本發(fā)明提供的方法操作簡單，生產(chǎn)成本低，提取效果 好。
[0030] (一)工藝路線的篩選
[0031] 1、揮發(fā)油提取工藝篩選
[0032] (1)正交試驗設計優(yōu)選揮發(fā)油萃取參數(shù)
[0033] 考察萃取壓力、萃取溫度、萃取時間及C〇2流量對揮發(fā)油萃取的影響，取蒼術 187.5g、陳皮112.5g按下列因素水平表萃取，因素水平表見表1。
[0034] 表1揮發(fā)油萃取的因素水平表
[0035]
[0036] W揮發(fā)油得油量(g)為考察指標，對正交數(shù)據(jù)進行了數(shù)據(jù)分析，結果見表2。
[0037] 表2W得油量為指標的正交安排表 [00；3 引
[0039](表中提供了9個試驗方案。如第6號試驗是A2B3C1化，即萃取壓力為30MPa，萃取溫 度為48°C，萃取1小時，C〇2流量為22化，依此類推）
[0040] W揮發(fā)油得油量為指標，極差分析結果B〉C〉D〉A，即影響因素排列順序為：萃取溫 度〉萃取時間>0)2流量〉萃取壓力。各因素與水平之間的最佳組合為A1B3C3D1，即萃取壓力 25MPa，萃取溫度48 °C，萃取時間化，C〇2流量20化。
[0041] (3)驗證試驗
[0042] WA項作為誤差項，進一步進行方差分析。
[0043] 由試驗結果可知，B因素有顯著性差異，故對B因素上浮一個水平（54°C)進行兩次 追加實驗，并依照極差分析優(yōu)選的最佳參數(shù)（即萃取壓力25MPa，萃取溫度48°C，萃取時間 化，0)2流量20化）進行驗證試驗，由結果可知，追加驗證實驗的參數(shù)與正交實驗是吻合的， 揮發(fā)油得油量為22.25g，表明該工藝穩(wěn)定可行。但是，由于溫度升高，萃余物容易板結，不易 取出，浪費了時間；并且萃余物還要繼續(xù)乙醇提取，為節(jié)約成本和時間，且驗證結果與試驗 結果相接近，條件基本穩(wěn)定可靠，因此最終選擇最佳工藝參數(shù)A1B3C3化，即萃取壓力25MPa， 萃取溫度48 °C，萃取時間化，CO2流量20化。
[0044] 2、醇提條件的優(yōu)選研究
[0045] (1)正交試驗設計篩選醇提條件
[0046] 厚樸、姜半夏等二味藥材與蒼術、陳皮超臨界萃取揮發(fā)油后的藥渣采用醇提的方 法?，F(xiàn)考察乙醇濃度、溶媒倍量、提取時間、提取次數(shù)四個因素對提取的影響。稱取相當于 32g蒼術、陳皮混合藥材的藥渣，12g厚樸粗粉，12g姜半夏置電熱套中按下述因素水平表回 流提取，因素水平表見表3。
[0047] 表3醇提條件的正交因素水平表
[004引
[0049] 我們選用澄皮巧、厚樸酪含量和浸膏量(g)為考察指標，對正交試驗進行了數(shù)據(jù)分 析，結果見表4。
[0050] 表4W澄皮巧、厚樸酪含量和浸膏量為指標的綜合評分正交安排表
[0化1 ]
[0化2]
[0054] (表中提供了9個試驗方案。如第6號試驗是A2B3C1D2,即用10倍量80%乙醇提取2 次，每次1小時依此類推）
[0055] W干膏得量為指標，極差分析結果0〉4〉〇8，即影響因素排列順序為:提取次數(shù)〉乙 醇濃度〉提取時間〉溶媒倍量。各因素與水平之間的最佳組為A1B2C2化，WC項作為誤差項，進 一步進行方差分析。D因素對實驗結果有顯著性影響。最佳醇提組合為乙醇濃度70%，加醇8 倍，提取3次，每次1.5小時。
[0056] W澄皮巧含量為指標，極差分析結果B〉D〉C〉A，即影響因素排列順序為:溶媒倍量〉 提取次數(shù)〉提取時間〉乙醇濃度。各因素與水平之間的最佳組為A3B2C1化，WA項作為誤差項， 進一步進行方差分析。B因素對實驗結果有顯著性影響。最佳醇提組合為乙醇濃度90%，加 醇8倍，提取2次，每次1小時。
[0057] W厚樸酪含量為指標，極差分析結果A〉B〉D〉C，即影響因素排列順序為：乙醇濃度〉 溶媒倍量〉提取次數(shù)〉提取時間。各因素與水平之間的最佳組為A3B1C2化，WC項作為誤差項， 進一步進行方差分析。A因素對實驗結果有顯著性影響。最佳醇提組合為乙醇濃度90%，加 醇6倍，提取2次，每次1.5小時。
[0058] 由于3個指標確定的最佳工藝不同，為了更加客觀地評價，用綜合評分尋找最佳工 藝，對3個指標賦與不同的權重，考慮到生產(chǎn)成本，故對3個指標分別賦予權重:將干膏得量 權重定為0.2,澄皮巧含量的權重定為0.4,厚樸酪含量的權重定為0.4。采用綜合評分法:綜 合評分為Υ =權重X(l〇〇-ymax+y〇,其中ymax為每個指標中的最大值，yi為第i行相應的指標 值。W綜合評分為指標，極差分析結果D〉A〉C〉B，即影響因素排列順序為：提取次數(shù)〉乙醇濃 度〉提取時間〉加醇倍量。各因素與水平之間的最佳組合為A出2C2化，WB項作為誤差項，進一 步進行方差分析，各因素對實驗結果的影響均不顯著。最終醇提組合為乙醇濃度70%，加醇 8倍，提取2次，每次1.5小時。
[0化9] (2)醇提驗證試驗
[0060]稱取相當于32g蒼術、陳皮混合藥材的藥渣，12g厚樸粗粉，12g姜半夏，W8倍量 70 %乙醇提取2次，每次1.5小時。進行Ξ批驗證試驗，結果見表5。
[0061 ] 表5.醇提驗證試驗結果
[0062]
[0063] ①結論:醇提驗證試驗結果與正交試驗結果基本吻合，因此將8倍量70 %乙醇，提 取2次，每次1.5小時，確定為最佳醇提工藝條件。
[0064] 3、水提條件的優(yōu)選研究
[0065] (1)采用正交試驗設計篩選水提條件
[0066] 蕾香、巧等等二味藥材與上述醇提藥渣采用水提的方法。W溶媒倍量、提取時間、 提取次數(shù)Ξ個因素為考察因素。采用正交設計L9(34)，稱取相當于56g蒼術、陳皮、厚樸、姜半 夏混合藥材的藥渣，12g蕾香，12g巧等置電熱套中按下述因素水平表回流提取，因素水平表 見表6。
[0067]表6.水提條件的正交因素水平表 [006引
[0069] 我們選用干膏得率（％ )和多糖含量（％ )為考察指標，對正交試驗進行了數(shù)據(jù)分 析，結果見表7。
[0070] 表7. W干膏得率、多糖含量為指標的綜合評分正交安排表
[0071]
[0072]
[0073] (表中提供了9個試驗方案。如第6號試驗是A2B3C1，即用8倍量水提取1次，每次2小 時，依此類推）
[0074] W干膏得率為指標，極差分析結果C〉A〉B，即影響因素排列順序為:提取次數(shù)〉溶媒 倍量〉提取時間。各因素與水平之間的最佳組合為A2B3C3，WD項作為誤差項，進一步進行方 差分析。c因素對實驗結果有顯著性影響。最佳水提組合為加8倍量水，提取3次，每次2小時。
[0075] W多糖含量為指標，極差分析結果C〉A〉B，即影響因素排列順序為:提取次數(shù)〉溶媒 倍量〉提取時間。各因素與水平之間的最佳組合為A2BiCi，WD項作為誤差項，進一步進行方 差分析，各因素對實驗結果均無顯著性影響。最佳水提組合為加8倍量水，提取1次，每次1小 時。
[0076] 由于2個指標確定的最佳工藝不同，為了更加客觀地評價，用綜合評分尋找最佳工 藝，對2個指標賦與不同的權重，考慮到服用量，故對巧旨標分別賦予權重:將干膏得率權重 定為0.4，多糖含量的權重定為0.6。采用綜合評分法:綜合評分為Υ =權重X (100-ymax+yi)， 其中ymax為每個指標中的最大值，yi為第i行相應的指標值。W綜合評分為指標，極差分析結 果A〉B〉C，即影響因素排列順序為:溶媒倍量〉提取時間〉提取次數(shù)。各因素與水平之間的最 佳組合為A2B3C2，WD項作為誤差項，進一步進行方差分析。各因素對實驗結果的影響均不顯 著。最終水提組合為加8倍量水，提取2次，每次2小時。
[0077] (2)水提驗證試驗
[0078] 稱取相當于56g蒼術、陳皮、厚樸、姜半夏混合藥材的藥渣，12g蕾香，12g巧等，加水 8倍量，提取2次，每次2小時。進行Ξ批驗證試驗，結果見表8。
[00巧]表8.水提驗證試驗結果
[0080]
[0081] 結論:水提驗證試驗結果與正交試驗結果基本吻合，因此將加8倍量水，提取2次， 每次2小時，確定為最佳水提工藝條件。
[0082] 4、揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合條件的優(yōu)選研究
[0083] (1)正交試驗設計篩選β-環(huán)糊精包合條件
[0084] 目前文獻報道的揮發(fā)油包合多采用飽和水溶液、超聲法和膠體磨娠磨法，膠體磨 娠磨法具有包合溫度低、時間短、包合率高等優(yōu)點。故選擇膠體磨娠磨法進行揮發(fā)油包合工 藝研究。
[0085] 用乙醇溶解揮發(fā)油，試驗表明當揮發(fā)油與乙醇用量比為1:1時揮發(fā)油溶解較好。待 揮發(fā)油溶解后將其逐滴加入與水混溶的β-環(huán)糊精溶液中進行包合，包合結束后，用具塞錐 形瓶接收包合物的混合溶液，4°C條件下靜置12hW上，置布氏漏斗中抽濾，包合物于40°C真 空干燥。W揮發(fā)油與e-CD的體積質(zhì)量比、包合時間、加水倍量為考察因素，采用正交設計L9 (34)，因素水平見表9。
[0086] 表9包合工藝的正交因素水平表
[0087]
[0088] 我們選用包合物得率、揮發(fā)油利用率和包合物含油率為評價指標，對正交試驗進 行了數(shù)據(jù)分析，結果見表10。
[0089] 表10.包合正交試驗安排及結果分析表
[0090]
[0091]
[0092]
[OOW](表中提供了9個試驗方案。如第6號試驗是A2B3C1，即揮發(fā)油:β-環(huán)糊精1:6,加水5 倍量，包合20min，依此類推。）
[0094] W包合物得率為指標，極差分析結果A〉C〉B，即影響因素排列順序為：揮發(fā)油與β- 環(huán)糊精比〉時間〉加水倍量。各因素與水平之間的最佳組為AiB2C2，WD項作為誤差項，進一步 進行方差分析。各因素對實驗結果的影響均不顯著。
[0095] W包合物含油率為指標，極差分析結果A〉C〉B，即影響因素排列順序為：主客分子 比〉包合時間〉加水倍量。各因素與水平之間的最佳組合為A2B3C3，WD項作為誤差項，進一步 進行方差分析，各因素對實驗結果的影響均不顯著。
[0096] W揮發(fā)油利用率為指標，極差分析結果A〉C〉B，即影響因素排列順序為：主客分子 比〉包合時間〉加水倍量。各因素與水平之間的最佳組為A3B3C3，WD項作為誤差項，進一步進 行方差分析，各因素對實驗結果的影響均不顯著。
[0097] 由于3個指標確定的最佳工藝不同，為了更加客觀地評價，用綜合評分尋找最佳工 藝，計算方法如下:在揮發(fā)油包合物的3個指標中，分別選取最高者作為100分，然后對3個指 標賦與不同的權重，考慮到生產(chǎn)成本，故對3個指標分別賦予權重:包合物得率0.2,含油率 0.4,油利用率0.4,采用綜合評分法:綜合評分為Υ =權重X(100-ymax+yi)，其中ymax為每個 指標中的最大值，yi為第i行相應的指標值。W綜合評分為指標，極差分析結果A〉C〉B，即影 響因素排列順序為：揮發(fā)油與0-環(huán)糊精比〉時間〉加水量。各因素與水平之間的最佳組為 A3B3C3dWD項作為誤差項，進一步進行方差分析，各因素對實驗結果的影響均不顯著。考慮 到服用量問題，最終包合工藝定為揮發(fā)油與0-環(huán)糊精(ml:g)比為1:6,加入5倍量水(環(huán)糊精 質(zhì)量的5倍），包合40min。
[0098] (2)揮發(fā)油包合驗證試驗
[0099] 量取揮發(fā)油6ml，將揮發(fā)油用等量乙醇溶解后，按照揮發(fā)油與β-環(huán)糊精的比為1:6、 加水5倍量、包合40min的條件進行驗證試驗，驗證結果見表11。
[0100] 表11揮發(fā)油包合追加驗證試驗結果
[0101]
[0102] 結論:揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合追加驗證試驗結果與前述試驗結果基本吻合，因此將 揮發(fā)油與e-CD(ml:g)比1:6、加水5倍量，包合時間40min確定為最佳揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合工 藝條件。
[0103] (3)包合物制備方法
[0104] 用乙醇溶解揮發(fā)油，揮發(fā)油與乙醇用量比為1:1。待揮發(fā)油溶解后將其逐滴加入與 0-環(huán)糊精溶液(加水量為e-CD的5倍）中進行包合，包合結束后，用具塞錐形瓶接收包合物的 混合溶液，4°C條件下靜置12hW上，置布氏漏斗中抽濾，用蒸饋水洗涂，待不再有液滴滴下 時，將包合物于40°C真空干燥。
[01化]④包合物的表征：
[0106] 采用紫外分光光度法及差示掃描量熱法對包合物進行表征。
[0107] a.紫外分光光度法(UV)
[0108] 分別取β-環(huán)糊精、包合物、揮發(fā)油、β-環(huán)糊精與揮發(fā)油的物理混合物適量，乙酸乙 醋作溶劑溶解，在250~60化m范圍內(nèi)進行掃描，掃描圖譜見圖1。由圖1可見，物理混合物與 揮發(fā)油A值基本一致，包合后A值明顯降低，表明揮發(fā)油已被包合。
[0109] β-環(huán)糊精無吸收，揮發(fā)油在337皿、316皿、296皿、266nm處有特征吸收峰，吸光度分 別為1.015、0.991、0.689、0.692;物理混合物在337皿、315皿、295皿處有吸收峰，吸光度分 別為0.936、0.920、0.638;物理混合物與揮發(fā)油基本一致，吸光度略低，可能是因為有一部 分揮發(fā)油與環(huán)糊精包合；包合物在337醒、316醒、297醒、266醒處有吸收峰，分別為0.193、 0.191、0.133、0.129,與物理混合物和揮發(fā)油相比基本一致，但吸光度明顯降低，說明揮發(fā) 油已被環(huán)糊精包合，包合成功。
[0110] b.差示掃描量熱法(DSC)
[0111] 分別取揮發(fā)油、揮發(fā)油與β-CD物理混合物、包合物和β-CD進行DSC掃描，結果見圖 2。由圖2可知，揮發(fā)油在133.40°C-174.38°C有一吸熱峰，熱洽值為36.8736J/g，i3-環(huán)糊精在 79.09 °C-97.44°C有一吸熱峰，熱洽值為686.8713J/g，物理混合物由于β-環(huán)糊精對揮發(fā)油 的吸附作用，使得133.4°C右移至219.69°C-222.12°C，79.38°C-106.03°C，表現(xiàn)出揮發(fā)油和 環(huán)糊精各自的吸收峰，熱洽值分別為5.4163J/g和258.7438J/g，包合物的吸收峰移至55.79 。(:-78.33°C，熱洽值為 227.39371/邑，133.40°〇174.38°(：和219.69°(：-222.12°(：左右的吸熱 峰消失，包合物與物理混合物圖譜有明顯區(qū)別，表明包合物已形成一種新的物相。
[0112] 由圖2可知，揮發(fā)油在133.40°C-174.38°C有一吸熱峰，熱洽值為36.8736J/g，f3-環(huán) 糊精在79.09 °C-97.44 °C有一吸熱峰，熱洽值為686.8713 J/g，物理混合物由于β-環(huán)糊精對 揮發(fā)油的吸附作用，使得133.4°C右移至219.69°C-222.12°C，79.38°C-106.03°C，表現(xiàn)出揮 發(fā)油和環(huán)糊精各自的吸收峰，熱洽值分別為5.41631八和258.74381八，包合物的吸收峰移 至 55.79°C-78.33°C，熱洽值為 227.39371/邑，133.40°〇174.38°(：和219.69°(：-222.12°(：左 右的吸熱峰消失，包合物與物理混合物圖譜有明顯區(qū)別，表明包合物已形成一種新的物相。
[0113] 5、顆粒成型工藝的研究
[0114] 1、輔料的種類及用量考察
[0115] 中藥提取過程中因為藥材及工藝等因素會影響其浸膏的得率，為了保持制劑的規(guī) 格均衡性，選用糊精適量作為賦形劑。同時為了適用于糖尿病患者，選用甜菊素作為矯味 劑。
[0116] (1)單因素篩選糊精用量
[0117] 取醇提和水提混合浸膏158.4g，加入揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物22.7g，分別加入0.5- 1.5倍量的糊精，W70%乙醇制粒，結果見表12。
[0118] 表12.糊精用量篩選結果
[0119]
[0120] 由上表可見浸膏158g中加入糊精1-1.5倍量左右時，制?？蒞進行，考慮服用量故 確定顆粒劑每袋規(guī)格為lOg，由于浸膏得率可隨藥材等因素變化，因此糊精用量在浸膏量的 1-1.5倍左右。
[0121] (2)單因素篩選甜菊素用量
[0122] 甜菊素的甜度為薦糖的200~300倍，選用不同比例進行試驗，根據(jù)口感確定甜菊 素的用量為0.75%，結果見表13。
[0123] 表13.甜菊素用量篩選結果
[0124]
[0125] 本發(fā)明的藥效學試驗如下：
[0126] 1.1藥品及試劑
[0127] 中藥提取物顆粒:按照實施例1方法制備得到。
[0128] 屯味除濕湯：按重量比例取半夏曲-厚樸-蒼術-廣蕾香-陳皮-巧等-甘草(20 : 20 : 20:10:10:10:7)藥材，加適量水煎煮。
[0129] 濃縮不換金正氣散：按處方比例取半夏曲-厚樸-蒼術-廣蕾香-陳皮-巧等-甘草 (1:1:1:1:1:1:)藥材，加適量水煎煮，濃縮。
[0130] 本方水煎劑:按處方比例取蒼術-姜半夏-厚樸-廣蕾香-陳皮-巧等(5:3:3:3:3:3) 藥材，加適量水煎煮，濃縮。
[0131] Botting液：按《實驗藥理方法學》附錄配制：NaCl 8.0，KC1 0.2，CaC12 0.08， MgC12 0.04，Na肥P04 0.05，Na肥03 1.0，Glucose 1.0(g)，蒸饋水配成 1000ml。
[0132] 1.2 動物
[0133] 小鼠，72只，方罕各半，體重18~22g;大鼠，72只，方罕不分，體重160~220g由上海第 二軍醫(yī)大學實驗動物中屯、，許可證號為:SCXK(滬)2002-0006。
[0134] 二、試驗方法和結果
[0135] 2.1對胃腸道推進的影響
[0136] 取合格小鼠72只，禁食12小時，按隨機分為9組，每組8只。正常對照組（陰性對照 組）、模型對照組、陽性藥得舒特組(3mg/kg)、中藥提取物高劑量組(16g/kg)、中藥提取物中 劑量組（8g/kg)、中藥提取物低劑量組（4g/kg)、本方水煎組（8g/kg)、屯味除濕湯組（8g/ kg)、不換金正氣散組(8g/kg)。正常對照組、模型對照組W蒸饋水0.4ml/20g灌胃，各組給藥 容積相等。給藥90min后正常對照組皮下注射生理鹽水(0. lml/20g體重），其余4組均皮下注 射新斯的明0.1ml (0. lml/20g，每ml含新斯的明0.03mg)，造成小腸過度疫李模型。15min后， 各組W碳末糊劑灌胃（0.2ml/10g，每劑含碳末0.05g，、阿拉伯膠0.02g)，繼而20min后處死， 分別測量小腸碳末推進長度及小腸總長度，計算碳末推進百分率。數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析采用組間 比較t檢驗，結果見表14。
[0137] 炭末推進百分率（％ )=墨汁在腸內(nèi)推進距離(cm)/小腸全長X 100%
[013引表14 AIP對胃腸道推進的影響(；巧)(n = 8)
[0139]
[0140] a : p〈Q . Q5 ; aa : p〈〇 . 01 ; aaa : p〈〇 . 001 空白對照組比較
[0141] b : p〈Q . Q5 ; bb : p〈〇 . 01 ; bbb : p〈〇 . 001模型對照組比較
[0142] 。: ？<0.05;。。:？<0.01;。。。:口<0.001本方水煎劑組比較
[0143] 結果表明，與模型對照組相比，陽性對照藥、中藥提取物高、中、低劑量可超極顯著 性抑制炭末在胃腸道內(nèi)的推進率(P<〇.001)，本方水煎劑可極顯著性抑制炭末在胃腸道內(nèi) 的推進率(p<〇.001)，屯味除濕湯及不換金正氣散無顯著性差異。與本方水煎劑相比，屯味 除濕湯、不換金正氣散對炭末在胃腸道內(nèi)的推進率抑制率有顯著性差異(P<〇.05)，中藥提 取物高劑量組對炭末在胃腸道內(nèi)的推進率抑制率有極顯著性差異(P<〇. 01 )，中劑量組對炭 末在胃腸道內(nèi)的推進率抑制率有顯著性差異(P<〇. 005)。
[0144] 2.2對番瀉葉所至大鼠腹瀉的治療作用
[0145] 所有大鼠于實驗前10小時禁食，自由飲水。其中隨機取8只為正常組模型組用蒸饋 水灌胃，其余大鼠均給予番瀉葉煎劑(〇.3g/mL)灌胃（按20mL/kg)，每日1次。持續(xù)5天。大鼠 造模標準為體重減輕，食欲減退，大便稀薄，倦邸少動，皮毛干枯無光澤。
[0146] 造模5天后繼續(xù)灌服番瀉葉，于每日服用番瀉葉后60分鐘開始給藥:模型組W生理 鹽水灌胃（20mL/kg);高劑量給藥組（11.2g/kg);中劑量給藥組（5.6g/kg);低劑量給藥組 (2.8g/kg);得舒特組（1.5mg/kg)，本方水煎組(8g/kg)、屯味除濕湯組(8g/kg)、不換金正氣 散組(8g/kg)。灌胃劑量20ml/kg。給藥后一小時單籠放置，籠底放置有濾紙，記錄3小時W內(nèi) 便稀情況。
[0147] 大鼠番瀉葉灌胃后化內(nèi)的稀便級：
[0148] W稀便污染濾紙形成的污跡的直徑大小定級，（圓形污跡，記錄其直徑長度;楠圓 形污跡:記錄其最長徑與最短徑之和的1/^2為直徑長度），制定標準如下：
[0149] I級:直徑長度1~1.9
[0150] Π 級:直徑長度2~2.9
[0151] 虹級：直徑長度3~3.9
[0152] IV級:直徑長度〉4
[0153] 實驗中設及公式如下：
[0154] 腹瀉率=腹瀉動物只數(shù)/動物總數(shù)X 100%
[01W] 表15. AIP對番瀉葉所至大鼠腹瀉的影響
[0156]
[0157] *:P<〇.〇5Day4 與 Dayl 比較
[0158] 結果表明，給藥第四天與給藥第一天組內(nèi)自身比較，陽性對照藥、中藥提取物高劑 量組、中藥提取物中劑量組能顯著降低稀便級數(shù)，抑制腹瀉率。因此，本發(fā)明中藥提取物具 有運脾除濕功效。主治腹瀉型腸易激綜合征，寒濕困脾證。
【附圖說明】
[0159] 圖1為紫外光譜圖。
[0160] 圖2為DSC掃描圖。
【具體實施方式】
[0161] W下通過實施例對本發(fā)明進行進一步的闡述：
[0162] 實施例1
[0163] -、中藥提取物處方：
[0164] 蒼術333g陳皮200g姜半夏200g [01化]厚樸200g蕾香200g巧等200g
[0166] 二、制法：
[0167] (一)提取揮發(fā)油:蒼術、陳皮二氧化碳超臨界萃取，萃取壓力為25MPa，萃取溫度48 Γ，萃取時間化，C〇2流量為20化，所得揮發(fā)油除水后備用，藥渣另存；
[0168] (二)醇提:取厚樸、姜半夏，與蒼術、陳皮等二味提取揮發(fā)油后的藥渣，加8倍量的 70%乙醇，加熱保持微沸1.5小時，提取2次，合并兩次醇提液，靜置，濾過，藥渣備用，醇提液 減壓濃縮至相對密度為1.25~1.30(60°C)的清膏備用。
[0169] (Ξ)水提:取蕾香、巧等與上述醇提后的藥渣，加8倍量的水，加熱保持微沸2小時， 提取2次，合并兩次水提液，靜置，濾過，水溶液減壓濃縮至相對密度為1.25~1.30(60°C)的 清膏備用。
[0170] (四）揮發(fā)油的包合:按照揮發(fā)油:β-環(huán)糊精(ml:g) = l:6的比例稱取β-環(huán)糊精，將 β-CD加入5倍量的水研勻，倒入膠體磨中，開動機器，緩慢連續(xù)滴加與無水乙醇（1:1)溶解的 揮發(fā)油，娠磨40min，將包合物及環(huán)糊精的混合溶液接出，于4°C下靜置24h，倒入布氏漏斗 中，抽濾，用50ml蒸饋水清洗2次，每次25ml，待不再有液滴滴下時，于40°C真空干燥，得包合 物備用。
[0171] 化)制顆粒； 水提浸膏和醇提浸膏（約相當于生藥1333g)(約） 525g
[0172]
[0173]
[0174] 制法:將水提浸膏、醇提浸膏、揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物、糊精適量及0.75%甜菊素 混合均勻，用適量70%乙醇將浸膏稀釋，制成軟材，14目不誘鋼篩制粒，干燥（《60°C )，干顆 粒過10目及50目篩，整粒，制成lOOOg，將所得顆粒侶錐包裝，分裝成lOg/袋，即得。
[0175] 實施例2
[0176] -、中藥提取物片劑處方：
[0177] 蒼術333g陳皮200g姜半夏200g
[0178] 厚樸200g蕾香200g巧等200g
[0179] 二、制法：
[0180] (一)提取揮發(fā)油:蒼術、陳皮二氧化碳超臨界萃取，萃取壓力為30MPa，萃取溫度36 Γ，萃取時間化，C〇2流量為24化，所得揮發(fā)油除水后備用，藥渣另存；
[0181] (二)醇提:取厚樸、姜半夏，與蒼術、陳皮等二味提取揮發(fā)油后的藥渣，加6倍量的 濃度為80 %乙醇，加熱保持微沸2小時，提取3次，合并醇提液，靜置，濾過，藥渣備用，醇提液 減壓濃縮至相對密度為1.25~1.30(60°C)的清膏備用。
[0182] (Ξ)水提:取蕾香、巧等與上述醇提后的藥渣，加10倍量的水，加熱保持微沸1小 時，提取3次，合并Ξ次水提液，靜置，濾過，水溶液減壓濃縮至相對密度為1.25~1.30 (60 °C)的清膏備用。
[0183] (四）揮發(fā)油的包合:按照揮發(fā)油:β-環(huán)糊精(ml:g) = l:4的比例稱取β-環(huán)糊精，將 β-CD加入5倍量的水研勻，倒入膠體磨中，開動機器，緩慢連續(xù)滴加與無水乙醇（1:1)溶解的 揮發(fā)油，娠磨30min，將包合物及環(huán)糊精的混合溶液接出，于4°C下靜置24h，倒入布氏漏斗 中，抽濾，用50ml蒸饋水清洗2次，每次25ml，待不再有液滴滴下時，于40°C真空干燥，得包合 物備用。
[0184] (五)制片劑:將水提浸膏、醇提浸膏、揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物和片劑常規(guī)輔料混合 壓片。
[01化]實施例3
[0186] 中藥提取物膠囊:將按照實施例2的步驟（1)、（2)(3)和(4)制備得到水提浸膏、醇 提浸膏、揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物和膠囊劑常規(guī)輔料制混合制備灌裝硬膠囊。
[0187] 實施例4
[0188] 中藥提取物軟膠囊:將按照實施例1的步驟（1)、（2)(3)和(4)制備得到水提浸膏、 醇提浸膏、揮發(fā)油0-環(huán)糊精包合物與適量的大豆油混合后壓制軟膠囊即可。
【主權項】
1. 一種治療腸易激綜合征的中藥提取物，其特征在于該中藥提取物是通過以下步驟制 備得到的： 取蒼術1.6-1.8重量份、陳皮1重量份、姜半夏1重量份、厚樸1重量份、藿香1重量份、茯 苳1重量份； 1) 提取揮發(fā)油:蒼術和陳皮采用二氧化碳超臨界萃取，萃取壓力為25-35MPa，萃取溫度 36-48°C，萃取時間l_2h，C0 2流量為20-24HZ，所得揮發(fā)油除水后備用，藥渣另存； 2) 醇提:取厚樸、姜半夏，與蒼術、陳皮兩味提取揮發(fā)油后的藥渣，加總重6-10倍量的濃 度為70-90 %的乙醇，提取1-3次，每次加熱保持微沸1-2小時，合并醇提液，靜置，濾過，藥渣 備用，醇提液減壓濃縮至60°C時的相對密度為1.25~1.30的清膏； 3) 水提:取藿香、茯苓與上述醇提后的藥渣，加6-10倍量的水，加熱保持微沸1-2小時， 提取1 -3次，合并水提液，靜置，濾過，水溶液減壓濃縮至60 °C時的相對密度為1.25~1.30的 清膏； 4) 揮發(fā)油的包合:按照揮發(fā)油:β_環(huán)糊精l:4-8ml/g的比例稱取β-環(huán)糊精，將β-⑶加入 水研勻，倒入膠體磨中，邊研磨邊緩慢連續(xù)滴加用無水乙醇溶解的揮發(fā)油，碾磨20_40min， 將得到的混合溶液于4°C下靜置24h以上，抽濾，蒸餾水清洗至不再有液滴滴下時，真空干 燥，得包合物； 5) 混合:將醇提清膏、水提清膏、揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物混合，干燥即得。2. 根據(jù)權利要求1所述的中藥提取物，其特征在于步驟1)中萃取壓力為25MPa，萃取溫 度48 °C，萃取時間2h，C02流量為20Hz。3. 根據(jù)權利要求1所述的中藥提取物，其特征在于步驟2)醇提步驟中乙醇濃度為70%， 溶媒倍量8倍，每次加熱保持微沸1.5小時，提取2次。4. 根據(jù)權利要求1所述的中藥提取物，其特征在于步驟3)水提步驟中水的倍量8倍，加 熱保持微沸2小時，提取2次。5. 根據(jù)權利要求1所述的中藥提取物，其特征在于步驟4)中揮發(fā)油與β-環(huán)糊精的比例 為1:6ml/g。6. 根據(jù)權利要求1所述的中藥提取物，其特征在于步驟4)中β-CD與其5倍量的水研勻， 揮發(fā)油與無水乙醇按照體積比1:1比例溶解。7. 根據(jù)權利要求1所述的中藥提取物，其特征在于步驟4)中碾磨時間為40min，真空干 燥溫度為40 °C。8. 根據(jù)權利要求1所述的中藥提取物，其特征在于該中藥提取物與藥學可接受的輔料 制成各種劑型，優(yōu)選為丸劑、片劑、散劑、顆粒劑或膠囊劑。9. 一種權利要求1所述的治療腸易激綜合征的中藥提取物的制備方法，其特征在于該 方法包括以下步驟： 取蒼術1.6_1.8重量份、陳皮1重量份、姜半夏1重量份、厚樸1重量份、藿香1重量份、茯 苳1重量份； 1) 提取揮發(fā)油:蒼術和陳皮采用二氧化碳超臨界萃取，萃取壓力為25-35MPa，萃取溫度 36-48°C，萃取時間l_2h，C0 2流量為20-24HZ，所得揮發(fā)油除水后備用，藥渣另存； 2) 醇提:取厚樸、姜半夏，與蒼術、陳皮兩味提取揮發(fā)油后的藥渣，加總重6-10倍量的濃 度為70-90 %的乙醇，提取1-3次，每次加熱保持微沸1-2小時，合并醇提液，靜置，濾過，藥渣 備用，醇提液減壓濃縮至60°C時的相對密度為1.25~1.30的清膏； 3) 水提:取藿香、茯苓與上述醇提后的藥渣，加6-10倍量的水，加熱保持微沸1-2小時， 提取1 -3次，合并水提液，靜置，濾過，水溶液減壓濃縮至60 °C時的相對密度為1.25~1.30的 清膏； 4) 揮發(fā)油的包合:按照揮發(fā)油:β_環(huán)糊精l:4-8ml/g的比例稱取β-環(huán)糊精，將β-⑶加入 水研勻，倒入膠體磨中，邊研磨邊緩慢連續(xù)滴加用無水乙醇溶解的揮發(fā)油，碾磨20_40min， 將得到的混合溶液于4°C下靜置24h以上，抽濾，蒸餾水清洗至不再有液滴滴下時，真空干 燥，得包合物； 5) 混合:將醇提清膏、水提清膏、揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物混合，干燥即得。10.權利要求1所述的中藥提取物在制備治療腸易激綜合征的藥物中的應用。
【文檔編號】A61K47/48GK105998480SQ201610323847
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月16日
【發(fā)明人】濮存海, 姬珊珊, 倪正
【申請人】濮存海