地瑞那韋乙醇鹽的醫(yī)藥新用圖
【專利摘要】本發(fā)明提供了地瑞那韋乙醇鹽的藥物新用途，具體涉及地瑞那韋乙醇鹽在預(yù)防或治療肥胖、II型糖尿病、糖尿病腎病和非酒精性脂肪肝的藥物中的應(yīng)用。在上述應(yīng)用中，其口服使用劑量范圍是50mg～2000mg；優(yōu)選50～1000mg。
【專利說(shuō)明】
地瑞那韋乙醇鹽的醫(yī)藥新用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于化學(xué)醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及地瑞那韋乙醇鹽的醫(yī)藥新用途;具體涉及地瑞那 韋乙醇鹽通過(guò)抑制高迀移率族蛋白Bl(high mobility group protein，HMGBl)的表達(dá)，以 致于預(yù)防或治療肥胖、II型糖尿病、糖尿病腎病和非酒精性脂肪肝等相關(guān)的代謝紊亂疾病。
【背景技術(shù)】
[0002] 2型糖尿病即成人發(fā)病型糖尿病，占糖尿病患者90%以上。2型糖尿病人多肥胖，產(chǎn) 生胰島素抵抗，導(dǎo)致對(duì)胰島素敏感性下降。糖尿病腎病為糖尿病的重要并發(fā)癥，糖尿病后期 近40%病人會(huì)發(fā)展為糖尿病腎病。肥胖癥是由于熱量攝入超過(guò)消耗所致的體內(nèi)脂肪堆積， 體重增加的一種非健康狀態(tài)。肥胖癥的發(fā)病率無(wú)論在發(fā)達(dá)國(guó)家還是發(fā)展中國(guó)家都迅速增 長(zhǎng)，并呈低齡化趨勢(shì)，已成為全球性嚴(yán)重影響健康的流行病，目前我國(guó)擁有超重者至少2-3 億人，肥胖癥患者突破7000萬(wàn)人。肥胖癥不僅影響人的日常生活，而且是導(dǎo)致2型糖尿病，冠 心病，高血壓，血脂異常，膽囊炎等疾病的主要因素。因此，肥胖癥的防治具有重要的臨床意 義。
[0003] 高迀移率族蛋白Bl(high mobility group protein，HMGBl)是一種高度保守的核 蛋白，廣泛分布于哺乳動(dòng)物細(xì)胞。隨著其晚期促炎作用的發(fā)現(xiàn)，HMGBl成為近年來(lái)危重醫(yī)學(xué) 研究的熱點(diǎn)祀點(diǎn)。高血糖可促進(jìn)HMGBl的表達(dá)[Volz HCl ,Seidel C，Laohachewin D,Kaya Z,Miiller OJ1Pleger ST,Lasitschka F,Bianchi ME,Remppis A,Bierhaus A,Katus HA, Andrassy M.HMGBl: the missing link between diabetes mellitus and heart failure .Basic Res Cardiol .2010; 105(6) :805-820. LHMGBl與肥胖關(guān)系密切，尤其脂肪 組織中的巨·細(xì)胞的HMGBl高表達(dá)[Weisberg SP，McCann D,Desai Μ,Rosenbaum Μ,Leibel RL,Ferrante Aff,Jr. Obesity is associated with macrophage accumulation in adipose tissue.J Clin Invest.2003；112(12):1796-1808.；ffagner M.A dangerous duo in adipose tissue:high-mobility group box lprotein and macrophages. Yale J Biol Med.2014；87(2):127-133.]〇
[0004] 地瑞那韋乙醇鹽(darunavir ethalolate，又稱"達(dá)如那韋"，商品名prezista)適 用于與小劑量利托那韋或其它抗HIV藥合用治療其它抗HIV藥治療無(wú)效的成人HIV感染，是 一種新的HIV-I蛋白酶抑制藥，其作用機(jī)制是選擇性抑制感染細(xì)胞內(nèi)的編碼Gag-Pol多蛋白 HIV卵裂，繼而抑制形成成熟的病毒粒，但地瑞那韋乙醇鹽在預(yù)防或治療肥胖、II型糖尿病、 糖尿病腎病和非酒精性脂肪肝的藥理作用未見(jiàn)報(bào)道。本發(fā)明人通過(guò)大量的研究發(fā)現(xiàn)地瑞那 韋乙醇鹽可以通過(guò)抑制HMGBl表達(dá)從而預(yù)防或治療肥胖、II型糖尿病、糖尿病腎病和非酒精 性脂肪肝?；诖耍景l(fā)明人發(fā)明了地瑞那韋乙醇鹽通過(guò)抑制IHMGBl表達(dá)，從而抑制肥胖、 II型糖尿病、糖尿病腎病和非酒精性脂肪肝的發(fā)生發(fā)展，以致于預(yù)防或治療肥胖、II型糖尿 病、糖尿病腎病和非酒精性脂肪肝。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明提供了地瑞那韋乙醇鹽在制備預(yù)防或治療肥胖、II型糖尿病、糖尿病腎病 和非酒精性脂肪肝的藥物中的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明提供了地瑞那韋乙醇鹽在制備預(yù)防或治療肥胖的藥物中的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明提供了地瑞那韋乙醇鹽在制備預(yù)防或治療Il型糖尿病的藥物中的應(yīng)用。 [0008]本發(fā)明提供了地瑞那韋乙醇鹽在制備預(yù)防或治療糖尿病腎病的藥物中的應(yīng)用。
[0009]本發(fā)明提供了地瑞那韋乙醇鹽在制備預(yù)防或治療非酒精性脂肪肝的藥物中的應(yīng) 用。
[0010] 本發(fā)明提供了地瑞那韋乙醇鹽通過(guò)抑制HMGBl的表達(dá)在肥胖、II型糖尿病、糖尿病 腎病和非酒精性脂肪肝中的藥物中的應(yīng)用。
[0011] 本發(fā)明提供的地瑞那韋乙醇鹽可以以和藥學(xué)上可接受的載體或輔料組成的藥物， 該藥物可以以藥學(xué)常規(guī)方法制備成片劑、膠囊劑、滴丸劑，優(yōu)選以膠囊形式存在。
[0012] 本發(fā)明提供的地瑞那韋乙醇鹽在用于肥胖、II型糖尿病、糖尿病腎病和非酒精性 脂肪肝時(shí)，其口服使用劑量范圍是50mg~2000mg;優(yōu)選50~lOOOmg。
【具體實(shí)施方式】
[0013]實(shí)施例1地瑞那韋乙醇鹽膠囊制備
[0014] 稱取50.0g地瑞那韋乙醇鹽、和150.Og羧甲基淀粉鈉充分混合均勻后過(guò)100目篩， 加入適量的3%PVP K3Q水溶液適量制軟材，20目篩制粒，60°C干燥3小時(shí)，18目篩整粒，加入 2. Og硬脂酸鎂，混合均勻后裝膠囊，調(diào)節(jié)膠囊重約200mg，即得。
[0015] 具體實(shí)施例
[0016] 試驗(yàn)例1地瑞那韋乙醇鹽對(duì)ob/ob肥胖小鼠的影響 [0017] 1.1實(shí)驗(yàn)材料
[0018] 糖化血紅蛋白測(cè)定試劑盒，批號(hào):0590072; HMGBl-抗購(gòu)買于sigma公司；地瑞那韋 乙醇鹽(純度99.5%，購(gòu)買于大連美侖生物科技有限公司）；高密度脂蛋白（HDL)試劑盒(北 京中生科技公司，批號(hào)：130706)、低密度脂蛋白（LDL)試劑盒（北京中生科技公司，批號(hào)： 130806)和甘油三酯(TG)試劑盒(北京中生科技公司，批號(hào)：130406)。
[0019] ob/ob小鼠，雄性50只，10周齡，體重50~55g;購(gòu)買于南京模式動(dòng)物研究所。
[0020] 1.2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
[0021] ob/ob小鼠50只，隨機(jī)分為5組，即模型組、地瑞那韋乙醇鹽灌胃給藥10mg/kg、 20mg/kg、200mg/kg、400mg/kg組。另外取10只正常ob/ob小鼠作為對(duì)照組。各組給予相應(yīng)藥 物，連續(xù)給藥4周。稱重和計(jì)算攝食量，測(cè)定糖化血紅蛋白（HbAlc )、血糖，高密度脂蛋白 (HDL)、低密度脂蛋白（LDL)和甘油三酯（TG)。取脂肪組織，均漿，BCA蛋白測(cè)定試劑盒 (Pierce公司）測(cè)定蛋白濃度后，取50yg樣品蛋白進(jìn)行10%的十二烷基磺酸鈉2聚丙烯酰胺 (SDS-PAGE)凝膠變性電泳、然后轉(zhuǎn)至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜，加入HMGBl-抗，β-actin作內(nèi) 參，Western blot檢測(cè)脂肪組織HMGBl蛋白的表達(dá)。比較各給藥組與模型組的差異。組間進(jìn) 行T檢驗(yàn)。
[0022] 表1地瑞那韋乙醇鹽給藥4周對(duì)ob/ob小鼠的影響(η = 10)
[0024] *，ρ〈0·05，'ρ〈0·01，與模型組比較
[0025] 表2地瑞那韋乙醇鹽給藥4周對(duì)ob/ob小鼠的血生化指標(biāo)影響(η = 10)
[0027] *，ρ〈0·05，**，ρ〈0·01，與模型組比較
[0028] 表1、表2結(jié)果顯不地瑞那韋乙醇鹽灌胃給藥1〇11^/1^、2〇11^/1^、20〇11^/1^和40〇11^/ kg組明顯降低體重和攝食量，降低血漿HbAl c、LDL和TG水平，抑制血糖升高，抑制脂肪組織 HMGBl表達(dá)下降，升高HDL水平(p〈0.05或p〈0.01)。地瑞那韋乙醇鹽200mg/kg組降低體重和 攝食量，降低血漿HbAlc、LDL和TG水平，抑制血糖升高，抑制脂肪組織HMGBl表達(dá)下降，升高 HDL水平與地瑞那韋乙醇鹽400mg/kg組比較無(wú)顯著性差異。
[0029] 試驗(yàn)例2地瑞那韋乙醇鹽對(duì)db/db II型糖尿病小鼠的影響
[0030] 2.1實(shí)驗(yàn)材料
[0031] 糖化血紅蛋白測(cè)定試劑盒，批號(hào):0590072; HMGBl-抗購(gòu)買于sigma公司；地瑞那韋 乙醇鹽(純度99.5%，購(gòu)買于大連美侖生物科技有限公司）；db/db小鼠，雄性60只，10周齡， 體重50~55g;購(gòu)買于南京模式動(dòng)物研究所。
[0032] 2.2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
[0033] db/db小鼠50只，隨機(jī)分為5組，即模型組、地瑞那韋乙醇鹽灌胃給藥10mg/kg、 20mg/kg，200mg/kg、400mg/kg組。另外取10只正常db/db小鼠作為對(duì)照組。各組給予相應(yīng)藥 物，連續(xù)給藥4周。稱重，測(cè)定糖化血紅蛋白（HbAlc)、血糖。取脂肪組織，均漿，BCA蛋白測(cè)定 試劑盒(Pierce公司）測(cè)定蛋白濃度后，取50yg樣品蛋白進(jìn)行10%的十二烷基磺酸鈉2聚丙 烯酰胺（SD S-PAGE)凝膠變性電泳、然后轉(zhuǎn)至聚偏二氟乙烯（PVDF)膜，加入HMGB1 -抗，β-actin作內(nèi)參，Western blot檢測(cè)脂肪組織HMGBl蛋白的表達(dá)。比較各給藥組與模型組的差 異。組間進(jìn)行T檢驗(yàn)。
[0034] 表3地瑞那韋乙醇鹽給藥4周對(duì)db/db糖尿病小鼠的影響(n = 10)
[0036] *，ρ〈0·05，**，ρ〈0·01，與模型組比較
[0037] 表3結(jié)果顯不地瑞那韋乙醇鹽灌胃給藥10mg/kg、20mg/kg、200mg/kg和400mg/kg組 明顯降低體重，降低血漿HbAlc水平，抑制血糖升高，抑制脂肪組織HMGBl表達(dá)下降（p〈0.05 或p〈0.01)。地瑞那韋乙醇鹽200mg/kg組降低體重，降低血漿HbAlc水平，抑制血糖升高，抑 制脂肪組織HMGBl表達(dá)下降與地瑞那韋乙醇鹽400mg/kg組比較無(wú)顯著性差異。
[0038] 試驗(yàn)例3地瑞那韋乙醇鹽對(duì)糖尿病腎病大鼠的影響
[0039] 3.1實(shí)驗(yàn)材料
[0040] 地瑞那韋乙醇鹽(純度99.5%，購(gòu)買于大連美侖生物科技有限公司）
[0041 ]苯那普利，北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：130106;鏈脲佐菌素（Sigma公司）， 血糖測(cè)定試劑盒(北京中生試劑有限公司批號(hào)：130503);肌酐和尿素氮試劑盒(北京中生科 技公司，批號(hào)：130606)。
[0042] 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SPF級(jí)Sprague Dawley大鼠，雄性，體重150g_200g，山東綠葉制藥股份 有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)為:SYXK (魯)20030020。
[0043] 3.2試驗(yàn)方法與結(jié)果
[0044] 雄性SD大鼠100只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，所有的大鼠在10%水合氯醛(0.35mL/1OOg， ip)麻醉，行左腎摘除術(shù)，一周后單次靜脈注射1%的鏈脲佐菌素溶液60mg/kg，鏈脲佐菌素 以0.1mol/L、pH為4.5枸椽酸緩沖溶液溶解，721!后眼眶采血，血糖測(cè)定試劑盒測(cè)定，血糖彡 16.7mmol/L確定為造模成功，4周后隨機(jī)分為6組，即模型組、苯那普利2mg/kg組，地瑞那韋 乙醇鹽灌胃5mg/kg組，地瑞那韋乙醇鹽灌胃10mg/kg組，地瑞那韋乙醇鹽灌胃100mg/kg組， 地瑞那韋乙醇鹽灌胃200mg/kg組，另外取10只作為正常對(duì)照組。各組連續(xù)給藥8周，采血測(cè) 定血清肌酐和尿素氮及各組大鼠24h尿蛋白排泄量。
[0045] 取腎組織，均漿，BCA蛋白測(cè)定試劑盒(Pierce公司）測(cè)定蛋白濃度后，取50yg樣品 蛋白進(jìn)行10%的十二烷基磺酸鈉 2聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝膠變性電泳、然后轉(zhuǎn)至聚偏二 氟乙烯(PVDF)膜，加入HMGBl-抗，β-actin作內(nèi)參，Western blot檢測(cè)腎組織HMGBl蛋白的 表達(dá)。比較各給藥組與模型組的差異，同時(shí)對(duì)腎臟作病理切片進(jìn)行顯微檢查。
[0046] 表4地瑞那韋乙醇鹽給藥8周對(duì)糖尿病腎病大鼠的影響(η = 10)
[0048] *，ρ〈0·05，**，ρ〈0·01，與模型組比較
[0049 ] 表5地瑞那韋乙醇鹽給藥8周對(duì)糖尿病腎病大鼠腎系數(shù)和HMGBl的影響(η = 10)
[0051] *，ρ〈0·05，**，ρ〈0·01，與模型組比較
[0052] 表4、表5結(jié)果表明苯那普利2mg/kg組，地瑞那韋乙醇鹽灌胃5mg/kg組，地瑞那韋乙 醇鹽灌胃l〇mg/kg組，地瑞那韋乙醇鹽灌胃100mg/kg組，地瑞那韋乙醇鹽灌胃200mg/kg組給 藥8周明顯降低血清肌酐和尿素氮24h尿蛋白排泄量，減少腎組織HMGBl的表達(dá)(與模型對(duì)照 組比較，p〈〇. 05或0.01);地瑞那韋乙醇鹽灌胃100mg/kg組降低血清肌酐和尿素氮及24h尿 蛋白排泄量，減少腎組織HMGBl的表達(dá)與地瑞那韋乙醇鹽灌胃200mg/kg組比較，無(wú)顯著性差 異。
[0053]病理檢查：正常對(duì)照組大鼠腎小球基底膜正常，未見(jiàn)增寬，足突排列整齊。模型對(duì) 照組大鼠腎小球基底膜顯著增寬，足突排列紊亂、融合，系膜細(xì)胞和基質(zhì)輕度節(jié)段性增生。 地瑞那韋乙醇鹽各給藥組較模型組病變輕，且隨劑量的增加病理?yè)p傷逐步減輕。
[0054] 試驗(yàn)例4地瑞那韋乙醇鹽對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠的影響
[0055] 4.1實(shí)驗(yàn)材料
[0056]地瑞那韋乙醇鹽(純度99.5%，購(gòu)買大連美侖生物科技有限公司）
[0057]二甲雙胍片（上海信誼藥廠有限公司，批號(hào)：1307231);游離脂肪酸(FFA)檢測(cè)試劑 盒，購(gòu)自南京建成生物工程有限公司，批號(hào)20130715;甘油三酯TG(酶學(xué)終點(diǎn)法）檢測(cè)試劑 盒，威特曼生物科技(南京)有限公司，批號(hào)ZGY13307;總膽固醇(TC試劑盒(北京中生科技公 司，批號(hào)：130506)
[0058] 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SPF級(jí)Sprague Dawley大鼠，雄性，體重150g_200g，山東綠葉制藥股份 有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)為:SYXK (魯)20030020。
[0059] 3.2試驗(yàn)方法與結(jié)果
[0060]大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，大鼠按體重編號(hào)，完全隨機(jī)分為正常組10只和高脂造模組 60只。正常組予普通飼料喂養(yǎng)，基礎(chǔ)飼料配方:面粉20 %、米粉10 %、玉米20 %、鼓皮25 %、豆 料20 %、魚(yú)粉2 %、骨粉2 %。高脂造模組予高脂飼料喂養(yǎng)，高脂飼料配方:基礎(chǔ)飼料77.6 %、 豬油10%、膽固醇2.0 %、膽鹽0.2%、丙硫氧嚓嚨0.2%、蛋黃粉5%、蔗糖5 %。均自由飲水。 連續(xù)造模8周，根據(jù)體重大鼠分為模型組、二甲雙胍10mg/kg、地瑞那韋乙醇鹽灌胃給藥5mg/ kg、10mg/kg、100mg/kg、200mg/kg組，各組繼續(xù)給予高脂飼料地同時(shí)給予上述相應(yīng)藥物，至 16周時(shí)處死大鼠，測(cè)定體重，計(jì)算肝系數(shù)，收集血樣，測(cè)定血清六1^^51'、了6、總膽固醇(1'〇、 游離脂肪酸(FFA)。取肝組織，均漿，BCA蛋白測(cè)定試劑盒(Pierce公司）測(cè)定蛋白濃度后，取 50yg樣品蛋白進(jìn)行10 %的十二烷基磺酸鈉2聚丙烯酰胺（SDS-PAGE)凝膠變性電泳、然后轉(zhuǎn) 至聚偏二氟乙?。≒VDF)膜，加入HMGBl-抗，β-actin作內(nèi)參，Western blot檢測(cè)肝組織 HMGBl蛋白的表達(dá)。比較各給藥組與模型組的差異。
[0061 ] 衷6地瑞那韋乙醇鹽給藥8周對(duì)非酒精件脂肪肝大鼠的影響（n = 10)
[0066] *，ρ〈0·05，'ρ〈0·01，與模型組比較
[0067] 表6、表7結(jié)果表明二甲雙胍10mg/kg組，地瑞那韋乙醇鹽灌胃5mg/kg組，地瑞那韋 乙醇鹽灌胃l〇mg/kg組，地瑞那韋乙醇鹽灌胃100mg/kg組，地瑞那韋乙醇鹽灌胃200mg/kg組 給藥8周明顯降低體重、肝系數(shù)和肝組織HMGBl表達(dá)，降低血清41^^31'、了6、1'(：和??4(與模型 對(duì)照組比較，p〈〇.05或0.01);地瑞那韋乙醇鹽灌胃100mg/kg組降低體重、肝系數(shù)和肝組織 HMGBl表達(dá)，降低血清41^^31^6、1'(^^^與地瑞那韋乙醇鹽灌胃20〇11^/1^組比較，無(wú)顯著 性差異。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種地瑞那韋乙醇鹽的醫(yī)藥新用途，其特征在于，地瑞那韋乙醇鹽在預(yù)防或治療肥 胖、II型糖尿病、糖尿病腎病和非酒精性脂肪肝的藥物中的應(yīng)用。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，地瑞那韋乙醇鹽可預(yù)防或治療肥胖。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，地瑞那韋乙醇鹽可預(yù)防或治療II型糖尿 病。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，地瑞那韋乙醇鹽可預(yù)防或治療糖尿病腎 病。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，地瑞那韋乙醇鹽可預(yù)防或治療非酒精性脂 肪肝。6. 根據(jù)權(quán)利要求2-5任一權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其特征在于，地瑞那韋乙醇鹽的使用劑 量范圍是50mg~2000mg。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，地瑞那韋乙醇鹽的使用劑量范圍是50~ 1000 mg0
【文檔編號(hào)】A61P1/16GK105943543SQ201610286162
【公開(kāi)日】2016年9月21日
【申請(qǐng)日】2016年5月3日
【發(fā)明人】蔣王林, 張廣華, 紀(jì)云霞, 葉亮, 朱海波
【申請(qǐng)人】濱州醫(yī)學(xué)院