用于預(yù)防轉(zhuǎn)移形成和/或復(fù)發(fā)的多糖的制作方法
【專利說明】用于預(yù)防轉(zhuǎn)移形成和/或復(fù)發(fā)的多糖
[0001 ] 描述
[0002] 本發(fā)明涉及包含通過α-糖苷鍵連接的任選取代的單糖單元，用于通過向罹患癌癥 的受試者的體腔施用來預(yù)防轉(zhuǎn)移形成和/或復(fù)發(fā)的多糖。本發(fā)明還涉及一種用于預(yù)防罹患 癌癥的受試者中的轉(zhuǎn)移形成的方法，其包括向所述受試者的體腔施用所述組合物，以及由 此預(yù)防所述受試者中的轉(zhuǎn)移形成。本發(fā)明也涉及組合物以及包括如本文所述的多糖和使其 溶解的藥學(xué)上可接受的物質(zhì)(means)的試劑盒和包括如本文所述的多糖和用于施用其的部 件的裝置。
[0003] 源于淀粉的多糖已例如作為血漿置換中的容量擴(kuò)張劑而用于醫(yī)學(xué)中以及也用于 臨床血液透析中（Sommermeyer等，1987，Krankenha uspharmazie，8(8) :271_278;Weidler 等，1991，Arzneimittelforschung/Drug Research，41:494_498)。常常，特定形式的輕烷基 化淀粉(HAS)，特定來說羥乙基化淀粉(HES)用于這些目的。
[0004] 多年來，已描述多糖的其它潛在醫(yī)學(xué)用途。
[0005] β-葡聚糖已被作為全面免疫刺激劑，以口服和靜脈內(nèi)用藥形式加以研究，特定來 說在癌癥治療中（A.Weitberg，J Exp Clin Cancer Res(2008)27:40;TO2007/084661)以及 在小鼠肉瘤模型中(US 4,207,312)加以研究。發(fā)現(xiàn)β-葡聚糖例如對癌細(xì)胞不具有直接細(xì)胞 毒性作用，而是具有免疫刺激作用（Chan等，J Hematol 0ncol(2009)，2:25;W02004/ 030613)。
[0006] DE 40 23 788 Al描述了羥烷基淀粉用于內(nèi)耳的高壓氧療法的用途。唯一實施例 描述了向接受高壓治療的患者施用包含銀杏(Ginkgo biloba)的提取物的HES溶液。然而， 未指不這種治療有治療效果。
[0007] 也存在對包含聚葡萄糖作為藥物活性化合物載體的溶液的用途的若干公開:US 6,207,654教導(dǎo)HES用以防止血清蛋白質(zhì)從毛細(xì)血管內(nèi)皮連接部泄漏的用途，并且提出使用 包含HES和白介素-2(interleukin-2)的溶液來治療病毒性和細(xì)菌性感染，目的在于預(yù)防惡 性腫瘤。Mohamed等描述（EJS0(2003)29:261)并綜述（Surg Oncol Clin N Am(2003)12: 8 13)等張高分子量溶液作為載體用于腹膜內(nèi)化學(xué)療法的優(yōu)勢。此外，艾考糊精 (icodextrin)已被描述為在小鼠模型中用于腹膜內(nèi)腺病毒腫瘤治療中的載體溶液的組分， 顯示艾考糊精溶液相較于PBS使總體存活期有所改進(jìn)(Rocconi等,Gynecologic Oncology (2006)103:985)。
[0008] 此外，聚葡萄糖已被推薦用于降低手術(shù)后粘附形成，參見例如Van den Tol等 (Surgery(2005)137(3):348)、US 5,807,833和I.Bekes(Dissertation an der Medizinischen FafcultEt d e r RffTH Aachen(2008) : ^ Adhasions- und Nidationsprophylaxe nach i .p. Implantation von SC0V. ip-Zellen i n SCID-Mause mittels Icodextrin, HyaluiOnsiiureund physiologischerNaCl-Ldsung1")。后述文件 也考查了艾考糊精溶液用于預(yù)防腫瘤細(xì)胞在引入腹腔中的病灶中筑巢(nidation)的用途。 相較于對照組(NaCl溶液)未見顯著作用。
[0009] 癌癥仍然是一個主要死亡原因，尤其在發(fā)達(dá)國家。因此，對改進(jìn)癌癥治療和預(yù)防的 研究仍然是許多研究項目的焦點。多年來，已設(shè)計用于治療原發(fā)性癌癥的方法，其在大多數(shù) 情況下至少在最初是有效的。然而，視癌癥的種類而定，存在癌瘤再生長(復(fù)發(fā))和/或癌細(xì) 胞向身體其它部位擴(kuò)散(轉(zhuǎn)移）的風(fēng)險。因此，五年存活率從例如對于原位乳腺癌的100%變 化至對于卵巢癌的25%以及對于胰腺癌低至大約6%的值。因此，近年來，研究的主要焦點 已從治療原發(fā)性癌癥向預(yù)防和治療轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)變。對于體腔(尤其是腹腔）的癌癥，這個 焦點尤其具有充分理由；在腹腔中生長的癌瘤僅在它們已達(dá)到某一尺寸之后引起癥狀，以 致腫瘤細(xì)胞從腫瘤脫離，從而導(dǎo)致轉(zhuǎn)移的風(fēng)險在那些腫瘤中會大大增加。這個影響造成被 診斷有所述癌癥的患者的預(yù)后常常深不可測。
[0010] 因此，本領(lǐng)域中需要提供用以預(yù)防腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的手段和方法。技術(shù)問題通過 在權(quán)利要求和下文中表征的實施方案來解決。
[0011] 因此，本發(fā)明涉及包含通過α-糖苷鍵連接的任選取代的單糖單元，用于通過向罹 患癌癥的受試者的體腔施用來預(yù)防轉(zhuǎn)移形成和/或復(fù)發(fā)的多糖。
[0012] 如本文所用，術(shù)語"具有"、"包含"或"包括"或其任何語法變化形式以非排它性方 式使用。因此，這些術(shù)語可指以下兩種情況:其中，除由這些術(shù)語引入的特征之外，在給定情 形下描述的實體中不存在其它特征，以及其中存在一種或多種其它特征的情況。舉例來說， 表述"Α具有Β"、"Α包含Β"和"Α包括Β"是指以下兩種情況:其中，除B之外，在A中不存在其它 要素（即其中A僅僅以及排它地由B組成的情況），以及其中，除B之外，在實體A中也存在一種 或多種其它要素，諸如要素 C、要素 C和D、或甚至其它要素的情況。
[0013]此外，如本文所用，術(shù)語"優(yōu)選地"、"更優(yōu)選地"、"最優(yōu)選地"、"特定來說"、"更特定 來說"、"具體來說"、"更具體來說"或類似術(shù)語連同任選特征一起使用，而不限制替代性可 能性。因此，由這些術(shù)語引入的特征是任選特征，并且不意圖以任何方式限制本發(fā)明的范 圍。如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將認(rèn)識到，本發(fā)明可通過使用替代性特征來進(jìn)行。類似地，由"在 本發(fā)明的一實施方案中"或類似表述引入的特征意圖是任選特征，而不關(guān)于本發(fā)明的替代 性實施方案進(jìn)行任何限制，不關(guān)于本發(fā)明的范圍進(jìn)行任何限制以及不關(guān)于組合以所述方式 引入的特征與本發(fā)明的其它任選或非任選特征的可能性進(jìn)行任何限制。
[0014] 此外，如本文所用，與參數(shù)的值關(guān)聯(lián)的術(shù)語"約"涉及所述值包括是所述值的± 10%、優(yōu)選±5%、更優(yōu)選±2%、最優(yōu)選± 1 %的范圍。類似地，關(guān)于術(shù)語"基本上由…組成 (essentially consisting of/consisting essentially of)"，當(dāng) A至少在90 %、優(yōu)選 95%、更優(yōu)選98%以及最優(yōu)選99%的程度上由B組成時，A基本上由B組成(A essentially consists of B/A consists essentially of B)〇
[0015] 如本文所用的術(shù)語"多糖"涉及包含通過a-糖苷鍵(a糖苷鍵)連接的任選取代的單 糖單元的多糖。術(shù)語a-糖苷鍵為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所知，并且涉及糖的半縮醛基團(tuán)與第 二分子(優(yōu)選是糖）的羥基之間的共價鍵。因此，"a_糖苷鍵"是例如在D-吡喃葡萄糖的情況 下，以軸向定向固定a位中的異頭碳原子的糖苷鍵。此外，術(shù)語"糖苷鍵連接"涉及通過糖苷 鍵加以連接。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)了解在糖苷鍵的形成期間，水分子被釋放，并且因此例 如以糖苷鍵嚙合的葡萄糖單元優(yōu)選被稱為脫水葡萄糖。
[0016] 通常，含有a-糖苷鍵的多糖比含有β-糖苷鍵的那些更易于由人體消化。
[0017] 用于分析多糖的方法，并且特定來說用以確定a-糖苷鍵的存在的方法在本領(lǐng)域中 是熟知的。優(yōu)選地，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案，通過IR和匪R分析，諸如ID和/或2D匪R光譜法，特定來 說1!1-匪1?、13(：-匪1?、批0(：、1'(^3￥、〇)3￥、從^3￥等來進(jìn)行測定和/或測量。
[0018]優(yōu)選地，多糖是由或可由活生物體產(chǎn)生的多糖，或更優(yōu)選是其衍生物。最優(yōu)選地， 多糖是由來自植物界的生物體產(chǎn)生的多糖。特定來說，多糖可由維管植物(導(dǎo)管植物)產(chǎn)生； 通過使用源于細(xì)菌的酶產(chǎn)生;或可為所述多糖的衍生物。
[0019] 優(yōu)選地，在本發(fā)明的多糖中，超過90 %的單糖單元通過α-糖苷鍵連接。更優(yōu)選地， 本發(fā)明的多糖中超過95%的單糖單元通過α-糖苷鍵連接。最優(yōu)選地，本發(fā)明的多糖中超過 98%的單糖單元通過α-糖苷鍵連接。
[0020] 術(shù)語"單糖"為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所知。優(yōu)選地，單糖是己糖，更優(yōu)選是葡萄糖。 最優(yōu)選地，單糖是D-葡萄糖。優(yōu)選地，本發(fā)明的多糖可包含超過一個單糖種類。如下文所述， 包含在本發(fā)明的多糖中的單糖單元被取代或未被取代。
[0021] 本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)了解兩個葡萄糖分子之間的糖苷鍵也可被稱為"葡糖苷 鍵"。此外，由作為單糖單元的脫水葡萄糖單元組成或基本上由其組成的多糖(特定來說生 物聚合物)被稱為"葡聚糖"。因此，例如由通過α-l，6-糖苷鍵連接的脫水葡萄糖單元組成或 基本上由其組成的多糖被稱為α-(1，6)_葡聚糖;在加以必要的變更下，由形成α-l，4_糖苷 鍵連接的分子的主鏈以及通過α-1，6_糖苷鍵形成的分支點的脫水葡萄糖單元組成或基本 上由其組成的多糖將被稱為α-(1，4/1，6)_葡聚糖。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員也應(yīng)了解多糖中的 脫水葡萄糖單元常為簡單起見而被稱為"葡萄糖單元"或"葡萄糖分子"。
[0022] 在本發(fā)明的多糖的一優(yōu)選實施方案中，包含在多糖中的至少70 %的單糖單元是脫 水葡萄糖和/或取代的脫水葡萄糖單元。更優(yōu)選地，包含在多糖中的至少80 %的單糖單元是 脫水葡萄糖和/或取代的脫水葡萄糖單元。甚至更優(yōu)選地，包含在多糖中的至少90%的單糖 單元是脫水葡萄糖和/或取代的脫水葡萄糖單元。更優(yōu)選地，包含在多糖中的至少95%、更 優(yōu)選至少96%、更優(yōu)選至少97%、更優(yōu)選至少98%以及更優(yōu)選至少99%的單糖單元是脫水 葡萄糖和/或取代的脫水葡萄糖單元。因此，在一優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的多糖是葡聚糖 或取代的葡聚糖。
[0023] 優(yōu)選地，任選取代的單糖單元(例如任選取代的脫水葡萄糖單元)通過α-l，4_糖苷 鍵和/或通過α-l，6-糖苷鍵和/或通過α-l，3-糖苷鍵和/或通過α-l，2-糖苷鍵連接。因此，優(yōu) 選地，本發(fā)明的多糖是包含α-l，4-糖苷鍵和/或α-l，6-糖苷鍵和/或α-l，3-糖苷鍵和/或α-1，2糖苷鍵的多糖。
[0024]更優(yōu)選地，多糖具有由α-l，4-糖苷鍵連接的脫水葡萄糖單元和/或α-l，6-糖苷鍵 連接的脫水葡萄糖單元和/或α-l，3-糖苷鍵連接的脫水葡萄糖單元和/或α-l，2-糖苷鍵連 接的脫水葡萄糖單元組成的主鏈，優(yōu)選是由α-l，4_糖苷鍵連接的脫水葡萄糖單元和/或α-1，6-糖苷鍵連接的脫水葡萄糖單元和/或α-l，3-糖苷鍵連接的脫水葡萄糖單元組成的主 鏈。
[0025]根據(jù)一個優(yōu)選實施方案，多糖具有由α-l，4-糖苷鍵連接的脫水葡萄糖單元組成的 主鏈。根據(jù)另一優(yōu)選實施方案，多糖具有由α-l，3_糖苷鍵連接的脫水葡萄糖單元組成的主 鏈。根據(jù)另一優(yōu)選實施方案，多糖具有由α-l，6_糖苷鍵連接的脫水葡萄糖單元組成的主鏈。 根據(jù)另一優(yōu)選實施方案，多糖具有由α-l，6_糖苷鍵連接的脫水葡萄糖單元和α-l，4_糖苷鍵 連接的脫水葡萄糖單元組成的主鏈。根據(jù)另一優(yōu)選實施方案，多糖具有由α-l，6_糖苷鍵連 接的脫水葡萄糖單元和α-l，3-糖苷鍵連接的脫水葡萄糖單元組成的主鏈。根據(jù)另一優(yōu)選實 施方案，多糖具有由α-l，6_糖苷鍵連接的脫水葡萄糖單元和α-l，3_糖苷鍵連接的脫水葡萄 糖單元和α-1，4-糖苷鍵連接的脫水葡萄糖單元組成的主鏈。
[0026] 在這個情形下的術(shù)語"主鏈"是指由共同產(chǎn)生分子的連續(xù)鏈的一系列共價鍵合的 構(gòu)筑嵌段，特定來說α-l，4-糖苷鍵連接的脫水葡萄糖單元和/或α-l，6-糖苷鍵連接的脫水 葡萄糖單元和/或α-1，3-糖苷鍵連接的脫水葡萄糖單元和/或α-l，2-糖苷鍵連接的脫水葡 萄糖單元形成的多糖的主鏈。優(yōu)選地，單糖單元的提供最佳結(jié)構(gòu)連續(xù)性(即在鍵聯(lián)的種類方 面的變化最小）的共價連接鏈被視為主鏈。應(yīng)了解存在于這個鏈中的構(gòu)筑嵌段可未被取代 或被取代，其中各構(gòu)筑嵌段中的取代樣式可相同或可彼此不同。此外，給定單糖構(gòu)筑嵌段可 為分支點。因此，主鏈可被至少一個多糖鏈取代，從而產(chǎn)生支鏈多糖。
[0027] 舉例來說(但不帶限制性），明確涉及以下葡聚糖:具有α-1，4連接的主鏈以及α-1， 6_連接的分支點，以及優(yōu)選包含每10個α-l，4鍵聯(lián)平均約1個α-l，6鍵聯(lián)的α-(1，4/1，6)_葡 聚糖;或具有例如α-l，4連接的主鏈以及α-l，6_連接的分支點，以及優(yōu)選包含每10個α-l，4 鍵聯(lián)平均小于約1個α-l，6鍵聯(lián)的α-(1，4/1，6)_葡聚糖，或具有α-l，4-連接的主鏈以及α-l， 6連接的分支點，以及優(yōu)選包含每30個α-l，4鍵聯(lián)平均約1個α-l，6鍵聯(lián)的α-(1，4/1，6)_葡聚 糖。
[0028] 本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)了解，特定來說當(dāng)術(shù)語"多糖"涉及生物多糖，即由或可由 活生物體產(chǎn)生（即由或可由活生物體獲得）的多糖時，多糖本身可包含少量雜質(zhì)，例如像主 鏈中或側(cè)鏈中的雜質(zhì)。因此，術(shù)語"多糖具有由…組成的主鏈"也指多糖包含所述少量雜質(zhì)。 優(yōu)選地，多糖的所述少量雜質(zhì)占多糖的總質(zhì)量的小于10%，更優(yōu)選占多糖的總質(zhì)量的小于 5%，更優(yōu)選小于4%，更優(yōu)選小于3%，更優(yōu)選小于2%，更優(yōu)選小于1 %，更優(yōu)選小于0.5%， 以及最優(yōu)選占多糖的總質(zhì)量的小于〇. 1 %。
[0029] 優(yōu)選地，多糖不包含呈β-l，3-糖苷鍵連接的脫水葡萄糖單元形式的雜質(zhì)，更優(yōu)選 地，多糖不包含呈糖苷鍵連接的脫水葡萄糖單元形式的雜質(zhì)，最優(yōu)選地，多糖不包含呈β_ 糖苷鍵連接的單糖單元形式的雜質(zhì)。
[0030] 根據(jù)一優(yōu)選實施方案，多糖包含α-l，4-糖苷鍵連接的任選取代的脫水葡萄糖單 J L 〇
[0031] 根據(jù)另一優(yōu)選實施方案，多糖包含α-l，6-糖苷鍵連接的任選取代的脫水葡萄糖單 J L 〇
[0032] 根據(jù)另一優(yōu)選實施方案，多糖包含α-l，4-糖苷鍵連接的和α-l，6-糖苷鍵連接的任 選取代的脫水葡萄糖單元。
[0033] 根據(jù)一個優(yōu)選實施方案，多糖中至少90 %的糖苷鍵聯(lián)是α-l，4-糖苷鍵聯(lián)和/或α-1，6-糖苷鍵聯(lián)。更優(yōu)選地，多糖中至少95%、更優(yōu)選至少96%、更優(yōu)選至少97%、更優(yōu)選至少 98%、更優(yōu)選至少99%的糖苷鍵聯(lián)是α-l，4-糖苷鍵聯(lián)和/或α-l，6-糖苷鍵聯(lián)。
[0034] 優(yōu)選地，本發(fā)明的多糖因此是任選取代的α-(1，6)_葡聚糖、任選取代的α-(1，4)_ 葡聚糖(例如麥芽糖糊精）、任選取代的α-(1，6/1，4)_葡聚糖(例如普魯蘭多糖(pullulan)) 或具有α-l，4連接的主鏈以及α-l，6連接的分支點的任選取代的α-(1，4/1，6)_葡聚糖。
[0035] 本發(fā)明的多糖可為堿性或酸性多糖或兩性離子或中性多糖。優(yōu)選地，多糖是中性 的，即優(yōu)選是不帶電荷的多糖。
[0036] 優(yōu)選地，本發(fā)明的多糖具有至少IkDa、更優(yōu)選至少5kDa、更優(yōu)選至少IOkDa、更優(yōu)選 至少13kDa的數(shù)量平均分子量，在本文中被稱為"平均分子量"。優(yōu)選地，多糖具有至多 1200kDa、更優(yōu)選至多l(xiāng)OOOkDa、最優(yōu)選至多800kDa的平均分子量。優(yōu)選地，多糖具有在5至 1200kDa、更優(yōu)選10至lOOOkDa、以及更優(yōu)選13至800kDa的范圍內(nèi)的平均分子量。最優(yōu)選分子 量也顯示在下文和實施例中。測定多糖的分子量的方法在本領(lǐng)域中是已知的。通常根據(jù)以 下方法測定本發(fā)明的多糖的Mw和Mn:如在本發(fā)明的情形下所用的術(shù)語"平均分子量"涉及如 根據(jù)MALLS-GPC(多角度激光散射-凝膠滲透色譜法)測定的重量。對于測定，串聯(lián)連接的2個 Tosoh BioS印GMPWXL柱（13μπι粒徑，直徑7.8mm，長度30cm，物品號08025)用作固定相。如下 制備流動相。在容量瓶中，將3.74g乙酸鈉*3H 20、0.344g NaN3溶解于800ml Mi 11