熟大黃微粉在制備阿爾茨海默癥藥物中的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，主要設(shè)及中藥大黃主要炮制品熟大黃及其制劑的藥物新用 途，具體設(shè)及它們?cè)谥苽漕A(yù)防和治療阿爾茨海默癥產(chǎn)品中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 阿爾茨海默癥(Alzheimer'S Disease,AD)是一種W進(jìn)行性癡呆為主的中樞神經(jīng) 系統(tǒng)的退行性疾病。阿爾茨海默癥國(guó)際聯(lián)合會(huì)公布的最新數(shù)據(jù)顯示，2010年全球已有3600 萬(wàn)癡呆患者，按照目前的患病增長(zhǎng)速度，未來(lái)40年全球會(huì)有1.5億人患有癡呆癥，已成為人 類繼屯、腦血管疾病和腫瘤之后的第=大死因。隨著社會(huì)老齡化的不斷深入，AD將給人類社 會(huì)帶來(lái)越來(lái)越承重的負(fù)擔(dān)。AD患者的平均生存期約為10年，但本病進(jìn)展速度是可變的。隨著 人們預(yù)期壽命的逐步提高，特別是在工業(yè)化國(guó)家，AD已成為很嚴(yán)重的健康問(wèn)題。
[0003] 迄今為止，預(yù)防和治療阿爾茨海默癥的藥物雖然較多，但主要集中在西藥，同時(shí)， 大多數(shù)藥物主要針對(duì)阿爾茨海默癥的單一致病祀點(diǎn)進(jìn)行預(yù)防或治療，效果并不顯著。因此， 有必要研究和開發(fā)能夠從多個(gè)疾病祀點(diǎn)對(duì)阿爾茨海默癥進(jìn)行干預(yù)的高效、低毒的新藥物和 新劑型。針對(duì)病因不清，多因素相關(guān)的復(fù)雜疾病，中醫(yī)藥多環(huán)節(jié)，多祀點(diǎn)的治療特點(diǎn)，比西藥 的單祀點(diǎn)具有優(yōu)勢(shì)，因此研究中藥治療阿爾茨海默癥成為國(guó)內(nèi)外新的熱點(diǎn)。
[0004] 中藥有別于天然藥物的一個(gè)主要方面就是"加工炮制"后運(yùn)用，而中醫(yī)在遣藥組方 時(shí)又非常講究"藥之生熟"、"生熟異用"。中藥生熟飲片不僅在藥性及外形上發(fā)生了變化，而 且在化學(xué)成分和藥理作用方面也發(fā)生了變化。熟大黃作為大黃的一個(gè)重要炮制品，不僅受 到醫(yī)家廣泛使用，且文獻(xiàn)中對(duì)其炮制作用亦有一定論述。孫思邀在《銀海精微》中指出大黃 宜"實(shí)者生用，虛者酒蒸"。明羅周彥、張介賓等也認(rèn)為虛弱者應(yīng)酒蒸熟后再用。《丹溪屯、法》 曰，大黃"生用則通腸胃塞熱，熟用則解諸瘡毒瀉屯、火"。竇漢卿認(rèn)為W "九浸九蒸九曬"之法 炮制的熟大黃具有"瀉中有補(bǔ)"的功效。由此可見，大黃具有生熟異用的特性，古今醫(yī)家大多 認(rèn)同此觀點(diǎn)。綜合說(shuō)來(lái)，熟大黃炮制目的大致有二，一是緩和瀉下及傷胃氣、傷陰血之副作 用，二是改變藥性走向，加強(qiáng)或突出清熱解毒、活血化疲功效。未見報(bào)道熟大黃及其蔥釀?lì)?成分和二苯乙締巧類成分對(duì)阿爾茨海默癥具有預(yù)防和治療的作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供含有熟大黃微粉作為阿爾茨海默癥藥物的用途，W熟大黃微 粉為活性成分制造防治和預(yù)防阿爾茨海默癥藥物。
[0006] 所述熟大黃微粉來(lái)源于寥科植物藥用大黃Rheum off icinale Baill.的干燥根 莖;炮制方法為：1)生大黃刮去外皮，切厚片或塊，在30°C-50°C低溫烘干制得大黃片或塊， 2)炮制：用黃酒拌勻，每IOOkg大黃片或塊用15-16 %的黃酒30kg;悶1.5小時(shí)至酒被吸盡，置 高壓滅菌鍋內(nèi)蒸制6小時(shí)，取出，干燥;3)熟大黃微粉的制備:取炮制所得熟大黃藥材投于超 微粉碎機(jī)中，粉碎5-8min，即得，粒徑為:50-7祉m。
[0007] 經(jīng)如上炮制的熟大黃微粉毒性小，對(duì)阿爾茨海默癥和由之繼發(fā)的學(xué)習(xí)記憶力下降 等有明顯的緩解作用。
[0008] 本發(fā)明的另一技術(shù)方案提供了一種治療阿爾茨海默癥的藥物組合物，W熟大黃微 粉為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔佐性成分制備而成的中藥制劑。該中服制劑 可為片劑、膠囊劑、顆粒劑或中服液。
[0009] 進(jìn)一步的檢驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn)熟大黃微粉中含有蔥釀?lì)惓煞趾投揭揖喦深惓煞?，可W 此活性成分制得藥物組合物。
【具體實(shí)施方式】
[0010] 下面的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，但并不意味著對(duì)本發(fā)明的任何限 制。
[001 U 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:雄性昆明系SPF級(jí)小鼠，體重30 ± 2g;雄性SPF級(jí)SD大鼠，雄性，體重205 ± 2g，購(gòu)于成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，SCXK(川）2008-24。每天接受1化光照/1化黑暗，光 照周期為8:00-20:00,實(shí)驗(yàn)室溫度20±2°C，濕度60%，動(dòng)物可W自行攝取標(biāo)準(zhǔn)飼料和清潔 用水，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)遵守國(guó)際實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理學(xué)要求。
[0012] 藥物：
[0013] 大黃藥材購(gòu)自四川成都新荷花大黃種植基地，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)炮制教研室盧先 明教授鑒定為寥科植物藥用大黃化eum officinale Baill.的干燥根莖。炮制方法為，生大 黃:刮去外皮，切厚片或塊，低溫(30°C-50°C)烘干;熟大黃:取生大黃片或塊適量，用黃酒拌 勻，悶1.5小時(shí)置酒被吸盡，置高壓滅菌鍋內(nèi)蒸制6小時(shí)，取出，干燥。每IOOkg大黃片或塊，用 黃酒30kg(酒度：15-16% )。
[0014] 熟大黃微粉的制備:取炮制所得熟大黃藥材投于超微粉碎機(jī)中，粉碎5-8min，即 得。粒徑為:50-7祉m。
[0015] 石杉?jí)A甲膠囊（Swanson Health Products)
[0016] 氨漠酸東賞窘堿粉末(成都遠(yuǎn)諾天成科技有限公司）
[0017] 實(shí)驗(yàn)方案
[0018] 本實(shí)驗(yàn)采用東賞窘堿致大鼠記憶缺失模型作為模擬阿爾茨海默癥的動(dòng)物模型，W 石杉?jí)A甲作為陽(yáng)性對(duì)照，比較各組動(dòng)物的行為學(xué)差異。
[0019] 東賞窘堿致大鼠記憶缺失模型
[0020] 東賞窘堿作為一種特異性M受體阻斷劑，可造成大鼠可逆性的膽堿功能損傷和記 憶障礙。東賞窘堿所致的記憶缺失模型作為模擬阿爾茨海默癥的一種常用的急性預(yù)防性模 型，在抗阿爾茨海默癥藥物的研究中具有廣泛的應(yīng)用。
[0021] 1小鼠實(shí)驗(yàn)
[0022] 分組及給藥方案
[0023] SPF級(jí)KM小鼠120只隨機(jī)分成正常組、模型組、熟大黃高劑量組(5g/kg)、熟大黃中 劑量組(2.5g/kg)、熟大黃低劑量組（1.25g/kg)，石杉?jí)A甲組，每組20只。連續(xù)給藥13天。正 常組和模型組給予生理鹽水。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行到第14天時(shí)，開始造模并進(jìn)行Y迷宮實(shí)驗(yàn)和跳臺(tái)實(shí) 驗(yàn)。在Y迷宮實(shí)驗(yàn)前30min，除正常組外，其余各組腹腔注射氛漠酸東賞窘堿(Img/kg)建立小 鼠記憶缺失模型。
[0024] 1.1 Y迷宮實(shí)驗(yàn)
[0025] Y迷宮也稱=等分福射式迷路箱，是由長(zhǎng)度相等的I、n、虹個(gè)方形臂和=個(gè)臂的交 區(qū)四個(gè)部分，箱的底部鋪直徑為0.2厘米，長(zhǎng)十四厘米，相互距離為一厘米的電柵臂。內(nèi)壁均 貼有可導(dǎo)電的薄層銅片每臂長(zhǎng)四十五厘米，在臂得頭部有一盞燈。迷宮刺激器的控制面板 上面有可W控制電壓的按鈕、控制時(shí)間延遲的按鈕和i、n、m和0四個(gè)按鍵，當(dāng)按下哪個(gè)鍵 時(shí)，該區(qū)的燈就會(huì)亮，說(shuō)明那個(gè)區(qū)域是安全的，沒有電，其他區(qū)域都是有電。按下0鍵，交界區(qū) 是危險(xiǎn)區(qū)，其他區(qū)域是安全區(qū)。實(shí)驗(yàn)開始時(shí)，選定一個(gè)起步區(qū)，讓小白鼠在其中適應(yīng)五分鐘， 然后隨意按鍵選定安全區(qū)或者按一定規(guī)律選定安全區(qū)，記錄小鼠逃離有電區(qū)域及危險(xiǎn)區(qū)進(jìn) 入安全區(qū)的能力。本次實(shí)驗(yàn)選用隨機(jī)不休息法。
[00%]表1熟大黃對(duì)小鼠 Y迷宮中正確反應(yīng)次數(shù)的影響(X ±& n = 20)
[0028] 注：與正常組比較巧<0.05，**P<0.0 l;與模型組比較胖<0.05，#胖<0.0 l
[0029] 與模型組相比，熟大黃高、中、低劑量組有極顯著差異(P<0.01)，表明小鼠給予熟 大黃微粉后，其記憶能力恢復(fù)到正常水平，對(duì)阿爾茨海默癥所致的學(xué)習(xí)和記憶能力減退具 有治療作用。
[0030] 1.2跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)
[0031] 將小鼠放入方格中適應(yīng)1-2分鐘，然后記錄一定時(shí)間（五分鐘內(nèi)）內(nèi)受電擊的次數(shù) (學(xué)習(xí)成績(jī)），24小時(shí)后第一次跳下平臺(tái)的潛伏期和一定時(shí)間內(nèi)（五分鐘內(nèi)）的錯(cuò)誤總數(shù)。 [003^ 表2熟大黃對(duì)小鼠跳臺(tái)學(xué)習(xí)成績(jī)的影響（支巧n = 20)
[0034] 表3熟大黃對(duì)小鼠跳臺(tái)成績(jī)的影響(支巧n = 20)
[0035]
[0036] 與模型組相比，熟大黃高、中、低劑量組有極顯著差異(P<0.01)，表明小鼠給予熟 大黃微粉后，其學(xué)習(xí)記憶能力恢復(fù)到正常水平，對(duì)阿爾茨海默癥所致的學(xué)習(xí)和記憶能力減 退具有治療作用。
[0037] 2大鼠實(shí)驗(yàn)
[0038] 分組及給藥方案
[0039] 將SPF級(jí)SD大鼠40只隨機(jī)分成正常組、正常給藥組、模型組、AD模型給藥組，每組10 只。正常給藥組和AD模型給藥組灌胃給予熟大黃微粉混懸液（2g/kg)，連續(xù)給藥13天。正常 組和模型組給予生理鹽水。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行到第14天時(shí)，開始造模并進(jìn)行曠場(chǎng)試驗(yàn)。在曠場(chǎng)試驗(yàn)實(shí) 驗(yàn)前30min，模型組和AD模型給藥組腹腔注射氛漠酸東賞窘堿（1.5mg/kg)建立大鼠記憶缺 失模型。東賞窘堿能夠破壞膽堿能神經(jīng)功能，此功能的破壞是阿爾茨海默癥發(fā)病的主要因 素之一O
[0040] 2.1曠場(chǎng)試驗(yàn)
[0041 ]曠場(chǎng)箱（IOOcmX IOOcmX 50cm)(自制）
[0042] 大鼠稱重后輕輕放入曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)箱中熟悉環(huán)境，除去異味和雜物，IOmin后將其放入 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)箱正中格并開始計(jì)時(shí)，記錄大鼠5min中內(nèi)在中央格的停留時(shí)間和周圍格跑格數(shù) (四爪均進(jìn)入的正方格方可記為1個(gè)跑格數(shù)，沿壁格為周圍格，其余為中央格）。在第一周期 (1-7天)時(shí)記錄各組大鼠在注射生理鹽水20分鐘后5分鐘的活動(dòng)情況，在第二周期(8-14天） 時(shí)記錄大鼠腹腔注射東賞窘堿后30分鐘后(兩個(gè)給藥組在給藥20分鐘后)進(jìn)行5分鐘的活動(dòng) 情況。
[0043] 表4第一周期各組曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)（京巧，n = 6)
[0045] 表5第二周期各組曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)（去±S，n = 6)
[0046]
[0047] 從表4和表5可知，模型組與正常組相比有極顯著差異(P<0.01)，表明大鼠阿茨海 默癥的模型建立成功，且生理鹽水不會(huì)對(duì)建模過(guò)程產(chǎn)生干擾。AD模型給藥組與模型組相比 有極顯著差異(P<〇.01)，表明熟大黃微粉對(duì)阿爾茨海默癥有預(yù)防和治療作用，且可W在較 短時(shí)間內(nèi)（給藥20分鐘)起效。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 熟大黃微粉在制備阿爾茨海默癥藥物中的用途，以熟大黃微粉為活性成分制造防治 和預(yù)防阿爾茨海默癥藥物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述熟大黃微粉來(lái)源于寥科植物藥用大黃 Rheum officinale Baill.的干燥根莖;炮制方法為：1)生大黃刮去外皮，切厚片或塊，在30 °C_50°C低溫烘干制得大黃片或塊，2)炮制：用黃酒拌勻，每100kg大黃片或塊用15-16%的 黃酒30kg;悶1.5小時(shí)至酒被吸盡，置高壓滅菌鍋內(nèi)蒸制6小時(shí)，取出，干燥;3)熟大黃微粉的 制備:取炮制所得熟大黃藥材投于超微粉碎機(jī)中，粉碎5-8min，即得，粒徑為:50-78μπι。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于:所述的熟大黃微粉中含有蒽醌類合物，二 苯乙烯苷類化合物及多糖。4. 一種治療阿爾茨海默癥的藥物組合物，以熟大黃微粉為活性成分，加上藥學(xué)上可接 受的輔料或輔佐性成分制備而成的中藥制劑。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征在于，所述中藥制劑為片劑、膠囊劑、顆粒 劑或口服液。
【專利摘要】本發(fā)明公開了熟大黃微粉在制備阿爾茨海默癥藥物中的用途。本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，含有熟大黃微粉為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔佐性成分制備而成的中藥制劑。本發(fā)明藥物有針對(duì)性地治療阿爾茨海默癥、療效確切、無(wú)成癮性和依賴性、無(wú)明顯的毒副作用。
【IPC分類】A61K9/14, A61K36/708, A61K125/00, A61P25/28
【公開號(hào)】CN105535131
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201511003272
【發(fā)明人】吳曉青
【申請(qǐng)人】西南交通大學(xué)
【公開日】2016年5月4日
【申請(qǐng)日】2015年12月29日