一種精準(zhǔn)快速無創(chuàng)式大鼠滴注方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明涉及臨床醫(yī)學(xué)和動物實(shí)驗(yàn)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種精準(zhǔn)快速無創(chuàng)式大鼠 滴注方法。
【背景技術(shù)】
[0002]呼吸道暴露是臨床醫(yī)學(xué)、毒理學(xué)、環(huán)境醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域研究中最為重要的暴露途徑之 一，隨著近年各學(xué)科研究的飛速發(fā)展，經(jīng)呼吸道給藥、染毒、呼吸監(jiān)測的動物實(shí)驗(yàn)的需求呈 上升趨勢，大鼠是國際通用的標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)動物，在多種醫(yī)學(xué)、生物學(xué)試驗(yàn)研究中廣泛應(yīng) 用，在大鼠開胸手術(shù)需呼吸機(jī)輔助呼吸、呼吸功能檢測或氣管內(nèi)給藥等動物實(shí)驗(yàn)中，順利的 大鼠氣管插管是實(shí)驗(yàn)成敗的前提，目前，常用的插管方法有:頸部切口插管法(邱永明，田 鑫，大鼠簡易的氣管插管方法[J].上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，21(6):567)，頸部切口鋼 絲引導(dǎo)插管法(陶運(yùn)明，莫緒明，戚繼榮等，一種新的大鼠氣管插管方法[J]，中華實(shí)驗(yàn)外科 雜志，2004,21(4)):504;Weksler B，Ng B.Lenert J.A simplified method for endotrocheal intubation in the rat[J].Journal of Applied Physiology.1994.76 (4):1823)，盲插法，內(nèi)窺鏡輔助插管法(ClaryEM·0HalloranEK，delaFuente·SG·et aI.Videonendoscopic endortacheal intubation of the rat[J].Lab Anim,2004.38
[2] :158)，經(jīng)口明視插管法和經(jīng)頸部透照氣管插管法(王響英，吳淑燕，李蘇安，等，大鼠直 視氣管插管方法[J].上海實(shí)驗(yàn)動物科學(xué)，2004,24(2): 107)等。
[0003] 可將氣管滴注法分為暴露式和非暴露式兩種，暴露式即通過手術(shù)將大鼠氣管暴露 出來，切口再進(jìn)行插管;非暴露式主要不需要暴露氣管，主要是通過口腔借助透射鏡、喉鏡 等輔助工具，利用冷光源找到氣管，再用導(dǎo)管插入氣管進(jìn)行滴注。以往的暴露式氣管滴注需 要切開大鼠頸部的皮膚和肌肉以暴露氣管，再把微樣進(jìn)樣器插入氣管，故實(shí)驗(yàn)的精確性得 到了保證，但是尖頭的微樣進(jìn)樣器容易引起大鼠呼吸道損傷，氣管切開后插管雖快速簡便， 但對動物機(jī)體傷害比較大。組織損傷及術(shù)后的感染都會影響術(shù)后大鼠機(jī)體的恢復(fù)，增加了 非實(shí)驗(yàn)因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。非暴露式氣管滴注是采用磨鈍的靜脈留置針或穿刺針進(jìn)行 插管，雖然具有無創(chuàng)性的優(yōu)點(diǎn)，但因?yàn)檫@些插管針往往和普通注射器匹配，而普通注射器的 精確度卻不如微樣進(jìn)樣器，且非暴露式氣管滴注方法難以兼顧無創(chuàng)性和精確性。研究顯示， 鼻腔滴注可以達(dá)到呼吸道給藥或染毒的目的，但尚沒有相關(guān)的研究對其進(jìn)行評價(jià)。
[0004] 近年來，呼吸機(jī)輔助通氣技術(shù)開始應(yīng)用于嚙齒類動物，為心胸外科、麻醉科、藥學(xué) 等專業(yè)的動物模型研究提供了呼吸支持手段?？焖俣行У臍夤懿骞苁菓?yīng)用輔助通氣技術(shù) 的前提，以往的暴露式氣管滴注需要切開大鼠頸部的皮膚和肌肉以暴露氣管，再將微樣進(jìn) 樣器插入氣管，故實(shí)驗(yàn)的精確性得到了保證，但是尖頭的微樣進(jìn)樣器容易引起大鼠呼吸道 損傷，氣管切開后插管雖快速簡便，但對動物機(jī)體傷害比較大。組織損傷及術(shù)后的感染都會 影響術(shù)后大鼠機(jī)體的恢復(fù)，增加了非實(shí)驗(yàn)因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。非暴露式氣管滴注是采 用磨鈍的靜脈留置針或穿刺針進(jìn)行插管，雖然具有無創(chuàng)性的優(yōu)點(diǎn)，但因?yàn)檫@些插管針往往 和普通注射器匹配，而普通注射器的精確度卻不如微樣進(jìn)樣器。因此，有創(chuàng)的插管方法會對 氣管及咽喉部周圍組織造成損傷，從而影響插管的重復(fù)進(jìn)行，進(jìn)而影響整個實(shí)驗(yàn)的結(jié)果;而 采用直視下導(dǎo)引鋼絲引導(dǎo)插管(VLGIT)法，雖然為無創(chuàng)式氣管滴注，但是滴注操作，每只動 物所用時間長;滴注量尚不精確，并且插管操作同樣會增加小鼠的痛苦與不適。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明鑒于現(xiàn)有的氣管滴注法中存在的缺陷和不足，為保證大鼠滴注能達(dá)到快 速、精準(zhǔn)、無創(chuàng)和成活率高等效果，從氣管滴注的設(shè)備、麻醉、操作步驟等方面入手進(jìn)行革新 完善，提供一種精準(zhǔn)快速無創(chuàng)的大鼠滴注方法。
[0006] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的一種精準(zhǔn)快速無創(chuàng)式大鼠滴注方法，所述方法是 在大鼠用乙醚麻醉后，將其懸掛在鐵架臺上，用包纏紗布的鑷子將大鼠舌頭夾住拉出口腔 之外，在喉鏡照射下找到聲門，然后捏住大鼠鼻子，使大鼠用嘴呼吸，隨著聲門開合，將已吸 好滴注藥物的移液槍快速插入聲門，將藥物滴注至氣管;退出移液槍，繼續(xù)捏鼻3_8s，使其 通過呼吸自動將滴注藥物吸入肺部，待聽到濕啰音，表明滴注成功。
[0007] 滴注結(jié)束后，將大鼠繼續(xù)懸掛在鐵架臺上5-10S，保持身體自然垂落，緩慢轉(zhuǎn)動大 鼠，使藥物均勻分布到大鼠肺部。
[0008] 前述的方法，將大鼠置于帶蓋的麻醉罐(例如玻璃罐或透明塑料罐）中進(jìn)行麻醉， 麻醉罐中放有蘸滿乙醚的棉花或紗布。
[0009] 前述的方法，待大鼠用乙醚麻醉后，用細(xì)繩系住大鼠門牙，將其懸掛在鐵架臺上。
[0010] 優(yōu)選地，每次滴注劑量控制在300μ1以內(nèi)，滴注量在300μ1以上，可分為兩次緩慢滴 注。
[0011] 本發(fā)明的目的還可以采用以下的技術(shù)措施來進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。
[0012] 1、滴注前期準(zhǔn)備
[0013] 將滴注中所需設(shè)備與儀器提前準(zhǔn)備好，包括:鐵架臺、移液槍、槍頭、小兒喉鏡、細(xì) 鐵絲或細(xì)繩、麻醉罐、無水乙醚、棉花或者紗布、計(jì)時器。
[0014] 2、麻醉罐的制作：為能夠直觀地觀察到大鼠麻醉的效果，選用一透明玻璃或者塑 料罐，根據(jù)大鼠體型選擇麻醉罐大小。將棉花或紗布放入罐中，最少將麻醉罐底部覆蓋，然 后，將無水乙醚注入罐中，為避免大鼠身體沾染太多的乙醚，注入量以棉花或紗布不滴出乙 醚為適。一般大鼠在5-10s內(nèi)能夠達(dá)到完全麻醉的效果，操作多次后，可視情況添加無水乙 醚，以保證麻醉效率。
[0015] 3、簡易手術(shù)臺的制作：取鐵架臺一個，將鐵夾或鐵圈上系一根能夠承受大鼠重量 的細(xì)繩，升高鐵夾或鐵圈的高度，至能使上門牙掛在繩上的大鼠能伸展開。
[0016] 4、大鼠麻醉:抓取欲滴注的大鼠，快速密封至麻醉罐中，蓋緊麻醉罐，大鼠在5-10s 內(nèi)被麻醉，麻醉標(biāo)準(zhǔn)為倒下不動，呼吸較慢，似熟睡狀，快速從罐中取除大鼠，將大鼠上門牙 懸掛在鐵架臺的細(xì)繩上，使其自然垂落。
[0017] 5、定位氣管:按照步驟4操作后，一人右手用包一層薄紗布的鑷子將大鼠舌頭夾住 拉出口腔之外，用左手用拇指、食指輕輕順向拉出舌頭，右手放下鑷子，拿小兒喉鏡從口腔 順著舌根照射，能清楚的看到大鼠的聲門隨著呼吸如魚嘴般開啟與閉合。
[0018] 6、藥物滴注:按步驟5操作后，另一人左手捏住大鼠鼻子，大鼠用嘴呼吸，可見聲門 一張一閉，右手持已吸好滴注藥物的移液槍快速插入聲門，將藥物滴注至氣管。退出移液 槍，左手繼續(xù)捏鼻3-8s，使其通過呼吸主動將滴注藥物吸入肺部，若聽到濕啰音，則說明滴 注成功。
[0019] 7、藥物均勻分布:大鼠滴注結(jié)束后，繼續(xù)懸掛在細(xì)繩上5-10s，緩慢轉(zhuǎn)動大鼠，使藥 物均勻分布到大鼠肺部。
[0020] 本發(fā)明提供的大鼠滴注方法具有無創(chuàng)、無痛苦、經(jīng)濟(jì)、快捷、精準(zhǔn)等特點(diǎn)，相比于其 他滴注方式具有良好的效果和優(yōu)點(diǎn)：
[0021] (一)經(jīng)過大量實(shí)踐證明，本方法成功率高，測試中對25只SD大鼠進(jìn)行了5次造模， 對大鼠滴注累計(jì)120次，成功116次，成功率高達(dá)96.67%。
[0022] (二)本發(fā)明的麻醉方法屬于無創(chuàng)式、無后遺癥式麻醉，此前麻醉方式基本上是以 戊巴比妥鈉或水合氯醛結(jié)合阿托品，需要兩次注射，增加實(shí)驗(yàn)動物的痛苦，同時，也將使注 射誤傷大鼠幾率提高，并且，該藥物的麻醉效果不容易控制，麻醉過淺大鼠容易在手術(shù)中清 醒掙扎造成誤傷，太深大鼠呼吸速率太低，滴注藥物后容易室息或嗆死。如果麻醉中沒有結(jié) 合使用阿托品，大鼠經(jīng)戊巴比妥鈉或水合氯醛后，氣管內(nèi)產(chǎn)生較多的粘液，也會造成室息的 危險(xiǎn)。本發(fā)明采用乙醚結(jié)合自制麻醉罐能夠避免上述弊端，達(dá)到無創(chuàng)、無后遺癥的理想麻醉 效果。
[0023] (三)本發(fā)明的滴注屬于無創(chuàng)傷安全式滴注，以往的滴注方式，暴露式的氣管插管 法和頸部氣管切開插管法(TTIT)直接切開皮膚、暴露氣管，手術(shù)中給大鼠造成一定的機(jī)械 創(chuàng)傷，術(shù)后也存在感染風(fēng)險(xiǎn)，而非暴露式的直視下導(dǎo)引鋼絲引導(dǎo)插管法(VLGIT)，同樣需要 硬質(zhì)鋼絲導(dǎo)入插管，存在戳傷大鼠氣管的可能。
[0024] (四）本發(fā)明的滴注方法屬于快速、精準(zhǔn)式滴注，以往的暴露式和非暴露式，因氣管 暴露、氣管縫合，導(dǎo)管的插入等繁瑣的步驟，消耗大量的時間，一般每只大鼠滴注時間需要 40s-300s，本發(fā)明滴注時間只需15s-30s，以往方法大部分采用注射器或進(jìn)樣器，外加導(dǎo)管 的輔助，增加了藥物量的消耗，本發(fā)明直接采用移液槍一步到位、操作快捷方便。
[0025] (五)本發(fā)明還具有所需器材簡易，容易獲取、制作簡單、經(jīng)濟(jì)合理;滴注過程中不 需要