包含含有大量活性成分的從東北婆婆納中分離的純化提取物或從此分離的化合物作為用 ...的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種組合物及其用途，所述組合物包含含有大量活性成分的從東北婆 婆納（Pseudolysimachion rotundum var. subintegrum)中分離的純化提取物或從此分離 的化合物作為用于預(yù)防或治療慢性阻塞性肺病的活性成分。
【背景技術(shù)】
[0002] 通常，慢性阻塞性肺病（C0PD)是由導(dǎo)致呼吸道阻塞的肺的異常炎性疾病引起的 肺病之一。coro導(dǎo)致由排出氣流阻礙引起的呼吸困難并顯示出與哮喘的常見特征不同的特 征，例如，氣道限制或氣道阻塞的不良可逆性，根據(jù)經(jīng)過時(shí)間的逐步發(fā)展等，并且，可以分成 肺氣腫和慢性阻塞性支氣管炎（Barnes P.J. 20014, Mediators of chronic obstructive pulmonary disease, Pharmacol. Rev. 56:515-548)〇
[0003] C0PD已經(jīng)被報(bào)道為2011年世界范圍心血管發(fā)病率和死亡率的危險(xiǎn)因素之一和 第五主要死亡原因。基于慢性阻塞性肺?。–0PD)標(biāo)準(zhǔn)（FEV1和FVC的比小于0.7)的全 球倡議的慢性阻塞性肺病的患病率在45歲以上的韓國人中是17. 2% (男性，25. 8% ;女 性，9. 6%) (Dong Soon Kim, Young Sam Kim, Ki-Suck Jung, Jung Hyun Chang, Chae-Man Lim，Jae Ho Lee，Soo_Taek Uh，Jae Jeong Shim 和 Woo Jin Lew,代表韓國肺結(jié)核與呼吸 道疾病石開究院（Korean Academy of Tuberculosis and Respiratory Diseases), Am J Respir Crit Care Med Vol 172.pp 842-847,2005 ;Don D.Sin 和 S.F. Paul Man, Chronic Obstructive Pulmonary Disease as a Risk Factor for Cardiovascular Morbidity and Mortality, Proc Am Thorac Soc Vol2. pp 8-11, 2005 ；A Sonia Buist, Mary Ann McBurnie, William M Vollmer, Suzanne Gillespie, Peter Burney, David M Mannino, Ana M B Menezes, Sean D Sullivan,Todd A Lee, Kevin B Weiss, Robert L Jensen, Guy B Marks, Amund Gulsvik,Ewa Nizankowska-Mogilnicka, International variation in the prevalence of C0PD (The BOLD Study):a population-based prevalence study, Lancet, Vol 370 ;741-750, 2007 年 9 月 1 日）
[0004] 患有coro的大多數(shù)患者具有全部三種病理學(xué)機(jī)制（慢性阻塞性支氣管炎、肺氣腫 和粘液性阻塞）因?yàn)槿坑晌鼰熣T導(dǎo)，但是他們可在肺氣腫和阻塞性支氣管炎的比例方面 不同。在發(fā)達(dá)國家，吸煙是coro的最常見的起因，但是有一些其他危險(xiǎn)因素，包括空氣污染 (尤其是，來自燃燒燃料的室內(nèi)空氣污染）、不良飲食和職業(yè)性暴露。coro以隨年齡的增長 可見的肺功能正常下降的加快為特征。緩慢發(fā)展的氣流限制導(dǎo)致殘疾和早產(chǎn)兒死亡，并且， 與可變氣道阻塞和很少發(fā)展為嚴(yán)重程度的哮喘的癥狀完全不同。
[0005] 已經(jīng)報(bào)道的是，C0PD的病理生理活動(dòng)和癥狀與哮喘的病理生理活動(dòng)和癥狀根本不 同。盡管coro和哮喘兩者與呼吸道的炎癥有關(guān)，但是就發(fā)炎過程的本質(zhì)而言有顯著差異， 具有炎性細(xì)胞、介體、炎癥反應(yīng)、結(jié)構(gòu)分布和抗炎癥治療反應(yīng)的不同，例如，（a)對(duì)于炎性細(xì) 胞，肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、D4+細(xì)胞（Th2)、巨噬細(xì)胞等主要作用于哮喘的發(fā)生，而嗜中 性粒細(xì)胞、⑶8+(Tc)等主要作用于CCPD的發(fā)生；(b)對(duì)于炎性介體，白三烯B、組胺、IL-4、 IL-5、I1-13、嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、RENTES、氧化應(yīng)激等主要涉及哮喘的發(fā)生，而TNF-a、 IL-8、GRO-ct等主要涉及C0PD的發(fā)生；（c)對(duì)于發(fā)炎癥狀，哮喘因在早期作用于總肺氣管 而顯示出的發(fā)炎癥狀（如AHR(氣道高反應(yīng)性）、上皮脫落、纖維化、無軟組織參與、粘液分 泌、相對(duì)可逆的氣道阻塞、咳嗽、打噴嚏、呼吸困難等）與通過作用于成人的外周氣道發(fā)生 并且顯示出各種現(xiàn)象（如上皮化生、實(shí)質(zhì)破壞、相對(duì)可逆的氣道阻塞、慢性支氣管炎、肺氣 腫等）的 C0PD 的發(fā)炎癥狀不同（Barnes PJ(2000b)Mechanisms in COPD:differences from asthma. Chest 117 (Suppl):10S-14S. ；Saetta M，Turato G, Maestrelli P，Mapp CE 和Fabbri LM(2001)Cellular and structural bases of chronic obstructive pulmonary disease. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 163:1304-1309) 〇
[0006] C0PD的組織病理學(xué)研究顯示出外周氣道（細(xì)支氣管）和肺實(shí)質(zhì)的主要參與， 而哮喘包括所有氣道的炎癥而不包括肺實(shí)質(zhì)。隨纖維化和巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的滲 透，有細(xì)支氣管阻塞。既存在肺實(shí)質(zhì)的破壞也存在巨噬細(xì)胞和CD8(細(xì)胞毒素的）T淋 巴細(xì)胞數(shù)的增加（Saetta M，Di Stefano A，Turato G，F(xiàn)acchini FM，Corbino L，Mapp CE，Maestrelli P,Ciaccia A 和 Fabbri LM(1998)CD8T-lymphocytes in peripheral airways of smokers with chronic obstructive pulmonary disease. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 157:822-826.)。支氣管的活組織檢查顯示出在患有嚴(yán)重C(PD的患者中具 有巨噬細(xì)胞和⑶8細(xì)胞的滲透和嗜中性粒細(xì)胞數(shù)增加的相似變化（Di Stefano A，Capelli A，Lusuardi M，Balbo P，Vecchio C，Maestrelli P，Mapp CE，F(xiàn)abbri LM，Donner CF 和 Saetta M(1998)Severity of airflow limitation is associated with severity of airway inflammation in smokers. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 158:1277-1285.) 〇
[0007] 不同于哮喘，除了在惡化期間或當(dāng)患者具有伴發(fā)性哮喘時(shí)，嗜酸性粒細(xì)胞不 顯著(Fabbri L，Beghe B，Caramori G，Papi A 和 Saetta M(1998)Similarities and discrepancies between exacerbations of asthma and chronic obstructive pulmonary disease. Thorax53:803-808 ；Fabbri LM, Romagnoli M，Corbetta L，Casoni G, Busljetic K，Turato G，Ligabue G，Ciaccia A，Saetta M 和 Papi A (2003)Differences in airway inflammation in patients with fixed airflow obstruction due to asthma or chronic obstructive pulmonary disease. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 167:418-424.) 〇
[0008] 因此，慢性阻塞性肺?。–0PD)的治療方法將不同于哮喘的治療方法，但是，現(xiàn)有 療法已經(jīng)致力于非特定地治療兩種疾病。因此，尚無抗炎療法特定地批準(zhǔn)用于C0PD，并 且可用的抗炎療法起初被開發(fā)用于哮喘。面對(duì)C0PD的研究的挑戰(zhàn)是多方面的；潛藏在該 疾病下的復(fù)雜和多樣的病理學(xué)的機(jī)制需要闡明；需要確認(rèn)疾病發(fā)展中炎癥的作用（Hele Dj,Belvisi MG,2003. Novel therapies for the treatment of inflammatory airway disease, Expert. Opino. Invest. Drug, 12:5-18 ； J Craig Fox 和 Mary F Fitzgerald ； The role of animal models in the pharmacological evaluation of emerging anti-inflammatory agents for the treatment of C0PD，Current Opinion in Pharmacology 2009,9:231_242)。
[0009] 對(duì)較長效0激動(dòng)劑、較安全類固醇和結(jié)合療法形式的治療哮喘有用的現(xiàn)有療法 的改善正在不斷進(jìn)行，并且向coro抗膽堿能藥提供癥狀緩解。已經(jīng)利用類固醇來治療惡 化，但是，到現(xiàn)在為止，尚無療法顯示出對(duì)C0PD中的肺功能的逐漸下降或哮喘的發(fā)展有顯 著影響。
[0010] 因此，直到現(xiàn)在有很多研究來開發(fā)可能成功或特定治療C0PD的新藥。
[0011] 本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)致力于開發(fā)源自具有安全性和功效的天然資源（如，具有 抑制炎性細(xì)胞繁殖的活性的效力的植物、動(dòng)物等）的有效力的治療劑，并且最終發(fā)現(xiàn)長 葉婆婆納（Pseudolysimachion longifolium)的提取物顯示出有效力的抗發(fā)炎、抗過敏 和抗哮喘活性（韓國專利第10-860080號(hào)），并且從此分離的各種化合物，如毛蕊花甙 (6-0-3, 4-二羥基苯甲酰基梓醇）、胡黃連苷II (6-0-4-羥基-3-甲氧基苯甲酰基梓醇）、梓 醇6-咖啡酸酯（6-0-3, 4-二羥基肉桂?；鞔迹?、6-0-藜蘆酰梓醇（6-0-3, 4-二甲氧基苯 甲?；鞔迹?、米內(nèi)戒（minecoside) (6-0-3-羥基-4-甲氧基肉桂酰基梓醇）、梓醇等，也顯 示出有效力的抗發(fā)炎、抗過敏和抗哮喘活性（韓國專利公開第10-2006-125499號(hào)）。
[0012] 東北婆婆納是分布在韓國、中國、日本、薩哈林島（Ostrov Sakhalin)、和俄羅斯的 多年生草本植物。
[0013] 基于在韓國專利第10-860080號(hào)中公開的長葉婆婆納的提取物的抗發(fā)炎、抗過敏 和抗哮喘活性的先前研究，本發(fā)明的發(fā)明人已嘗試開發(fā)從東北婆婆納的提取物分離的顯示 抗炎、抗過敏和抗哮喘活性的更有效且更大量的成分的更有效率的制備方法。
[0014] 然而，尚未有報(bào)道或公開有關(guān)用于制備從東北婆婆納的提取物分離的比在上述引 用的文獻(xiàn)中更有效且更大量的顯示抗炎、抗過敏和抗哮喘活性的成分的有效方法，上述引 用的文獻(xiàn)所公開的內(nèi)容在此通過引用并入本文中。
[0015] 因此，本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)用于從東北婆婆納的提取物制備含有較大量活 性成分（如，梓醇）的純化提取物的新工業(yè)化方法，并且通過利用BALB/c雄性小鼠進(jìn)行 的各種體內(nèi)試驗(yàn)（例如，由C0PD發(fā)生導(dǎo)致的招募至肺的炎性免疫細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞的 增殖和活性的抑制試驗(yàn)；參與肺細(xì)胞的損壞的趨化因子（如，MIP-2/CXCL-2、TNF-a、KC/ CXCL-1 (趨化因子Gro- a )和CXCL-8等）的再生的抑制試驗(yàn)；在利用SPF (無特定病原體） Sprague-Dawley大鼠的動(dòng)物試驗(yàn)中通過降低NF-kB活性減少對(duì)IL-1 0、IL-6、TNF- a和 MMP-9表達(dá)的釋放的影響）以及在分子表達(dá)譜變化試驗(yàn)中誘導(dǎo)對(duì)Th2細(xì)胞的IL-4-表達(dá)的 影響的體外試驗(yàn)（例如，對(duì)MUC5AC (低聚粘液/凝膠形成）的表達(dá)的抑制試驗(yàn)），所述純化 提取物和從此分離的化合物顯示出有效力的抗coro活性而無0-2-受體對(duì)抗應(yīng)答。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0016] 技術(shù)問題
[0017] 本發(fā)明提供一種包含來自東北婆婆納的含有活性成分（如梓醇衍生物）的新純化 提取物或選自藜蘆酸、毛蕊花甙、梓苷、胡黃連苷II、異香草酰梓醇和6-0-藜蘆酰梓醇的至 少一種化合物的藥物組合物和保健食品，以治療和預(yù)防慢性阻塞性肺?。–0PD)。
[0018] 本發(fā)明還提供來自東北婆婆納的含有活性成分（如梓醇衍生物）的新純化提取物 或選自藜蘆酸、毛蕊花甙、梓苷、胡黃連苷II、異香草酰梓醇和6-0-藜蘆酰梓醇的至少一種 化合物用于治療和預(yù)防慢性阻塞性肺病（C0PD)的用途。
[0019] 本發(fā)明還提供治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物的慢性阻塞性肺病（C0PD)的方法，其包括向 該哺乳動(dòng)物施用有效量的來自東北婆婆納的含有活性成分（如梓醇衍生物）的新純化提取 物或選自藜蘆酸、毛蕊花甙、梓苷、胡黃連苷II、異香草酰梓醇和6-0-藜蘆酰梓醇的至少一 種化合物，和它們制藥上可接受的載體。
[0020] 技術(shù)方案
[0021] 因此，本發(fā)明的目的是提供一種包含來自東北婆婆納的含有活性成分（如梓醇 衍生物）的新純化提取物或選自藜蘆酸、毛蕊花甙、梓苷、胡黃連苷II、異香草酰梓醇和 6-0-藜蘆酰梓醇的至少一種化合物的藥物組合物和保健食品，以治療和預(yù)防慢性阻塞性肺 ?。╟oro)。
[0022] 在此公開的術(shù)語"梓醇衍生物"包括毛蕊花甙、梓苷、胡黃連苷II、異香草酰梓醇和 6-0-藜蘆酰梓醇等。
[0023] 在此公開的術(shù)語"東北婆婆納"包括培養(yǎng)的或天然生長的植物和市售的植物，但不 意欲限制到上述范圍內(nèi)。
[0024] 在此公開的術(shù)語"新的純化提取物"包含：(a)用丁醇分餾的純化提取物（下文中 稱為"ATC1"）和（b)用二級(jí)分餾的純化提取物（下文中稱為"ATC2"）。
[0025] 具體地，術(shù)語"用丁醇分餾的純化提取物（ATC1) "的特征在于，基于東北婆婆納的 總提取物的重量（100% )，含有15-50% (w/w)毛蕊花甙、0. 3-10% (w/w)藜蘆酸、0. 5-10% (w/w)梓苷、0.3-10% (w/w)胡黃連苷 II、0. 3-10% (w/w)異香草酰梓醇和 0.3-10% (w/ w)6-0-藜蘆酰梓醇；優(yōu)選地，基于東北婆婆納的總提取物的重量（100% )，含有20-25% (￥/\￥)毛蕊花戒、0.5-5%^/\￥)藜蘆酸、1-5%(￥/\￥)梓苷、0.5-5%(￥/\￥)胡黃連苷11、 0.5-5% (w/w)異香草酰梓醇和1-5% (w/w) 6-0-藜蘆酰梓醇；
[0026] 和/或，其特征在于，在東北婆婆納的總提取物（100% )中含有12. 3-47% (w/ w)梓苷衍生物，且各種梓苷衍生物的重量之間具有如下的相對(duì)混合比（w/w) :15. 0-18.0 份（w/w)毛蕊花戒、2. 10-2. 60 份（w/w)梓苷、1 份（w/w)胡黃連苷 II、1. 00-1. 30 份（w/w) 異香草酰梓醇以及2. 00-2. 30份（w/w) 6-0-藜蘆酰梓醇；優(yōu)選地，16. 0-17. 0份（w/w)毛 蕊花戒、2. 20-2. 50份（w/w)梓苷、1份（w/w)胡黃連苷II、1. 10-1. 20份（w/w)異香草酰 梓醇以及2. 10-2. 20份（w/w) 6-0-藜蘆酰梓醇；更優(yōu)選地，16. 20-16. 99份（w/w)毛蕊花 戒、2. 40-2. 45份（w/w)梓苷、1份（w/w)胡黃連苷II、1. 10-1. 19份（w/w)異香草酰梓醇、 2. 10-2. 19 份（w/w) 6-0-藜蘆酰梓醇。
[0027] 更具體地，術(shù)語"用丁醇分餾的純化提取物（ATC1) "的特征在于，通過如下方法制 備：在第一步中，向干燥的東北婆婆納中加入選自水、C1-C4低級(jí)醇（例如甲醇、乙醇、丁醇 等）或它們的混合物的至少一種提取溶劑，優(yōu)選水和乙醇的混合物，更優(yōu)選30 - 80% (w/ w)乙醇的水溶液；在第二步中，在10至100°C、優(yōu)選20至90°C的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行選自熱水 回流提取、冷水提取、超聲波處理或常規(guī)提?。▋?yōu)選冷水提取接著回流提取）中的至少一種 提取方法30分鐘至72小時(shí)、優(yōu)選6至48小時(shí)的時(shí)間，更優(yōu)選地，在10至60°C、優(yōu)選20至 50°C的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行冷水提取30分鐘至72小時(shí)、優(yōu)選6至48小時(shí)的時(shí)間，然后在40至 120 °C、優(yōu)選60至90 °C的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行回流提取30分鐘至72小時(shí)、優(yōu)選6至48小時(shí)的時(shí) 間，反復(fù)進(jìn)行，以獲得第一提取物；在第三步中，將所述第一提取物懸浮在約〇. 5-10倍體積 (v/V)、優(yōu)選約1-5倍體積（v/v)的水中，以得到懸浮提取物；以及加入約0. 5-20倍體積（v/ v)、優(yōu)選約1-10倍體積（v/V)的丁醇，分餾為水層和丁醇層并收集丁醇層以得到用丁醇分 餾的純化提取物（ATC1)，以治療和預(yù)防慢性阻塞性肺?。–OPD)，基于東北婆婆納的總提取 物的重量（100% )，所述用丁醇分餾的純化提取物含有15-50% (w/w)毛蕊花甙、0.3-10% (w/w)藜蘆酸、0.5-10% (w/w)梓苷、0.3-10% (w/w)胡黃連苷 II、0. 3-10% (w/w)異香草 酰梓醇和〇. 3-10 % (w/w) 6-0-藜蘆酰梓醇。
[0028] 因此，在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明還提供了用于制備從東北婆婆納中 分離出的用丁醇分餾的純化提取物（ATC1)的方法，包括以下步驟：在第一步中，向干燥的 東北婆婆納中加入選自水、C1-C4低級(jí)醇（例如甲醇、乙醇、丁醇等）或它們的混合物的至 少一種提取溶劑，優(yōu)選水和乙醇的混合物，更優(yōu)選30 - 80% (w/w)乙醇的水溶液；在第二 步中，在10至100°C、優(yōu)選20至90°C的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行選自熱水回流提取、冷水提取、超 聲波處理或常規(guī)提取中的至少一種提取方法30分鐘至72小時(shí)，優(yōu)選6至48小時(shí)的時(shí)間， 優(yōu)選冷水提取后接著回流提取，更優(yōu)選地，在10至60°C、優(yōu)選20至50°C的溫度范圍內(nèi)進(jìn) 行冷水提取30分鐘至72小時(shí)、優(yōu)選6至48小時(shí)的時(shí)間，然后在40至120°C、優(yōu)選60至 90°C的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行回流提取30分鐘至72小時(shí)、優(yōu)選6至48小時(shí)的時(shí)間，反復(fù)進(jìn)行， 以獲得第一提取物；在第三步中，將所述第一提取物懸浮在約〇. 5-10倍體積（v/v)、優(yōu)選 約1-5倍體積（v/v)的水中，以得到懸浮提取物；以及加入約0. 5-20倍體積（v/v)、優(yōu)選 約1-10倍體積（v/v)的丁醇，分餾為水層和丁醇層并收集丁醇層以得到用丁醇分餾的純化 提取物（ATC1)，以治療和預(yù)防慢性阻塞性肺?。–0PD)，基于東北婆婆納的總提取物的重量 (100% )，所述用丁醇分餾的純化提取物（ATC1)含有15-50% (w/w)毛蕊花甙、0.3-10% (w/w)藜蘆酸、0.5-10% (w/w)梓苷、0.3-10% (w/w)胡黃連苷 II、0. 3-10% (w/w)異香草 酰梓醇和〇. 3-10 % (w/w) 6-0-藜蘆酰梓醇。
[0029] 具體地，術(shù)語"用二級(jí)分餾的純化提取物（ATC2) "的特征在于，基于東北婆婆納的 總提取物的重量（100%)，含有30-60% (w/w)毛蕊花甙、0.5-10% (w/w)藜蘆酸、2-20% (￥/\￥)梓苷、1-10%^/\￥)胡黃連苷11、1-10%(￥/\￥)異香草酰梓醇和2-20%(￥/\￥)6-0-藜 蘆酰梓醇；優(yōu)選地，基于東北婆婆納的總提取物的重量（100% )，含有40-50% (w/w)毛蕊 花戒、1-5% (w/w)藜蘆酸、3-10% (w/w)梓苷、2-5% (w/w)胡黃連苷 II、2_8% (w/w)異香 草酰梓醇和3-8% (w/w) 6-0-藜蘆酰梓醇；
[0030] 和/或，其特征在于，在東北婆婆納的總提取物（100% )中含有36. 5-91% (w/ W)梓苷衍生物，且各種梓苷衍生物的重量之間具有如下的相對(duì)混合比（w/w) :13. 0-16.0 份（w/w)毛蕊花戒、2. 20-2. 50 份（w/w)梓苷、1 份（w/w)胡黃連苷 II、1. 10-1. 40 份（w/w) 異香草酰梓醇以及2. 00-2. 20份（w/w) 6-0-藜蘆酰梓醇；優(yōu)選地，14. 0-15. 0份（w/w)毛 蕊花戒、2. 30-2. 45份（w/w)梓苷、1份（w/w)胡黃連苷II、1. 20-1. 35份（w/w)異香草酰 梓醇以及2. 00-2. 10份（w/w) 6-0-藜蘆酰梓醇；更優(yōu)選地，14. 50-14. 99份（w/w)毛蕊花 戒、2. 35-2. 43份（w/w)梓苷、1份（w/w)胡黃連苷II、1. 25-1. 34份（w/w)異香草酰梓醇、 2. 01-2. 09 份（w/w) 6-0-藜蘆酰梓醇。
[0031] 更具體地，術(shù)語"用二級(jí)分餾的純化提取物（ATC2) "的特征在于，通過如下方法制 備：在第一步中，向干燥的東北婆婆納中加入選自水、C1-C4低級(jí)醇（例如甲醇、乙醇、丁醇 等）或它們的混合物的至少一種提取溶劑，優(yōu)選水和乙醇的混合物，更優(yōu)選30-80(w/w)乙 醇的水溶液；在第二步中，在10至l〇〇°C、優(yōu)選20至90°C的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行選自熱水回流 提取、冷水提取、超聲波處理或常規(guī)提取的至少一種提取方法30分鐘至72小時(shí)、優(yōu)選6至 48小時(shí)的時(shí)間，優(yōu)選冷水提取后，接著回流提取，更優(yōu)選地，在10至60°C、優(yōu)選20至50°C的 溫度范圍內(nèi)進(jìn)行冷水提取30分鐘至72小時(shí)、優(yōu)選6至48小時(shí)的時(shí)間，然后在40至120°C、 優(yōu)選60至90°C的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行回流提取30分鐘至72小時(shí)、優(yōu)選6至48小時(shí)的時(shí)間， 反復(fù)進(jìn)行，以獲得第一提取物；在第三步中，將所述第一提取物懸浮在約〇. 5-10倍體積（v/ v) 、優(yōu)選約1-5倍體積（v/v)的水中，以得到懸浮提取物；在第三步中，加入約0. 5-20倍體 積（v/V)、優(yōu)選約1-10倍體積（v/V)的丁醇，分餾為水層和丁醇層并收集丁醇層以得到用丁 醇分餾的純化提取物（ATC1);以及對(duì)用丁醇分餾的純化提取物（ATC1)進(jìn)行選自反相分配 色譜、正相分配色譜、離子交換色譜以及尺寸排斥色譜的至少一種純化工藝以得到用二級(jí) 分餾的純化提取物（ATC2)，以治療或預(yù)防慢性阻塞性肺?。–OPD)，基于東北婆婆納的總提 取物的重量（100%)，所述用二級(jí)分餾的純化提取物（ATC2)含有30-60% (w/w)毛蕊花甙、 0. 5-10% (w/w)藜蘆酸、2-20% (w/w)梓苷、1-10% (w/w)胡黃連苷 II、1_10% (w/w)異香 草酰梓醇和2-20 % (w/w) 6-0-藜蘆酰梓醇。
[0032] 因此，在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明還提供用于制備從東北婆婆納中分 離出的用二級(jí)分餾的純化提取物（ATC2)