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一種胸膜/腦膜及其制備方法_2

文檔序號:9360126閱讀:來源:國知局
種胸膜/腦膜的制備方法,包括以下步驟:
[0032] S1、按固液比1:100~5:100g/ml的比例,將脫乙酰度大于60%、分子量大于 0. 5 X IO6的魷魚軟骨殼聚糖或魷魚軟骨殼聚糖粉末溶解成膠液;
[0033] S2、對膠液過濾、脫泡后旋轉(zhuǎn)涂膜,得到胸膜/腦膜。
[0034] 其中,步驟Sl中魷魚軟骨殼聚糖的制備包括:
[0035] Sl 1、按固液比5. 0:100~25: lOOg/ml的比例,將魷魚軟骨0-甲殼素或魷魚軟骨 殼聚糖溶解于質(zhì)量百分比濃度30%~40%的NaOH溶液中,在50~80°C下攪拌1~6h后 過濾,得到濾渣;
[0036] S12、對步驟Sll得到的濾渣洗滌至中性后干燥,得到步驟Sl所用的魷魚軟骨殼聚 糖。
[0037] 通過元素分析法測定魷魚軟骨殼聚糖的脫乙酰度,稀溶液粘度法測定魷魚軟骨殼 聚糖的粘均分子量,得到如下表1所示的一系列魷魚軟骨殼聚糖。由表1可看出,采用不同 的脫乙酰條件(如堿濃度、時(shí)間、溫度),得到的魷魚軟骨殼聚糖的分子量相近,而脫乙酰度 不同。
[0038]
[0039] 表I
[0040] 其中,
[0041 ] P-chitin :魷魚軟骨0 -甲殼素;
[0042] 2+la:脫乙酰兩次,第一次2h,第二次Ih ;
[0043] 2+l+lb:脫乙酰三次,第一次2h,第二次lh,第三次Ih;
[0044] l+1+l+l+r:脫乙酰五次,每次Ih;
[0045] CS-75d:CS-75 在 70°C超聲處理 2h ;
[0046] Nile:不完全溶解,無法測定粘均分子量。
[0047] 更進(jìn)一步地,魷魚軟骨殼聚糖的制備在步驟S12之后還包括:
[0048] S13、將步驟S12得到的魷魚軟骨殼聚糖作為中間產(chǎn)物,按固液比5. 0:100~ 25: lOOg/ml的比例,將中間產(chǎn)物在室溫下溶解于質(zhì)量百分比濃度1%~5%的鹽酸溶液中, 在60~80°C下超聲處理2~8h,得到混合液;
[0049] S14、在混合液中加入0. 1~1.0 mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)混合液至中性,抽濾得到 濾渣;
[0050] S15、對步驟S14得到的濾渣洗滌至中性后干燥,得到與中間產(chǎn)物分子量不同的魷 魚軟骨殼聚糖,作為步驟Sl所用的魷魚軟骨殼聚糖。
[0051] 仍然通過元素分析法測定魷魚軟骨殼聚糖的脫乙酰度,稀溶液粘度法測定魷魚軟 骨殼聚糖的粘均分子量,得到如下表2所示的一系列魷魚軟骨殼聚糖。由表2可看出,通過 改變超聲處理時(shí)間和/或溫度,得到的魷魚軟骨殼聚糖的脫乙酰度相近,而分子量不同。
[0052]
[0053] 表 2
[0054] 其中,
[0055] P -chitin :魷魚軟骨P -甲殼素;
[0056] 〇5-150:00(80.00±0.65)%、麗(1.52±0.25)\106的魷魚軟骨殼聚糖。
[0057] 以下通過優(yōu)選的實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。
[0058] 實(shí)施例一:
[0059] 本實(shí)施例提出一種胸膜/腦膜的制備方法,包括以下步驟:
[0060] Sl、將I. 3g魷魚軟骨殼聚糖(DD = 75%,Mff = 1. 52 X IO6)粉末溶解在IOOmU質(zhì) 量百分比濃度2 %的醋酸溶液中,配置成膠液;
[0061] S2、對經(jīng)過過濾、脫泡的膠液旋轉(zhuǎn)涂膜(r = 2000rad/min,t = 9s),得到殼聚糖薄 膜;
[0062] S3、將殼聚糖薄膜置于60°C鼓風(fēng)干燥箱中烘干后,用稀堿溶液和去離子水洗滌,再 次置于60°C鼓風(fēng)干燥箱中烘干,得到胸膜/腦膜補(bǔ)片。
[0063] 其中,步驟Sl中魷魚軟骨殼聚糖粉末的制備包括:
[0064] Sl 1、按固液比為10:100 (g/ml)的比例,將魷魚軟骨甲殼素溶解于質(zhì)量百分比 濃度35 %的NaOH溶液中,在80 °C下攪拌2h后過濾得到濾渣;
[0065] S12、對濾渣用去離子水洗滌至中性后置于60°C鼓風(fēng)干燥箱烘干、研磨,得到魷魚 軟骨殼聚糖(DD = 75%,Mff = L 52 X IO6)粉末。
[0066] 由于步驟Sl中配置的膠液粘度較大,流延涂膜的膠液難以在基片上均勻鋪展,而 旋轉(zhuǎn)涂膜工藝則是通過膠液和基片之間粘滯力和旋轉(zhuǎn)引起離心力的合力作用使膠液在平 整基片上流動成膜,形成的液膜平整,起伏性較小。因此本發(fā)明采用旋轉(zhuǎn)涂膜方法制備的魷 魚軟骨殼聚糖膜厚度更加均勻且膜中無氣孔,防滲性能得到極大提高,參見圖1是本發(fā)明
【具體實(shí)施方式】一的流延成膜和旋轉(zhuǎn)涂膜厚度均勻性比較圖;其中,上圖為流延成膜,下圖為 旋轉(zhuǎn)涂膜。本實(shí)施例制備的胸膜/腦膜厚度為〇. l〇mm,濕態(tài)拉伸強(qiáng)度為11. 45±0. 12MPa, 斷裂伸長率為209. 64±21. 21%,溶脹率為239%,具體力學(xué)性能數(shù)據(jù)如下表3所示:
[0067]
[0068] 表 3
[0069] 參見圖2是本發(fā)明【具體實(shí)施方式】一的補(bǔ)片體外酶解殘留率隨時(shí)間變化曲線圖,經(jīng) 體外酶解性能測試發(fā)現(xiàn),補(bǔ)片殘留率隨時(shí)間增加而減小。
[0070] 下面通過小鼠皮下植入補(bǔ)片實(shí)驗(yàn)評價(jià)補(bǔ)片的生物相容性、生物降解性及周圍組織 炎癥反應(yīng)情況,作為實(shí)驗(yàn)組。以小鼠體內(nèi)不放置補(bǔ)片、單純縫合的為對照組,小鼠不作任何 處理的為正常組。宏觀觀察發(fā)現(xiàn)小鼠的傷口慢慢愈合,兩月后傷口僅存線性疤痕。HE染 色光鏡觀察發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組和對照組傷口愈合前期都存在炎癥反應(yīng),之后炎癥反應(yīng)慢慢消失。 Masson染色光鏡觀察發(fā)現(xiàn)傷口愈合過程中,實(shí)驗(yàn)組和對照組的傷口組織含有大量成纖維細(xì) 胞,并存在大量膠原蛋白沉積。參見圖3是本發(fā)明【具體實(shí)施方式】一的體內(nèi)植入補(bǔ)片的炎癥 情況圖,根據(jù)C0X-2/GAPDH的比值可知:補(bǔ)片植入后的前24天,創(chuàng)口組織出現(xiàn)炎癥反應(yīng),在 第24天時(shí)最為強(qiáng)烈,是因?yàn)閭谖赐耆弦约把a(bǔ)片在體內(nèi)產(chǎn)生的不適應(yīng)造成炎癥;24天 后,補(bǔ)片植入材料與組織完全融合,且傷口基本愈合,其炎癥反應(yīng)慢慢減??;到了第60天, C0X-2/GAPDH比值與正常組差距較小,說明炎癥反應(yīng)慢慢消失。參見圖4是本發(fā)明具體實(shí) 施方式一的補(bǔ)片在小鼠體內(nèi)酶解情況圖,根據(jù)補(bǔ)片體內(nèi)殘留率隨時(shí)間的變化曲線可知:補(bǔ) 片在體內(nèi)緩慢酶解吸收,植入后的前13天,補(bǔ)片降解緩慢,之后隨小鼠自愈能力加強(qiáng),傷口 慢慢愈合,補(bǔ)片吸收也隨之加快;補(bǔ)片植入后的60天,補(bǔ)片殘留率為58%。參見圖5是本 發(fā)明【具體實(shí)施方式】一的補(bǔ)片植入后小鼠血清中MDA的變化圖,通過對比實(shí)驗(yàn)組、對照組及 正常組小鼠血清中MDA的含量可知:補(bǔ)片植入后第13、39、60天的實(shí)驗(yàn)組和對照組小鼠MDA 含量均比正常組高,且對照組和實(shí)驗(yàn)組MDA含量基本上相等,說明補(bǔ)片的植入并未對小鼠 組織細(xì)胞造成額外的損傷,補(bǔ)片具有良好的生物相容性。
[0071] 以上綜合性能檢測和動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:由魷魚軟骨殼聚糖通過旋轉(zhuǎn)涂膜方法制 備的胸膜和硬腦膜補(bǔ)片具有良好的干、濕態(tài)力學(xué)性能,厚度更加均勻,且消除了膜的氣孔, 提高其防滲性能。此外,該補(bǔ)片具有良好生物相容性、生物降解性及對周圍組織無炎癥反應(yīng) 等特性。
[0072] 實(shí)施例二:
[0073] 本實(shí)施例提出一種胸膜/腦膜的制備方法,包括以下步驟:
[0074] Sl、將I. 5g魷魚軟骨殼聚糖(DD = 95%,Mff = 1. 15 X IO6)粉末溶解在IOOmU質(zhì) 量百分比濃度2 %的醋酸溶液中,配置成膠液;
[0075] S2、對經(jīng)過過濾、脫泡的膠液旋轉(zhuǎn)涂膜(r = 2500rad/min,t = IOs),得到殼聚糖 薄膜;
[0076] S3、將殼聚糖薄膜置于60°C鼓風(fēng)干燥箱中烘干后,用稀堿溶液和去離子水洗滌,再 次置于60°C鼓風(fēng)干燥箱中烘干,得到胸膜/腦膜補(bǔ)片。
[0077] 其中,步驟Sl中魷魚軟骨殼聚糖粉末的制備包括:
[007
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