荔枝皮多酚在制備降低肝臟膽固醇的藥物或保健品中的應用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于荔枝的醫(yī)藥用途技術(shù)領(lǐng)域,尤其涉及荔枝皮多酚在制備降低肝臟膽固 醇的藥物或保健品中的應用。
【背景技術(shù)】
[0002] 非酒精性脂肪性肝病是指除酒精和其他明確的損肝因素所致的,以彌漫性肝細胞 大泡性脂肪變?yōu)橹饕±肀憩F(xiàn)的遺傳-代謝-病理臨床綜合征,具有影響全身多系統(tǒng)、病程 持續(xù)進展的特點。非酒精性脂肪性肝的發(fā)病機制極為復雜,比較認可的是二次打擊學說,初 次打擊是胰島素抵抗,二次打擊主要指各種原因所致的氧化應激及脂質(zhì)過氧化損傷。脂肪 肝的形成和脂代謝障礙有著密切關(guān)系:肝細胞中甘油三酯(TG)、極低密度脂蛋白的合成與 排出不平衡是形成脂肪肝的主要原因。當進入肝臟的脂肪量超過肝臟的脂質(zhì)和氧化能力, 或肝臟合成低密度脂蛋白障礙,肝臟合成的內(nèi)源性TG就不能以脂蛋白的形式進出肝臟,則 在肝細胞內(nèi)外堆積形成脂肪肝。目前,臨床上尚無完全有效的藥物治療非酒精性脂肪性肝, 僅僅能夠改善胰島素抵抗,維護機體內(nèi)環(huán)境脂質(zhì)代謝、能量代謝和抗氧化物的平衡,促使機 體保持在適應性反應階段,延緩、阻止脂肪性肝病的病情進展。現(xiàn)階段藥物治療主要針對不 同病因進行診治,如:對高血脂脂肪肝患者使用降脂藥物,對糖尿病性脂肪肝患者使用降糖 藥。
[0003] 荔枝為無患子科常綠植物的果實,主產(chǎn)于我國廣東、廣西、福建等地,目前我國荔 枝年產(chǎn)量約160萬噸,占世界荔枝總產(chǎn)量80%以上。在荔枝的深加工過程中產(chǎn)生了約40% 鮮果質(zhì)量的果皮和果核廢棄物,大量荔枝果皮作為大宗農(nóng)產(chǎn)品廢棄物至今未能得到有效開 發(fā)和利用。研宄表明,荔枝果皮中含有大量的多酚類化合物,實驗證明多酚類物質(zhì)具有抗氧 化、抗腫瘤、預防心血管疾病、延緩衰老等多種生物活性。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供荔枝皮多酚在制備降低肝臟膽固醇的藥物或保 健品中的應用,以用于治療非酒精性脂肪肝和肝臟脂肪堆積等相關(guān)肝病。
[0005] 為解決上述技術(shù)問題,本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:荔枝皮多酚在制備降低肝臟膽 固醇的藥物或保健品中的應用。
[0006] 藥物或保健品用于預防或治療肝臟脂肪堆積。
[0007] 藥物或保健品用于預防或治療非酒精性脂肪肝。
[0008] 藥物或保健品用于預防或治療酒精性脂肪肝。
[0009] 降低肝臟膽固醇的藥物或保健品,含治療有效量的荔枝皮多酚和輔料。
[0010] 荔枝皮多酚來自荔枝果皮醇提物。
[0011] 荔枝果皮醇提物按以下方法制備:取新鮮荔枝果皮,用80%乙醇室溫浸泡2次,過 濾,合并濾液,減壓濃縮濾液,濾除葉綠素及蠟質(zhì)后繼續(xù)濃縮得浸膏,浸膏冷凍干燥后得到 干浸膏。
[0012] 荔枝果皮醇提物按以下方法制備:取新鮮荔枝果皮6. 68Kg,用6倍量80 %乙醇室 溫浸泡2次,每次7天,過濾,合并濾液,減壓濃縮濾液,濾除蠟質(zhì)及葉綠素后繼續(xù)濃縮得浸 膏650g ;取浸膏550g加水充分溶解后,采用S印hadex LH-20柱層析,0 - 100% MeOH進行 梯度洗脫,20 %為一個梯度,每一梯度2L及50 %、60 %的丙酮各2L,每份收集250mL,經(jīng)硅膠 薄層層析跟蹤檢測,合并相近流份,50°C以下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀真空減壓至干的浸膏。
[0013] 上述藥物或保健品為口服劑型。
[0014] 口服劑型為膠囊劑、片劑或顆粒劑。
[0015] 發(fā)明人通過大量實驗發(fā)現(xiàn),來自荔枝果皮的荔枝皮多酚可有效降低肝臟膽固醇、 肝臟甘油三酯、肝臟低密度脂蛋白膽固醇,從而有效地減少肝臟中脂肪堆積,可用于治療非 酒精性脂肪肝等相關(guān)肝病。
【附圖說明】
[0016] 圖1是荔枝皮多酚(荔枝果皮醇提物)提取分離的工藝流程圖。
[0017] 圖2各組小鼠肝臟照片,圖中:A空白組,B模型組,C陽性組,D荔枝皮多酚低劑量 組,E荔枝皮多酚高劑量組。
[0018] 圖3各組小鼠肝臟HE染色照片(HEX 100),圖中:A空白組,B模型組,C陽性組,D 荔枝皮多酚低劑量組,E荔枝皮多酚高劑量組。
【具體實施方式】
[0019] 1.實驗材料與方法
[0020] 1. 1藥品和試劑
[0021] 新鮮的荔枝果皮:2013年7月購于廣西桂林市雁山區(qū),經(jīng)鑒定為無患子科荔枝 (litchi chinensis)的果皮;辛伐他汀片:廣東彼迪藥業(yè)有限公司,批號20141002 ;總膽 固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDLC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDLC)測定 試劑盒:長春匯力;超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶 (AST)、血糖(FBG)、胰島素(INS)測定試劑盒:南京建成;其余試劑均為國產(chǎn)分析純。
[0022] 1. 2 儀器
[0023] TGL-16R型高速冷凍離心機,珠海黑馬公司;RT-9100型半自動生化分析儀,深圳 雷杜生命科學股份有限公司;MK3型全自動酶標儀,賽默飛世爾(上海)儀器有限公司;電 子天平,梅特樂-托利多儀器上海有限公司。
[0024] 1. 3實驗動物及飼料
[0025] 昆明小鼠,SPF級,體重18_22g,由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供。生產(chǎn) 許可證號:SCXK(湘)2009-0004?;A(chǔ)飼料,由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供。生 產(chǎn)證號:SCXK (湘)2009-0009。
[0026] 1.4荔枝皮多酚的制備
[0027] 取新鮮荔枝果皮6. 68Kg,用6倍量80%乙醇室溫浸泡2次,每次7天,過濾,合并 濾液,減壓濃縮濾液,濾除蠟質(zhì)及葉綠素后繼續(xù)濃縮得浸膏650g ;取浸膏550g加水充分溶 解后,米用36卩]^(1611^-20柱層析(8〇11;[.(1.\54011,0-100%]\160!1,20%為一個梯度,每 一梯度2L及50 %、60 %的丙酮各2L)進行梯度洗脫,每份收集250mL,經(jīng)硅膠薄層層析跟蹤 檢測,合并相近流份,50°C以下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀真空減壓至干的浸膏。具體工藝流程參見圖1。
[0028] 研宄表明,荔枝果皮各部位的多酚含量存在著差異,提取物經(jīng)過S印hadex LH-20 柱層析純化后,其多酚類成分主要集中在Fr. 3、Fr. 4和Fr. 5這三個部位中,總酚含量都達 到40 %以上,其中Fr. 3的總酚含量44. 02 %,F(xiàn)r. 4的總酚含量46. 53 %,F(xiàn)r. 5的總酚含量 52. 48%,說明S印hadex LH-20對多酚類成分具有較好的富集作用。合并Fr. 3、Fr. 4和Fr. 5 這三個部位的干浸膏用于以下活性實驗,測得合并后的干浸膏多酚含量45.62% (其中以 鎖狀多聚體多酚為主,接近90%,小分子多酚含量只有11.02% )。
[0029] 1. 5非酒精脂肪肝動物模型的建立
[0030] 將小鼠隨機分為兩組,對照組小鼠(20只)喂飼基礎(chǔ)飼料,模型組小鼠(60只) 喂飼高脂飼料(66. 9%基礎(chǔ)飼料、10%豬油、10%酪蛋白、10%蔗糖、2%膽固醇、1 %膽酸鹽、 0. 1 %丙基硫氧嘧啶),自由攝食、飲水。連續(xù)喂養(yǎng)8周后,與對照組比較,造模小鼠肝臟明顯 腫大、肝臟指數(shù)明顯升高,肝組織病理切片觀察可見肝細胞脂肪變性。
[0031] 1.6分組及給藥
[0032] 將造模后的小鼠隨機分成4組:模型組、陽性組(辛伐他?。?、荔枝皮多酚低劑量 組、荔枝皮多酚高劑量組。對照組和模型組灌胃蒸餾水,陽性對照組(辛伐他汀5mg/kg),荔 枝皮多酚低劑量組(200mg/kg),荔枝皮多酚高劑量組(400mg/kg),給藥體積0. 2mL/10g,連 續(xù)給藥8周,每周記錄小鼠體質(zhì)量。
[0033] 1. 7指標測定
[0034] 所有小鼠在末次給藥后,禁食不禁水12h,眼球取血,3500r/min離心10min,血清 于-20°C低溫保存,用于檢測各項生化指標。小鼠脫頸處死,剖腹,迅速取肝臟,拍照,稱質(zhì) 量。剪下一葉肝臟用冰冷的〇. 9%的生理鹽水充分灌流、洗凈血液和血跡至白陶土樣,用濾 紙吸干,稱重,快速地用剪刀將組織剪碎,加入冰冷的(4°C )0. 9%的生理鹽水制成勻漿液, 4°C,4000r/min離心15分鐘,棄去沉淀,留下上清液-20°C低溫保存,用于檢測各項生化指 標。剪下一葉肝臟用冰冷的〇. 9%的生理鹽水充分灌流、洗凈血液和血跡至白陶土樣,用濾 紙吸干,稱重,快速地用剪刀將組織剪碎,加入異丙醇制成勻漿液,過夜,離心,取上清液測 定各項生化指標。剪下一葉肝臟置福爾馬林溶液中固定,HE染色,切片,顯微鏡觀察病理變 化。計算肝臟指數(shù)和胰島素抵抗指數(shù),公式分別為:肝臟指數(shù)=肝臟濕質(zhì)量*1000/體質(zhì)量; 胰島素抵抗指數(shù)(IRI) = FBG*INS/22. 5。
[0035] 1. 8統(tǒng)計學方法
[0036] 采用SPSS 13. 0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析,實驗數(shù)據(jù)均以x±s表示,兩個獨立樣本 均數(shù)比較采用t檢驗,多個樣本之間的兩兩比較采用單因素方差分析,P < 0. 05為具有統(tǒng) 計學意義。
[0037] 2.結(jié)果
[0038] 2. 1肝組織病理學觀察
[0039] 2. I. 1大體觀察
[0040] 由圖2可知:空白對照組肝臟肉眼觀察呈鮮紅色,邊緣銳利,表面光滑。非酒精性 脂肪肝模型對照組肉眼見肝臟體積增大,邊緣變鈍,顏色呈土黃色,質(zhì)