一種急進(jìn)高原實(shí)地大鼠缺氧模型的構(gòu)建方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)動(dòng)物模型研宄領(lǐng)域，尤其涉及一種急進(jìn)高原實(shí)地大鼠缺氧模型的 構(gòu)建方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 中國(guó)高原地域遼闊，每年因工作、旅游從內(nèi)地前往高原地區(qū)的人數(shù)超過(guò)1000萬(wàn)人 /次，而高原惡劣自然環(huán)境，嚴(yán)重影響到進(jìn)入高原人群的身體健康。據(jù)統(tǒng)計(jì)平原人快速進(jìn)入 到海拔2500m以上地區(qū)，60~90%的人會(huì)發(fā)生急性高原病，從而制約了高原地區(qū)國(guó)民經(jīng)濟(jì)的 發(fā)展。
[0003] 急性高原病，即機(jī)體快速進(jìn)入到高原地區(qū)（醫(yī)學(xué)上的高原指在海拔2500m以上的 地區(qū)，青海標(biāo)準(zhǔn)）或久居高原進(jìn)入到更高海拔地區(qū)，在數(shù)小時(shí)內(nèi)發(fā)病，出現(xiàn)頭痛、頭暈、心悸、 胸悶、氣促、乏力、睡眠障礙，重者出現(xiàn)惡心、嘔吐、紫紺、少尿或血尿等癥狀。一般無(wú)特殊重 要體征，常見(jiàn)有呼吸加深加快，心率加快，面色蒼白，肢端發(fā)涼，少數(shù)患者血壓輕度異常、顏 面或/和四肢水腫，經(jīng)過(guò)在高原短期適應(yīng)或?qū)ΠY治療，癥狀及體征顯著減輕或消失，機(jī)體可 迅速恢復(fù)正常(高鈺琪主編，高原軍事醫(yī)學(xué)，重慶出版社（2005) 250-276)。
[0004] 目前，急性高原反應(yīng)的發(fā)病機(jī)理尚不清楚，這也是制約高原反應(yīng)合理用藥及相關(guān) 藥物研發(fā)的重要原因。當(dāng)機(jī)體快速暴露在低壓缺氧環(huán)境中時(shí)，機(jī)體會(huì)出現(xiàn)一系列生理生化 反應(yīng)，如血?dú)?、生化指?biāo)及組織器官結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生變化。因此，亟需建立一種符合高原缺 氧癥狀的模型，以便分析機(jī)體進(jìn)入低壓缺氧環(huán)境后發(fā)展成為急性高原癥狀的病理生理情 況，從而有利于合理探宄急性高原疾病的發(fā)病機(jī)理，并為實(shí)地缺氧實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行和抗缺氧藥 物的研發(fā)提供條件。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種簡(jiǎn)單易行、模型制作成功率高、能真實(shí)反 應(yīng)動(dòng)物缺氧損傷情況的急進(jìn)高原實(shí)地大鼠缺氧模型的構(gòu)建方法。
[0006] 為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明所述的一種急進(jìn)高原實(shí)地大鼠缺氧模型的構(gòu)建方法，包 括以下步驟： ⑴在高原低壓低氧模擬艙中模擬海拔3500米，通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行跑臺(tái)實(shí)驗(yàn)，篩選出 缺氧敏感型大鼠； ⑵隨機(jī)選取所述缺氧敏感型大鼠，并采用急進(jìn)高原方式放入高原實(shí)驗(yàn)場(chǎng)； ⑶建立急進(jìn)高原實(shí)地大鼠缺氧條件； ⑷在缺氧24~120h后鑒定所述缺氧敏感型大鼠的血?dú)馍笜?biāo)和病理指標(biāo)。
[0007] 所述步驟⑴中的實(shí)驗(yàn)大鼠是指SPF級(jí)健康Wi star和/或SD雄性大鼠，體重 180~300g，6~7 周齡。
[0008] 所述步驟⑴中的篩選方法是指在高原低壓低氧模擬艙中模擬海拔3500米，將 15~100只實(shí)驗(yàn)大鼠在速度10~20m/min、坡度5~20°C的條件下進(jìn)行跑臺(tái)實(shí)驗(yàn)，以實(shí)驗(yàn)大鼠在 跑臺(tái)上的運(yùn)動(dòng)時(shí)間作為耐力評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，運(yùn)動(dòng)時(shí)間偏長(zhǎng)的5~40只實(shí)驗(yàn)大鼠作為耐受大鼠，運(yùn) 動(dòng)時(shí)間處于中間段的5~20只實(shí)驗(yàn)大鼠作為不敏感型大鼠，運(yùn)動(dòng)時(shí)間偏短的5~40只實(shí)驗(yàn)大 鼠作為敏感型大鼠。
[0009] 所述耐力評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)的運(yùn)動(dòng)時(shí)間為30~540min。
[0010] 所述步驟⑵中的急進(jìn)高原方式是指所述缺氧敏感型大鼠經(jīng)上海虹橋機(jī)場(chǎng)航空運(yùn) 輸急進(jìn)至蘭州中川機(jī)場(chǎng)后，立即改用恒溫箱式貨車轉(zhuǎn)運(yùn)至青海省瑪多縣花石峽鎮(zhèn)，并于12 小時(shí)內(nèi)完成急進(jìn)過(guò)程。
[0011] 所述步驟⑶中急進(jìn)高原實(shí)地大鼠缺氧條件是指實(shí)地海拔2500~4300m，大氣壓 60. 2~75. 3KPa，溫度18~22°C，相對(duì)濕度28~55%，所述缺氧敏感型大鼠食用標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由 飲用純凈水，實(shí)驗(yàn)時(shí)間為24~120h。
[0012] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)： 1、本發(fā)明通過(guò)急進(jìn)海拔4300m高原缺氧環(huán)境，建立了實(shí)驗(yàn)大鼠缺氧大鼠模型，有效地 反映了實(shí)驗(yàn)大鼠缺氧的真實(shí)情況，通過(guò)鑒定發(fā)現(xiàn)急進(jìn)海拔4300m實(shí)地大鼠血氧飽和度降 低，動(dòng)脈血氧分壓降低，動(dòng)脈血乳酸升高，心、肝、腦、腎及肺出現(xiàn)不同程度的病理性損傷，形 成高原缺氧損傷的生理病理狀態(tài)。
[0013] ⑴所需材料 ①實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 實(shí)驗(yàn)所用大鼠為SPF級(jí)健康雄性Wistar大鼠，合格證編號(hào)為2007000525382,6~7周 齡，體重為180~220g。
[0014] ②實(shí)驗(yàn)儀器 海王星500E手持式GPS儀(上海達(dá)賽導(dǎo)航設(shè)備有限公司），PHOX-plus-L便攜式動(dòng)物 電解質(zhì)與血?dú)夥治鰞x(美國(guó)Nova Biomedical有限公司），BX-3010全自動(dòng)生化分析儀（日本 Sysmex醫(yī)用電子有限公司），YDS-30-80液氮罐（樂(lè)山東亞機(jī)電工貿(mào)有限公司）ASP-200S自 動(dòng)脫水機(jī)、M 398419自動(dòng)切片機(jī)、EG 1150H自動(dòng)包埋機(jī)(德國(guó)萊卡有限公司），BX51光學(xué)顯 微鏡（日本Olympus有限公司），ZH-PT型計(jì)算機(jī)控制動(dòng)物實(shí)驗(yàn)跑臺(tái)（安徽正華生物儀器設(shè)備 有限公司）。
[0015] ③實(shí)驗(yàn)試劑 0. 9%氯化鈉注射液(規(guī)格為500ml :4. 5g，辰欣藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)為 1308270724)，10%水合氯醛溶液(規(guī)格為100mL/瓶，蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院，批號(hào)為130815)， 肝素鈉(規(guī)格為2ml :12500單位，南京新百藥業(yè)有限公司，批號(hào)為130618)，甲醛溶液(分析 純，規(guī)格為500ml/瓶，華北地區(qū)特種化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心，批號(hào)121109)。
[0016] ⑵實(shí)驗(yàn)方法 ①缺氧敏感型大鼠的篩選 在高原低壓低氧模擬艙中模擬海拔3500米，將50只大鼠（Wistar及SD)進(jìn)行跑臺(tái)實(shí) 驗(yàn)，速度15m/min，坡度15°C，測(cè)試大鼠的耐力情況，以大鼠在跑臺(tái)上的運(yùn)動(dòng)時(shí)間作為耐力 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，運(yùn)動(dòng)時(shí)間偏長(zhǎng)的20只大鼠作為耐受大鼠，運(yùn)動(dòng)時(shí)間處于中間段的10只大鼠作為 不敏感型大鼠，運(yùn)動(dòng)時(shí)間偏短的20只大鼠作為敏感型大鼠，耐受型和敏感型大鼠進(jìn)行下一 步實(shí)驗(yàn)。
[0017] ②實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組 將20只耐受型大鼠，按隨機(jī)挑出10只為正常對(duì)照組(蘭州，海拔：1500m，大氣壓 85. 3KPa，北煒36° V 15"，東經(jīng)103° 47' 11"，溫度20°C，相對(duì)濕度48%，以下簡(jiǎn)稱"正 常組")，將20只敏感型大鼠，按隨機(jī)挑出10只為缺氧模型組(海拔：4300m，大氣壓60. 2KPa， 北煒35° 6' 57.3"，東經(jīng)98° 5廣57.1"，溫度16°C，相對(duì)濕度28%。以下簡(jiǎn)稱"模型 組")。
[0018] ③急進(jìn)高原實(shí)地實(shí)驗(yàn)大鼠缺氧條件的建立 實(shí)驗(yàn)用大鼠飼養(yǎng)于平原(第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院動(dòng)物房)。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，正常組大鼠放 置于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室中，模型組大鼠經(jīng)上海虹橋機(jī)場(chǎng)航空運(yùn)輸急進(jìn)至蘭州中川機(jī)場(chǎng)后，立即改 用恒溫箱式貨車轉(zhuǎn)運(yùn)至青海省瑪多縣花石峽鎮(zhèn)(實(shí)地海