紫萼玉簪花總皂苷的制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域；具體涉及紫萼玉簪花總皂苷的制備新方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 紫萼玉簪（Hosta ventricosa Stearn)為百合科玉簪屬多年生草本植物。《全國(guó) 中藥匯編》記載紫玉簪具有散瘀止痛、解毒功效，可治跌打損傷、胃痛、咽喉腫痛等疾病?；?學(xué)成分主要是留體皂苷、黃酮類(lèi)（山萘酚苷）、苯丙素類(lèi)（7-羥基香豆素）等。我們前期研 宄發(fā)現(xiàn)紫萼玉簪花具有抗腫瘤作用。經(jīng)過(guò)MTT法跟蹤篩選發(fā)現(xiàn)，總留體皂苷是紫萼玉簪抗 腫瘤的活性部位，且增殖抑制作用顯著；同時(shí)發(fā)現(xiàn)其具有良好的抗氧化作用，是一種非常具 有開(kāi)發(fā)前景的腫瘤預(yù)防和治療藥物，同時(shí)也可作為保健品開(kāi)發(fā)應(yīng)用。但目前紫萼玉簪總甾 體皂苷的制備方法皂苷得率和純度都很低，制約了其深度開(kāi)發(fā)和應(yīng)用。本發(fā)明主要是建立 了紫萼玉簪總留體皂苷的高效、高純度、低成本的制備工藝，為后續(xù)藥品和保健品的研發(fā)奠 定基礎(chǔ)。
[0003] 皂苷的提取方法有許多種，常用的有浸漬法、滲濾法、回流法、超聲提取法等。浸漬 法、滲濾法操作簡(jiǎn)單，成本低廉，但耗時(shí)長(zhǎng)。回流法提取過(guò)程中皂苷類(lèi)成分長(zhǎng)期受熱，容易破 壞皂苷結(jié)構(gòu)。超聲法具有提取率高，加快細(xì)胞內(nèi)有效成分的溶出，縮短提取時(shí)間，溫度低的 特點(diǎn)，但限于提取器的容積不適合工業(yè)化大生產(chǎn)。文獻(xiàn)報(bào)道采用超聲提取，硅膠柱色譜結(jié)合 DlOl大孔樹(shù)脂純化紫萼玉簪花總皂苷，提取方法僅限于實(shí)驗(yàn)室研宄，純化過(guò)程繁瑣，總皂苷 純度不高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明要解決現(xiàn)有提取紫萼玉簪總皂苷方法存在得率較少且皂苷的純度不高的 技術(shù)問(wèn)題。
[0005] 本發(fā)明的提供了一種紫萼玉簪花總皂苷的制備方法。
[0006] 本發(fā)明還提供了紫萼玉簪花總皂苷的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明紫萼玉簪花總皂苷提取方法高效、省時(shí)、節(jié)能、經(jīng)濟(jì)，采用AB8大孔樹(shù)脂進(jìn) 行純化，獲得精制總皂苷。采用MTT法，選擇人乳腺癌細(xì)胞MCF-7,人肝癌細(xì)胞H印G2、人胃 癌細(xì)胞SGC-7901和人肺癌細(xì)胞A549四種腫瘤細(xì)胞進(jìn)行體外活性篩選，從而進(jìn)行藥效學(xué)評(píng) 價(jià)。采用紫外分光光度法，評(píng)價(jià)紫萼玉簪花總皂苷對(duì)羥基自由基體系、DPPH自由基體系的 體外抗氧化活性。
[0008] 本發(fā)明中紫萼玉簪花總皂苷的制備方法是按下述步驟進(jìn)行的：
[0009] 步驟一、取新鮮紫萼玉簪花，清洗后至于磨漿機(jī)中，按紫萼玉簪花與乙醇質(zhì)量比為 1:10~15配比加入體積分?jǐn)?shù)大于等于85%的乙醇，升溫至50°C研磨IOmin~15min，然后 過(guò)濾或者離心，提取3次，合并乙醇提取液，濃縮得到浸膏。浸膏用熱水分散成真溶液后用 1~3倍的水飽和正丁醇萃取5~8次，合并正丁醇萃取液，濃縮得到正丁醇萃取物。
[0010] 步驟二、AB8大孔樹(shù)脂進(jìn)行預(yù)處理，然后裝入樹(shù)脂柱，步驟一得到的正丁醇萃取物 用熱水分散成真溶液后上樣，先用蒸餾水洗脫至Molish反應(yīng)呈陰性，再用體積分?jǐn)?shù)為30% 乙醇洗脫除雜；然后用體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇溶液作為洗脫液進(jìn)行洗脫處理，洗脫液的用 量為6~8倍樹(shù)脂柱體積，洗脫流速控制在2BV/h，收集乙醇洗脫液后回收溶劑，蒸干，即得 到紫萼玉簪花總皂苷。
[0011] 本發(fā)明采用熱磨，工藝簡(jiǎn)單，熱磨加快了纖維的斷裂，而且原料研磨的更加細(xì)小， 有利于有效成分的溶出。
[0012] 本發(fā)明方法獲得紫萼玉簪花總皂苷的得率在5. 0%以上。
[0013] 本發(fā)明方法獲得紫萼玉簪花的總皂苷純度高，在60%以上。
[0014] 采用MTT法實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示紫萼玉簪花總皂苷進(jìn)對(duì)以人乳腺癌細(xì)胞MCF-7,人肝癌 細(xì)胞H印G2、人胃癌細(xì)胞SGC-7901和人肺癌細(xì)胞A549有較強(qiáng)的增殖抑制作用，IC5tl分別為 26. 47、21. 94、20. 54和22. 95 μ g/L，紫萼玉簪花總皂苷具有抗腫瘤活性。
[0015] 采用紫外分光光度法，通過(guò)與Vc對(duì)比，評(píng)價(jià)紫萼玉簪花總皂苷對(duì)羥基自由基體系 和DPPH自由基體系的體外抗氧化活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，紫萼玉簪花總皂苷具有清除羥基自 由基和DPPH自由基的能力，且清除能力與樣液濃度呈量效關(guān)系，其IC5tl分別為4. 67mg/mL， 0. 09mg/mL?？寡趸饔门c紫萼玉簪花總皂苷含量呈正相關(guān)，紫萼玉簪花總皂苷具有抗氧化 活性。
[0016] 本發(fā)明的方法簡(jiǎn)單，操作方便。
[0017] 本發(fā)明紫玉簪花的總皂苷可以制成片劑、沖劑、膠囊劑等口服制劑用于癌癥治療。 此外，作為天然來(lái)源的抗氧化劑也可用于保健食品和化妝品。
【具體實(shí)施方式】
【具體實(shí)施方式】 [0018] 一：本實(shí)施方式中紫萼玉簪花總皂苷的制備方法是按下述步驟進(jìn)行 的：
[0019] 步驟一、取新鮮紫萼玉簪花，清洗后至于磨漿機(jī)中，按紫萼玉簪花與乙醇質(zhì)量比為 1:10~15配比加入體積分?jǐn)?shù)大于等于85%的乙醇，升溫至50°C研磨IOmin~15min，然后 過(guò)濾或者離心，提取3次，合并乙醇提取液，濃縮得到浸膏。浸膏用熱水分散成真溶液后用 1~3倍的水飽和正丁醇萃取5~8次，合并正丁醇萃取液，濃縮得到正丁醇萃取物。
[0020] 步驟二、對(duì)AB8大孔樹(shù)脂進(jìn)行預(yù)處理，然后裝入樹(shù)脂柱，步驟一得到的正丁醇萃取 物用熱水分散成真溶液后上樣，先用蒸餾水洗脫至Molish反應(yīng)呈陰性，再用體積分?jǐn)?shù)為 30 %乙醇洗脫除雜；然后用體積分?jǐn)?shù)為70 %的乙醇溶液作為洗脫液進(jìn)行洗脫處理，洗脫液 的用量為6~8倍樹(shù)脂柱體積，洗脫流速控制在2BV/h，收集乙醇洗脫液后回收溶劑，蒸干， 即得到紫萼玉簪花總皂苷。
[0021] 對(duì)AB8大孔樹(shù)脂進(jìn)行預(yù)處理（取大孔樹(shù)脂適量，加入5倍量乙醇浸泡24h，充分溶 脹。裝柱后用蒸餾水沖洗至無(wú)白色渾濁現(xiàn)象為止。5%HCL沖至流出液PH為3,靜置2h，蒸 餾水洗至中性，再用5% NaOH沖至流出液PH為9,靜置2h，蒸餾水洗至中性，備用。）
[0022] 采用下述實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證發(fā)明效果
[0023] 對(duì)比例1 :取30g新鮮紫萼玉簪花，干燥后，粉碎，加入乙醇300mL放入50°C體積分 數(shù)等于80%的乙醇中浸提50min，過(guò)濾，濃縮乙醇，得到浸膏。浸膏用熱水分散成真溶液后 用1~3倍的水飽和正丁醇萃取8次，合并正丁醇萃取液，濃縮得到正丁醇萃取物。
[0024] 對(duì)比例2 :取30g新鮮紫萼玉簪花，干燥后，粉碎，加入乙醇300mL放入50°C體積分 數(shù)等于80 %的乙醇超聲提取50min，過(guò)濾，濃縮乙醇，得到浸膏。浸膏用熱水分散成真溶液 后用1~3倍的水飽和正丁醇萃取8次，合并正丁醇萃取液，濃縮得到正丁醇萃取物。
[0025] 表1不同提取方法對(duì)正丁醇萃取物得率和皂苷純度的影響
[0026]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 紫玉簪花總皂苷的制備方法，其特征在于紫玉簪花總皂苷的制備方法是按下述步驟 進(jìn)tx的： 步驟一、取新鮮紫玉簪花，清洗后至于磨漿機(jī)中，按紫玉簪花與乙醇質(zhì)量比為1:5~10 配比加入體積分?jǐn)?shù)大于等于85%的乙醇，升溫至50°C研磨IOmin~15min，然后過(guò)濾或者離 心，提取3次，合并乙醇提取液，揮去乙醇，濃縮，得到浸膏； 步驟二、AB8大孔樹(shù)脂進(jìn)行預(yù)處理，然后裝入樹(shù)脂柱，步驟一得到的乙醇浸膏用熱水分 散成真溶液后上樣，先用蒸餾水洗脫至Molish反應(yīng)呈陰性，再用體積分?jǐn)?shù)為20%乙醇洗脫 除雜；然后用體積分?jǐn)?shù)為50%~70%的乙醇溶液作為洗脫液進(jìn)行洗脫處理，洗脫液的用量 為6倍樹(shù)脂柱體積，洗脫流速控制在2BV/h，收集乙醇洗脫液后回收溶劑，蒸干，即得到紫玉 簪花總皂苷。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫玉簪花總皂苷的制備方法，其特征在于步驟二中熱水的溫 度為（70~80) °C。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫玉簪花總皂苷的制備方法，其特征在于用HPD826大孔樹(shù)脂 或NKA-9大孔樹(shù)脂替換步驟二所述的AB8大孔樹(shù)脂。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫玉簪花總皂苷的制備方法，其特征在于步驟二中用體積分 數(shù)為70 %的乙醇溶液作為洗脫液。
5. 紫玉簪花總皂苷在制備抗腫瘤藥物及作為天然來(lái)源的抗氧化劑在保健食品和化妝 品中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了紫玉簪花總皂苷的制備方法和應(yīng)用，本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明要解決現(xiàn)有提取紫玉簪總皂苷方法存在得量較少且皂苷的純度不高的技術(shù)問(wèn)題。本發(fā)明的方法如下：一、取新鮮紫玉簪花，清洗后至于磨漿機(jī)中，加入乙醇，升溫至50℃研磨，再過(guò)濾或者離心，揮去乙醇，濃縮，得到浸膏；二、對(duì)AB8大孔樹(shù)脂預(yù)處理，裝入樹(shù)脂柱，上樣，先用蒸餾水洗脫至Molish反應(yīng)呈陰性，再用20％乙醇洗脫除雜，用50％～70％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液后回收溶劑，蒸干。本發(fā)明中紫玉簪花總皂苷在制備抗腫瘤藥物及作為天然來(lái)源的抗氧化劑在保健食品和化妝品中的應(yīng)用。本發(fā)明紫玉簪花的總皂苷純度高，在60％以上。
【IPC分類(lèi)】A61P35-00, A61K36-896, A61K8-97, A23L1-30, A61Q19-08, A61P39-06
【公開(kāi)號(hào)】CN104857245
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510296765
【發(fā)明人】鄒翔, 曲中原
【申請(qǐng)人】哈爾濱商業(yè)大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年8月26日
【申請(qǐng)日】2015年6月3日