一種長效促排卵注射液的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及動物生殖領(lǐng)域，尤其涉及一種長效促排卵注射液。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前，畜牧業(yè)已逐步成為我國相對獨(dú)立的產(chǎn)業(yè)和農(nóng)村經(jīng)濟(jì)的支柱產(chǎn)業(yè)。在畜牧業(yè) 發(fā)展中乳業(yè)和肉業(yè)發(fā)展較為迅速，肉和奶也正在成為我國城市居民每天消費(fèi)的生活必需 品。但是，目前乳業(yè)和肉業(yè)的發(fā)展規(guī)模和水平遠(yuǎn)不能滿足人民生活水平以及現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展 的需要。借助胚胎生物技術(shù)能充分挖掘優(yōu)良母畜的繁殖潛力，快速實現(xiàn)短期快速擴(kuò)繁良種 群。其中，超數(shù)排卵是發(fā)揮這種擴(kuò)繁作用的重要技術(shù)環(huán)節(jié)。
[0003] 超排激素是影響超排效果的主要因素之一。通常使用的超數(shù)排卵藥物有促卵泡素 (FSH)、孕馬血清促性腺激素（PMSG)。應(yīng)用FSH多次超排（FSH作用效果穩(wěn)定）處理后卵巢 機(jī)能恢復(fù)較快，排卵數(shù)較高。但FSH半衰期短，需分四天注射8次，比較麻煩而且費(fèi)用高，在 注射劑量和時間上易引起誤差。用PMSG進(jìn)行超數(shù)排卵，只需肌肉注射一次，對供體刺激小， 費(fèi)用低廉，使用方便。在發(fā)情期第13d注射PMSG，能得到一定數(shù)量的卵母細(xì)胞，但PMSG半衰 期較長，常使未排卵的大卵泡殘留于卵巢而分泌雌激素，從而影響回收胚胎的質(zhì)量，延長卵 巢恢復(fù)和重復(fù)超排間隔。用FSH在供體獲得可用卵數(shù)和超排效果穩(wěn)定性上，顯著高于PMSG 超排藥品。并且FSH超排供體不會有卵巢囊腫和持續(xù)發(fā)情，所以使用FSH優(yōu)于PMSG，但由 于FSH的半衰期短，所以要多次注射，處理程序繁瑣。同時激素質(zhì)量與可用胚胎數(shù)有密切關(guān) 系，不同來源的FSH制劑超數(shù)排卵的效果也大不相同。
[0004]FSH制劑也被廣泛用于母畜繁殖障礙的治療，是治療卵巢靜止、卵巢囊腫的繁殖疾 病首選的藥品，對提高養(yǎng)殖企業(yè)母畜的繁殖力有重要作用。
[0005] 但是國內(nèi)獸用的FSH制劑存在純度不高，生物活性低，半衰期較短的問題。由于在 體內(nèi)代謝和消除迅速，在實際中需要多次連續(xù)注射，才能維持FSH血藥濃度在卵巢刺激的 閾值水平以上。在生產(chǎn)實踐中大大增加了工作時間和成本，反復(fù)連續(xù)注射也會使動物產(chǎn)生 應(yīng)激反應(yīng)。國際上也有人嘗試使用重組FSH制劑，實驗結(jié)果表明使用重組FSH制劑并沒有 解決天然FSH制劑在動物體內(nèi)半衰期短和不穩(wěn)定性的問題。繼重組FSH制劑后，2010年美 國推出的第一個長效FSH(即FSH-CTP)，該產(chǎn)品在保持天然FSH制劑活性的情況下，半衰期 得到一定程度的延長，并且更加穩(wěn)定。對于長效FSH，國內(nèi)外也做了大量的實驗研究，均證明 長效FSH半衰期和生物活性明顯增強(qiáng)，在實際生產(chǎn)實踐中有良好的應(yīng)用效果，但由于其成 本較高未能在動物的超數(shù)排卵上得到應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種長效促排卵注射液，該長效促排卵注射液包含卵泡刺 激素融合蛋白及醫(yī)學(xué)上可接受的載體；其中卵泡刺激素融合蛋白的含量為10-600Ug/mL。
[0007] 該長效促排卵注射液的主要活性成分為卵泡刺激素融合蛋白，其含量為 10-600iig/mL，優(yōu)選為 50-400iig/mL，更優(yōu)選為 200iig/mL。
[0008] 卵泡刺激素融合蛋白（FSH融合蛋白）應(yīng)用的是專利申請（CN103509121A)中公 開的FSH融合蛋白，包括同二聚體融合蛋白和異二聚體融合蛋白。
[0009] 本發(fā)明的一種長效促排卵注射液，其包含卵泡刺激素融合蛋白、甘露醇、L-甲硫氨 酸、吐溫80和L-組氨酸；
[0010] 其中甘露醇含量為10-70mg/mL，優(yōu)選為25-60mg/mL;L-甲硫氨酸含量為 0? 02-2mg/mL，優(yōu)選為 0? 1-lmg/mL;吐溫 80 含量為 0? 01-lmg/mL，優(yōu)選為 0? 05-0. 5mg/mL; L_組氨酸含量為2-4mg/mL，優(yōu)選為2. 5-3. 5mg/mL;
[0011] 所述的長效促排卵注射液，其中卵泡刺激素融合蛋白的含量為200iig/mL，甘露醇 含量為10-70mg/mL;L-甲硫氨酸含量為0? 02-2mg/mL;吐溫80含量為0? 01-lmg/mL;L-組 氨酸含量為2-4mg/mL;余量為水。
[0012] 本發(fā)明所述的長效促排卵注射液，其PH值為5. 5-8. 0,優(yōu)選為6. 5-7. 0。
[0013] 本發(fā)明的長效促排卵注射液的制備方法為：將卵泡刺激素融合蛋白從-80°C冰箱 取出，在2?8°C冷房水浴化凍24小時，加入甘露醇、L-甲硫氨酸、吐溫80、L-組氨酸，然 后用注射用水稀釋，再用檸檬酸調(diào)節(jié)溶液的PH值為5. 5-8. 0 (優(yōu)選為6. 5-7. 0)，磁力攪拌 10-15分鐘，充分混勻，用PES材質(zhì)0. 22ym過濾器過濾，得到長效促排卵注射液。
[0014] 本發(fā)明的長效促排卵注射液可以用于動物的生殖領(lǐng)域，包括促排卵，卵巢靜止、持 久黃體、卵泡發(fā)育停滯等的預(yù)防和治療。
[0015] 本發(fā)明所述的長效促排卵注射液進(jìn)行5次反復(fù)凍融的穩(wěn)定性研究，經(jīng)SE-HPLC(分 子排阻色譜法）純度和生物活性的檢測，表明SE-HPLC純度和生物活性均符合標(biāo)準(zhǔn)。本發(fā)明 所述的長效促排卵注射液對奶牛有明顯的超排作用，獲得的可用胚胎數(shù)均超過了 6. 5枚。 [0016] 本發(fā)明所述的長效促排卵注射液是通過FSH融合蛋白特殊的分子設(shè)計，在基本保 留FSH的生物學(xué)活性的基礎(chǔ)上，顯著延長其在動物體內(nèi)的半衰期，避免了由于藥物反復(fù)注 射引起的副作用，實現(xiàn)真正的"長效"，能減少畜牧業(yè)生產(chǎn)中的工作量，降低生產(chǎn)成本，同時 也能減輕動物的應(yīng)激反應(yīng)，為日后在動物繁殖領(lǐng)域的發(fā)展奠定良好的基礎(chǔ)。
[0017] 本發(fā)明研發(fā)的長效促排卵注射液不僅可以填補(bǔ)國內(nèi)外獸用長效FSH市場的空白， 對我國動物繁殖技術(shù)的發(fā)展，尤其是對推動家畜胚胎移植技術(shù)的發(fā)展及產(chǎn)業(yè)化進(jìn)程有重要 意義。
【具體實施方式】
[0018] 通過如下實施例來對本發(fā)明做進(jìn)一步說明，其中實施例1-5為長效促排卵注射液 的實施方案。
[0019] 實施例1-9
[0020] 具體制備方法為：將卵泡刺激素融合蛋白異二聚體從_80°C冰箱取出，在2?8°C 冷房水浴化凍24小時，加入甘露醇、L-甲硫氨酸、吐溫80、L_組氨酸，然后用注射用水稀釋 至1L，再用檸檬酸調(diào)節(jié)溶液的PH值為5. 5-8. 0,磁力攪拌10-15分鐘，充分混勻，用PES材 質(zhì)0. 22ym過濾器過濾，最后分裝成2000瓶。
[0021] 具體的各組分的含量見表1。
[0022] 表1實施例1-5的注射液組分及含量
[0023]
【主權(quán)項】
1. 一種長效促排卵注射液，其特征在于該長效促排卵注射液包含卵泡刺激素融合蛋白 及醫(yī)學(xué)上可接受的載體組成；其中卵泡刺激素融合蛋白的含量為10-600 y g/mL。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的長效促排卵注射液，其特征在于其中卵泡刺激素融合蛋白的 含量為 50-400 ii g/mL。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的長效促排卵注射液，其特征在于其中卵泡刺激素融合蛋白的 含量為 200ii g/mL。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的長效促排卵注射液，其特征在于該長效促排卵注射 液包含卵泡刺激素融合蛋白、甘露醇、L-甲硫氨酸、吐溫80和L-組氨酸。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的長效促排卵注射液，其特征在于其中甘露醇含量為10-70mg/ mL;L-甲硫氨酸含量為0.02-2mg/mL;吐溫80含量為0.01-lmg/mL;L-組氨酸含量為 2_4mg/mL〇
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的長效促排卵注射液，其特征在于其中甘露醇含量為25-60mg/ mL;L-甲硫氨酸含量為0. 1-lmg/mL;吐溫80含量為0.05-0. 5mg/mL;L-組氨酸含量為 2. 5-3. 5mg/mL〇
7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的長效促排卵注射液，其特征在于其中卵泡刺激素融合蛋白的 含量為200 ii g/mL，甘露醇含量為10-70mg/mL ;L-甲硫氨酸含量為0. 02-2mg/mL ;吐溫80含 量為0. 01-lmg/mL ;L-組氨酸含量為2-4mg/mL ;余量為水。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的長效促排卵注射液，其特征在于其PH值為5. 5-8. 0。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的長效促排卵注射液，其特征在于其PH值為6. 5-7. 0。
10. 權(quán)利要求1-9任一項所述長效促排卵注射液在動物生殖領(lǐng)域的應(yīng)用。
11. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其特征在于該長效促排卵注射液用于促排卵，卵巢 靜止、持久黃體、卵泡發(fā)育停滯的預(yù)防和治療。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種長效促排卵注射液，該長效促排卵注射液包含卵泡刺激素融合蛋白及醫(yī)學(xué)上可接受的載體；其中卵泡刺激素融合蛋白的含量為10-600μg/mL。本發(fā)明的長效促排卵注射液具有明顯的超排作用。
【IPC分類】A61K9-08, A61P15-08, A61K38-24
【公開號】CN104524553
【申請?zhí)枴緾N201410768635
【發(fā)明人】薛傳校, 楊彥玲, 薛峰, 曹羽然, 李蔚
【申請人】薛傳校, 楊彥玲, 薛峰
【公開日】2015年4月22日
【申請日】2014年12月12日
【公告號】CN104524553B