細胞-WPMY-1及 該攝護腺癌細胞株-LNCaP的半抑制劑量（IC5(I值）分別為11. 63yg/mL及13. 19yg/mL。
[0060] 此外，為證實本發(fā)明的山蘇萃取物可以有效改善小鼠攝護腺肥大癥狀，遂進行以 下試驗，惟其應用范疇并不以此為限：
[0061] 本試驗選用C57BL/6Jnarl雄性小鼠（購自國家動物中心），該小鼠為飼養(yǎng)于中研 院農業(yè)生物科技研宄中心SPF動物房，飼養(yǎng)環(huán)境為22°C，光照時間與黑暗時間各為12小時。
[0062] 本試驗是以皮下注射脫氧腎上腺素（phenylephrine，簡稱PE，施用量為每單位體 重公斤施予15毫克脫氧腎上腺素），以活化a1-腎上腺素受體，進而誘導小鼠產生攝護腺 肥大現(xiàn)象（其誘導期間為每周注射五次脫氧腎上腺素，且連續(xù)注射五周）；并且同時口服 喂食不同劑量的本發(fā)明的山蘇萃取物，觀察受試小鼠的攝護腺指數(shù)（prostateindex，簡稱 PI，即攝護腺內側部位濕重/小鼠體重）、小鼠排尿狀況及飲水狀況，分別紀錄于圖14a、圖 14b及圖14c;并且于犧牲小鼠后，取其攝護腺進行切片染色，其結果如圖15所示。
[0063] 請參照圖14a所示，相較于控制組，施予脫氧腎上腺素的小鼠（PE組）的攝護腺指 數(shù)顯著上升，表示該小鼠產生攝護腺內側部位腫大的現(xiàn)象，該小鼠同時有排尿減少，以及飲 水量減少等現(xiàn)象；而同時喂食山蘇酒萃物（ANE組，未經管柱層析步驟，劑量為每天每單位 體重公斤小鼠喂食100毫克）或本發(fā)明的山蘇萃取物（Lo組，劑量為每天每單位體重公斤 小鼠喂食10毫克；或Hi組，每天每單位體重公斤小鼠喂食50毫克）均可以有效減緩小鼠 攝護腺指數(shù)的變化，也可以緩解小鼠排尿減少及飲水量增加的問題（P< 0.01，請參照圖 14b及圖14c)，其中，以每天每單位體重公斤小鼠喂食50毫克的本發(fā)明山蘇萃取物（Hi組） 的效果最佳。是以，本發(fā)明的山蘇萃取物可以有效緩解生物體的攝護腺肥大現(xiàn)象。
[0064] 接著，將上述五組小鼠（控制組、PE組、ANE組、Lo組及Hi組）犧牲后，取攝護腺 進行切片，并進行蘇木精-伊紅染色（Hematoxylin-eosinstaining，簡稱H&Estaining)， 相較于控制組，施予脫氧腎上腺素的小鼠（PE組）可以觀察到上皮細胞增生現(xiàn)象，使PE組 小鼠泌尿道腔室面積顯著減小，表示PE組小鼠的分泌腺體受到壓縮（如圖15的ii所示）， 而同時喂食山蘇酒萃物（ANE組）或本發(fā)明的山蘇萃取物（Lo組或Hi組）均可以有效減緩 上述上皮細胞增生現(xiàn)象（如圖15的iii、iv及v所示）。
[0065] 此外，請參照圖15的vii至ix所示，本試驗更以梅生氏三色染色法（Masson's trichromestaining)，觀察各組切片的膠原蛋白的分布狀況，控制組的膠原蛋白分布范圍 較廣（如圖15的vii所示，黃色箭頭所指藍色區(qū)域即為膠原蛋白），更可以于攝護腺基質觀 察到網(wǎng)狀纖維的分布（如橘色箭頭所指區(qū)域），而PE組小鼠的切片則較難觀察到此一現(xiàn)象 (如圖15的viii所示），而同時喂食本發(fā)明的山蘇萃取物（Hi組）則可以有效回復上述現(xiàn) 象（如圖15的ix所示）。
[0066] 是以，本發(fā)明的山蘇萃取物可以有效舒緩脫氧腎上腺素造成的攝護腺肥大現(xiàn)象， 增加小鼠排尿量，并且也可以減緩攝護腺肥大造成的病理特征，可以作為改善男性攝護腺 問題的活性物質，應用于制備用以治療攝護腺疾病的藥物組成分或保健食品。
[0067] 本發(fā)明山蘇萃取物的實際應用如下方實施例所示，但其應用并不以此例為限：
[0068] 本實施例按前述的萃取方法，依序操作該采選步驟S3、溶劑萃取步驟S1及管柱層 析步驟S2,以制得該山蘇萃取物。請參照第1表所示，該山蘇萃取物提供給88名不同年齡 層的攝護腺疾病患者服用，平均二至四星期內可改善患者的排尿狀況，同時未引發(fā)任何副 作用，有助于攝護腺肥大、攝護腺炎或攝護腺癌的治療。
[0069] 攝護腺肥大的病征之一就是頻尿與夜尿，本發(fā)明的山蘇萃取物可將頻尿與夜尿的 頻率降至與正常人無異。將前述88名患者試驗前后的情況，依據(jù)國際攝護腺癥狀評分表 (InternationalProstateSymptomScore，I_PSS)進行分析，在 2 至 4周內進步分數(shù)平均 至少達約20至30分，遠高于市售現(xiàn)用營養(yǎng)補充產品的平均2-3分，以及藥物治療的平均14 分。
[0070] 第1表：88名攝護腺疾病患的使用結果
[0071]
【主權項】
1. 一種山蘇萃取物，包含：焦脫鎂葉綠酸-a甲酯；脫鎂葉綠酸-a甲酯；1-亞麻油 酸-3-亞麻酸-甘油酯；1-亞麻酸-2, 3-雙棕梠酸-甘油酯；以及1，3-雙棕梠酸-甘油 酯。
2. 如權利要求1所述的山蘇萃取物，其特征在于，該山蘇萃取物通過一包含下列步驟 的方法所制得： 一個溶劑萃取步驟，即使用一個萃取溶劑，對一個山蘇樣品進行萃取處理，使該山蘇樣 品與該萃取溶劑的重量體積比（w/v，g/ml)為50至60 mg/ml，并回收得一個萃取物；以及 一個管柱層析步驟，利用乙醇和水混合成線性梯度作為流動相，進行該萃取物的層析 分離處理，其中乙醇及水的混合是由70%乙醇提升至100%乙醇（V/V)，以獲得數(shù)個區(qū)分物， 依沖提順序而編號為區(qū)段a至i，擷選該區(qū)段c經減壓濃縮及冷凍干燥后，即得該山蘇萃取 物。
3. 如權利要求2所述的山蘇萃取物，其特征在于，該管柱層析步驟是擷選該區(qū)段b經減 壓濃縮及冷凍干燥后，即得該山蘇萃取物。
4. 如權利要求2所述的山蘇萃取物，其特征在于，該管柱層析步驟是擷選該區(qū)段d經減 壓濃縮及冷凍干燥后，即得該山蘇萃取物。
5. 如權利要求2所述的山蘇萃取物，其特征在于，該溶劑萃取步驟的萃取溶劑是95%的 乙醇。
6. 如權利要求2所述的山蘇萃取物，其特征在于，該溶劑萃取步驟的萃取溶劑是水。
7. 如權利要求2所述的山蘇萃取物，其特征在于，該方法更包含一采選步驟，是選整株 山蘇花含根為該山蘇樣品。
8. 如權利要求7所述的山蘇萃取物，其特征在于，該采選步驟，是選用山蘇花 ifeh'flo)的整株植物含根為該山蘇樣品。
9. 如權利要求7所述的山蘇萃取物，其特征在于，該采選步驟，是選用臺灣山蘇花 Zi/?/?)的整株植物含根為該山蘇樣品。
【專利摘要】一種山蘇萃取物，供制備改善攝護腺疾病的藥物或保健食品，包含焦脫鎂葉綠酸-a甲酯、脫鎂葉綠酸-a甲酯、1-亞麻油酸-3-亞麻酸-甘油酯、1-亞麻酸-2,3-雙棕梠酸-甘油酯，以及1,3-雙棕梠酸-甘油酯。該山蘇萃取物通過一包含下列步驟的方法所制得：一溶劑萃取步驟，即使用一萃取溶劑，對一山蘇樣品進行萃取處理，使該山蘇樣品與該萃取溶劑的重量體積比(w/v,g/ml)為50至60mg/ml，并回收得一萃取物；以及一管柱層析步驟，利用水和乙醇作為流動相，進行該萃取物的層析分離處理，以獲得數(shù)個區(qū)分物，沖提先后而編號為區(qū)段a至區(qū)段i，擷選該區(qū)段b、c、d或其組合物經減壓濃縮及冷凍干燥后，即得該山蘇萃取物。
【IPC分類】A61P35-00, A61K36-11, A23L1-29, A61P5-28, A61P13-08
【公開號】CN104523766
【申請?zhí)枴緾N201410689932
【發(fā)明人】黃昆暄, 莊哲仁, 蕭培文, 蔡佳芮
【申請人】景鑫生物科技有限公司, 中央研究院
【公開日】2015年4月22日
【申請日】2013年6月27日
【公告號】US9056077, US20140142157, US20150190441