專利名稱：用于核磁共振診斷的血池劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及膽酸類化合物與具有螯合活性的分子的共軛物的金屬離子絡合物在稱為“磁共振成像”(M.R.I.)的已知診斷技術中作為造影劑，特別是作為血池劑(blood pool agent)的應用。
螯合劑和適當金屬形成的絡合物業(yè)已在下列診斷技術中用作造影劑X射線成像，核磁共振成像(M.R.I.)和閃爍成像(scintigraphy)。
特別是，利用磁共振成像(M.R.I.)的醫(yī)學診斷是一種在臨床實踐中被公認為非常有效的診斷技術(Stark，D.D.，Bradley，W.G.，Jr.，編輯″磁共振成像″The C.V.Mosby Company，St.Louis，Missouri(USA)，1988)，其主要采用順磁性藥物組合物，優(yōu)選含有二-三價金屬離子與聚氨基多元羧酸配體的螯合絡合物和/或其衍生物或類似物。
基本上由水質子的NMR信號獲得的成像是不同參數(shù)如質子密度和T1和T2弛豫時間之間的相互復合作用。通過給予顯著改變近水質子的共振特性的外源性化學物質可以使對比度增強。(參見Lauffer，R.B.化學評述(Chem.Rev.)1987，87，901)。
N.M.R.成像所采用的順磁造影劑起著改變存在于組織內的水質子的弛豫時間的作用，其中該造影劑被濃縮，因此它們可以提高不同組織之間或健康與病變組織之間的對比度。
因其高度通過偶極相互作用減少近水分子的質子的弛豫時間的能力，釓類順磁絡合物已經(jīng)成為研究、出版物和專利的目標。
其中一些在臨床中提供用作M.R.I.造影劑Gd-DTPA，釓與二亞乙基三胺五乙酸絡合的N-甲基葡糖胺鹽，MAGNEVIST；Gd-DOTA，釓與1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷1，4，7，10-四乙酸絡合的N-甲基葡糖胺鹽，DOTAREM；Gd-HPDO3A，釓與[10-(2-羥丙基)-1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷-1，4，7-三乙酸的絡合物，PROHANCE；Gd-DTPA-BMA，釓與二亞乙基三胺五乙酸雙(甲基酰胺)的絡合物，OMNISCAN；上述和市售的造影劑適合一般性應用。事實上，給藥后，在被排泄之前所述M.R.I.造影劑擴散到血液內和機體的不同部分的細胞外區(qū)域中。因此在這方面，它們類似于X射線醫(yī)學診斷中所用的碘代化合物。
目前，醫(yī)療業(yè)需要以特定器官為目標或用于血液系統(tǒng)成像的造影劑，這樣的造影劑是現(xiàn)有市售產(chǎn)品的方式所無法充分定義的。獲得后者的第一條途徑包括把造影劑和大分子如蛋白質共價連接，或使其位于穩(wěn)定分子聚集體如脂質體內成為球形，或仍然采用所謂的超順磁性微粒。
譬如，釓與二亞乙基三胺五乙酸的絡合物(Gd-DTPA)和人體白蛋白(HSA)、聚賴氨酸或葡聚糖相連(Oksendal A.N.等人，磁共振成像雜志(J.Magn.Reson.Imaging)，157，1993；Rocklage S.M.，“造影劑、磁共振成像”，Mosby Year Book，372-437，1992)為的是減少或甚至抑制由血液擴散到細胞外液，由此令試劑在血液系統(tǒng)中的保留更高。雖然可以獲得所需效果，但這種途徑存在不良副作用，因為難以排泄出該試劑。
一種不同的策略是利用用聚乙二醇類化合物或烴類涂層的超順磁性微粒，從而減少被內皮網(wǎng)狀組織或其他系統(tǒng)肝臟攝取(Tilcock C.，生物化學和生物物理學學報(Biochim.Biophys.Acta)，77，1993；Bogdanoy A.A.等人，放射學(Radiology)，701，1993)，由此延長所述試劑在血液中的持久性，但也會出現(xiàn)上述副作用，以及因生產(chǎn)成本高造成的問題。
因此，目前仍然無法滿足對具有低毒性和適當經(jīng)濟成本的有效血池劑的需求。
本發(fā)明涉及特別選擇的、已在國際專利申請WO-A-95/32741中公開的、由膽酸類化合物與螯合劑軛合制得的化合物作為血池劑的新用途，其能夠螯合順磁二-三價金屬，并且涉及新的化合物、其制備方法及其作為血池劑的應用。
所述化合物表現(xiàn)出良好的肝膽排泄作用(參見Anelli P.L.等人，放射學評述(Acta Radiologica)，38，125，1997)，這使它們有希望成為肝膽系統(tǒng)顯象的造影劑。
令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，特定種類的所述化合物可以在血管系統(tǒng)中保留足夠長的時間從而成為血管系統(tǒng)、特別是冠狀血管成像的造影劑。
在動物(如兔子、猴子)的體內試驗中進行時這種效果非常明顯。事實上，當繪制動物血液樣本的質子弛豫值(1/T1)時可以立刻顯示出在血管系統(tǒng)中的持久性，血樣是在給予造影劑后適當?shù)臅r間間隔采集。
由于Gd(III)絡合物是順磁性物質，血液中的高1/T1值就是高濃度的造影劑的證據(jù)。
根據(jù)Lauffer等人在放射學(Radiology)，529，1998中的文章可以很好地澄清普通細胞外造影劑和血池劑之間的區(qū)別，其中報導了血液中T1分布圖在造影劑給藥后是所逝時間的函數(shù)。
特別是，當以與合理安全指數(shù)相容的劑量對例如兔子給藥時，本發(fā)明的絡合物能夠在給藥后10分鐘改變弛豫速率(測量為Δ1/T1)使其在血液中高于5s-1，由此有希望用作血管系統(tǒng)成像的造影劑。
目前發(fā)現(xiàn)，此類效應不僅僅與膽酸類化合物的存在有關，而且取決于所述絡合物的化學結構。事實上，似乎螯合單位適宜通過膽酸類化合物的3、7或12位與甾族骨架相連。
實際中，已經(jīng)證實螯合單位和包含24位羧基的膽酸之間的任何連接鍵將生成絡合物，但該絡合物在血管系統(tǒng)中具有無法令人滿意的保留性。 因此，本發(fā)明的目的是通式(I)的化合物與選自Fe(2+)、Fe(3+)、Cu(2+)、Cr(3+)、Gd(3+)、Eu(3+)、Dy(3+)、Yb(3+)或Mn(2+)的二-三價金屬離子的絡合物作為血池劑的應用X-L-Y(I)其中X是聚氨基聚羧酸配體或其衍生物的基團，選自組成如下的基團乙二胺四乙酸(EDTA)、二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)、1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷-1，4，7，10-四乙酸(DOTA)、1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷-1，4，7-三乙酸(DO3A)、[10-(2-羥丙基)-1，4，7，10-四氮雜-環(huán)十二烷-1，4，7-三乙酸(HPDO3A)、4-羧基-5，8，11-三(羧甲基)-1-苯基-2-氧雜-5，8，11-三氮雜十三烷-13-酸(BOPTA)；Y是選自膽酸、鵝去氧膽酸、脫氧膽酸、熊去氧膽酸、石膽酸基團的膽酸衍生物， 且它們都在具有羥基的位置官能化為反應基團，并具有獨立于終產(chǎn)物的立體化學，所述衍生物也包括24位酸基與?；撬岷透拾彼岬能椇衔?；L是與X的任何位置以及Y的C-3、C-7、C-12位相連的鏈，X選擇性地含有一個由此轉化為酰氨基的羧基，并且具有下式(II) 其中m是1-10的整數(shù)，其中對于大于1的值，A可以具有不同的含義，A具有下式(III)， n和q可以是0或1，但是它們不能同時為0，p可以介于0至10，Z是氧原子或-NR基，其中R為氫原子，或(C1-C5)烷基，其未取代或被-COOH基取代。
特別優(yōu)選的化合物是其中間隔鏈L具有以下通式(IIIa)和(IIIb)的那些化合物。 還優(yōu)選其中Z是氧原子的結構且由此L經(jīng)3、7、12位存在的羥基形成獨立于終產(chǎn)物的立體化學。
特別優(yōu)選式(I)的化合物，其中基團X選自EDTA、DTPA、DOTA、DO3A、BOPTA；L選自(IIIa)、(IIIb)組成的基團；
Y優(yōu)選自膽酸、脫氧膽酸、鵝去氧膽酸、石膽酸的基團，其通過3位氨基與L相連，并且24位的酸基以其本身或以?；撬峄蚋拾彼嵫苌锎嬖?。
Y也可以被各種不同的官能化，譬如通過轉化使一個或多個羥基成為酮基。
上述特別優(yōu)選的與順磁性金屬離子的絡合物是與釓或與錳的絡合物。
優(yōu)選通式(IV)的化合物，其中通式(I)中的基團X是取代在中間鏈上的DTPA，并且其中R1是氫原子或-COOH基， Y選自膽酸、脫氧膽酸、鵝去氧膽酸、石膽酸基并且L具有式(III)的結構。
特別優(yōu)選通式(IVa)的化合物 其中R1是-COOH基并且Y具有上述通式(IV)定義的含義和L具有結構(IIIa)或(IIIb)。
本發(fā)明的另一個目的是下列屬于通式(IVa)類型的新化合物，及其制備方法；[3β(S)，5β]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代-丁基](羧甲基)氨基]膽烷-24-酸 [3β(S)，5β]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]膽烷-24-酸； [3β(S)，5β，7β]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7-羥基膽烷-24-酸； [3α(S)，5β]-3-[2[-[5-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]-氨基]-2-氧代乙氧基]膽烷-24-酸； [3β(S)，5β]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-氧代膽烷-24-酸； [3β(S)，5β，7α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7-羥基膽烷-24-酸； N2-雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]-N-[(3β，5β，-7α，12α)-7，12-二羥基-24-氧代-24-[(2-磺乙基)氨基]膽烷-3-基]-L-谷氨酰胺； N2-雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]-N-[(3β，5β)-24-氧代-24-[(2-磺乙基)氨基]膽烷-3-基]-L-谷氨酰胺； [3β(S)，5β，12α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羥基膽烷-24-酸； [3β(R)，5β，12α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]-乙基]氨基]-4-羧基-1-氧基丁基]氨基]-12-羥基膽烷-24-酸； [3β(RS)，5β，12α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羥基膽烷-24-酸； [3α(S)，5β，12α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]-乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羥基膽烷-24-酸； [3β(RS)，5β，7α，12α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)-氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸； [3α(S)，5β，7α，12α]-3-[[[[5-[雙[2-[雙(羧甲基)-氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]羰基]氧基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸； [3α(S)，5β]-3-[2-[[5-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]-2-氧代乙氧基]膽烷-24-酸 其他屬于此類的、其與釓的絡合物業(yè)已公開在專利申請WO-A-95/32741中的化合物為下列化合物[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7，12-二羥基-膽烷-24-酸； [3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[[5-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]-1，4-二氧代-丁基]氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸。 另外優(yōu)選通式(IVb)的化合物，其也是中間位取代的DTPA衍生物， 其中Y具有定義上式(IV)化合物的含義并且L具有結構(IIIa)。
本發(fā)明進一步涉及下列屬于通式(IVb)類的新化合物，及其制備方法(3β，5β，7α，12α)-3-[[[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]乙?；鵠氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸 (3β，5β)-3-[[[[[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]-氨基]乙?；鵠氨基]乙?；鵠氨基]膽烷-24-酸 其他屬于此類的、其與釓的絡合物業(yè)已公開在專利申請WO-A-95/32741中的化合物是下列化合物(3β，5β，7α，12α)-3-[[[[[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]乙?；鵠氨基]乙酰基]氨基]-7，12-二羥基-膽烷-24-酸； (3β，5β，7α，12α)-3-[[6-[[[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]乙?；鵠氨基]-1-氧代己基]氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸。 另外特別優(yōu)選通式(V)的化合物，其中在通式(I)中基團X為DTPA，Y具有上式化合物(IV)所定義的含義并且L具有式(IIIa)的結構。 其他屬于此類的、其與釓的絡合物業(yè)已公開在WO-A-95/32741中的化合物為下列化合物(3β，5β，7α，12α)-3-[[N-[N-[2-[[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]乙基]-N-(羧甲基)甘氨?；鵠甘氨?；鵠氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸； 18-[[(3β，5β，7α，12α)-23-羧基-7，12-羥基-24-降膽烷-3-基]氨基]-3，6，9-三(羧甲基)-11，18-二氧代-3，6，9，12-四氮雜十八烷酸。
另外優(yōu)選式(VI)的化合物，其中式(I)中基團X為DO3A，Y具有上式(IV)化合物定義的含義和L選自結構(IIIa)和(IIIb)。 在(VI)的化合物中，特別優(yōu)選10-[3-[[(3α，5β，7α，12β)-23-羧基-7，12-二羥基-24-降膽烷-3-基]氧基]-2-羥丙基]-1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷-1，4，7-三乙酸，其與釓的絡合物業(yè)已公開在專利申請WO-A-95/32741中。 類似地，優(yōu)選通式(VII)的化合物，其中在式(I)中基團X為EDTA，Y具有上式(IV)的化合物所定義的含義和L具有式(III)的結構。
特別優(yōu)選式(VII)的化合物與錳的絡合物。 在式(VII)的化合物中，特別優(yōu)選下列化合物[3α(S)，5β，12α]-3-[[[[5-[[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-5-羧戊基]氨基]羰基]氧基]-12-羥基膽烷-24-酸 [3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[[5-[[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-5-羧戊基]氨基]-1，4-二氧代丁基]氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸 [3α(S)，5β]-3-[2-[[5-[[2-[雙(羧甲基)氨基]-乙基](羧甲基)氨基]-5-羧戊基]氨基]-2-氧代乙氧基]膽烷-24-酸 [3β(S)，5β，12α]-3-[[4-[[2-[[雙(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羥基膽烷-24-酸 [3β(S)，5β]-3-[[4-[[2-[[雙(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-氧代膽烷-24-酸 通式(I)的化合物可以用會聚合成的方法制備，其中包括1)官能化配體的合成，即能夠與一個順磁金屬離子配位并通過適當官能團的方式與膽酸穩(wěn)定結合的配體的合成；2)官能化膽酸的合成；3)兩個不同共振物(synton)之間的偶合反應；4)任何保護基的裂解；5)順磁性金屬離子的絡合；在上文引用的專利申請WO-A-95/32741中詳細舉例說明。
某些制備本發(fā)明的配體的優(yōu)選方法包括在兩個共振物之間酰胺鍵的形成，其中之一是螯合體系的順磁離子的前體(共振物A)，另一個是含在最終絡合物中的膽酸基的前體。
下面所述的方法不應該被視為限定本發(fā)明化合物的合成。
酰胺鍵可以通過下列方式形成a)通過含有羧基官能的共振物A與含有伯或仲氨基官能的共振物B反應；b)通過含有伯或仲氨基官能的共振物A與含有羧基官能的共振物B反應；c)通過DTPA二酐(市售產(chǎn)品)與含有伯或仲氨基官能的共振物B反應。
適用于本發(fā)明的一些共振物A和B如下表所述。表
顯然，所用共振物在那些在酰胺鍵形成的條件下用產(chǎn)生寄生反應的基團適當保護。在兩個共振物之間的鍵形成之后，考慮采用一個或多個脫保護步驟來恢復原始基團。
另外，對于此類方法，可以通過多步驟反應、由膽酸衍生物起始引入螯合亞基，如同在試驗部分的實施例3中所述的化合物合成情況中，舉例說明下面的合成路線1。合成路線1 本發(fā)明還涉及新的方法，其在下面的合成路線2中具體說明合成路線2 其中R4是氨基保護基；R5是直鏈或支鏈C1-C10烷基或芳基，R2和R3獨立地是氫，直鏈或支鏈C1-C20烷基，其未取代或被芳基取代，或這兩個基團形成C3-C10環(huán)；該方法采用酰胺基轉移反應，并且能夠保持起始吡咯烷酮的氮原子的相鄰手性中心的立體化學和提供仲酰胺。基團R4和R5的聯(lián)合選擇在多種條件下進行的裂解中是至關重要的。R4的可行實例是芐氧羰基(Cbz)基和R5的可行實施例為甲基或叔丁基。
該方法通常適用于獲得谷氨酸γ-酰胺，并且它非常有效和適宜制備本發(fā)明的化合物，特別是具有如上定義基團Y的3-氨基衍生物的谷氨酸γ-酰胺。事實上，該方法獲得最終的化合物而避免在形成谷氨酸和相應胺之間的γ-酰胺鍵時使用昂貴的縮合劑。
這種全新合成方法的應用實例是[3β(S)，5β，12α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)-氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羥基膽烷-24-酸的合成，其常規(guī)合成在試驗部分的實施例4中描述，而另一種方法報導在實施例5中并且完整的合成路線如下面的合成路線3所示
類似地制備業(yè)已公開在專利申請WO-A-95/32741中的膽酸類衍生物，[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7，12-二羥基-膽烷-24-酸。
適合與通式(I)的螯合劑形成絡合物鹽的金屬離子是選自Fe(2+)、Fe(3+)、Cu(2+)、Cr(3+)、Gd(3+)、Eu(3+)、Dy(3+)、Yb(3+)或Mn(2+)元素的二價或三價離子。
由于本發(fā)明的新螯合絡合物的診斷用途，它們可以在利用磁共振方式的成像診斷技術中用作造影劑，特別是血池劑。
按慣例、根據(jù)一種方法進行絡合物的制備，其中氧化物或順磁性金屬的適當鹽溶解在水中或懸浮在水-醇溶液中，將其在攪拌條件下加入到螯合劑的水溶液或水-醇溶液中，并且如果必要，適度加熱或加熱至沸點直至反應完全。如果絡合物不溶于反應溶劑，可將其過濾。如果絡合物可溶，可以通過蒸除溶劑回收殘余物，例如通過噴霧干燥。
在所得絡合物仍然含有游離酸基的情況中，通過與在溶液中可以生成生理相容性陽離子的有機或無機堿反應轉化為中性鹽。
為了制備這些中性鹽，可以把足夠量的堿加入含有游離酸基的絡合物的水溶液或混懸液中至中性。所得溶液可以按照常規(guī)方法蒸發(fā)，或加入適宜的溶劑令絡合物鹽結晶。
適宜使本發(fā)明螯合絡合物成鹽的優(yōu)選無機陽離子特別包括堿金屬或堿土金屬離子，例如鉀、鈉、鈣、鎂及其混合物。特別優(yōu)選鈉離子。
適合上述目的的、從有機堿衍生的優(yōu)選陽離子特別包括伯、仲和叔胺類化合物的那些，例如乙醇胺、二乙醇胺、嗎啉、葡糖胺、N-甲基葡糖胺、N，N-二甲基葡糖胺，特別優(yōu)選N-甲基葡糖胺。
由氨基酸衍生的優(yōu)選陽離子包括，例如牛磺酸、甘氨酸、賴氨酸、精氨酸或鳥氨酸的那些。
另一個這種方法包括制備可注射制劑而無需分離絡合物鹽。在這樣的情況中，終溶液必須不含有游離金屬離子，它們對機體有毒。
這可以通過滴定，例如采用顯色指示劑(如二甲苯酚橙)檢測。也可進行絡合鹽的最終純化步驟。
在此類的方法中，螯合劑、所述鹽或金屬氧化物和任何成鹽堿在水中以化學計量比反應，反應完全后，濾除焦精并且將產(chǎn)物分散在適當容器內并且熱滅菌。
可注射藥物制劑一般通過把如上制得的活性成分和賦形劑溶解在水中制備，所用水具有藥理學觀點上適宜的純度，提供適合腸胃或腸胃外給藥的藥物制劑，活性成分的濃度為0.01-1.0摩爾。把所得造影劑適當滅菌。
根據(jù)診斷的要求，造影劑給藥劑量為0.01-0.3mmol/kg體重。
原則上，腸胃外給藥的劑量范圍是0.001-約1.0mmol/kg體重。腸胃外給藥的優(yōu)選劑量是0.01-約0.5mmol/kg體重。
腸胃給藥的劑量范圍一般為0.5-約10mmol/kg，優(yōu)選約1.0-約10mmol/kg體重。
本發(fā)明的新制劑表現(xiàn)出良好的耐受性；此外，其水溶性是另一個重要特征，這使它們特別適用于核磁共振。
本發(fā)明的診斷組合物可以按照慣例應用。所述組合物可以全身性和局部地給予患者、通常為溫血動物的通過磁共振顯影的器官或組織內。
分析方案和儀器可以參見著作如Stark，D.D.，Bradley，W.G.，磁共振成像，Mosby Year Book，St.Louis，Mo，1992。
所用試驗條件將在試驗部分中詳細說明。試驗部分實施例1和1-脫氧-1-(甲基氨基)-D-山梨醇(1∶3)成鹽的[3β(S)，5β]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]膽烷-24-酸的釓絡合物 A)[3β(S)，5β]-3-[[5-(1，1-二甲基乙氧基)-4-[雙[2-[雙[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]-乙基]氨基]-1，5-二氧代戊基]氨基]膽烷-24-酸甲酯3.6g(3β，5β)-3-氨基膽烷-24-酸甲酯(類似于WO-A-95/32741實施例5所述方法制備)(9.24mmol)、8.5gN，N-雙[2-[雙[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]-乙基]-L-谷氨酸叔丁酯(按照類似于WO-A-95/32741實施例15所述方法制備)(11.39mmol)和1.64g氰基膦酸二乙酯(9.39mmol)溶解在160mL的DMF中。把該溶液冷卻至0℃，將1.28mL的Et3N(9.24mmol)滴加其中，將該反應混合物在室溫下放置30分鐘。1小時后，減壓下蒸發(fā)該溶液，將殘余物溶于EtOAc中，依次用5％NaHCO3和鹽水洗滌。分離有機相，用Na2SO4干燥，隨后減壓下蒸發(fā)。粗品通過閃式色譜純化得到9.5g的預期產(chǎn)物(8.50mmol)。收率92％K.F.3.47％元素分析 C HN％計算值 66.63 9.74 5.01％實測值a67.42 10.08 5.07a在120℃真空下干燥后TLC固定相∶硅膠板60F 254 Merck洗脫劑＝4∶6 EtOAc/正己烷檢測0.5％KMnO4在1M NaOH中，Rf＝0.461H-NMR、13C-NMR、IR和MS譜與所示結構吻合。B)[3β(S)，5β]-3-[[4-羧基-4-[雙[2-[雙(羧乙基)氨基]乙基]氨基]-1-氧代丁基]氨基]膽烷-24-酸甲酯向9.3g步驟A)制得的化合物(8.32mmol)在50mLCH2Cl2中的攪拌溶液內加入5.1mL的CF3COOH(66.6mmol)；0-5℃的溫度下10分鐘后，蒸發(fā)該溶液。將殘余物溶于50mL的CF3COOH中，室溫下24小時后，進一步加入30mL的CF3COOH使反應完全。5小時后，蒸發(fā)該反應混合物并且用CH2Cl2處理殘余物，每次在減壓下蒸發(fā)溶劑直至得到粉末。用H2O洗滌該固體，過濾，干燥，得到預期產(chǎn)物(6.9g；8.24mmol)。收率99％ m.p.205℃K.F.7.78％元素分析 C H N％計算值 60.27 8.18 6.69％實測值a59.28 8.11 6.68a在120℃真空下干燥后TLC固定相硅膠板60F 254 Merck洗脫劑＝6∶4∶1 CHCl3/MeOH/25％NH4OH。檢測0.5％KMnO4在1MNaOH中 Rf＝0.281H-NMR、13C-NMR、IR和MS光譜與所示結構吻合。C)[3β(S)，5β]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]膽烷-24-酸向6.14g步驟B)制備的化合物(7.33mmol)在50mL H2O中的混懸液中加入50mL的1M NaOH(50mmol)，利用pH-靜電儀的裝置保持pH13。室溫下2小時后，用12M HCl酸化反應混合物(pH 0.5)得到混懸液，將其過濾，用H2O洗滌并且干燥，得到預期產(chǎn)物(5.64g；6.85mmol)。收率93％ m.p.205℃K.F.9.02％元素分析C H NCl，Na％計算值 59.84 8.086.81％實測值a59.56 8.156.80 ＜0.1a在120℃真空下干燥后TLC固定相硅膠板60F 254 Merck洗脫劑6∶4∶1 CHCl3/MeOH/25％NH4OH檢測0.5％KMnO4在1M NaOH中，Rf＝0.25
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS波譜與所示結構吻合。D)與1-脫氧-(甲基氨基)-D-山梨醇(1∶3)成鹽的[3β(S)，5β]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]膽烷-24-酸的釓絡合物將4.53g步驟C)制備的化合物(5.5mmol)懸浮在50mL H2O中并且用10mL 2M葡甲胺水溶液(20mmol)溶解得到pH 6.8的溶于。此后，在1小時內加入11mL的0.5M GdCl3水溶液(5.5mmol)，通過加入6.5mL的2M葡甲胺水溶液(13mmol)保持pH 6.8。利用毛細管電泳監(jiān)測該反應的進程。2小時后，經(jīng)微孔膜過濾該溶液，納米過濾和蒸發(fā)。干燥殘余物得到預期化合物(6.15g；4.17mmol)。收率76％ m.p.220℃K.F.8.44％CE試驗100％(面積％)毛細管熔融二氧化硅0.56m×50mm，帶有球形池電壓25kV緩沖液0.05M硼酸鹽pH 9.3，0.3mM EDTA溫度40℃停止時間20分鐘檢測(UV)200-210nm注射流體靜力(50mbar，5s)樣品濃度1mg mL-1；儀器Hewlett PacKard 3D HPCE預處理t(分鐘)處理2 用H2O沖洗2 用0.1M NaOH沖洗1 用H2O沖洗5 用緩沖液沖洗9 開始分析元素分析 CH Gd N Cl，Na％計算值 47.65 7.35 10.06 6.27％實測值a47.83 7.36 10.01 6.24 ＜0.1a在120℃真空下干燥后IR和MS光譜與所示結構吻合。
類似地制備下列化合物和有關釓絡合物與1-脫氧-1-(甲基氨基)-D-山梨醇(1∶3)成鹽的[3β(S)，5β，7β]-3-[[4-[雙[2[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7-羥基膽烷-24-酸的釓絡合物；與1-脫氧-1-(甲基氨基)-D-山梨醇(1∶3)成鹽的[3α(S)，5β]-3-[2[-[5-[雙[2[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]-氨基]-2-氧代乙氧基]膽烷-24-酸的釓絡合物；
0℃和氮氣下，將DCC(6.24g；30.3mmol)的CH2Cl2(25mL)溶液在30分鐘內滴加到N，N-雙[2[雙[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]乙基]-L-谷氨酸1-(1，1-二甲基乙基)酯(按照WO-A-95/32741實施例15所述方法制備)(21.5g；28.9mmol)、化合物B)(11.1g；27.5mmol)和HOBT(1-羥基苯并三唑)(3.72g；27.5mmol)的CH2Cl2(300mL)溶液中。令該混合物升至室溫。21小時后，過濾該反應混合物，溶液用NaHCO3飽和水溶液、隨后用H2O洗滌，進而蒸發(fā)。粗產(chǎn)物通過閃式色譜純化得到24.5g預期產(chǎn)物(21.7mmol)。收率79％[α]20D＝+12.17(c 2.07，CHCl3)TLC固定相硅膠板60F 254 Merck洗脫劑1∶1 EtOAc/正己烷檢測0.5％KMnO4在1M NaOH中，Rf＝0.451H-NMR、13C-NMR、IR和MS光譜與所示結構吻合。D)[3β(S)，5β]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-氧代膽烷-24-酸0℃下，在1小時內將80mL TFA(1.0mol)滴加到23.8g步驟C)制得的產(chǎn)物(21.0mmol)的CH2Cl2(50mL)溶液中。室溫下攪拌該反應混合物，2小時后，蒸發(fā)。將殘余物溶于TFA(100mL；1.3mol)中，將該溶液進一步攪拌24小時。隨后蒸發(fā)該反應混合物，溶于CH2Cl2并且再次蒸發(fā)。將粗產(chǎn)物溶于150mL的1M NaOH，用冰浴冷卻，溶液在室溫下攪拌15小時(pH 10)。用3.30mL的30％NaOH調節(jié)該反應混合物至pH 13，4小時后，經(jīng)微孔膜(HAS 0.45μm)過濾。濾液用12.5mL的30％HCl和19mL 1MHCl酸化至pH 1.60。過濾沉淀，用H2O洗滌并且干燥，得到15.8g預期產(chǎn)物(18.9mmol)。收率90％ m.p.172-175℃K.F.1.98％[α]20D＝+43.54(c 2.02，1M NaOH)HPLC97％(面積％)固定相Zorbax ECLIPSE XDB-C8 3.5m；150×4.6mm.；溫度40℃；流動相梯度洗脫；A＝H2O中0.017M H3PO4，0.3mM EDTA；B＝CH3CN梯度分鐘％A％B0 85 1540 65 3550 65 35流速1.5mL分鐘-1；檢測(UV)210nm；元素分析C H N Cl Na％計算值58.84 7.71 6.69％實測值56.57 7.68 6.37 0.25 0.18TLC固定相硅膠板60F 254 Merck洗脫劑5∶4∶2 CHCl3/MeOH/25％NH4OH檢測0.5％KMnO4在1M NaOH中，Rf＝0.281H-NMR、13C-NMR、IR和MS光譜與所示結構吻合。E)與1-脫氧-1-(甲基氨基)-D-山梨醇(1∶3)成鹽的[3β(S)，5β]-3-[[4-[雙[2[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-氧代膽烷-24-酸的釓絡合物室溫下，把49.0mL的0.918M葡甲胺水溶液(45.0mmol)滴加到14.0g步驟D)制備的化合物(16.7mmol)的H2O(100mL)溶液中，得到澄清溶液(pH 6.5)。將31.6mL的0.503M GdCl3水溶液(15.9mmol)滴加在其中，通過加入55.7mL的0.918M葡甲胺水溶液(51.1mmol)、利用pH-靜電裝置保持pH 6.5。加料結束時，混合物經(jīng)微孔膜(HAWP 0.45/m)過濾，納米過濾，用0.100mL的0.918M葡甲胺水溶液(0.092mmol)調至pH 7.0和蒸發(fā)。干燥殘余物得到22.0g預期產(chǎn)物(14.0mmol)。收率84％ m.p.100-105℃K.F.5.06％HPLC分析97％(面積％)固定相HYPURITYTMElite C18 5μm；250×4.6mm柱Hypersil；溫度40℃；流動相梯度洗脫；A＝0.01M KH2PO4在水中；B＝CH3CN梯度分鐘％A％B0 95 540 65 3550 65 35流速1mL分鐘-1；檢測(UV)210nm；元素分析C H N Gd Na，Cl％計算值47.23 7.16 6.22 9.97％實測值45.70 7.32 6.00 9.41 ＜0.1IR和MS光譜與所示結構吻合。
506535流速1.5mL分鐘-1；檢測(UV)210nm；酸性滴定度(0.1N NaOH)99％[α]20λ(c 2.04；1N NaOH)λ(nm) 589 578546436405365[α] +24.80 +25.83 +29.22 +49.02 +58.43 +75.59元素分析 C H NCl，Li％計算值 58，70 7，93 6，68％實測值 57，90 7，97 6，57 ＜0.1 H2O0.951H-NMR、13C-NMR、IR和MS光譜與所示結構吻合。
該化合物由(3β，5β，7α)-3-氨基-7-羥基膽烷-24-酸甲酯(按照類似于WO-A-95/32741實施例5所述膽酸衍生物的方法制備)和N，N-雙[2-[雙[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]-乙基]-L-谷氨酸1-(1，1-二甲基乙基)酯(WOA-95/32741實施例15所述方法制備)、按照實施例4詳細方法制備。得到產(chǎn)物，總收率89％。m.p.＞300℃元素分析 C H N Gd Na％計算值46.49 5.71 5.29 14.85 6.51％實測值43.88 6.50 4.91 13.62 6.04 H2O7.11％IR和MS光譜與所示結構吻合。
實施例12[3β(RS)，5β，7α，12α]-3-[[4-[雙[2[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸 該化合物由(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羥基膽烷-24-酸甲酯(WO-A-95/32741實施例5所述方法制備)和N，N-雙[2-[雙[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]-乙基]-DL-谷氨酸1-(1，1-二甲基乙基)酯(由DL谷氨酸、按照WO-A95/32741實施例15對于L異構體所述方法制備)、按照實施例4制備化合物B的詳細步驟合成)。所得產(chǎn)物的總收率為65％。m.p.224℃分解。HPLC分析97％(面積％)固定相Zorbax ECLIPSE XDB-C8 3.5μm；150×4.6mm柱RocklandTechnologies，Inc.；溫度40℃；流動相梯度洗脫；A＝0.017M H3PO4，0.3mM EDTA水中；B＝CH3CN梯度分鐘％A％B0 95 540 65 3550 65 35流速1.0mL分鐘-1；檢測(W)210nm；色譜法顯示出兩個峰，這兩個峰幾乎等比例，它們與二酯非對映異構體有關，這歸因于DTPA殘基中的RS立體中心。元素分析 C H N Li， Cl％計算值 57.60 7.78 6.55％實測值 54.34 7.81 6.19 ＜0.1 H2O 5.12％IR、NMR和MS光譜與所示結構吻合。
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光譜與所示結構吻合。方法2氮氣氛下，將[3α，5β，7α，12α]-3-[(氯代羰基)氧基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸甲酯(Janout，V.，Lanier，M.；Regen，S.L.美國化學協(xié)會會志(J.Am.Chem.Soc.)1997，119，640)(6.1g；12.6mmol)在無水CH2Cl2(150mL)溶液冷卻至0℃，隨后加入N，N-二異丙基乙胺(4.8mL；27.6mmol)。此后滴加N2，N2-雙[2-[雙[2(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]乙基]-L-賴氨酸(1，1-二甲基乙基)酯(9.3g；12.6mmol)在無水CH2Cl2(20mL)中的溶液。室溫下攪拌3小時，用水(2×100ml)洗滌，Na2SO4干燥，蒸發(fā)。粗產(chǎn)物通過閃式色譜純化得到預期產(chǎn)物(11.9g；9.9mmol)。收率79％.
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光譜與所示結構吻合。B)[3α(S)，5β，7α，12α]-3-[[[[5-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]-羰基]氧基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸室溫下，將2M LiOH(141mL)的水溶液滴加到化合物A)(11.2g；9.4mmol)在1，4-二噁烷(141mL)中的溶液內。104小時后，濃縮該溶液(150mL)且滴加2M HCl(175mL)水溶液最終pH達到1.9。過濾沉淀，用H2O(5×50mL)洗滌且真空干燥。粗產(chǎn)物通過閃式色譜純化。所得固體溶解在10％CH3CN水溶液中，加入濃鹽酸調至pH 1，隨后將該溶液填裝在AmberliteXAD 16.00樹脂柱(250mL)上且用CH3CN/H2O梯度洗脫。蒸發(fā)含有產(chǎn)物的餾份得到預期產(chǎn)物(4.3g；4.8mmol)。收率51％.m.p.184-191℃K.F.4.36％[α]20D＝+19.5(c 1，1M NaOH)HPLC分析97.3％(面積％)固定相Hypurity Elite C 18 5μm；250×4.6mm柱，填裝有Hypersil溫度40℃；流動相梯度洗脫；A＝0.01M KH2PO4，0.3mM EDTA，在水中；B＝CH3CN梯度分鐘％A％B0 95 520 65 3550 65 35流速1mL分鐘-1；檢測(UV)200nm；元素分析C H N Cl％計算值57.45 7.85 6.23％實測值 55.22 7.91 6.08 ＜0.11H-NMR、13C-NMR、IR和MS光譜與所示結構吻合。C)與鈉(1∶3)成鹽的[3α(S)，5β，7α，12α]-3-[[[[5-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]羰基]氧基]-7，12-二羥基-膽烷-24-酸的釓絡合物步驟B)制備的化合物(4.7g；5.2mmol)懸浮在H2O(100mL)中并且通過加入1M NaOH(10mL)直至pH為6.5溶解該化合物。加入GdCl3(1.9g；5.2mmol)的H2O(17mL)溶液，用1M NaOH(15.6mL)維持pH 6.5。室溫下1小時后，將溶液填裝在AmberliteXAD 16.00樹脂柱(250mL)上，其用CH3CN/H2O梯度洗脫。蒸發(fā)含有產(chǎn)物的餾份，得到預期產(chǎn)物(4.2g；3.8mmol)。收率72％.m.p.＞300℃K.F.9.49％[α]20D＝+2.63(c 2，H2O)HPLC分析100％(％面積)(與步驟B相同的方法)元素分析 C H N Gd Na Cl％計算值 46.15 5.76 5.00 14.05 6.17％實測值 41.80 6.28 4.54 12.64 5.73 ＜0.11H-NMR、13C-NMR、IR和MS光譜與所示結構吻合。
以相同方式由實施例2中的化合物B)制備[3β(S)，5β]-3-[[4-[[2[[雙(羧甲基)氨基]乙基]-(羧甲基)氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-氧代膽烷-24-酸。
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光譜與所示結構吻合。C)[3α(S)，5β，12α]-3-[[[[5-[[2-[雙[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]乙基][2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]-6-甲氧基-6-氧代己基]氨基]羰基]氧基]-12-羥基膽烷-24-酸甲酯把5％Pd/C(1.3g)加入步驟A)制備的化合物(12.3g；18.1mmol)的MeOH(120mL)溶液中，該混懸液在氫氣氛、室溫下攪拌3小時。經(jīng)Millipore濾膜(FT 0.45μm)過濾后，減壓下蒸發(fā)該溶液。將殘余物溶解在無水CH2Cl2(20mL)，0℃、氮氣氛下滴加步驟B)制備的化合物(8.7g；18.54mmol)和N，N-二異丙基乙胺(DIEA)(6.5mL；37.07mmol)在無水CH2Cl2(200mL)中的溶液內。3小時后，反應混合物用H2O(2×100mL)洗滌，分離有機相，干燥Na2SO4和減壓下蒸發(fā)。粗產(chǎn)物通過閃式色譜純化得到預期產(chǎn)物(8.6g；8.8mmol)。收率49％。K.F.＜0.1％元素分析 C H N％計算值 65.07 9.38 4.30％實測值 65.67 9.52 4.24TLC固定相硅膠板60F 254 Merck洗脫劑3∶7＝EtOAc/正己烷 Rf＝0.30檢測Ce(SO4)2，4H2O(0-18％)和(NH4)6Mo7O244H2O(3.83％)，在10％H2SO4，1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光譜與所示結構吻合。D)[3α(S)，5β，12α]-3-[[[[5-[[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-5-羧戊基]氨基]羰基]氧基]-12-羥基膽烷-24-酸將2M LiOH(133mL；266mmol)加入步驟C)制備的化合物(8.5g；10.64mmol)的1，4-二噁烷(130mL)溶液中。室溫下將所得溶液攪拌24小時，隨后加入2N HCl(120mL)中和至pH 7。減壓下蒸發(fā)濃縮該溶液至一半體積，在劇烈攪拌下非常緩慢地酸化至pH 1.5，得到白色沉淀，將其過濾，用H2O洗滌(2×100mL)和干燥，得到預期產(chǎn)物(6.45g；8.13mmol)。收率76％。m.p.188.9℃K.F.1.44％[α]20D＝+35.47(c 2.01，1M NaOH)HPLC分析96.8％(面積％)固定相Zorbax Eclipse XDB-C8 3.5μm；150×4.6mm柱，由RocklandTechnologies Inc.填裝；溫度40℃；流動相梯度洗脫；A＝0.017M H3PO4水溶液；B＝CH3CN梯度分鐘％A％B0 65 3525 15 8530 15 85流速1mL分鐘-1；檢測(UV)210nm；元素分析 C H N Li Cl％計算值 59.91 8.12 5.37％實測值 58.44 8.04 5.03 ＜0.1 ＜0.11H-NMR、13C-NMR、IR和MS光譜與所示結構吻合。E)與鈉(1∶3)成鹽的[3α(S)，5β，12α]-3-[[[[5-[[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-5-羧戊基]氨基]羰基]氧基]-12-羥基-膽烷-24-酸的錳絡合物將步驟D)制備的化合物(5g；6.3mmol)懸浮在H2O(50mL)中并且通過加入1MNaOH(18mL；18mmol)使該化合物溶解。在3小時內加入0.559M MnCl2水溶液(11.27mL；6.3mmol)，利用1M NaOH(7.8mL)保持pH 6.5。用1M NaOH(0.9mL；0.9mmol)調至pH 6.8，過濾(HA 0.45μm Millipore膜)并且通過納米過濾脫鹽。蒸發(fā)該溶液，干燥得到預期產(chǎn)物(5.45g；6.05mmol)。收率96％m.p.＞300℃K.F.3.78％[α]20D＝+2.74(c2，H2O)CE分析100％(面積％)毛細管熔融二氧化硅0.72m×50μm電壓30kV緩沖液0.07M硼酸鹽，pH 9.3，0.3mM EDTA溫度25C停止時間20分鐘；檢測(UV)200nm；注射水壓式(50mbar，4s)；樣本濃度1mgmL-1；儀器Hewlett Packard 3D HPCE預處理時間表t(分鐘) 作用2 用H2O洗脫2 用0.1M NaOH洗脫1 用H2O洗脫5 用緩沖液洗脫元素分析C H N Mn Na Cl％計算值52.00 6.49 4.66 6.10 7.66％實測值49.54 7.17 4.44 5.65 7.58 ＜0.1IR和MS光譜與所示結構吻合。
以相同方式制備N2-雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]-N-[(3β，5β)-24-氧代-24-[(2-磺乙基)氨基]膽烷-3-基]-L-谷氨酰胺的釓絡合物。
1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光譜與所示結構吻合。B)[3a(S)，5β]-3-[2-[[5-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]-2-氧代乙氧基]膽烷-24-酸把N2，N2-雙[2-[雙[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]-氨基]乙基]-L-賴氨酸(1，1-二甲基乙基)酯(Anelli，P.L.等人，生物偶聯(lián)化學(Bioconjugate Chem.)1999，10，137)(18.6g；25mmol)、化合物A)(11.2g；25mmol)和氰基磷酸二乙酯(市售產(chǎn)品)(4.9g；28mmol)溶于DMF(300mL)中。將所得溶液冷卻至0℃并滴加Et3N(4mL)。室溫下6小時后，減壓下蒸發(fā)該溶液，把殘余物溶于EtOAc(250mL)，用5％NaHCO3水溶液(2×100mL)洗滌，隨后用鹽水(2×100mL)洗滌。分離有機相，用Na2SO4干燥，減壓下蒸發(fā)。殘余物溶于二噁烷(300mL)中，滴加0.5M H2SO4水溶液(300mL；150mmol)。所得混合物在90℃下加熱2小時。用2N NaOH將溶液的pH調至7，減壓下蒸發(fā)溶劑。粗產(chǎn)物通過閃式色譜純化。將產(chǎn)物溶解在H2O(300mL)和2N HCl(30mL)中，經(jīng)AmberlitesXAD-16.00樹脂柱、用CH3CN/H2O梯度洗脫脫鹽得到預期產(chǎn)物(9.03g；10.25mmol)。收率41％。K.F.2.78％元素分析 C H N％計算值59.98 8.24 6.36％實測值58.11 8.28 6.141H-NMR、13C-NMR、IR和MS光譜與所示結構吻合。C)與鈉(1∶3)成鹽的[3α(S)，5β]-3-[2-[[5-[雙[2[雙(羧甲基)氨基]-乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]-2-氧代乙氧基]膽烷-24-酸的釓絡合物通過加入1N NaOH直至pH 6.8使產(chǎn)物B)(5g；5.67mmol)溶于H2O(200mL)中。加入Gd2O3(1.03g；2.84mmol)，所得混懸液在50℃下加熱8小時。經(jīng)Millipore裝置(HA 0.45μm濾膜)過濾該反應混合物，減壓下蒸發(fā)濾液，干燥，得到預期產(chǎn)物(5.74g；5.21mmol)。收率92％.m.p.＞250℃K.F.5.81％元素分析C H N Gd Na％計算值47.99 6.04 5.09 14.28 6.26％實測值45.09 6.15 4.77 13.39 5.81IR和MS光譜與所示結構吻合。
以相同方式、由實施例15的化合物A)開始制備[3α(S)，5β]-3-[2[[5-[[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-5-羧戊基]氨基]-2-氧代乙氧基]膽烷-24-酸的釓絡合物。
以相同方式、由實施例15的化合物A)和(3β，5β，7α，12α)-3-[(3-羧基-1-氧代丙基)氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸甲酯(按照WO-A-95/32741實施例12所述方法制備)開始，制備[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[[5-[[2-[雙(羧甲基)-氨基]乙基](羧甲基)氨基]-5-羧戊基]氨基]-1，4-二氧代丁基]氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸的釓絡合物。
將實施例1制備的化合物，與1-脫氧-1-(甲基氨基)-D-山梨糖醇(1∶3)成鹽的[3β(S)，5β]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]膽烷-24-酸的釓絡合物以0.1mmol/kg的劑量對兔子給藥。簡圖(

圖1)表示弛豫速率的分布圖。
專利申請WO 95/32741實施例9中制備的化合物，與1-脫氧-1-(甲基氨基)-D-山梨醇(1∶2)成鹽的(3β，5β，7α，12α)-3-[[N-[N-[2-[[2-[雙(羧甲基)-氨基]乙基](羧甲基)氨基]乙基]-N-(羧甲基)甘氨酰基]甘氨?；鵠氨基]-7，12-二羥基-膽烷-24-酸的釓絡合物以0.1mmol/kg的劑量對兔子給藥。簡圖(圖2)表示弛豫速率的分布圖。
專利申請WO 95/32741的實施例15制備的化合物，與1-脫氧-1-(甲基氨基)-D-山梨醇(1∶3)成鹽的[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸的釓絡合物以0.1mmol/kg的劑量對兔子給藥。簡圖(圖3)表示弛豫速率的分布圖。
實施例4制備的化合物，與1-脫氧-1-(甲基氨基)-D-山梨醇(1∶3)成鹽的[[3β(S)，5β，12α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羥基膽烷-24-酸的釓絡合物以O.1mmol/kg的劑量對兔子給藥。簡圖(圖4)表示弛豫速率的分布圖。
實施例190.3M的與 1-脫氧-1-(甲基氨基)-D-山梨糖醇(1∶3)成鹽的[3β(S)，5β，12α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羥基膽烷-24-酸釓絡合物的藥物制劑室溫下，在藥用不銹鋼反應釜中將31.775kg與1-脫氧-1-(甲基氨基)-D-山梨糖醇(1∶3)成鹽的[3β(S)，5β，12α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羥基膽烷-24-酸釓絡合物(例如實施例4制備)和100g氨丁三醇(trometamol)鹽酸鹽溶解在100L滅菌水中。溶解后，通過加入1M氨丁三醇將溶液的pH調節(jié)至7.4。該溶液經(jīng)0.22mm直徑的濾器過濾滅菌并且分配在20mL的瓶內，瓶子用鹵丁基塞封閉，用鋁環(huán)密封并且在Fo＝18下蒸氣滅菌。HPLC顯示滴定度為0.294M。
權利要求
1.二-三價順磁性金屬離子與式(I)的化合物及其和生理相容性有機堿或無機堿的鹽的螯合絡合物在制備用于通過核磁共振獲得人體或動物體血液系統(tǒng)的成像的診斷制劑中的應用，所述二-三價順磁性金屬離子選自Fe(2+)、Fe(3+)、Cu(2+)、Cr(3+)、Gd(3+)、Eu(3+)、Dy(3+)、Yb(3+)或Mn(2+)，所述生理相容性有機堿選自伯、仲、叔胺類化合物和堿性氨基酸類化合物，所述無機堿的陽離子為鈉、鉀、鎂、鈣或其混合物X-L-Y(I)其中X是聚氨基聚羧酸配體或其衍生物的基團，選自組成如下的基團乙二胺四乙酸(EDTA)、二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)、1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷-1，4，7，10-四乙酸(DOTA)、1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷-1，4，7-三乙酸(DO3A)、[10-(2-羥丙基)-1，4，7，10-四氮雜-環(huán)十二烷-1，4，7-三乙酸(HPDO3A)、4-羧基-5，8，11-三(羧甲基)-1-苯基-2-氧雜-5，8，11-三氮雜十三烷-13-酸(BOPTA)；Y是選自膽酸、鵝去氧膽酸、脫氧膽酸、熊去氧膽酸、石膽酸基團的膽酸1類衍生物， 且它們都在具有羥基的位置官能化為反應基團，并具有獨立于終產(chǎn)物的立體化學，所述衍生物也包括24位酸基與牛磺酸和甘氨酸的軛合物；L是與X的任何位置以及Y的C-3、C-7、C-12位相連的鏈，X選擇性地含有一個由此轉化為酰氨基的羧基，并且具有下式(II) 其中m是1-10的整數(shù)，其中對于大于1的值，A可以具有不同的含義，A具有下式(III)， n和q可以是O或1，但是它們不能同時為0，p可以介于0至10，Z是氧原子或-NR基，其中R為氫原子，或取代或被-COOH基取代的(C1-C5)烷基。
2.如權利要求1所述的化合物的應用，其中所述絡合物與釓或錳離子形成。
3.如權利要求1所述式(I)化合物的應用，其中間隔鏈L具有式(IIIa)和(IIIb)，
4.按照權利要求1-3的式(I)化合物的應用，其中Z是氧原子和L通過存在于3、7、12位的羥基形成，與終產(chǎn)物的立體化學無關。
5.如權利要求3所述的式(I)化合物的應用，其中基團X選自EDTA、DTPA、DOTA、DO3A、BOPTA；L選自(IIIa)、(IIIb)組成的基團；和Y是選自膽酸、脫氧膽酸、鵝去氧膽酸、石膽酸類化合物的基團，Y是這些基團本身或其中一個或多個羥基已經(jīng)轉化為酮基，Y通過3位氨基與L相連，24位酸基為其本身或是?；撬峄蚋拾彼嵫苌?；所述化合物的絡合物是與釓或錳離子形成，適合中和的有機堿陽離子選自乙醇胺、二乙醇胺、嗎啉、葡糖胺、N-甲基葡糖胺、N，N-二甲基葡糖胺，或所述無機堿的陽離子選自鈉、鉀、鎂、鈣或其混合物。
6.如權利要求5中所述通式(IV)的化合物的應用，其中在式(I)中基團X是取代在中間鏈上的DTPA，和其中R是氫原子或-COOH。 Y選自膽酸、脫氧膽酸、鵝去氧膽酸、石膽酸基團且L具有式(III)的結構。
7.如權利要求6所述的通式(IVa)化合物的應用，其中R1是-COOH 和Y具有定義通式(IV)的化合物的含義，和L具有結構(IIIa)和(IIIb)。
8.如權利要求7所述的通式(IVa)化合物的應用，所述化合物選自[3β(S)，5β]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代-丁基](羧甲基)-氨基]-膽烷-24-酸；[3β(S)，5β]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]膽烷-24-酸；[3β(S)，5β]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-氧代膽烷-24-酸；[3β(S)，5β，5α]-3-[[4-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7-羥基膽烷-24-酸；N2-雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]-N-[(3β，5β)-24-氧代-24-[(2-磺乙基)氨基]膽烷-3-基]-L-谷氨酰胺；N2-雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]-N-[(3β，5β，7α，12α)-7，12-二羥基-24-氧代-24-[(2-磺乙基)氨基]-膽烷-3-基]-L-谷氨酰胺；[3β(S)，5β，7β)-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7-羥基膽烷-24-酸；[3β(R)，5β，12α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羥基膽烷-24-酸；[3β(RS)，5β，12α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羥基膽烷-24-酸；[3β(RS)，5β，7α，12α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-]-氧代丁基]氨基]-7，12二羥基膽烷-24-酸；[3β(RS)，5β，7α，12α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸；[3β(RS)，5β，7α，12α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸；[3α(S)，5β，7α，12α]-3-[[[[5-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]羰基]氧基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸；[3α(S)，5β]-3-[2-[[5-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]-2-氧代乙氧基]膽烷-24-酸；[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸；[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[[5-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]-1，4-二氧代丁基]氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸。
9.如權利要求6所述的通式(IVb)化合物的應用， 其中Y具有上述定義通式(IV)的化合物的含義和L具有結構(IIIa)。
10.如權利要求9的通式(IVb)化合物的應用，該化合物選自(3β，5β，7α，12α)-3-[[[雙[2[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]乙?；鵠氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸；(3β，5β)-3-[[[[[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]乙酰基]氨基]乙?；鵠氨基]膽烷-24-酸；(3β，5β，7α，12α)-3-[[[[[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]-乙基]氨基]-乙?；鵠氨基]乙?；鵠氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸；(3β，5β，7α，12α)-3-[16-[[[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-乙酰基]氨基]-1-氧代己基]氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸。
11.如權利要求5所述的通式(V)的化合物的應用，其中在通式(I)中基團X是DTPA，Y具有上述定義通式(IV)的化合物的含義和L具有式(IIIa)的結構，
12.如權利要求11所述的通式(V)化合物的應用，選自(3β，5β，7α，12α)-3-[[N-[N-[2-[[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]乙基]-N-(羧甲基)甘氨?；鵠甘氨酰基]氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸；18-[[(3β，5β，7α，12α)-23-羧基-7，12-羥基-24-降膽烷-3-基]氨基]-3，6，9-三(羧甲基)-11，18-二氧代-3，6，9，12-四氮雜十八烷酸。
13.如權利要求5所述的通式(VI)化合物的應用，其中在通式中基團X為DO3A，Y具有上述定義通式(IV)的化合物的含義和L選自結構(IIIa)和(IIIb)，
14.如權利要求11所述的10-[3-[[(3α，5β，7α，12α)-23-羧基-7，12二羥基-24-降膽烷-3-基]氧基]-2-羥丙基]-1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷-1，4，7-三乙酸的應用。
15.如權利要求5所述的通式(VII)化合物的應用，其中通式(I)中基團X是EDTA， Y具有上述定義通式(IV)化合物的含義和L具有式(III)的結構。
16.如權利要求11所述的通式(VII)化合物的應用，所述化合物選自[3α(S)，5β，12α]-3-[[[[5-[[2-[雙(羧甲基)氨基]-乙基](羧甲基)氨基]-5-羧戊基]氨基]羰基]氧基]-12-羥基膽烷-24-酸；[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[[5-[[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-5-羧基-戊基]氨基]-1，4-二氧代丁基]氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸；[3β(S)，5β]-3-[2-[[5-[[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-5-羧戊基]氨基]-2-氧代乙氧基]膽烷-24-酸；[3β(S)，5β，12α]-3-[[4-[[2-[[雙(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羥基膽烷-24-酸；[3β(S)，5β]-3-[[4-[[2-[[雙(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-氧代膽烷-24-酸。
17.按照權利要求1-16的化合物的應用，其中所述螯合絡合物鹽是與鈉和N-甲基葡糖胺形成。
18.通式(IVa)的化合物 其中Y是選自膽酸、脫氧膽酸、鵝去氧膽酸、石膽酸的基團，其是這些基團本身或其中一個或多個羥基已經(jīng)轉化為酮基，Y通過3位氨基與L相連，且24位酸基以其本身或作為?；撬峄蚋拾彼嵫苌锎嬖冢凰龌衔锏慕j合物是與釓或錳離子形成，適于中和的堿的陽離子選自乙醇胺、二乙醇胺、嗎啉、葡糖胺、N-甲基葡糖胺、N，N-二甲基葡糖胺或無機堿陽離子選自為鈉、鉀、鎂和鈣，L具有式(IIIa)和(IIIb)的結構，其中m是1至10的整數(shù)，但不包括[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[雙[2[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸和[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[[5-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]-1，4-二氧代丁基]氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸。
19.權利要求18的化合物，選自[3β(S)，5β]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代-丁基](羧甲基)-氨基]膽烷-24-酸；[3β(S)，5β]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]膽烷-24-酸；[3β(S)，5β]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-氧代膽烷-24-酸；[3β(S)，5β，7α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7-羥基膽烷-24-酸；N2-雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]-N-[(3β，5β)-24-氧代-24-[(2-磺乙基)氨基]膽烷-3-基]-L-谷氨酰胺；N2-雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]-N-[(3β，5β，7α，12α)-7，12-二羥基-24-氧代-24-[(2-磺乙基)氨基]膽烷-3-基]-L-谷氨酰胺；[3β(S)，5β，7β]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7-羥基膽烷-24-酸；[3β(R)，5β，12α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羥基膽烷-24-酸；[3β(RS)，5β，12α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羥基膽烷-24-酸；[3β(RS)，5β，7α，12α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸；[3β(RS)，5β，7α，12α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸；[3β(RS)，5β，7α，12α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸；[3α(S)，5β，7α，12α]-3-[[[[5-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]羰基]氧基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸[3α(S)，5β]-3-[2-[[5-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-5-羧戊基]氨基]-2-氧代乙氧基]膽烷-24-酸；
20.通式(IVb)的化合物 其中Y如權利要求18定義和L具有如權利要求18定義的結構(IIIa)，但除了(3β，5β，7α，12α)-3-[[[[[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]乙?；鵠氨基]乙?；鵠氨基]-7，12-二羥基-膽烷-24-酸；和(3β，5β，7α，12α)-3-[[6-[[[雙[2[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-乙?；鵠氨基]-1-氧代己基]氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸以外。
21.如權利要求20所述的化合物，選自(3β，5β，7α，12α)-3-[[[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]-乙基]氨基]乙?；鵠氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸；(3β，5β)-3-[[[[[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]乙酰基]氨基]乙?；鵠氨基]膽烷-24-酸。
22.通式(VII)的化合物 其中Y如權利要求18所述定義和L具有權利要求1定義的結構(III)。
23.如權利要求22所述的化合物，選自[3α(S)，5β，12α]-3-[[[[5-[[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-5-羧戊基]氨基]羰基]氧基]-12-羥基膽烷-24-酸；[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[[5-[[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-5-羧戊基]氨基]-1，4-二氧代丁基]氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸；[3β(S)，5β]-3-[2-[[5-[[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-5-羧戊基]氨基]-2-氧代乙氧基]膽烷-24-酸；[3β(S)，5β，12α]-3-[[4-[[2-[[雙(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]12-羥基膽烷-24-酸；[3β(S)，5β]-3-[[4-[[2-[[雙(羧甲基)氨基]乙基](羧甲基)氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-氧代膽烷-24-酸。
24.造影診斷藥物組合物，含有至少一種權利要求17-23所述螯合絡合物或其如權利要求1-4所述的鹽。
25.如權利要求24所述的藥物組合物，含有附加的摩爾數(shù)不超過5％的與鈣或鎂和/或選自氨丁三醇和甘氨?；拾彼岬纳砜山邮芫彌_劑成鹽的螯合絡合物。
26.一谷氨酸γ-酰胺類化合物的制備方法，按照下列合成路線 其中R4是氨基保護基；R5是直鏈或支鏈C1-C10烷基或芳基，R2和R3獨立地是氫原子、直鏈或支鏈未取代或被芳基取代的C1-C20烷基，或這兩個基團形成C3-C10環(huán)。
27.如權利要求26的方法，用于制備如權利要求1所述的式(I)化合物，谷氨酸γ-酰胺類化合物具有基團Y的3-氨基衍生物。
28.如權利要求27所述的方法，用于制備化合物[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-12-羥基膽烷-24-酸和[3β(S)，5β，7α，12α]-3-[[4-[雙[2-[雙(羧甲基)氨基]乙基]氨基]-4-羧基-1-氧代丁基]氨基]-7，12-二羥基膽烷-24-酸。
全文摘要
通式(Ⅰ)的化合物與選自Fe(
文檔編號A61K49/00GK1333695SQ99815792
公開日2002年1月30日 申請日期1999年12月16日 優(yōu)先權日1998年12月23日
發(fā)明者P·L·阿奈里, C·德漢恩, L·拉圖爾達, G·曼弗萊迪, D·帕拉諾, F·尤吉里, M·維希加里 申請人:伯拉考成像股份公司