專利名稱：丙型肝炎三肽抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于治療丙型肝炎病毒(HCV)感染的化合物、它們的合成方法、組合物和方法。尤其是，本發(fā)明提供了新的肽類似物、含這些類似物的藥物組合物、以及將這些類似物用于治療HCV感染的方法。本發(fā)明還提供了合成這些肽類似物的方法和中間體。
背景技術(shù)：
丙型肝炎病毒(HCV)是輸血后和群體傳染的全球性非A非B肝炎的主要病原物。已證實(shí)全球超過(guò)150百萬(wàn)人感染有這種病毒。有較高比例的攜帶者成為慢性感染并且大多數(shù)發(fā)展為慢性肝病，即所謂的慢性丙型肝炎。這些群體隨后有患嚴(yán)重肝病的危險(xiǎn)，例如肝硬變、肝細(xì)胞癌和晚期肝病而導(dǎo)致死亡。
HCV形成病毒存留和導(dǎo)致慢性肝病高發(fā)病率的機(jī)制還沒(méi)有完全得到闡明。還不知道HCV是如何相互作用和離開(kāi)宿主免疫系統(tǒng)的。另外，細(xì)胞免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答在防止HCV感染和疾病中的作用也還沒(méi)有得以確立。據(jù)報(bào)道免疫球蛋白已用于預(yù)防與輸血相關(guān)的病毒性肝炎。但是，疾病控制中心目前還沒(méi)有推薦用于此目的的免疫球蛋白。
缺乏有效的保護(hù)性免疫應(yīng)答正防礙著對(duì)疫苗和照射后的適合預(yù)防方法的開(kāi)發(fā)，因此，近期把希望專注于抗病毒方法。
為了確定能有效治療患有慢性丙型肝炎患者的HCV感染的藥劑，已經(jīng)進(jìn)行了各種臨床研究。這些研究包括α干擾素的使用，單獨(dú)使用和與其它抗病毒劑聯(lián)合使用。這類研究表明大多數(shù)參與者對(duì)這些治療沒(méi)有反應(yīng)，并且發(fā)現(xiàn)其中出現(xiàn)有利反應(yīng)的參與者中，在治療結(jié)束后大部分病情復(fù)發(fā)。
直到最近，人們認(rèn)為干擾素(IFN)是唯一能得到的對(duì)慢性丙型肝炎有認(rèn)可的確實(shí)臨床效果的療法。但是其持續(xù)反應(yīng)速度慢，且干擾素也可導(dǎo)致嚴(yán)重的降低被治療患者的生活質(zhì)量的副作用(即視網(wǎng)膜病、甲狀腺炎、急性胰腺炎、抑郁癥)。近來(lái)，已允許將干擾素和病毒唑聯(lián)合用于對(duì)單獨(dú)IFN無(wú)反應(yīng)的患者。但是，由IFN導(dǎo)致的這些副作用并沒(méi)有隨著這種聯(lián)合療法而得以緩解。
因此，要開(kāi)發(fā)有效治療HCV感染的抗病毒劑必須解決現(xiàn)有藥物療法局限性的問(wèn)題。
HCV是Flaviviridae家族中的有包膜正鏈RNA病毒。單鏈HCV RNA基因組長(zhǎng)度約9500個(gè)核苷酸、具有單個(gè)開(kāi)放讀框(ORF)，編碼約3000個(gè)氨基酸的單個(gè)大的多蛋白。在被感染的細(xì)胞中，這種多蛋白通過(guò)細(xì)胞蛋白酶和病毒蛋白酶在多個(gè)位點(diǎn)被切割、以產(chǎn)生結(jié)構(gòu)和非結(jié)構(gòu)(NS)蛋白。在HCV情況中，成熟的非結(jié)構(gòu)蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)是通過(guò)兩種病毒蛋白酶產(chǎn)生的。第一種蛋白酶，表征還不清楚，它是在NS2-NS3連接處切割；第二種是包含在NS3的N末端區(qū)的絲氨酸蛋白酶(以下稱作NS3蛋白酶)，并介導(dǎo)所有隨后的NS3下游的切割，該NS3包括順式和反式兩種，順式在NS3-NS4A切割位點(diǎn)，反式是指剩下的NS4A-NS4B、NS4B-NS5A、NS5A-NA5B位點(diǎn)。NA4A蛋白具有多種功能，作為NS3蛋白酶的輔因子、能輔助NS3和其它病毒復(fù)制酶成分的膜定位。這種NS3蛋白與NS4復(fù)合物的形成對(duì)于這些過(guò)程似乎是需要的，它增強(qiáng)了所有位點(diǎn)上的蛋白酶解的功效。這種NS3蛋白也具有核苷三磷酸酶和RNA解旋酶活性。NS5B是一種涉及HCV復(fù)制的RNA依賴性RNA聚合酶。
開(kāi)發(fā)抗病毒劑的總策略是使病毒復(fù)制所必需的病毒性編碼酶失活。為此，專利申請(qǐng)WO97/06804描述了作為抗HCV的核苷類似物胞嘧啶-1,3-氧硫烷(oxathiolane)(也叫做3TC)的(-)對(duì)映異構(gòu)體。此化合物，雖然據(jù)報(bào)道它在以前的臨床抗HIV和HBV試驗(yàn)中是安全的，但臨床上還需要證實(shí)該化合物具有抗HCV活性，其抗病毒的作用機(jī)制也還未見(jiàn)報(bào)道。
為找到抑制HCV的NS3蛋白酶或RNA解旋酶的化合物而進(jìn)行的認(rèn)真和艱難的嘗試已有了如下發(fā)現(xiàn)·美國(guó)專利5,633,388描述了用作抗HCV活性劑的雜環(huán)取代的羧酰胺和類似物。這些化合物具有抗病毒的NS3蛋白的解旋酶活性，但臨床試驗(yàn)還沒(méi)有報(bào)道。
·Chu等報(bào)道了(Tet.快報(bào)(1996),7229-7232)菲醌具有抗體外HCV NS3蛋白酶活性。未見(jiàn)對(duì)該化合物的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)的報(bào)道。
·在第9界國(guó)際抗病毒研究會(huì)議上Urabandai,Fukyshima,Japan(1996)公開(kāi)的一篇論文(抗病毒研究，30,1,1996；A23，(摘要19))報(bào)道了噻唑烷衍生物可抑制HCV蛋白酶。
數(shù)項(xiàng)研究報(bào)道了抑制其它諸如人白細(xì)胞彈性蛋白酶的絲氨酸蛋白酶的化合物。這些化合物的其中一組在WO95/33764(Hoechst Marion Roussel,1995)中有報(bào)道。公開(kāi)在該申請(qǐng)中的肽是嗎啉基羰基-苯甲酰基-肽類似物，該類似物在結(jié)構(gòu)上不同于本發(fā)明的肽。
·Vertex藥物公司的WO98/17679公開(kāi)了絲氨酸蛋白酶、尤其是丙型肝炎病毒NS3蛋白酶的抑制劑。這些抑制劑是基于NS5A/5B天然底物的肽類似物。雖然公開(kāi)了幾種三肽，但所有這些肽類似物均含有C末端活性羰基功能團(tuán)作為它的基本特征。還報(bào)道了這些類似物具有抗其它絲氨酸蛋白酶活性，因此它對(duì)HCV NS3蛋白酶不是特異性的。
Hoffman LaRoche也報(bào)道了屬于蛋白酶抑制劑的六肽，它可用作治療HCV感染的抗病毒劑。這些肽在C末端含有醛或硼酸。
Steinkuhla等和Ingallinella等發(fā)表了NS4A-4B產(chǎn)物抑制作用(生物化學(xué)(1998),37,8899-8905和8906-8914)。但是，其中的肽和肽類似物并不包括也不會(huì)導(dǎo)致構(gòu)思出本發(fā)明的肽。
本發(fā)明的一大優(yōu)點(diǎn)是提供了抑制丙型肝炎病毒的NS3蛋白酶的三肽。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是在于這些肽特異地抑制NS3蛋白酶，而它對(duì)其它絲氨酸蛋白酶在濃度約300μM時(shí)沒(méi)有顯著的抑制活性，例如對(duì)人白細(xì)胞彈性蛋白酶(HLE)、豬胰彈性蛋白酶(PPE)、或牛胰凝乳蛋白酶、或諸如人肝組織蛋白酶B(CatB)的半胱氨酸蛋白酶。
本發(fā)明還有一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是在于提供了一些低分子量的小肽，它能滲透細(xì)胞膜，并在細(xì)胞培養(yǎng)物中和在體內(nèi)的活性具有良好的藥物動(dòng)力學(xué)性能。
發(fā)明概述包括在本發(fā)明范圍內(nèi)的是式(1)化合物的外消旋體、非對(duì)映異構(gòu)體、旋光異構(gòu)體、或者其藥學(xué)上可接受的鹽或酯 其中B是H、C6或C10的芳基、C7-16的芳烷基；Het或(低級(jí)烷基)-Het，所有這些基團(tuán)均可被C1-6烷基取代或不取代；C1-6烷氧基；C1-6烷酰基；羥基；羥基烷基；鹵素；鹵烷基；硝基；氰基；氰基烷基；可被C1-6烷基取代或不取代的氨基；酰氨基；或(低級(jí)烷基)酰胺；或者B是式R4-C(O)-的?；苌?；式R4-O-C(O)-的羧基；式R4-N(R5)-C(O)-的酰胺基；式R-N(R5)-C(S)-的硫酰胺基；或式R4-SO2的硫?；渲蠷4是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷?；⒘u基、C1-6烷氧基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低級(jí)烷基)酰胺基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基、C3-7環(huán)烷氧基、或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可被羥基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低級(jí)烷基)酰胺基取代或不取代；(ⅲ)可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低級(jí)烷基)酰胺基；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het或(低級(jí)烷基)-Het，兩者均可被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；R5是H或C1-6烷基；條件是當(dāng)R4是酰胺基或硫酰胺基時(shí)，R4不是(ⅱ)的環(huán)烷氧基；以及
Y是H或C1-6烷基；R3是C1-8烷基、C3-7環(huán)烷基、或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可被羥基、C1-6烷氧基、C1-6硫烷基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、C6或C10芳基、或C7-16芳烷基取代或不取代；R2是CH2-R20、NH-R20、O-R20或S-R20，其中R20是飽和或不飽和的C3-7環(huán)烷基或C4-10的(烷基環(huán)烷基)，這些均可不被取代或被R21單取代、二取代或三取代，或者R20是C6或C10芳基、或C7-14芳烷基，這些均可不被取代或被R21單取代、二取代或三取代，或者R20是Het或(低級(jí)烷基)-Het，兩者均可不被取代或被R21單取代、二取代或三取代，其中每個(gè)R21各自為C1-6烷基；C1-6烷氧基；低級(jí)硫烷基；磺?；?；NO2；OH；SH；鹵素；鹵烷基；可不被取代或被C1-6烷基、C6或C10芳基、C7-14芳烷基、Het或(低級(jí)烷基)-Het單取代或二取代的氨基；可不被取代或被C1-6烷基、C6或C10芳基、C7-14芳烷基、Het或(低級(jí)烷基)-Het單取代或二取代的酰氨基；羧基；羧基(低級(jí)烷基)；C6或C10芳基、C7-14芳烷基或Het，所說(shuō)的芳基、芳烷基或Het均可被R22取代或不取代，其中R22是C1-6烷基；C3-7環(huán)烷基；C1-6烷氧基；可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代；磺?；?；(低級(jí)烷基)磺?；?；NO2；OH；SH；鹵素；鹵烷基；羧基；酰胺基；(低級(jí)烷基)酰胺基；或被C1-6烷基取代或不取代的Het；R1是H、C1-6烷基、C3-7環(huán)環(huán)烷基、C2-6環(huán)烯基、C2-6烷炔基，這些均可被鹵素取代或不取代。
包含在本發(fā)明范圍內(nèi)的是一種藥物組合物，該組合物包括病毒學(xué)上有效量的抗丙型肝炎的式Ⅰ化合物、或其治療上可接受的鹽或酯，以及包括藥學(xué)上可接受的載體介質(zhì)或輔助劑。
本發(fā)明的一個(gè)重要方面是涉及一種治療哺乳動(dòng)物丙型肝炎病毒感染的方法，即給予哺乳動(dòng)物病毒學(xué)上有效量的抗丙型肝炎的式Ⅰ化合物、或其治療上可接受的鹽或酯或上述組合物。
另一重要方面是涉及一種抑制丙型肝炎病毒復(fù)制的方法，即通過(guò)將該病毒暴露于丙型肝炎病毒的NS3蛋白酶抑制量的式Ⅰ化合物、或其治療上可接受的鹽或酯、或上述組合物。
還有一方面是涉及一種治療哺乳動(dòng)物丙型肝炎病毒感染的方法，即給該哺乳動(dòng)物使用病毒學(xué)上有效量的抗丙型肝炎的式Ⅰ化合物、或其治療可接受的鹽或酯。按照一種實(shí)施方式，本發(fā)明的藥物組合物含有另一種免疫調(diào)變劑。另一種免疫調(diào)變劑的實(shí)例包括但不限于α-,β-，和δ-干擾素。
優(yōu)選實(shí)施方式的詳細(xì)說(shuō)明定義除非另有說(shuō)明，本文使用了下述定義在各種情況中所提及的(R)或(S)用于表示基團(tuán)的構(gòu)型，例如式Ⅰ化合物的R1，這種表示是以該化合物而論、不是指單獨(dú)的基團(tuán)。
除了甘氨酸外，天然氨基酸包含手性碳原子。除非另有特別指明，優(yōu)選的是含L-構(gòu)型的天然氨基酸的化合物。但是，申請(qǐng)人考慮，在特殊情況時(shí)，式Ⅰ的一些氨基酸可以是D-或L-構(gòu)型、或者可以是D-和L-異構(gòu)體的混合物，包括外消旋混合物。
本文所用的標(biāo)記“P1、P2、P3”是指從肽類似物的C末端開(kāi)始向N末端延伸的氨基酸殘基的位置(即P1指從C末端起的位置1,P2指從C末端起的位置2，等)(見(jiàn)Berger A.和SchechterI.，倫敦皇家學(xué)會(huì)會(huì)報(bào)匯編(1970),B257,249-264)。
本申請(qǐng)中用的α-氨基酸的縮寫(xiě)列在表A中。
表A
本文所用的術(shù)語(yǔ)“1-氨基環(huán)丙基-羧酸”(Acca)是指下式化合物
本文所用的術(shù)語(yǔ)“叔-丁基甘氨酸”(Tbg)是指下式化合物
與氨基酸或氨基酸衍生物相關(guān)的術(shù)語(yǔ)“殘基”意指通過(guò)去除羧基的羥基和α-氨基的一個(gè)氫從相應(yīng)的α-氨基酸產(chǎn)生的基團(tuán)。例如，術(shù)語(yǔ)Gln、Ala、Gly、Ile、Arg、Asp、Phe、Ser、Leu、Cys、Asn、Sar和Tyr分別代表L-谷氨酰胺、L-丙氨酸、甘氨酸、L-異亮氨酸、L-精氨酸、L-天冬氨酸、L-苯丙氨酸、L-絲氨酸、L-亮氨酸、L-半胱氨酸、L-天冬酰胺、肌氨酸和L-酪氨酸。
與氨基酸或氨基酸殘基相關(guān)的術(shù)語(yǔ)“側(cè)鏈”意指與α-氨基酸的α-碳原子相連的基團(tuán)。例如，甘氨酸的R-基團(tuán)側(cè)鏈?zhǔn)菤?，?duì)丙氨酸的是甲基，纈氨酸的是異丙基。對(duì)于α-氨基酸的特異性R-基團(tuán)或側(cè)鏈，參考A.L.Lehninger的《生物化學(xué)》教科書(shū)(見(jiàn)第4章)。
本文的術(shù)語(yǔ)“鹵”意指選自溴基、氯基、氟基或碘基的鹵素基。
本文的術(shù)語(yǔ)“C1-6烷基”或“(低級(jí))烷基”，單獨(dú)或與另一個(gè)基團(tuán)結(jié)合，都是指含1-6個(gè)碳原子的無(wú)環(huán)、直鏈或支鏈烷基基團(tuán)，包括甲基、乙基、丙基、丁基、叔丁基、己基、1-甲基乙基、1-甲基丙基、2-甲基丙基、1,1-二甲基乙基。
本文的術(shù)語(yǔ)“C3-7環(huán)烷基”，單獨(dú)或與另一個(gè)基團(tuán)結(jié)合，都是指含3-7個(gè)碳原子的環(huán)烷基基團(tuán)，包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基。
該術(shù)語(yǔ)也包括“螺”-環(huán)基團(tuán)，如螺-環(huán)丙基或螺環(huán)丁基 術(shù)語(yǔ)“不飽和的環(huán)烷基”包括，例如環(huán)己烯基 本文的術(shù)語(yǔ)“C4-10(烷基環(huán)烷基)”意指含3-7個(gè)碳原子與烷基基團(tuán)相連的環(huán)烷基基團(tuán)，被連接的基團(tuán)含1-10個(gè)碳原子；例如，環(huán)丙基甲基、環(huán)戊基乙基、環(huán)己基甲基、環(huán)己基乙基或環(huán)庚基乙基。
本文的術(shù)語(yǔ)“C2-10鏈烯基”，單獨(dú)或與另一個(gè)基團(tuán)結(jié)合，都是指如上所述的含2-10個(gè)碳原子的烷基基團(tuán)，并且還含至少一個(gè)雙鍵。例如鏈烯基包括烯丙基和乙烯基。
本文的術(shù)語(yǔ)“C1-6烷?；保瑔为?dú)或與另一個(gè)基團(tuán)結(jié)合，都是指含1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈1-氧烷基基團(tuán)，包括甲?；⒁阴；?-氧丙基(丙?；?、2-甲基-1-氧丙基、1-氧己基，等等。
本文的術(shù)語(yǔ)“C1-6烷氧基”，單獨(dú)或與另一個(gè)基團(tuán)結(jié)合，都是指-O(C1-6烷基)基團(tuán)，其中烷基如上所述含1-6個(gè)碳原子。烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、1-甲基乙氧基、丁氧基和1,1-二甲基乙氧基。后面這一基團(tuán)通常叫做叔丁氧基。
本文的術(shù)語(yǔ)“C3-7環(huán)烷氧基”，單獨(dú)或與另一個(gè)基團(tuán)結(jié)合，都是指與一個(gè)氧原子連接的C3-7環(huán)烷基基團(tuán)，例如 本文的術(shù)語(yǔ)“C6或C10芳基”，單獨(dú)或與另一個(gè)基團(tuán)結(jié)合，都是指含6個(gè)碳原子的芳族單環(huán)基團(tuán)或含10個(gè)碳原子的芳族二環(huán)基團(tuán)。例如，芳基包括苯基、1-萘基或2-萘基。
本文的術(shù)語(yǔ)“C7-16芳烷基”，單獨(dú)或與另一個(gè)基團(tuán)結(jié)合，都是指上述與一個(gè)烷基連接的C6或C10芳基，其中烷基如上所述含1-6個(gè)碳原子。C7-16芳烷基包括例如芐基、丁基苯基和1-萘基甲基。
本文的術(shù)語(yǔ)“氨基芳烷基”，單獨(dú)或與另一個(gè)基團(tuán)結(jié)合，都是指被C7-16芳烷基取代的氨基基團(tuán)，例如，氨基芳烷基 本文的術(shù)語(yǔ)“(低級(jí)烷基)酰胺基”，單獨(dú)或與另一個(gè)基團(tuán)結(jié)合，都是指被C1-6烷基單取代的酰胺，例如 本文的術(shù)語(yǔ)“羧基(低級(jí))烷基”，單獨(dú)或與另一個(gè)基團(tuán)結(jié)合，都是指通過(guò)上述的(低級(jí))烷基連接的羧基(COOH)，包括例如酪酸。
本文的術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)”或“Het”，單獨(dú)或與另一個(gè)基團(tuán)結(jié)合，都是指通過(guò)從含1-4個(gè)雜原子的5-、6-或7-節(jié)飽和或不飽和(包括芳族)雜環(huán)中去掉一個(gè)氫而衍生的一價(jià)基團(tuán)，其中的雜原子選自氮、氧和硫。另外，本文的“Het”意指上述與一個(gè)或多個(gè)可以是雜環(huán)或任何其它環(huán)的另外的環(huán)稠合的雜環(huán)。適合的雜環(huán)例如包括吡咯烷、四氫呋喃、噻唑烷、吡咯、噻吩、二氮雜草、1H-咪唑、異噁唑、噻唑、四唑、哌啶、1,4-二噁烷、4-嗎啉、吡啶、嘧啶、噻唑[4,5-b]-吡啶、喹啉、或吲哚、或下列雜環(huán) 本文的術(shù)語(yǔ)“(低級(jí)烷基)-Het”，意指通過(guò)一種鏈或支鏈烷基連接的上述雜環(huán)基團(tuán)，其中烷基如上所述含1-6個(gè)碳原子。(低級(jí)烷基)-Het的例子包括 本文的術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的酯”，單獨(dú)或與另一個(gè)基團(tuán)結(jié)合，都是指式Ⅰ化合物的酯，其中分子的任何羧基官能團(tuán)、但優(yōu)選羧基末端，被烷氧基羰基官能團(tuán)代替 其中酯的R部分選自烷基(例如甲基、乙基、正丙基、叔丁基、正丁基)；烷氧基烷基(例如甲氧基甲基)；烷氧基酰基(例如乙氧基甲基)；芳烷基(例如芐基)；芳氧基烷基(例如苯氧基甲基)；芳基(例如苯基)，可用鹵素、C1-4烷基或C1-4烷氧基取代或不取代。其它適合的前藥酯可以在此引用的《前藥設(shè)計(jì)》，Bundgssrd,H.Ed.Elsevier(1985)中找到。當(dāng)這些藥學(xué)上可接受的酯注射在哺乳動(dòng)物中時(shí)它通常在體內(nèi)水解、并轉(zhuǎn)化為式Ⅰ化合物的酸形式。
關(guān)于上述酯，除非另有說(shuō)明，任何所出現(xiàn)的烷基部分優(yōu)選含1-16個(gè)碳原子，特別是1-6個(gè)碳原子。在這些酯中所出現(xiàn)的任何芳基部分優(yōu)選包含苯基。
尤其是這些酯可以是C1-16烷基酯，未取代的芐基酯或被至少一種鹵素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、硝基或三氟甲基取代的芐基酯。
本文的術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”包括那些從藥學(xué)上可接受的堿衍生的鹽。適合的堿例如包括膽堿、乙醇胺和1,2-二乙胺。Na+、K+和Ca++鹽也應(yīng)包含在本發(fā)明范圍內(nèi)(也參見(jiàn)“藥物鹽”，Birge,S.M.等，《(藥物科學(xué)雜志》(1977),66,1-19，將其在此引作參考)。優(yōu)選的實(shí)施方式包括在本發(fā)明范圍內(nèi)的是式(1)的化合物，其中優(yōu)選的是，B是C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可不被取代或被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷?；?、羥基、羥烷基、鹵素、鹵烷基、硝基、氰基、氰烷基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代；或B優(yōu)選的是Het或(低級(jí)烷基)-Het，這些均可不被取代或被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷?；?、羥基、羥烷基、鹵素、鹵烷基、硝基、氰基、氰烷基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代。
或者，B優(yōu)選的是R4-SO2，其中R4優(yōu)選為C1-6烷基；酰氨基；(低級(jí)烷基)酰氨基；C6或C10芳基、C7-14芳烷基或，這些均可被C1-6烷基取代或不取代。
或者，B優(yōu)選的是式R4-C(O)-的?；苌铮渲蠷4優(yōu)選的是(ⅰ)可被羧基、羥基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、或可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，兩者均可被羥基、羧基、(C1- 6烷氧基)羰基、可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低級(jí)烷基)酰胺基取代或不取代；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；(ⅴ)Het或(低級(jí)烷基)-Het，兩者均可不被取代或被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代。
或者，B優(yōu)選的是式R4-O-C(O)-的羧基，其中R4優(yōu)選的是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷酰基、羥基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、或可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低級(jí)烷基)酰胺基取代或不取代；
(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het或(低級(jí)烷基)-Het，兩者均可被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代。
或者，B優(yōu)選的是式R4-N(R5)-C(O)-的酰胺基，其中R4優(yōu)選的是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷?；?、羥基、C1-6烷氧基、可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低級(jí)烷基)酰胺基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低級(jí)烷基)酰胺基取代或不取代；(ⅲ)可任意被C1-3烷基單取代或二取代的氨基；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het或(低級(jí)烷基)-Het，兩者均可被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代R5是優(yōu)選H或甲基。
或者，B優(yōu)選的是式R4-NH-C(S)-的硫酰基，其中R4優(yōu)選的是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷酰基或C1-6烷氧基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、氨基或酰氨基取代或不取代。
更優(yōu)選的是，B是可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷酰基、羥基、羥烷基、鹵素、鹵烷基、硝基、氰基、氰烷基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代的C6或C10芳基，因此B的例子如下 或者B更優(yōu)選的是可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷?；?、羥基、鹵素、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代的Het，因此B的例子如下 或者，B更優(yōu)選的是式R4-SO2，其中R4優(yōu)選的是C6或C10芳基、C7-14芳烷基或Het，這些均可被C1-6烷基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基取代或不取代，因此B的例子如下 或者，B更優(yōu)選的是式R4-C(O)-的?；苌铮渲蠷4優(yōu)選的是(ⅰ)可被羧基、羥基、C1-6烷氧基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，兩者均可被羥基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基取代或不取代，因此B的例子如下 或R4優(yōu)選的是(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基取代或不取代，因此B的例子如下 或R4優(yōu)選的是(ⅴ)可被C1-6烷基、羥基、酰氨基取代或不取代的Het，因此B的例子如下 或者，B更優(yōu)選的是式R4-O-C(O)-的羧基，其中R4優(yōu)選的是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷?；⒘u基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代，因此B的例子如下 或R4優(yōu)選的是(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het或(低級(jí)烷基)-Het，兩者均可被C1-6烷基、羥基、酰氨基、或可被C1-6烷基不取代或單取代的氨基取代或不取代，因此B的例子如下 或者，B優(yōu)選的是式R4-N(R5)-C(O)-的酰胺基，其中R4優(yōu)選的是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷?；⒘u基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、酰氨基、低級(jí)烷基)酰胺基、可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；以及R5是優(yōu)選H或甲基，因此B的例子如下 或R4優(yōu)選的是(ⅲ)可任意被C1-3烷基單取代或二取代的氨基；因此B的例子如下 或R4優(yōu)選的是
(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、氨基、可被C1-6烷基取代或不取代的酰氨基取代或不取代；或(ⅴ)可被C1-6烷基、羥基、氨基、酰氨基取代或不取代的Het，因此B的例子如下 或者，B優(yōu)選的是式R4-NH-C(S)-的硫?；渲蠷4優(yōu)選的是(ⅰ)C1-10烷基；或(ⅱ)C3-7環(huán)烷基，因此B的例子如下 B更優(yōu)選的是式R4-NH-C(O)-的酰胺基，其中R4優(yōu)選的是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷?；?、羥基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、酰氨基、低級(jí)烷基)酰胺基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代； 或R4優(yōu)選的是(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、氨基或酰氨基取代或不取代，因此B的例子如下 甚至最優(yōu)選的是，B是叔丁氧基羧基(Boc)或 優(yōu)選的是，Y是H或甲基，更優(yōu)選的是，Y是H。
優(yōu)選的是，R3是C1-8烷基、C3-7環(huán)烷基、或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可被羥基、C1-6烷氧基、C1-6硫烷基、乙酰氨基、C6或C10芳基、或C7-16芳烷基取代或不取代，因此B的例子如下 更優(yōu)選的是，R3是叔丁基甘氨酸(Tbg)、Ile、Val、Chg或 的側(cè)鏈最優(yōu)選的是，R3是Tbg、Chg或Val的側(cè)鏈包括在本發(fā)明范圍內(nèi)的式1這些化合物中，優(yōu)選的是，R2是S-R20或O-R20，其中R20優(yōu)選的是C6或C10芳基、C7-16芳烷基、Het或CH2-Het，這些均可不被取代或被R21單取代、二取代或三取代，優(yōu)選的是，R21是C1-6烷基；C1-6烷氧基；低級(jí)硫烷基；可不被取代或被C1-6烷基、C6或C10芳基、C7-16芳烷基、Het或(低級(jí)烷基)-Het單取代或二取代的氨基或酰氨基；NO2；OH；鹵素；三氟甲基；羧基；C6或C10芳基、C7-16芳烷基或Het，所說(shuō)的芳基、芳烷基或Het均可被R22取代或不取代。更優(yōu)選的是，R21是C1-6烷基；C1-6烷氧基；氨基；二(低級(jí)烷基)氨基；(低級(jí)烷基)酰胺基；C6或C10芳基、或Het，所說(shuō)的芳基或Het均可被R22取代或不取代。
優(yōu)選的是，R22是C1-6烷基；C3-7環(huán)烷基；C1-6烷氧基；氨基；單-或二(低級(jí)烷基)氨基；(低級(jí)烷基)酰氨基；磺?；榛?；NO2；OH；鹵素；三氟甲基；羧基；或Het。更優(yōu)選的是，R22是C1-6烷基；C3-7環(huán)烷基；C1-6烷氧基；氨基；單-或二(低級(jí)烷基)氨基；(低級(jí)烷基)酰胺基；鹵素；三氟甲基；或Het。最優(yōu)選的是，R22是C1-6烷基；C1-6烷氧基；鹵素；可不被取代或被低級(jí)烷基單-或二-取代的氨基；酰氨基；(低級(jí)烷基)酰氨基；或Het。甚至最優(yōu)選的是，R22是甲基；乙基；異丙基；叔丁基；甲氧基；氯代基；可不被取代或被低級(jí)烷基單-或二-取代的氨基；酰氨基；(低級(jí)烷基)酰胺基；或低級(jí)烷基)2-噻唑基。
或者，R2是優(yōu)選地選自以下這組基 更優(yōu)選的是，R2是1-萘基甲氧基；2-萘基甲氧基；芐氧基；1-萘基氧基；2-萘基氧基；如上所述未取代、被R21單取代、或二取代的喹啉氧基。最優(yōu)選的是，R2是1-萘基甲氧基；或如上所述未取代、被R21單取代、或二取代的喹啉氧基，；因此R2的例子如下 還更優(yōu)選的是，R2是 更優(yōu)選的是，R21A是C1-6烷基例如異丙基、叔丁基或環(huán)己基；C1-6烷氧基例如甲氧基， 低級(jí)硫烷基例如 鹵素例如氯；未取代或被C1-6烷基取代的氨基；或C6或C10芳基，因此R21A是例如二甲基氨基，Ph-N(Me)-；未取代的C6或C10芳基、C7-16芳烷，例如苯基或(貼p20第5行)；或R21A更優(yōu)選的是被R22取代或不取代的Het其中R22C1-6烷基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、不被取代或被C1-6烷基取代的氨基、或Het，因此R21A是例如 最優(yōu)選的是，R21A是C6、C10芳基或Het，這些均可被如上所述的R22取代或不取代，因此R21A是例如 甚至最優(yōu)選的是，R2是 其中R22A優(yōu)選的是C1-6烷基(如甲基)；C1-6烷氧基(如甲氧基)；或鹵素(如氯)；R21B是優(yōu)選的是C1-6烷基、可被C1-6烷基單取代或不取代的氨基、酰氨基、或(低級(jí)烷基)酰胺基；而R21B是優(yōu)選的是C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、二(低級(jí)烷基)氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、NO2、OH、鹵素、三氟甲基、或羧基。更優(yōu)選的是，R21B是C1-6烷氧基、二(低級(jí)烷基)氨基。最優(yōu)選的是，R21B是甲氧基。
如上所述，式1化合物的P1片段是環(huán)丁基或環(huán)丙基環(huán)，兩者均可被R1取代或不取代。
優(yōu)選的是，R1是H、C1-3烷基、C3-5環(huán)烷基、或可被鹵素取代或不取代的C2-4烷烯基。更優(yōu)選的是，R1是乙基、乙烯基、環(huán)丙基、1或2溴乙基、或1或2-溴乙烯基。最優(yōu)選的是，R1是乙烯基。
當(dāng)R1不是H時(shí)，P1優(yōu)選的是下式的環(huán)丙基體系 其中C1和C2每個(gè)代表環(huán)丙基環(huán)的1和2位上的不對(duì)稱碳原子。盡管式1化合物的其它片段上有其它可能的不對(duì)稱中心，但這兩種不對(duì)稱中心的存在意味著式Ⅰ化合物可以以非對(duì)映異構(gòu)體的外消旋混合物的形式存在。如后面實(shí)施例所例證的，可以制備該外消旋混合物、然后將其分離成單個(gè)旋光異構(gòu)體，或者通過(guò)手性合成法制備這些旋光異構(gòu)體。
因此，式Ⅰ化合物可以在碳1位置上以一種非對(duì)映異構(gòu)體的外消旋混合物的形式存在，但其中碳2上的R1與位置1上的羰基以順式定向，以下列基團(tuán)表示 或者式Ⅰ化合物可以以一種非對(duì)映異構(gòu)體的外消旋混合物的形式存在，其中位置2上的R1與位置1上的羰基以反式定向，以下列基團(tuán)表示 接下來(lái)，可以將該外消旋混合物分離成單個(gè)光學(xué)異構(gòu)體。
本發(fā)明最有趣的發(fā)現(xiàn)是有關(guān)在碳2上加R1取代基以及P1片段的立體定向。該發(fā)現(xiàn)涉及碳1上的不對(duì)稱碳的構(gòu)型。一種優(yōu)選的實(shí)施方式是其中R1不是H和碳1R構(gòu)型。 更明確地說(shuō)，當(dāng)R1是以使C1具有R構(gòu)型的方式引入時(shí)，取代基R1在C2上的引入就會(huì)對(duì)位價(jià)有影響。例如，化合物901(1R,2S)和203(1R,2S)分別具有25有82nM的活性。當(dāng)與未取代的環(huán)丙基化合物111(475nM)比較時(shí)，可觀察到位價(jià)有很大提高。而且，正如化合物901和203所示，C1具有R構(gòu)型時(shí)，在環(huán)丙基環(huán)的碳2上取代基R1(如烷基或烷烯基)的這種構(gòu)型使HCV NS3蛋白酶的抑制作用進(jìn)一步提高，例如具有對(duì)羧基“順式”的R1的化合物比“反式”外消旋體的位價(jià)更大(25nM)。通過(guò)比較化合物801(1R,2S)和它相應(yīng)的(1S,2S)異構(gòu)體的位價(jià)分別為6nM和＞10μM，相差超過(guò)1500倍??！我們可以看到R與S構(gòu)型的不同效果。
因此，最優(yōu)選的化合物是具有下式絕對(duì)構(gòu)型中順式取代基R1和羰基的光學(xué)異構(gòu)體 例如，在R1是乙基的情況下，在1或2位上的不對(duì)稱碳原子具有R,R構(gòu)型。
包括在本發(fā)明范圍內(nèi)的式1化合是其中B是C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷?；?、羥基、羥烷基、鹵素、鹵烷基、硝基、氰基、氰烷基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；或Het或(低級(jí)烷基)-Het，這些均可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷?；?、羥基、羥烷基、鹵素、鹵烷基、硝基、氰基、氰烷基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代?；蛘連是R4-SO2，其中R4優(yōu)選為酰氨基；(低級(jí)烷基)酰胺基；C6或C10芳基、C7-14芳烷基或Het，這些均可被C1-6烷基取代或不取代?；蛘?br> B是式R4-C(O)-的?；苌?，其中R4是(ⅰ)C1-10烷基，可被羧基、羥基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，兩者均可被羥基、羧基、(C1- 6烷氧基)羰基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、或可不被取代或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；(ⅴ)Het或(低級(jí)烷基)-Het，兩者均可被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代，或者B是式R4-O-C(O)-的羧基，其中R4是(ⅰ)C1-10烷基，可被羧基、C1-6烷?；?、羥基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低級(jí)烷基)酰胺基取代或不取代；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het或(低級(jí)烷基)-Het，兩者均可或被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)氨基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的酰氨基取代或不取代。或者
B是式R4-N(R5)-C(O)-的酰胺基，其中R4是(ⅰ)C1-10烷基，可被羧基、C1-6烷?；?、羥基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅲ)可不被取代或被C1-3烷基單取代或二取代的氨基；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、或可不被取代或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het或(低級(jí)烷基)-Het，兩者均可被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；和R5是優(yōu)選H或甲基，或者B是式R4-NH-C(S)-的硫酰胺基，其中R4是(ⅰ)C1-10烷基，可被羧基、C1-6烷?；駽1-6烷氧基取代或不取代；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可不被取代或被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、氨基或酰氨基取代；Y是H或甲基；R3是C1-8烷基、C3-7環(huán)烷基、或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可被羥基、C1-6烷氧基、C1-6硫烷基、乙酰氨基、C6或C10芳基、或C7-16芳烷基取代或不取代；R2是S-R20或O-R20，其中R20優(yōu)選的是C6或C10芳基、C7-16芳烷基、Het或CH2-Het，這些均可不被取代或被R21單取代、二取代或三取代，其中R21是C1-6烷基；C1-6烷氧基；低級(jí)硫烷基；可不被取代或被C1-6烷基、C6或C10芳基、C7-16芳烷基、Het或(低級(jí)烷基)-Het單取代或二取代的氨基或酰氨基；NO2；OH；鹵素；三氟甲基；羧基；C6或C10芳基、C7-16芳烷基或Het，所說(shuō)的芳基、芳烷基或Het均可被R22取代或不取代，其中R22是C1-6烷基；C3-7環(huán)烷基；C1-6烷氧基；氨基；單-或二(低級(jí)烷基)氨基；(低級(jí)烷基)酰胺基；磺?；榛?；NO2；OH；鹵素；三氟甲基；羧基或Het；或者R2是優(yōu)選地選自以下這組基團(tuán) 或者R2是1-萘基甲氧基；2-萘基甲氧基；芐氧基；1-萘基氧基；2-萘基氧基；如上所述未取代、被R21單取代、或二取代的喹啉氧基；P1片段是環(huán)丁基或環(huán)丙基環(huán)，兩者均可被R1取代或不取代。其中R1是H、C1-3烷基、C3-5環(huán)烷基、或可被鹵素取代或不取代的C2-4烷烯基，并且所說(shuō)的在碳2上的R1對(duì)1位上的羰基是順式定向的，由以下基團(tuán)表示 包括在本發(fā)明范圍內(nèi)的式1化合物是其中B是C6或C10芳基，可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷?；⒘u基、羥烷基、鹵素、鹵烷基、硝基、氰基、氰烷基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；或者B是可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷?；?、羥基、鹵素、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代的Het；或者B是R4-SO2其中R4-是C6或C10芳基、C7-14芳烷基或Het，這些均可被C1-6烷基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基取代或不取代；或者B是式R4-C(O)-的?；苌?，其中R4是(ⅰ)C1-10烷基，可被羧基、羥基、C1-6烷氧基取代或不取代；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，兩者均可被羥基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基取代或不取代；或(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基取代或不取代；(ⅴ)Het，可被C1-6烷基、羥基、酰氨基或氨基取代或不取代，或者B是式R4-O-C(O)-的羧基，其中R4是(ⅰ)C1-10烷基，可被羧基、C1-6烷?；?、羥基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het或(低級(jí)烷基)-Het，兩者均可被C1-6烷基、羥基、酰氨基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代的氨基取代或不取代；或者B是式R4-N(R5)-C(O)-的酰胺基，其中R4是(ⅰ)C1-10烷基，可被羧基、C1-6烷?；⒘u基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可不被取代或被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代；和R5是H和甲基；或R4是
(ⅲ)可任意被C1-3烷基單取代或二取代的氨基；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、可被C1-6烷基取代或不取代的氨基或酰氨基取代或不取代；或(ⅴ)可被C1-6烷基、羥基、氨基或酰氨基取代或不取代的Het；或者B是式R4-NH-C(S)-的硫酰胺基，其中R4是(ⅰ)C1-10烷基；或(ⅱ)C3-7環(huán)烷基；或者B是式R4-NH-C(O)-的酰胺基，其中R4是(ⅰ)C1-10烷基，可被羧基、C1-6烷?；?、羥基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可不被取代或被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代；( ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、氨基或酰氨基取代或不取代；Y是H；R3是叔丁基甘氨酸(Tbg)、Ile、Val、Chg的側(cè)鏈或 R2是1-萘基甲氧基；或被如上所述的R21未取代、單取代或二取代的喹啉氧基；或者R2是 其中R21A是C1-6烷基；C1-6烷氧基；C6、C10的芳基或Het；低級(jí)硫烷基；鹵素；可被C1-6烷基單取代或不取代的氨基；或C6、C10的芳基、C7-16芳烷基或Het，均可被R22取代或不取代，其中R22是C1-6烷基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基或Het；P1是環(huán)丙基環(huán)其中碳1具有R構(gòu)型， 以及R1是乙基、乙烯基、環(huán)丙基、1或2-溴乙基或1或2-溴乙烯基。包括在本發(fā)明范圍內(nèi)的式1化合物還有是其中B是叔丁氧基羰基(Boc)或 R3是叔丁基甘氨酸(Tbg)、Chg或Val、的側(cè)鏈；R2是 其中R22A是C1-6烷基(如甲基)；C1-6烷氧基(如甲氧基)；或鹵素(如氯)；R21B是C1-6烷基、可被C1-6烷基單取代或不取代的氨基、酰氨基、或(低級(jí)烷基)酰胺基；而R21B是C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、二(低級(jí)烷基)氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、NO2、OH、鹵素、三氟甲基、或羧基；以及P1是
最后，包含在本發(fā)明范圍內(nèi)的是表1-10所列出的每個(gè)式Ⅰ化合物。
根據(jù)一種可替代的實(shí)施方式，本發(fā)明的藥物組合物還可以包括另一種抗HCV劑。抗HCV劑的例子包括α或β干擾素、病毒唑和金剛胺。
根據(jù)另一種可替代的實(shí)施方式，本發(fā)明的藥物組合物還可包括HCV蛋白酶的其它抑制劑。
還根據(jù)另一種可替代的實(shí)施方式，本發(fā)明的藥物組合物還可包括HCV生存期中的其它目標(biāo)的抑制劑，包括但不限于，例如解旋酶、聚合酶、金屬蛋白酶或內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)(IRES)。
本發(fā)明的藥物組合物可以口服、非腸道或通過(guò)一種植入的貯主給藥。優(yōu)選口服或注射給藥。本發(fā)明的藥物組合物也可含有常規(guī)的藥學(xué)上可接受的無(wú)毒載體、輔助劑或賦形劑。在某些情況中，可以用藥學(xué)上可接受的酸、堿或緩沖液調(diào)節(jié)制劑的pH，以增強(qiáng)所配制的化合物或其傳送形式的穩(wěn)定性。本文所用的術(shù)語(yǔ)非腸道包括皮下、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑液內(nèi)、胸骨內(nèi)、鞘內(nèi)和損害內(nèi)注射或輸注技術(shù)。
本藥物組合物可以是無(wú)菌的可注射制劑形式，例如，無(wú)菌的可注射含水懸浮液或油狀懸浮液?？筛鶕?jù)本領(lǐng)域已知的技術(shù)、使用適合的分散劑或潤(rùn)濕劑(例如吐溫80)和懸浮劑制備該懸浮液。
本發(fā)明的藥物組合物可以以任何口服可接受的劑型進(jìn)行口服給藥，它包括但不限于，膠囊、片劑以及含水懸浮液和溶液。在口服使用的片劑中，通常使用的載體包括乳糖和玉米淀粉。也可以有代表性地加入諸如硬脂酸鎂之類的潤(rùn)滑劑。對(duì)于膠囊形式的口服給藥，有用的稀釋劑包括乳糖和干玉米淀粉。當(dāng)將含水懸浮液口服給藥時(shí)，可將活性成分與乳化劑和懸浮液組合使用。如需要，可以加入某些甜味劑和/或調(diào)味劑和/或著色劑。
用于上述制劑和組合物的其它適合的賦形劑或載體可以在標(biāo)準(zhǔn)的藥物教科書(shū)中找到，例如在《藥學(xué)科學(xué)和實(shí)踐》第19版，Mack出版公司，Easton,Penn.,(1995)的“Remington的藥物科學(xué)”中。
劑量為大約0.01-100mg/kg體重/天的本文所述的蛋白酶抑制劑化合物可用于預(yù)防和治療HCV介導(dǎo)性疾病的單一療法，其劑量?jī)?yōu)選約0.5-75mg/kg體重/天。典型的是，本發(fā)明藥物組合物可以每天給藥約1-5次，或者連續(xù)輸注。這種給藥方法可用于慢性或急性治療?？膳c載體物質(zhì)結(jié)合而產(chǎn)生單一劑型的活性成分的用量將根據(jù)所治療的患者和給藥的特殊方式的不同而改變。典型的制劑包含約5％-約95％的活性化合物(w/w)。這種制劑優(yōu)選包含約20％-約80％活性化合物。
正如本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所共知的，可能需要較上述劑量更低或更高的用量。對(duì)任何特殊患者的特定劑量和治療方案是根據(jù)各種因素而決定的，該因素包括所用的特定化合物的活性、年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、給藥時(shí)間、排泄速度、聯(lián)合用藥、感染的嚴(yán)重程度和過(guò)程、患者對(duì)感染的處置和主治醫(yī)生的判斷。一般而言，基本上以小于肽的最佳劑量的小劑量開(kāi)始治療。此后，按小增量增大劑量直至在該情況下達(dá)到最佳效果。總之，最合乎需要的是將該化合物以能達(dá)到抗病毒效果而不產(chǎn)生任何有害或造成傷害的副作用的濃度水平進(jìn)行給藥。
當(dāng)本發(fā)明組合物包括式Ⅰ化合物和一種或多種附加治療劑或預(yù)防劑的組合時(shí)，該化合物和附加劑兩者應(yīng)大約占單一治療方案中的正常給予劑量的10一100％，更優(yōu)選約10-80％。
當(dāng)將這些化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽與藥學(xué)上可接受的載體一同進(jìn)行配制時(shí)，所得到的組合物可以對(duì)諸如人的哺乳動(dòng)物體內(nèi)給藥，以抑制HCV NS3蛋白酶或者治療或預(yù)防HCV病毒感染。也可聯(lián)合使用本發(fā)明化合物與包括但不限于下列試劑達(dá)到這種治療免疫調(diào)節(jié)劑、例如α-、β-、γ-干擾素；其它抗病毒劑，例如病毒唑、金剛胺；其它HCV NS3蛋白酶抑制劑；HCV生存期的其它目標(biāo)的抑制劑，它包括但不限于解旋酶、聚合酶、金屬蛋白、或內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)(IRES)、或其組合。也可將附加劑與本發(fā)明化合物組合以形成單一劑型?；蛘邔⑦@些附加劑作為復(fù)合劑型的一部分單獨(dú)給哺乳動(dòng)物服用。
因此，本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式是提供通過(guò)服用式Ⅰ化合物(其中取代基如上所述)而抑制哺乳動(dòng)物的HCV NS3蛋白酶活性的方法。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，這些方法用于降低哺乳動(dòng)物的HCV NS3蛋白酶活性。如果藥物組合物僅包括本發(fā)明化合物作為活性成分，則這些方法可另外包括下列步驟給所述哺乳動(dòng)物服用選自下列的試劑免疫調(diào)節(jié)劑，抗病毒劑，HCV蛋白酶抑制劑，或HCV生存期的其它目標(biāo)的抑制劑，例如解旋酶、聚合酶、金屬蛋白、或IRES。這些附加劑可以在給本發(fā)明化合物之前、同時(shí)、或之后服用。
在一種替代的優(yōu)選實(shí)施方式中，這些方法用于抑制哺乳動(dòng)物的病毒復(fù)制。這類方法用于治療或預(yù)防HCV疾病。如果藥物組合物僅包括本發(fā)明化合物作為活性成分，則這些方法可另外包括下列步驟給所述哺乳動(dòng)物服用選自下列的試劑免疫調(diào)節(jié)劑，抗病毒劑，HCV蛋白酶抑制劑，或HCV生存期的其它目標(biāo)的抑制劑?？梢栽诮o予本發(fā)明化合物之前、同時(shí)、或之后服用這些附加劑。
前面所述化合物也可用作實(shí)驗(yàn)室試劑。本發(fā)明化合物也可用于治療或預(yù)防物質(zhì)的病毒污染，因而降低與這些物質(zhì)(如血液、組織、外科儀器和覆蓋物、實(shí)驗(yàn)室儀器和覆蓋物、以及血液收集裝置和物質(zhì))接觸的實(shí)驗(yàn)室人員或醫(yī)療人員或患者感染病毒的危險(xiǎn)。
前面所述化合物也可用作研究試劑。也可將本發(fā)明化合物用作陽(yáng)性對(duì)照以驗(yàn)證基于細(xì)胞的代用品測(cè)定或者體外或體內(nèi)病毒復(fù)制測(cè)定。方法根據(jù)下列合成方案舉例說(shuō)明的方法合成本發(fā)明化合物(其中CPG為羧基保護(hù)基團(tuán)、APG為氨基保護(hù)基團(tuán))合成方案Ⅰ 簡(jiǎn)言之，P1、P2、和P3可通過(guò)公知的肽偶聯(lián)技術(shù)連接。P1、P2、和P3基團(tuán)可以以任何順序連接在一起，只要最終化合物與式Ⅰ的肽一致。例如，P3可與P2-P1相連；P1可與P3-P2相連。
通常，通過(guò)使用上述方法、脫保護(hù)N-末端殘基的α氨基、并通過(guò)肽連接偶聯(lián)下一個(gè)適合的N-保護(hù)性氨基酸的未保護(hù)羧基，從而使肽延長(zhǎng)。重復(fù)這種脫保護(hù)和偶聯(lián)過(guò)程直至得到所需的序列。這種偶聯(lián)可以用如合成方案Ⅰ所述的分段方式中的氨基酸組分來(lái)進(jìn)行，或通過(guò)在此引用的Merrifield，《美國(guó)化學(xué)會(huì)雜志》(1963),85,2149-2154中最初所述的方法的固相肽合成來(lái)進(jìn)行。
可以用標(biāo)準(zhǔn)的偶聯(lián)方法進(jìn)行兩個(gè)氨基酸、一個(gè)氨基酸和一個(gè)肽、或兩個(gè)肽片段之間的偶聯(lián)，這些標(biāo)準(zhǔn)的偶聯(lián)方法例如疊氮化物法、混合碳酸-羧酸酐(氯甲酸異丁酯)法、碳二亞胺(二環(huán)己基碳二亞胺、二異丙基碳二亞胺、或水溶性碳二亞胺)法、活性酯(對(duì)硝基苯基酯、N-羥基琥珀亞氨基酯)法、Woodward試劑K方法、羰基二咪唑法、磷試劑法或氧化-還原法。通過(guò)加入1-羥基苯并三唑使其中一些方法(尤其是碳二亞胺法)增強(qiáng)。這些偶聯(lián)反應(yīng)可以在溶液(液相)或固相中進(jìn)行。
更清楚地說(shuō)，這種偶聯(lián)步驟包括在偶聯(lián)劑存在下一個(gè)反應(yīng)物的游離羧基與另一個(gè)反應(yīng)物的游離氨基的脫水偶聯(lián)、以形成連接酰胺鍵。這些偶聯(lián)劑的說(shuō)明可在有關(guān)肽化學(xué)的普通教科書(shū)中找到，例如，M.Bodanszky，“肽化學(xué)”，第二次修訂版，Springer-Verlag，柏林，德國(guó)，(1993)。適合的偶聯(lián)劑例如有N,N’-二環(huán)己基碳二亞胺、N,N’-二環(huán)己基碳二亞胺中的1-羥基苯并三唑或N-乙基-N’-[(3-二甲基氨基)丙基]碳二亞胺。非常實(shí)際且有用的偶聯(lián)劑是單獨(dú)形式或存在于1-羥基苯并三唑中的從市售可得到的(苯并三唑-1-基氧)三-(二甲基氨基)六氟磷酸鹽。另一種非常實(shí)際且有用的偶聯(lián)劑是市售可得到的2-(1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基四氟硼酸脲。還有一個(gè)非常實(shí)際且有用的偶聯(lián)劑是市售可得到的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基六氟磷酸脲。
偶聯(lián)反應(yīng)是在惰性溶劑中進(jìn)行的，該惰性溶劑例如二氯甲烷、乙腈或二甲基甲酰胺。加入過(guò)量的叔胺例如二異丙基乙基胺、N-甲基嗎啉或N-甲基吡咯烷以保持反應(yīng)混合物pH約為8。反應(yīng)溫度通常是在0℃-50℃的范圍內(nèi)，反應(yīng)時(shí)間通常為15分鐘至24小時(shí)。
當(dāng)使用固相合成法時(shí)，將C末端羧酸與不溶性載體(通常為聚苯乙烯)相連。這些不溶性載體包括與羧基反應(yīng)形成一種鍵的載體，這種鍵對(duì)于延長(zhǎng)情況是穩(wěn)定的、但此后易于裂解。這些載體例如有氯或溴甲基樹(shù)脂、羥甲基樹(shù)脂、三苯基甲基樹(shù)脂和2-甲基-4-烷氧基-芐基醇樹(shù)脂。
這些樹(shù)脂中有許多是市售可得到的、并已經(jīng)加入了所需的C末端氨基酸?；蛘?，可以按照Wang,S.-S.，《美國(guó)化學(xué)會(huì)雜志》(1973),95,1328；Atherton,E.,Shepard,R.C.“固相肽合成；一種實(shí)用方法”牛津IRL出版社，(1989)；131-148中的已知方法將氨基酸加在固體載體上。除了上述以外，其它肽合成方法在Stewart和Young，“固相肽合成”，第二版，Pierce化學(xué)公司，Rockford,IL(1984)；Gross,Meienhofer,Udenfriend，編輯，“肽分析、合成、生物學(xué)”，卷1、2、3、5和9,Academic出版社，紐約，(1980-1987)；Bodansky等，“肽合成實(shí)踐”Springer-Verlag，紐約(1984)中有描述，這些公開(kāi)出版物均為本發(fā)明參考文獻(xiàn)。
在偶聯(lián)反應(yīng)過(guò)程中通常必須保護(hù)組分氨基酸的功能基團(tuán)、以避免形成不必要的鍵?？梢允褂玫谋Ｗo(hù)基團(tuán)列在Greene，“有機(jī)化學(xué)的保護(hù)性基團(tuán)”，JohnWiley和Sons，紐約(1981)和“肽分析、合成、生物學(xué)”卷3,Academic出版社，紐約，(1981)中，這些公開(kāi)出版物均為本發(fā)明參考文獻(xiàn)。
通常將C末端殘基的α羧基保護(hù)成一種可裂解形成羧酸的酯(CPG)?？梢允褂玫谋Ｗo(hù)性基團(tuán)包括1)烷基酯，例如甲基酯、三甲基甲硅烷基乙基酯和叔丁基酯，2)芳烷基酯，例如芐基酯和取代的芐基酯，或3)可以通過(guò)弱堿處理或輕度還原方法而被裂解的酯，例如三氯乙基和苯甲酰甲基酯。
必須保護(hù)與生長(zhǎng)肽鏈偶聯(lián)的每個(gè)氨基酸的α氨基(APG)。可以使用任何本領(lǐng)域已知的保護(hù)性基團(tuán)。這些基團(tuán)例如包括1)?；缂柞；?、三氟乙酰基、鄰苯二?；?、和對(duì)甲苯磺酰基；2)芳族氨基甲酸酯基團(tuán)，例如芐氧基羰基(Cbz或Z)和取代的芐氧基羰基，以及9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)；3)脂族氨基甲酸酯基團(tuán)，例如叔丁氧基羰基(Boc)，乙氧基羰基，二異丙基甲基羰基，和烯丙基羰基；4)環(huán)烷基氨基甲酸酯基團(tuán)，例如環(huán)戊氧基羰基和金剛烷氧基羰基；5)烷基，例如三苯基甲基和芐基；6)三烷基甲硅烷基，例如三甲基甲硅烷基；和7)含諸如苯基硫代羰基和二硫琥珀?；幕鶊F(tuán)的巰基。優(yōu)選的α氨基保護(hù)基團(tuán)是Boc或Fmoc。適合用于肽合成保護(hù)的許多氨基酸衍生物均可從市售獲得。
新近所加的氨基酸殘基的α氨基保護(hù)基團(tuán)在下一個(gè)氨基酸偶聯(lián)之前被裂解。當(dāng)使用Boc基團(tuán)時(shí)，選擇的方法是凈三氟乙酸或二氯甲烷中的三氟乙酸、或二噁烷或乙酸乙酯中的HCl。然后在偶聯(lián)之前或在偶聯(lián)的當(dāng)時(shí)用堿性溶液例如含水緩沖液、或二氯甲烷中的叔胺或乙腈或二甲基甲酰胺中和所得到的銨鹽。當(dāng)使用Fmoc基團(tuán)時(shí)，選擇的試劑是二甲基甲酰胺中的哌啶或取代的哌啶，但是也可使用任何仲胺。脫保護(hù)是在0℃-室溫(RT)的溫度下進(jìn)行的，通常是20-22℃。
具有側(cè)鏈官能度的任何氨基酸必須在肽制備過(guò)程中用任何上述基團(tuán)進(jìn)行保護(hù)。本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員知道用于這些側(cè)鏈官能度的適合的保護(hù)基團(tuán)的選擇和使用是根據(jù)氨基酸和肽中的其它保護(hù)性基團(tuán)的存在而決定的。對(duì)這些保護(hù)性基團(tuán)的選擇的重要性在于該基團(tuán)在脫保護(hù)和α氨基的偶聯(lián)過(guò)程中必須不被去除。
例如，當(dāng)Boc用作α氨基保護(hù)性基團(tuán)，下列側(cè)鏈保護(hù)性基團(tuán)是適合的可用于保護(hù)諸如Lys和Arg的氨基酸的氨基側(cè)鏈的對(duì)甲苯磺?；?甲苯磺?；?部分；可用于保護(hù)半胱氨酸的含硫化物側(cè)鏈的乙酰氨基甲基、芐基(Bn)、或叔丁基磺?；糠?；可用于保護(hù)絲氨酸、蘇氨酸或羥基脯氨酸的含羥基側(cè)鏈的芐基(Bn)醚；以及可用于保護(hù)含天門(mén)冬氨酸和谷氨酸側(cè)鏈的羧基的芐基酯。
當(dāng)選擇Fmoc用于α-氨基保護(hù)時(shí)，通?；谑宥』谋Ｗo(hù)性基團(tuán)是可以接受的。例如，可用于賴氨酸和精氨酸的Boc，用于絲氨酸、蘇氨酸或羥基脯氨酸的叔丁基醚；和用于天門(mén)冬氨酸和谷氨酸的叔丁基酯。三苯基甲基(三苯甲基)部分可用于保護(hù)半胱氨酸的含硫化物側(cè)鏈。
一旦完成了肽的延長(zhǎng)，則去除所有保護(hù)性基團(tuán)。當(dāng)使用液相合成時(shí)，在選擇保護(hù)性基團(tuán)所采取的無(wú)論什么方法中，應(yīng)將保護(hù)性基團(tuán)去除。這些方法對(duì)于本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是公知的。
當(dāng)使用固相合成時(shí)，肽從樹(shù)脂裂解、同時(shí)伴有保護(hù)性基團(tuán)的去除。當(dāng)Boc保護(hù)方法用于合成時(shí)，用0℃的含HF的無(wú)水添加劑例如二甲硫、茴香醚、茴香硫醚或?qū)追舆M(jìn)行處理是用于從樹(shù)脂裂解肽的優(yōu)選方法。肽的裂解也可通過(guò)其它諸如三氟甲烷磺酸/三氟乙酸混合物的酸性試劑而實(shí)現(xiàn)，如果使用Fmoc保護(hù)方法，則用較早所述的試劑使N末端Fmoc基團(tuán)裂解。用三氟乙酸溶液和各種添加劑如茴香醚等使其它保護(hù)性基團(tuán)和肽從樹(shù)脂裂解。
1．封端基團(tuán)B的合成各種不同的封端基團(tuán)B按以下方式引入1.1)當(dāng)B是芳基、芳烷基時(shí)通過(guò)以下三種方法之一制備芳基化的氨基酸a)在氟-硝基芳基部分直接親核取代 簡(jiǎn)單地說(shuō)，4-氟-3-硝基三氟苯甲酸(a)在堿如氫氧化鉀存在下在80℃下與L-氨基酸(b)反應(yīng)，產(chǎn)生所需的N-芳基氨基酸(c)；b)按照Ma et.al.(J.Am.Chem.Soc.1998,120,12459)所述的方式進(jìn)行銅催化偶聯(lián) 簡(jiǎn)單地說(shuō)，溴-4-氟苯(d)在堿如氫氧化鉀和催化量的銅存在下在90℃下與L-氨基酸(b)反應(yīng)，產(chǎn)生所需的N-芳基氨基酸(e)；或c)三氟芐酸酯(triflate)用苯胺親核取代 簡(jiǎn)單地說(shuō)，鄰甲氧基苯胺(f)在堿如2,6-二甲基吡啶存在下在90℃下與三氟芐酸酯(triflate)(g)反應(yīng),得到芐基酯(h)。用10％Pd/C氫化，產(chǎn)生所需的N-芳基氨基酸(i)。1.2)當(dāng)B是氨基噻唑衍生物時(shí) a)按照Keamey et al.,1998,J.Org.Chem,63,196，所述的方法制備的Fmoc-N=C=S與保護(hù)的P3殘余片段或全肽或肽片段反應(yīng)產(chǎn)生硫脲。
b)該硫脲衍生物與合適的溴銅反應(yīng)產(chǎn)生相應(yīng)的噻唑衍生物。
1.3)當(dāng)B是R4-C(O)-,R4-S(O)2時(shí)保護(hù)的P3殘余片段或全肽或肽片段分別與合適的?；然蚧酋Ｂ扰己希撐镔|(zhì)可從市場(chǎng)上買(mǎi)到或用現(xiàn)有技術(shù)中已知的方法合成。
1.4)當(dāng)B是R4O-C(O)-時(shí)保護(hù)的P3殘余片段或全肽或肽片段與合適的氯甲酸酯或磺酰氯偶合，該磺酰氯可從市場(chǎng)上買(mǎi)到用現(xiàn)有技術(shù)中已知的方法合成。至于Boc-衍生物，使用(Boc)2O。
例如 a)用光氣處理氯丁醇產(chǎn)生相應(yīng)的苯甲酸酯。
b)該苯甲酸酯用合適的NH2-三肽在堿如三乙基胺存在下進(jìn)行處理得到環(huán)丁基氨基甲酸酯。
1.5)當(dāng)B是R4-N(R5)-C(O)-，或R4-NH-C(S)-時(shí)保護(hù)的P3殘余片段或全肽或肽片段如SynLett.Feb 1995；(2)；142-144所述用光氣處理接著用胺處理。
2．P2部分的合成
2.1合成母體A)合成鹵芳基甲烷衍生物按照K.N.Campbell et al.,JAmer.Chem.Soc.,(1946),68,1844中所述的方法制備鹵代甲基-8-喹啉Ⅱd。
合成方案Ⅱ 簡(jiǎn)言之，通過(guò)相應(yīng)的酰基鹵化物Ⅱb與諸如氫化鋁鋰的還原劑的還原反應(yīng)將8-喹啉羧酸Ⅱa轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的醇Ⅱc。用適當(dāng)?shù)臍潲u酸處理醇Ⅱb得到所需的鹵衍生物Ⅱd。這種方法的一個(gè)特殊實(shí)施方式見(jiàn)實(shí)施例1。
B)芳基醇衍生物的合成根據(jù)Giardina等(《美國(guó)化學(xué)會(huì)雜志》，(1997),40,1794-1807)所述的方法制備2-苯基-4-羥基喹啉衍生物Ⅲc。
合成方案Ⅲ R22和R21B=烷基、OH、SH、鹵、NH2或NO2。
將苯甲?；阴０?Ⅲa)與適合的苯胺(Ⅲb)縮合、并用聚磷酸使所得到的亞胺環(huán)化得到相應(yīng)的2-苯基-4-羥基喹啉(111c)。這種方法的一個(gè)特定實(shí)施方式見(jiàn)實(shí)施例2。
或者，該方法也可用一種不同的方式進(jìn)行苯甲酰乙基酯(Ⅲa)在酸存在下與合適的苯胺(Ⅲb)縮合，所得亞胺在260-280℃下環(huán)化得到相應(yīng)的2-苯基-4-羥基喹啉(Ⅲc)。該方法特定的實(shí)施方式如實(shí)施例3(化合物3e)所述。2.2．P2的合成A)4-取代的脯氨酸(其中R2通過(guò)碳原子與環(huán)相連)(立體化學(xué)如下所示)的合成 根據(jù)J.Ezquerra等(《四面體》，(1993),38,8665-8678)和C.Pedregal等(《四面體快報(bào)》，(1994),35,2053-2056)所述的方法按合成方案Ⅳ所示。進(jìn)行。
合成方案Ⅳ 簡(jiǎn)言之，將Boc-焦谷氨酸保護(hù)為芐基酯。用諸如二異丙基酰胺鋰的強(qiáng)堿處理、然后加入烷化劑(Br-R20或I-R20)，在酰胺的還原反應(yīng)和酯的脫保護(hù)后，得到所需的化合物Ⅳe。
B)O-芳烷基化4-(R)-羥基脯氨酸的合成 可用以下不同方法進(jìn)行。
1)當(dāng)R20為芳基、Het、芳烷基、或(低級(jí)烷基)-Het時(shí)，根據(jù)E.M.Smith等(《醫(yī)用化學(xué)雜志》(1988),31,875-885)所述的方法進(jìn)行該合成過(guò)程。簡(jiǎn)言之，用如氫化鈉或K-tBuO的堿處理市售獲得的Boc-4(R)-羥基脯氨酸，所得到的醇化物與鹵-R20(Br-R20,I-R20，等)反應(yīng)生成所需的化合物。這種方法的一個(gè)特定實(shí)施方式見(jiàn)實(shí)施例4,5和7。
2)或者，當(dāng)R20為芳基、Het時(shí)，這些化合物也可通過(guò)Mitsunobu反應(yīng)(Mitsunobu(1981)，合成，1月，1-28；Rano等(1995)，《四面體快報(bào)》36(22),3779-3792；Krchnak等，(1995)，《四面體快報(bào)》36(5),62193-6196；Richter等，(1994),Tet.快報(bào)35(27),4705-4706)來(lái)制備。簡(jiǎn)言之，即在三苯基膦和二乙基偶氮二羧酸鹽(DEAD)的存在下用適當(dāng)?shù)姆蓟蓟蛄虼继幚鞡oc-4(S)-羥基脯氨酸甲基酯，將所得到的酯水解成酸。這種方法的特定實(shí)施方式見(jiàn)實(shí)施例6和8。
合成方案Ⅴ 或者，可在固相中進(jìn)行Mitsunobu反應(yīng)(圖解Ⅴ)。將等分樹(shù)脂結(jié)合化合物(Ⅴa)加入396型合成器(高級(jí)Chem Tech)的96孔分塊(block)中，再加入各種芳基醇或硫醇和適當(dāng)?shù)脑噭?。培養(yǎng)后，洗滌、干燥每個(gè)樹(shù)脂結(jié)合產(chǎn)品(Ⅴb)，并使其從樹(shù)脂裂解。
Suzuki反應(yīng)(Miyaura等，(1981)，《工業(yè)合成》11,513；Sato等，(1989)，化學(xué)快報(bào)》1405；Watanabe等，(1992),Syn快報(bào)，207；Takayuki等，(1993)，《有機(jī)化學(xué)雜志》58,2201；Frenette等，(1994),Tet.快報(bào)35(49),9177-9180；Guiles等，(1996)，《有機(jī)化學(xué)雜志》61,5169-5171)也可用于進(jìn)一步使芳基取代基官能化。
3．P1部分的合成3.1 合成2-取代的1-氨基環(huán)丙基羧酸的4位上可能的異構(gòu)體根據(jù)合成方案Ⅵ進(jìn)行合成。
合成方案Ⅵ a)簡(jiǎn)言之，即在堿條件下使二保護(hù)性丙二酸鹽Ⅵa和1,2-二鹵烷烴Ⅵb或環(huán)硫酸鹽Ⅵc(根據(jù)K.Burgess和Chun-Yen KE(合成，(1996),1463-1467的方法合成的)反應(yīng)得到二酯Ⅵd。
b)進(jìn)行較少受阻酯的區(qū)域選擇性水解得到酸Ⅵe。
c)將這種酸Ⅵe進(jìn)行Curtius重排得到1-氨基環(huán)丙基羧酸衍生物Ⅵf的外消旋混合物，其中R1與羧基順式定向。這種合成方法的特定實(shí)施方式見(jiàn)實(shí)施例9。
d,e)或者，從酸Ⅵe選擇性形成的酯與適合的鹵化物(P*Cl)或醇(P*OH)形成二酯Ⅵg，其中P*與P酯的選擇性水解是相容的。P酯的水解得到酸Ⅵh。
f)Ⅵh的Curtius重排得到1-氨基環(huán)丙基羧酸衍生物Ⅵi的外消旋混合物，其中R1基團(tuán)與羧基反向。這種合成方法的特定實(shí)施方式見(jiàn)實(shí)施例14。
另一種制備衍生物Ⅵf(當(dāng)R1為乙烯基并與羧基以順式定向時(shí))的合成法如下所述。
合成方案Ⅶ 用堿中的1,4-二鹵丁烯Ⅶb處理市售獲得的亞胺Ⅶa，所得的亞胺Ⅶc水解后得到與羧基同向的丙烯基取代基的Ⅶd，這種方法見(jiàn)實(shí)施例15和19。
所有上述碳1(Ⅵe和Ⅶd)上的對(duì)映異構(gòu)混合物可通過(guò)以下進(jìn)行拆分1)酶分離(實(shí)施例13,17和20)；2)用手性酸結(jié)晶(實(shí)施例18)；或3)化學(xué)衍生(實(shí)施例10)。
拆分后，可按實(shí)施例11所示進(jìn)行絕對(duì)立體化學(xué)的判定。
可以以同樣的方法對(duì)碳1上的對(duì)映異構(gòu)混合物進(jìn)行拆分和立體化學(xué)判定，該混合物中C2上的取代基與羧基反向(Ⅵi)。3.2)合成1-氨基環(huán)丁基羧酸按照“Kavin Douglas；Ramaligam Kondareddiar；Woodard Ronald,Synth.Commun.(1985),15(4),267-72”所述的方法合成1,1-氨基環(huán)丁烷羧酸。
反應(yīng)式Ⅷ 簡(jiǎn)單地說(shuō)，在Ⅷb存在下用堿處理化合物Ⅷa得到相應(yīng)的環(huán)丁基衍生物Ⅷc。式Ⅷc的異氰酸酯和酯在酸性條件下水解產(chǎn)生1-氨基-環(huán)丁基羧酸的鹽酸鹽Ⅷd。后者的羧酸在甲醇的HCl溶液中酯化。實(shí)施例21中說(shuō)明了這種酯化的具體實(shí)施方式
。3.3合成2-取代的1-氨基環(huán)丁基羧酸 a)保護(hù)的甘氨酸酯衍生物如亞胺Ⅸa在合適的堿如金屬氫化物、氫氧化物或烷氧化物的存在下與高烯丙基親電子試劑Ⅸb進(jìn)行烷基化反應(yīng)。在Ⅸb中有用的離去基團(tuán)包括鹵素(X=Cl、Br、I)或磺酸酯(甲苯磺酸酯、二甲苯磺酸酯或三甲苯磺酸酯)。Ⅸb中的烯丙醇官能團(tuán)用本領(lǐng)域已知的羥基保護(hù)基(如乙酸酯、甲硅烷基、乙醛)保護(hù)。
b)在第二步，將一烷基化衍生物Ⅸc的羥基官能團(tuán)去保護(hù)并轉(zhuǎn)化成合適的親電子試劑官能團(tuán)X，如上述的化合物Ⅸb。
c)通過(guò)用堿(金屬氫化物、烷氧化物)處理，接著用含水無(wú)機(jī)酸，水解以及用弱堿中和的方法使Ⅸd環(huán)化成環(huán)丁烷衍生物Ⅸe。在此階段，可用閃蒸色譜法分離Ⅸe的順式和反式-異構(gòu)體。
d)Ⅸe的雙鍵在標(biāo)準(zhǔn)條件下也可以加氫，生成相應(yīng)的飽和衍生物Ⅸf。這一步可有可無(wú)。
本發(fā)明還包括式(Ⅰ)的肽類似物的制備方法，其中P1是取代的氨基環(huán)丙基羧酸殘余部分。該方法包括的步驟有·將選自APG-P3-P2或APG-P2的肽用下式的P1中間體進(jìn)行偶合， 其中R1是C1-6烷基、環(huán)烷基或C2-6鏈烯基，這些均可被鹵素取代或不取代，CPG是羧基保護(hù)基，以及APG是氨基保護(hù)基，P3和P2如上定義。
本發(fā)明還包括制備1)或2)的方法1)絲氨酸蛋白酶抑制劑肽類似物，或2)HCV NS3蛋白酶抑制劑肽類似物。該方法包括的步驟有·將(適當(dāng)保護(hù)的)氨基、肽或肽片段與下式的P1中間體偶合， 其中R1是C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基或C2-6鏈烯基，這些均可被鹵素取代或不取代，而CPG是羧基保護(hù)基。
本發(fā)明因此包括制備1)蛋白酶抑制劑肽類似物或2)絲氨酸蛋白酶抑制劑肽類似物的方法。該方法包括的步驟有·將(適當(dāng)保護(hù)的)氨基酸、肽或肽片段與下式的中間體偶合， 其中CPG是羧基保護(hù)基。
本發(fā)明還包括下式的P1中間體的用途， 其中R1是C1-6烷基、環(huán)烷基或C2-6鏈烯基，這些均可被鹵素取代或不取代，該中間體用于制備1)絲氨酸蛋白酶抑制劑肽類似物，或2)HCV NS3蛋白酶抑制劑肽類似物。
本發(fā)明還包括下式中間體的用途， 其中CPG是羧基保護(hù)基，該中間體用于制備1)蛋白酶抑制劑肽類似物，或2)絲氨酸蛋白酶抑制劑肽類似物。
本發(fā)明還包括以下各式P1中間體用于制備上面定義的式1化合物的用途， 其中R1是C1-6烷基、環(huán)烷基或C2-6鏈烯基，這些均可被鹵素取代或不取代。
最后，本發(fā)明還包括下式脯氨酸類似物的用途， 其中R21A是C1-6烷基；C1-6烷氧基；低級(jí)硫烷基；鹵素；可被C1-6烷基取代或不取代的氨基；C6、C10芳基、C7-16芳烷基或Het，所述的芳基、芳烷基或Het均可被R22取代或不取代其中R22是C1-6烷基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、或Her，以及R21B是C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、二(低級(jí)烷基)氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、NO2、OH、鹵素、三氟甲基、或羧基；1)絲氨酸蛋白酶抑制劑肽類似物，2)HCV NS3蛋白酶抑制劑肽類似物，或3)式1的肽類似物的合成方法均如上述定義。
實(shí)施例通過(guò)下列非限定性實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步舉例說(shuō)明。
將溫度設(shè)為攝氏溫度。除非另有說(shuō)明，溶液百分比表示重量與體積關(guān)系，溶液比例表示體積與體積關(guān)系。在Bruker 400MHz分光計(jì)上記錄核磁共振(NMR)光譜；將化學(xué)位移(δ)記作部分/百萬(wàn)。根據(jù)Still的閃光色譜技術(shù)(W.C.Still等，《有機(jī)化學(xué)雜志》，(1978),43,2923)在硅膠(SiO2)上進(jìn)行閃光色譜法。
用于本實(shí)施例的縮寫(xiě)包括Bn芐基；Boc叔丁氧基羰基{Me3COC(O)}；BSA牛血清白蛋白；CHAPS:3-[(3-氯酰氨基丙基)-二甲基銨]-1-丙烷磺酸鹽；DBU:1,8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯；CH2Cl2=DCM二氯甲烷；DEAD二乙基偶氮二羧酸鹽；DIAD二異丙基偶氮二羧酸鹽；DIEA二異丙基乙基胺；DIPEA二異丙基乙胺；DMAP二甲基氨基吡啶；DDC:1,3-二環(huán)己基碳二亞胺；DME:1,2-二甲氧乙烷；DMF二甲基甲酰胺；DMSO二甲基亞砜；DTT二硫蘇糖醇或蘇-1,4-二巰基-2,3-丁二醇；DPPA二苯基磷?；B氮化物；EDTA乙二胺四乙酸；Et乙基；EtOH乙醇；EtOAc乙酸乙酯；Et2O二乙醚；HATU:[O-7-(氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基六氟磷酸脲]；HPLC高效液相層析；MS質(zhì)譜(MALDI-TOF基質(zhì)輔助性激光解吸(disorption)電離-飛行時(shí)間，F(xiàn)AB快速原子轟擊)；LAH氫化鋁鋰；Me甲基；MeOH甲醇；MES:(2-{N-嗎啉代}乙烷-磺酸)；NaHMDS雙(三甲基甲硅烷基)酰胺鈉；NMM:N-甲基嗎啉；NMP:N-甲基吡咯烷；Pr丙基；Succ:3-羧基丙酰基(propanoyl)；PNA:4-硝基苯基氨基或?qū)ο趸桨罚籘BAF叔-丁基氟化物銨；TBTU:2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基四氟硼酸脲；TCEP鹽酸三(2-羧乙基)膦；TFA三氟乙酸；THF四氫呋喃；TIS三異丙基硅烷；TLC薄層色譜法；TMSE三甲基甲硅烷基乙基；Tris/HCl鹽酸三(羥甲基)氨基甲烷，P2結(jié)構(gòu)單元實(shí)施例1溴甲基-8-喹啉(1)的合成 向市售獲得的8-喹啉羧酸(2.5g,14.4mmol)中加入純亞硫酰氯化物(10ml,144mmol)中。在過(guò)量的亞硫酰氯化物在減壓下被蒸餾之前將此混合物在80℃加熱1小時(shí)。將在80℃加熱了1小時(shí)的無(wú)水乙醇(15mL)在真空濃縮之前加入所得到的呈褐色固體中。殘余物分配在EtOAc和飽和含水NaHCO3之間，并將有機(jī)相干燥(MgSO4)、過(guò)濾和濃縮得到呈褐色的油(2.8g)。將該物質(zhì)(約14.4mmol)在35分鐘內(nèi)滴加到冷卻至-60℃的LAH(0.76g,20.2mmol)/Et2O懸浮液中，反應(yīng)完成之前，將反應(yīng)混合物在1.5小時(shí)內(nèi)緩慢升溫至-35℃。在30分鐘內(nèi)緩慢加入MgSO4·10H2O然后加濕THF使該反應(yīng)停止。將混合物分配在Et2O和10％含水NaHCO3之間。并將有機(jī)相干燥(MgSO4)、過(guò)濾和濃縮得到相應(yīng)的醇呈黃色的固體(2.31g,2步80％)。將該醇(2.3g,11.44mmol)溶解在AcOH/HBr(20Ml,Aldrich的30％溶液)中并在70℃加熱2.5小時(shí)。將混合物在真空下濃縮至干燥，分配在EtOAc(100mL)和飽和含水NaHCO3之間，然后干燥(MgSO4)、過(guò)濾和濃縮得到呈褐色固體(2.54g,100％)的所需化合物(1A)。實(shí)施例22-苯基-4-羥基喹啉(2)的合成 將市售可獲得的苯甲酰乙酸乙酯(6.00g,31.2mmol)于85℃(封閉管)在75mL 30％的NH4OH中加熱2小時(shí)。冷卻后的固體過(guò)濾并在水中回流2小時(shí)。用CH2Cl2萃取該溶液三次。合并有機(jī)層、經(jīng)MgSO4干燥、過(guò)濾并濃縮。將黃色殘余物在硅膠上進(jìn)行閃光色譜分析、用EtOAc∶己烷(3∶7)洗脫、得到1.60g呈白色固體的相應(yīng)酰胺，得率31％。
使用Dean-Stark裝置用苯胺(143mg,1.53mmol)和甲苯(10mL)中的鹽酸苯胺(10mg,0.08mmol)回流此酰胺(250mg,1.53mmol)。濃縮該溶液得到棕色油，將這種油與多磷酸(2g)混合并在135℃加熱20分鐘。將該反應(yīng)混合物注入水中并用5M NaOH調(diào)節(jié)pH為8。用乙酸乙酯萃取該含水懸浮液兩次。有機(jī)層合并、用鹽水洗滌、經(jīng)MgSO4干燥、過(guò)濾并濃縮。將殘余物在硅膠上進(jìn)行閃光色譜分析、用乙酸乙酯中的3％MeOH洗脫、得到67mg 2-苯基-4-羥基喹啉(2)，得率20％。1HNMR(DMSO-d6)δ8.11(d,J=7Hz,1H),7.86-7.83(m,2H),7.77(d,J=8Hz,1H),7.68(dd,J=8,7Hz,1H),7.61-7.58(m,3H),7.35(dd,J=8,7Hz,1H),6.34(s,1H).實(shí)施例34-羥基-2-苯基-7-甲氧喹啉(3)的合成 4-羥基-2-苯基-7-甲氧喹啉(e)將苯甲?；宜嵋阴?b)(100.0g,0.52mol)、間茴香胺(a)(128.1g,1.04mmol)和4N HCl/二噁烷(5.2mL)的甲苯(1.0L)溶液在Dean-Stark裝置中回流6.25小時(shí)。用含水10％HCl(2×300mL)、1N NaOH(2×300mL)、H2O(300mL)和鹽水(15mL)依次洗滌被冷卻的甲苯溶液。將甲苯相干燥(MgSO4)、過(guò)濾并在減壓下濃縮得到1.2:1.0的酯c和酰胺d混合物(144.6g,45％/38％粗制得率)，它是一種深棕色油。將該粗的油加熱80分鐘至280℃、同時(shí)蒸餾所產(chǎn)生的乙醇。用CH2Cl2(200mL)研制所得到的冷卻暗色固體。過(guò)濾懸浮液、用CH2Cl2洗滌所得到的固體，得到淺褐色固體e(22.6g,由a得到17％):1HNMR(DMSO-d6)δ8.00(d,J=9.0Hz,1H),7.81-7.82(m,2H),7.57-7.59(m,3H),7.20(d,J=2.2Hz,1H),6.94(dd,J=9.0,2.2Hz,1H),6.26(s,1H),3.87(s,3H).4-氯-2-苯基-7-甲氧喹啉(3)將e(8.31g,33.1mmol)的POCl3(90mL)懸浮液加熱回流2小時(shí)(加熱后得到的清亮溶液)。在減壓下濃縮該反應(yīng)混合物。將殘余物分配在1NNaOH(加入放熱的10N NaOH以保持高pH)和EtOAc(500mL)之間。用H2O(100mL)和鹽水(100mL)洗滌有機(jī)層、然后干燥(MgSO4)、過(guò)濾和在減壓下濃縮得到淺黃色固體3(8.60g,96％):1H NMR(DMSO-d6)δ8.28-8.30(m,2H),8.20(s,1H),8.10(d,J=9.1Hz,1H),7.54-7.58(m,3H),7.52(d,J=2.5Hz,1H),7.38(dd,J=9.1,2.5Hz,1H),3.98(s,3H).該反應(yīng)重復(fù)三次，總是得到96-98％的得率，這明顯高于《醫(yī)用化學(xué)雜志》1997,40,1794中所報(bào)道的68％得率。實(shí)施例4Boc-4(R)-(萘-1-基甲氧基)脯氨酸(4)的合成 將市售的Boc-4(R)-羥基脯氨酸(5.00g,21.6mmol)溶解在THF(100mL)中并冷卻至0℃。在10分鐘內(nèi)分批添加氫化鈉(60％油懸浮液，1.85g,45.4mmol)，將懸浮液在室溫?cái)嚢?小時(shí)。然后，加入1-(溴甲基)萘(8.00g,36.2mmol)(如E.A.Dixon等，《(加拿大化學(xué)雜志》(1981),59,2629-2641所述的制備)、將混合物回流加熱18小時(shí)。將混合物注入水(300mL)中、用己烷洗滌。用10％含水HCl酸化含水層、并用乙酸乙酯提取兩次。合并有機(jī)層并用鹽水洗滌、干燥(MgSO4)、過(guò)濾并濃縮。將殘余物通過(guò)閃蒸色譜法(49∶49∶2己烷∶乙酸乙酯∶乙酸)純化得到為無(wú)色油的標(biāo)題化合物(4.51g,56％得率)。1HNMR(DMSO-d6)顯示存在兩種旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體
δ8.05(m,1H),7.94(m,1H),7.29(d,J=14Hz,1H),7.55-7.45(m,4H),4.96(m,2H),4.26(br.s,1H),4.12(dd,J=J=8Hz,1H),3.54-3.42(m,2H),2.45-2.34(m,1H),2.07-1.98(m,1H)1.36(s,(3/9)9H),1.34(s,(6/9)9H).實(shí)施例5Boc-4(R)-(8-喹啉-甲氧基)脯氨酸(5)的合成 將無(wú)水THF(20mL)中的Boc-4(R)-羥基脯氨酸(1.96g,8.5mmol)加入THF(100mL)中的NaH(1.4g,60％油，34mmol)懸浮液中。在將實(shí)施例1的甲基-8-喹啉(2.54g,11.44mmol)加入THF(30mL)之前攪拌該混合物30分鐘。在70℃加熱該反應(yīng)混合物(5小時(shí))后用濕THF仔細(xì)去除過(guò)量NaH。真空濃縮反應(yīng)物、并將所得到的物質(zhì)溶解在EtOAc和水中。分離堿性含水相并在用EtOAc(150mL)提取之前用10％含水HCl酸化至pH約為5。將有機(jī)相干燥(MgSO4)、過(guò)濾并濃縮得到一種棕色油。通過(guò)閃蒸色譜法(洗脫液10％MeOH/CHCl3)純化得到為淺黃色固體的所需化合物(2.73g,86％得率)。HPLC(97.5％)；1HNMR(DMSO-d6)顯示比例為6:4的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體數(shù) δ12-11.4(bs,1H),8.92(2×d,J=4.14 and 4.14Hz,1H),8.38(2×d,J=8.27 and 8.27Hz,1H),7.91(d,J=7.94Hz,1H),7.77(d,J=7.0Hz,1H),7.63-7.54(m,2H),5.14(2×s,2H),4.32-4.29(m,1H),4.14-4.07(m,1H),3.52-3.44(m,2H),2.43-2.27(m,1H),2.13-2.04(m,1H),1.36 and 1.34(2×s,9H).實(shí)施例6Boc-4(R)-(7-氯喹啉-4-氧)脯氨酸(6)的制備
將市售可獲得的Boc-4(S)-羥基脯氨酸甲基酯(500mg,2.04mmol)和7-氯-4-羥基喹啉(440mg,2.45mmol)置于0℃的干THF(10mL)中。加入三苯基膦(641mg,2.95mmol),然后緩慢加入DIAD(642mg,2.45mmol)。將混合物在室溫?cái)嚢?0小時(shí)。然后，濃縮該反應(yīng)混合物，將其溶解在乙酸乙酯中，用1N HCl提取三次。用Na2CO3堿化含水相、并用乙酸乙酯提取兩次?；旌嫌袡C(jī)層、經(jīng)MgSO4干燥、過(guò)濾并濃縮得到一種黃色油。將這種油通過(guò)閃蒸色譜法純化得到498mg為白色固體的化合物(6)甲基酯，58％得率。
用甲醇(4mL)中的1M含水氫氧化鈉(1.7Ml,1.7mmol)在0℃水解這種甲基酯(400mg,0.986mmol)3小時(shí)。濃縮該溶液以去除甲醇，并用1M含水HCl中和。濃縮懸浮液至干、并溶解在甲醇(20mL)中，過(guò)濾掉鹽、濃縮濾液得到387mg定量得率的所需化合物(6)，為白色固體。
1HNMR(DMSO-d6)(約1∶1旋光異構(gòu)體的混合物)1HNMR(DMSO-d6)(ca.1∶1 mixture of rotamers)δ8.74(d,J=5Hz,1H),8.13-8.09(m,1H),7.99 and 7.98(s,1H),7.58(d,J=9Hz,1H),7.02(d,J=5Hz,1H),5.26-5.20(m,1H),4.10-4.01(m,1H),3.81-3.72(m,1H),3.59(dd,J=12,10Hz,1H),2.41-2.31(m,2H),1.34 and 1.31(s,9H).實(shí)施例7Boc-4(R)-(2-苯基-7-甲氧基喹啉-4-氧)脯氨酸(7)的合成 Boc-4(R)-(2-苯基-7-甲氧基喹啉-4-氧)脯氨酸(7)將叔丁氧化鉀(8.16g,72.7mmol)在15分鐘內(nèi)按分小批加入保持在25℃的DMSO(83mL)中的Boc-4(R)-羥基脯氨酸(6.73g,29.1mmol)中，將混合物在25℃攪拌1.5小時(shí)。將氯-2-苯基-7-甲氧基喹啉3(8.61g,32.0mmol)分4批加入該反應(yīng)混合物中(在15分鐘內(nèi))。將該反應(yīng)混合物在25℃攪拌19小時(shí)。將所得到的懸浮液注入水(650mL)中、并用Et2O(3×150mL)洗滌混合物以去除過(guò)量的氯喹啉(后來(lái)發(fā)現(xiàn)EtOAc更有效)。用含水1N HCl(約1.5當(dāng)量、38mL，需要43.6mL)酸化含水層至pH為4-5。通過(guò)過(guò)濾回收被沉淀的白色固體。在減壓下經(jīng)P2O5干燥濕的固體得到為淺褐色固體的脯氨酸衍生物7(12.6g,91％，含2.3％w/w DMSO):1HNMR(DMSO-d6)δ(2∶1旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的混合物)8.27(d,J=7.0Hz,2H),8.00,7.98(2d,J=9.2,-9.2Hz,1H),7.48-7.56(m,3H),7.45,7.43(2s,1H),7.39(d,J=2.5Hz,1H),7.17(dd,J=9.2,2.5Hz,1H),5.53-5.59(m,1H),4.34-4.41(m,1H),3.93(s,3H),3.76(broads,2H),2.63-2.73(m,1H),2.32-2.43(m,1H),1.36,1.33(2s,9H).實(shí)施例8合成Boc-4(R)-(2-苯基-6-硝基喹啉-4-氧)脯氨酸(8) 將二乙基偶氮二羧酸酯(0.77ml,4.89mmol)滴加到攪拌的三苯基膦(1.28g,4.88mmol)在15ml四氫呋喃的0℃下的溶液中。在氮?dú)庀聰嚢?0分鐘后，將5ml四氫呋喃中加Boc-4(S)-羥基脯氨酸甲酯(1.00g,4.08mmol),接著加市售的6-硝基-2-苯基-4-喹啉醇(1.30g,4.88mmol)在10ml相同溶劑的懸浮液。將該紅色的混合物在0℃和室溫下攪拌15分鐘。真空蒸發(fā)溶劑。剩下的油在醋酸乙酯中稀釋并用碳酸氫鈉洗兩次，一次用水，一次用鹽水。干燥(MgSO4)有機(jī)層，過(guò)濾，真空蒸發(fā)。殘留物經(jīng)硅膠色譜70∶30 v/v，己烷-醋酸乙酯)得到所需的甲基酯，為淡黃色固體(1.70g,85％)。1HNMR(CDCl3)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體≡3∶7δ9.03(d,J=2.5Hz,1H),8.46(dd,J=9,2.5Hz,1H),8.18(d,J=9Hz,1H),8.14-8.07(m,2H),7.59-7.50(m,3H),7.19(s,1H),5.39-5.30(m,1H),4.67(t,J=8Hz,0.3H),4.61(1,J=8Hz,0.7H),4.07-4.01(m,2H),3.81(s,3H),2.89-2.73(m,1H),2.55-2.47(m,1H),1.49(s,2.7H),1.45(s,6.3H).向上述甲基酯(503mg,1.02mmol)在THF∶H2O(10∶4ml)的混合物中加氫氧化鋰單水合物(85mg,2.05mmol)。加2ml的MeOH以便得到均勻的溶液。在30分鐘內(nèi)形成白色沉淀。在室溫下將所得的懸浮液再攪拌6小時(shí)。該反應(yīng)混合物用10％檸檬酸的水溶液稀釋并用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用MgSO4干燥，過(guò)濾，真空蒸發(fā)，得到416mg(85％)所需的酸(8)1HNMR(DMSO-d6):δ8.92-8.87(m,1H),8.47(dd,J=9,3Hz,1H),8.38-8.32(m,2H),8.19(d,J=9Hz,1H),7.77(s,1H),7.62-7.55(m,3H),5.73-5.66(m,1H),4.41(t,J=8Hz,1H),3.89-3.76(m,2H),2.83-2.72(m,1H),2.47-2.35(m,1H),1.38(s,9H).實(shí)施例9(1R,2R)/(1S,2R)1-氨基-2-乙基環(huán)丙基羧酸的混合物的合成 a)將二叔丁基丙二酸鹽(20.0g,92.47mmol)和1,2-二溴丁烷(30.0g,138.93mmol)依次加入50％NaOH水溶液(185mL H2O中含92.4g)中的芐基三乙基氯化銨(21.0g,92.19mmol)中。在室溫下用力攪拌該反應(yīng)混合物過(guò)夜，然后加入冰和水的混合物。用CH2Cl2(3x)提取粗制品，接著用水(3x)和鹽水洗滌。將有機(jī)層干燥(MgSO4)、過(guò)濾并濃縮。將殘余物通過(guò)閃蒸色譜分析(7cm，己烷中含2-4％Et2O)得到所需環(huán)丙烷衍生物9c(19.1g,70.7mmol,76％得率)。
1HNMR(CDCl3)δ1.78-1.70(m,1H),1.47(s,9H),1.46(s,9H),1.44-1.39(m,1H),1.26-1.64(m,3H),1.02(1,3H,J=7.6Hz).b)在0℃干醚(100mL)中的叔丁氧化鉀(6.71g,59.79mmol,4.4當(dāng)量)懸浮液中加入水(270μL,15.00mmol,1.1當(dāng)量)。5分鐘后，將醚(10mL)中的二酯5c(3.675g,13.59mmol)加入懸浮液中。在室溫下將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜，然后加入冰和水的混合物并用醚(3x)洗滌。在0℃用10％檸檬酸水溶液酸化含水層、并用AcOEt(3x)提取。用水(2x)和鹽水連續(xù)洗滌混合的有機(jī)層。常規(guī)處理(Na2SO4，過(guò)濾，濃縮)后，分離出為淺黃色油的所需酸9d(1.86g,8.68mmol,64％得率)1HNMR(CDCl3)δ2.09-2.01(m,1H),1.98(dd,J=3.8,9.2Hz,1H),1.81-1.70(m,1H),1.66(dd,J=3.0,J=8.2Hz,1H),1.63-1.56(m,1H),1.51(s,9H),1.0(t,J=7.3Hz,3H).c)在干苯(32mL)中的酸5d(2.017g,9.414mmol)中依次加入Et3N(1.50mL,10.76mmol,1.14當(dāng)量)和DPPA(2.20mL,10.21mmol,1.08當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物回流3.5小時(shí)，然后加入2-三甲基甲硅烷基乙醇(2.70mL,18.84mmol,2.0當(dāng)量)。使回流保持過(guò)夜，然后用Et2O稀釋反應(yīng)混合物，并依次用10％檸檬酸水溶液、水、飽和含水NaHCO3水(2x)和鹽水連續(xù)洗滌。常規(guī)處理(MgSO4，過(guò)濾，濃縮)后，將殘余物通過(guò)閃蒸色譜(5cm,10％AcOEt-己烷)純化得到為淺黃色油的所需氨基甲酸酯9e(2.60g,7.88mmol,84％得率)。MS(FAB)330(MH+)；1HNMR(CDCl3)δ5.1(bs,1H),4.18-4.13(m,2H),1.68-1.38(m,4H),1.45(s,9H),1.24-1.18(m,1H),1.00-0.96(m,5H),0.03(s,9H).d)在氨基甲酸酯5e(258mg,0.783mmol)中加入THF(940ìL,0.94mmol,0.8當(dāng)量)中的1.0M TBAF溶液。4.5小時(shí)后，另外加入(626ìL,0.63mmol,0.8當(dāng)量)1.0M TBAF。在室溫下將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜，回流30分鐘，然后用AcOEt稀釋。用水(2x)和鹽水連續(xù)洗滌該溶液。常規(guī)處理(MgSO4，過(guò)濾和濃縮)后，分離出(84mg,0.453mmol,58％得率)為淺黃色液體的所需胺9f。1HNMR(CDCl3)δ1.96(bs,2H),1.60-1.40(m,2H),1.47(s,9H),1.31-1.20(m,1H),1.14(dd,J=4.1,7.3Hz,1H),1.02(dd,J=4.1,9.2Hz,1H),0.94(t,J=7.3Hz,3H).實(shí)施例10叔丁基-(1R,2R)/(1S,2R)1-氨基-2-乙基環(huán)丙基羧酸鹽(來(lái)自實(shí)施例9)的化學(xué)拆分 用1M TBAF/THF(26mL)回流處理由實(shí)施例5得到的混合物9e(8.50g,25.86mmol)45分鐘。用AcOEt稀釋冷卻的反應(yīng)混合物，用水(3x)和鹽水(1x)洗滌，然后干燥(MgSO4)、過(guò)濾并蒸發(fā)得到為淺黃色油的游離胺。將該游離胺溶解在無(wú)水CH2Cl2(120mL)中，依次加入NMM(8.5mL,77.57mmol)、化合物4(實(shí)施例4)(10.08g,27.15mmol)和HATU(11.79g,31.03mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜，然后按前面所述逐步進(jìn)行。通過(guò)閃蒸色譜(洗脫液-己烷∶Et2O；25∶75)分離粗制非對(duì)映異構(gòu)體混合物得到白色泡沫(4.42g,64％理論得率)的二肽10a(較少極性洗脫斑)和為乳白色泡沫(4g,57％理論得率)的10b(較多極性洗脫斑)。此時(shí)分離出兩種異構(gòu)體，但絕對(duì)的立體化學(xué)仍是未知的。實(shí)施例11通過(guò)與已知的叔丁基(1R-氨基-2R-乙基環(huán)丙基)羧酸鹽的相互關(guān)系確定化合物10a和10b的絕對(duì)立體化學(xué) Montreal大學(xué)的A.Charette教授提供了具有所示絕對(duì)立體化學(xué)的化合物11a，它是通過(guò)X線結(jié)晶學(xué)(《(美國(guó)化學(xué)會(huì)雜志》1995,117,12721)確定的。將化合物11a(13.2mg,0.046mmol)溶解在1M HCl/EtOAc(240ìL)中，并攪拌約48小時(shí)。蒸發(fā)該混合物至干得到呈淺黃色膏的化合物11b，再按實(shí)施例10所述、使用CH2Cl2中的NMM(20.3ìL,0.185mmol)和HATU(21.1mg,0.056mmol)將該化合物與化合物4(18mg,0.049mmol)偶聯(lián)。通過(guò)閃蒸色譜(洗脫液-己烷Et2O；50∶50)純化該粗制物質(zhì)得到二肽11c為一種油(7.7mg,31％)。通過(guò)TLC、HPLC和NMR對(duì)比，發(fā)現(xiàn)二肽11c與實(shí)施例10所得到的較低極性化合物10a是相同的，由此確定10a的絕對(duì)立體化學(xué)為(1R,2R)。實(shí)施例12(1R,2R)/(1S,2R)1-Boc-氨基-2-乙基環(huán)丙基羧酸(12a)的制備 將實(shí)施例9的氨基甲酸酯9e(2.6g,7.88mmol)在TFA中于0℃攪拌40分鐘。然后濃縮該混合物，用THF(10mL)稀釋。加入NaOH水溶液(700mg,8.8mL水中含17.5mmol)、再加入(Boc)2O(2.06g,9.44mmol,1.2當(dāng)量)的THF(13mL)溶液。在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物過(guò)夜(需要時(shí)通過(guò)加入10％NaOH水溶液保持pH為8)，然后用水稀釋，用Et2O(3X)洗滌，再在0℃用10％檸檬酸水溶液酸化。用EtOAc(3x)提取含水層，再用水(2x)和鹽水連續(xù)洗滌。常規(guī)處理(MgSO4,過(guò)濾和濃縮)后，分離出所需的Boc-保護(hù)性氨基酸(12a)(788mg,3.44mmol,44％得率)。1H NMR(CDCl3)δ5.18(bs,1H),1.64-1.58(m,2H),1.55-1.42(m,2H),1.45(s,9H),1.32-1.25(m,1H),0.99(t,3H,J=7.3Hz).(1R,2R)/(1S,2R)1-Boc-氨基-2-乙基環(huán)丙基羧酸甲基酯(12b)的制備 將Boc衍生物12a(0.30g,1.31mmol)溶解在Et2O(10mL)中，并在0℃用剛剛制備的Et2O中的二偶氮甲烷處理，直至留下黃色稍過(guò)量的二偶氮甲烷。在室溫下攪拌20分鐘后，濃縮該反應(yīng)混合物至干得到為澄清無(wú)色油的12b(0.32g,100％)。1HNMR(CDCl3)δ5.1(bs,1H),3.71(s,3H),1.62-1.57(m,2H),1.55(s,9H),1.53-1.43(m,1H),1.28-1.21(m,2H),0.95(t,J=7.3Hz,3H).實(shí)施例13甲基(1R,2R)/(1S,2R)Boc-1-氨基-2-乙基環(huán)丙基羧酸鹽的酶促拆分 *使用ChiralcelOD-H柱的HPLC分析
**也可接受的其它酯(如Et)a)將實(shí)施例10的(1R,2R)/(1S,2R)1-Boc-氨基-2-乙基環(huán)丙基羧酸甲基酯(0.31g,1.27mmol)的對(duì)映異構(gòu)體混合物溶解在丙酮(3mL)中，然后用水(7mL)稀釋，同時(shí)快速攪拌。在加入阿卡酶(Alcalase)[2.4L從NovoNordisk工業(yè)公司提取](300mg)之前用0.05M含水NaOH將溶液的pH調(diào)至7.5。培養(yǎng)過(guò)程中用NaOH穩(wěn)定pH，設(shè)立pH穩(wěn)定計(jì)以監(jiān)控NaOH溶液的加入。40小時(shí)后用EtOAc和水(含5mL飽和NaCO3)稀釋混合物，并分離該相。用10％含水HCl酸化含水相、并用EtOAc提取、干燥(MgSO4)、過(guò)濾并濃縮得到酸13a(48.5mg)。使用實(shí)施例10和11所述的相互關(guān)系確定絕對(duì)立體化學(xué)。b)用Et2O中的二偶氮甲烷處理等分酸13a，得到甲基酯，然后通過(guò)使用手性柱[ChiralcelOD-H,2.5％異丙醇/己烷，等度]的HPLC分析顯示(S,R)異構(gòu)體的比例為51∶1。實(shí)施例14(1R,2S)/(1S,2S)1-氨基-2-乙基環(huán)丙基羧酸的合成 從實(shí)施例9所述的酸9d起始c)向CH3CN(25mL)中的9d(1.023g,4.77mmol)中依次加入DBU(860μL,5.75mmol,1.2當(dāng)量)和烯丙基溴化物(620μL,7.16mmol,1.5當(dāng)量)。在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物4小時(shí)，然后濃縮。用Et2O稀釋殘余物，并依次用10％檸檬酸水溶液(2X)、水、飽和含水NaHCO3、水(2x)和鹽水洗滌。常規(guī)處理(MgSO4，過(guò)濾和濃縮)后，分離出為無(wú)色油的所需酯14a(1.106g,3.35mmol,91％得率)。MS(FAB)255(MH+)；1HNMR(CDCl3)δ5.96-5.86(m,1H),5.37-5.22(m,2H),4.70-4.65(m,1H),4.57-4.52(m,1H),1.87-1.79(m,1H),1.47(s,9H),1.45-1.40(m,1H),1.33-1.24(m,3H),1.03(t,J=7.3Hz,3H).d)將TFA(5mL)加入室溫的干CH2Cl2(5mL)中的酯14a(1.106g,4.349mmol)中。攪拌該反應(yīng)混合物1小時(shí),然后濃縮得到14b(854mg,4.308mmol,99％得率)。MS(FAB)199(MH+)；1HNMR(CDCl3)δ5.99-5.79(m,1H),5.40-5.30(m,2H),4.71-4.62(m,2H),2.22-2.00(m,2H),1.95-1.88(m,1H),1.84-1.57(m,2H),0.98(t,J=7.3Hz,3H).e)在干苯(14.8mL)中的酸14b(853mg,4.30mmol)中依次加入Et3N(684μL,4.91mmol,1.14當(dāng)量)和DPPA(992μL,4.60mmol,1.07當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物回流4.5小時(shí)，然后加入2-三甲基甲硅烷基乙醇(1.23mL,8.58mmol,2.0當(dāng)量)。使回流保持過(guò)夜，然后用Et2O稀釋反應(yīng)混合物，并依次用10％檸檬酸水溶液、水、飽和含水NaHCO3、水(2x)和鹽水連續(xù)洗滌。常規(guī)處理(MgSO4，過(guò)濾，濃縮)后，將殘余物通過(guò)閃蒸色譜(5cm,10-15％AcOEt-己烷)純化得到為淺黃色油的所需氨基甲酸酯14c(1.212g,3.866mmol,90％得率)。MS(FAB)314(MH+)；1HNMR(CDCl3)δ5.93-5.84(m,1H),5.32-5.20(m,2H),5.05(bs,1H),4.60-4.56(m.2H),4.20-4.11(m,2H),1.71-1.60(m,3H),1.39-1.22(m,1H),1.03(t,J=7.6Hz,3H),0.96-0.86(m,1H),0.04(s,9H).f)在氨基甲酸酯14c(267mg,0.810mmol)中加入THF(1.62mL,1.62mmol,2.0當(dāng)量)中的1.0M TBAF溶液。在室溫下將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜，回流30分鐘，然后用AcOEt稀釋。用水(2x)和鹽水依次洗滌該溶液。常規(guī)處理(MgSO4,過(guò)濾和濃縮)后，分離出(122mg,0.721mmol,89％得率)為淺黃色液體的所需胺14d。
1HNMR(CDCl3)δ5.94-5.86(m,1H),5.31-5.22(m,2H),4.58(d,J=5.7Hz,2H),1.75(bs,2H),1.61-1.53(m,2H),1.51-1.42(m,2H),1.00(t,J=7.3Hz,3H),0.70-0.62(m,1H).實(shí)施例15乙基-(1R,2S)/(1S,2S)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙基羧酸鹽的合成 a)將市售可獲得的THF(45mL)中的亞胺15a(10.0g,37.41mmol)加到-78℃的叔丁氧化鉀(4.62g,41.17mmol,1.1當(dāng)量)的THF溶液(180mL)中。將反應(yīng)混合物升溫至0℃，并在此溫度下攪拌40分鐘。然后加入1,4-二溴丁烯15b(8.0g,37.40mmol)將混合物冷卻至-78℃，再在0℃攪拌1小時(shí)，加入叔丁氧化鉀(4.62g,41.17mmol,1.1當(dāng)量)使之冷卻回到-78℃。最后再在0℃將反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)、并濃縮得到化合物15c。b,c,d)將15c溶解在Et2O(265mL)中、并用1N HCl水溶液(106mL)處理。在室溫下3.5小時(shí)后，分離各層，用Et2O(2X)洗滌含水層，并用飽和NaHCO3水溶液使之堿化。用Et2O(3X)提取所需的胺，并用鹽水洗滌混合的有機(jī)提取物。常規(guī)處理(MgSO4、過(guò)濾并濃縮)后，用二噁烷(187mL,748mmol)中的4N HCl溶液處理殘余物。濃縮后，分離出棕色固體的鹽酸鹽15d(2.467g,12.87mmol,34％得率)。
1NMR(CDCl3)δ9.17(bs,3H),5.75-5.66(m,1H),5.39(d,J=17.2Hz,1H),5.21(d,J=10.2Hz,1H),4.35-4.21(m,2H),2.77-2.70(m,1H),2.05(dd,J=6.4,10.2Hz,1H),1.75(dd,J=6.4,8.3Hz,1H),1.33(t,J=7.0Hz,3H).實(shí)施例16(1R,2R)/(1S,2R)-1-Boc-氨基-2-乙烯基環(huán)丙基羧酸乙基酯的制備 將鹽酸鹽15d(1.0g,5.2mmol)和(Boc)2O(1.2g,5.7mmol)溶解在THF(30mL)中，并用DMAP(0.13g,1.04mmol,0.2當(dāng)量)和二異丙基乙基胺(2.8mL,15.6mmol)處理。在用EtOAc(40mL)稀釋前攪拌該反應(yīng)化合物24小時(shí)，依次用飽和NaHCO3(含水)、5％含水HCl和飽和鹽水洗滌。將有機(jī)相干燥(MgSO4)、過(guò)濾和濃縮，通過(guò)閃蒸色譜(15％EtOAc/己烷)得到16a(0.29g,23％)。1HNMR(CDCl3)δ5.80-5.72(m,1H)5.29-5.25(dd,J=17.2,17.2Hz,1H),5.24-5.1(bs,1H),5.10(dd,J=9.2,9.2 Hz,1H),4.22-4.13(m,2H),2.15-2.04(m,1H),1.85-1.73(bs,1H),1.55-1.5(m,1H),1.49(s,9H),1.26(t,J=7.3Hz,3H).實(shí)施例17(1R-25)/(1S,2S)1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙基羧酸乙酯的酶促拆分 a)將外消旋衍生物17a(0.29g,1.14mmol)溶解在丙酮(5mL)中，再用水(10mL)稀釋。在加入Alcalase(300mg)之前用0.2N含水NaOH將pH調(diào)至7.2。為了在培養(yǎng)過(guò)程中保持pH恒定，通過(guò)pH穩(wěn)定滴定計(jì)加入NaOH溶液9天以上，直至加入了理論數(shù)量的堿。接著按實(shí)施例13所述進(jìn)行酸/堿提取，分離出未水解酯(0.15g,100％)和水解物質(zhì)(0.139g,95％)。通過(guò)使用手性柱的HPLC對(duì)未水解酯分析顯示所需化合物17c的比例為43∶1，其(R,S)立體化學(xué)排布是基于如實(shí)施例10和11所述的化學(xué)上相互關(guān)系。
HPLC分析的條件ChiralcelOD-H(4.6mm×25cm)，使用2.5％異丙醇/己烷流動(dòng)相的等度條件。實(shí)施例18用二苯甲酰基-D-酒石酸結(jié)晶對(duì)(1R-2S)/(1S,2S)1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙基羧酸鹽進(jìn)行拆分 將二苯甲?；?D-酒石酸(33.5g,93.5mmol)加到EtOAc(800mL)中的粗制外消旋(1S,2S和1R,2S)1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙基羧酸乙酯[按實(shí)施例15所述從N-(二苯基亞甲基)甘氨酸乙基乙酯(25.0g,93.5mmol)獲得]溶液中。將混合物加熱回流，在室溫下放置15分鐘，然后冷卻至0℃。30分鐘后得到白色固體。過(guò)濾該固體，用EtOAc(100mL)洗滌并風(fēng)干。將固體懸浮在丙酮(70mL)中，超聲(sonicated)并過(guò)濾(3x)。在熱丙酮中將該固體再結(jié)晶兩次(A批)。濃縮母液、在熱丙酮中將該殘余物再結(jié)晶三次(B批)?；旌?5.53g)二苯甲?；?D-酒石酸鹽的兩批無(wú)水白色固體，并將其懸浮在Et2O(250mL)和飽和NaHCO3溶液(150mL)的混合物中。用鹽水洗滌有機(jī)層，干燥(MgSO4)并過(guò)濾。用1N HCl/Et2O(100mL)稀釋濾液，并在減壓下濃縮。用CCl4蒸發(fā)油性殘余物得到為白色吸濕性固體的鹽酸1(R)-氨基-2(R)-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯(940mg,11％得率)。D25+39.5℃(c1.14 MeOH)；[α]36.525+88.5℃(c1.14 MeOH)；1HNMR(DMSO-d6)δ9.07(broad s,2H),5.64(ddd,J=17.2,10.4,8.7Hz,1H),5.36(dd,J=17.2,1.6Hz,1H),5.19(dd,J=10.4,1.6Hz,1H),4.24-4.16(m,2H),2.51-2.45(m,peakshindered by DMSO,1H),1.84(dd,J=10.0,6.0Hz,1H),1.64(dd,J=8.3,6.0Hz,1H),1.23(t,J=7.1Hz,3H)；MS(ESI)m/z 156(MH)+；通過(guò)Boc衍生物的HPLC分析(CHIRALPAK AS Column,-Hex:I-PrOH)確定對(duì)映體的純度約為91％。實(shí)施例19制備(1R,2S)/(1S,2S)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸甲基-鹽酸化物(19f) 制備亞胺19b將甘氨酸乙基酯鹽酸化物19a(1519.2g,10.88mol,1.0當(dāng)量)懸浮在叔丁基甲基醚(8L)中。加苯甲醛(1155g,10.88mol,1當(dāng)量)和無(wú)水硫酸鈉(773g,5.44mole,0.5當(dāng)量)，將該混合物在冰-水浴中冷卻到5℃。在15分鐘內(nèi)滴加三乙胺(2275ml,16.32mol,1.5當(dāng)量)(用0.5L叔丁基甲基醚漂洗)并在室溫下將該混合物攪拌40小時(shí)。然后加冰冷水(5L)使反應(yīng)停止，分離有機(jī)層。水相用叔丁基甲基醚(1L)萃取，合并的有機(jī)相用飽和NaHCO3(400ml)和水(1.6L)混合物洗滌，然后漂洗。溶液經(jīng)MgSO4干燥，減壓濃縮，將殘留的黃色油狀物真空干燥至恒重。得到的亞胺19b為深黃色油，在-20℃下固化(2001g，產(chǎn)率96％):1HNMR(CDCl3,400MHz)δ8.30(s,1H),7.79(m,2H),7.48-7.39(m,3H),4.40(d,J=1.3Hz,2H),4.24(q,J=7Hz,2H),1.31(t,J=7Hz,3H).制備外消旋的N-Boc-(1R,2S)/(1S,2S)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙基-酯鹽酸化物19e將叔丁氧基鋰懸浮在無(wú)水甲苯(60ml)中。在無(wú)水甲苯(30ml)中溶解亞胺19b(5.020g,26.3mmol,1.05當(dāng)量)和二溴酰胺19c(5.348g,25mmol,1當(dāng)量)，并將該溶液在30分鐘內(nèi)滴加到室溫?cái)嚢璧腖iOtBu溶液中。滴完后，將該深紅色混合物再攪拌10分鐘，加水(50ml)和叔丁基甲基醚(TBME,50ml)驟冷。水相分出，用TBME(50ml)萃取兩次。合并有機(jī)相，加1N HCl(60ml)，并將該混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。分離有機(jī)相，用水(40ml)萃取。然后合并水相，用鹽(35g)飽和，并加TBME(50ml)。然后將該攪拌的混合物小心加10N NaOH使其呈堿性至pH13-14。用TBME(2×50ml)分離有機(jī)相并萃取水相。將含游離胺19d的有機(jī)萃取物合并，并加二叔丁基二碳酸酯(5.46g,25mmol,1當(dāng)量)。室溫下攪拌過(guò)夜后，TLC表明有些未反應(yīng)的游離胺存在。再加二叔丁基二碳酸酯(1.09g,5mmol,0.2當(dāng)量)并在該溫度下回流2小時(shí)，TLC分析顯示19d已完全轉(zhuǎn)化為氨基甲酸酯19e。將溶液冷卻到室溫，經(jīng)MgSO4干燥，減壓濃縮。剩留物用10％再用20％EtOAc/己烷作稀釋劑通過(guò)閃蒸色譜法純化。純的19e是在真空下經(jīng)緩慢固化得到清亮的黃色油狀物(4.014g，產(chǎn)率63％)。1HNMR(CDCl3,400MHz)δ5.77(ddd,J=17,10,9Hz,1H),5.28(dd,J=17,1.5Hz,1H),5.18(broad s,1H),5.11(dd J=10,1.5Hz,1H),4.24-4.09(m,2H),2.13(q,J=8.5Hz,1H),1.79(broad m,1H),1.46(m,1H),1.45(s,9H),1.26(t,J=7Hz,3H)19e經(jīng)過(guò)酯轉(zhuǎn)移而制備標(biāo)題化合物19f將乙酯19e(10.807g,42.35mmol)溶解在無(wú)水甲醇中，并加甲醇鈉在MeOH(25％w/w,9.7ml,42mmol,1當(dāng)量)中的溶液?；旌衔镌?0℃下加熱2小時(shí)，此時(shí)的TLC分析表明已完成酯轉(zhuǎn)移(19e,Rf0.38,19f Rf0.34，在20％EtOAc/己烷中)。反應(yīng)混合物冷卻到室溫，并用4N HCl的二噁烷溶液酸化至pH4。過(guò)濾除去沉淀的NaCl(用叔丁基甲基醚洗滌)并減壓蒸發(fā)除去。在殘留物中加叔丁基甲基醚(100ml)，過(guò)濾除去固體。濾液在減壓下蒸發(fā)并真空干燥，得到純的甲基醚19f(10.11g，產(chǎn)率99％)。1HNMR(CDCl3,400MHz)δ5.75(ddd,J=17,10,9Hz,1H),5.28(dd,J=17,1Hz,1H),5.18(broad s,1H),5.11(ddd,J=10,1.5,0.5Hz,1H),3.71(s.3H),2.14(q,J=9Hz,1H),1.79(broad m,1H),1.50(broad m,1H),1.46(s,9H).實(shí)施例20(1R,2S)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸甲基-酯鹽酸化物的酶催化拆分 制備N-Boc-(1R,2S)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸甲基酯20a將外消旋的酯19f(0.200g,0.83mmol)溶解在丙酮(3ml)中，加水(7ml)。加0.05M NaOH(1滴)使溶液的pH至～8，然后加Alcalase2.4L(NovoNordisk Biochem,0.3g在1ml水中)。在室溫下強(qiáng)烈攪拌該混合物，用自動(dòng)滴定器使溶液pH維持在8。在此pH下攪拌的開(kāi)始4天和5天時(shí)再加(2×0.3g)酶溶液。5天后，共消耗8.3ml的0.05M NaOH。將此反應(yīng)混合物用EtOAc和水稀釋，分離有機(jī)相。用鹽水洗滌后，用MgSO4干燥有機(jī)萃取物，并真空濃縮。得到的化合物20a(0.059g,30％產(chǎn)率)為清亮的油1HNMR與化合物19f相同。HPLC(手性的細(xì)胞ODH,4.6×250mm，在已烷中無(wú)梯度洗脫，流速0.8mL/min)(1R,2S)-2 Rt19.3min(97％)；(1S,2R)-Rt17.0min(3％)。制備(1R,2S)-1-氨基-2-乙烯基丙烷羧酸甲酯鹽酸化物20b將化合物20a(39.36g,165.7mmol)溶于二噁烷(25ml)中，將該溶液滴加到攪拌的4NHCl的二噁烷(Aldrich,250ml)中。45分鐘后，TLC分析表明已完全去保護(hù)。減壓下除去蒸發(fā)物，殘留物用MeOH(2×100ml)共蒸發(fā)兩次。在棕色的油狀殘留物中加乙醚(300ml)和MeOH(10ml)，該混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，形成半固體沉淀。再加MeOH(15ml)并繼續(xù)攪拌6分鐘，此時(shí)過(guò)濾收集黃色固體。產(chǎn)物用5％MeOH的乙醚(50ml)清洗再用乙醚(2×50ml)洗，然后真空干燥，得到的化合物20b為黃色固體(22.60g,產(chǎn)率76％)。濾液(包括洗滌液)在真空下蒸發(fā)得到另外的20b為棕色油(7.82g，產(chǎn)率26％)。這兩部分產(chǎn)物的純度對(duì)于用在合成HCV蛋白抑制劑上是足夠的。[α]D25+38.2°(c1.0,MeOH)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.15(broad s,3H),5.65(add,J=17,10,9Hz,1H),5.36(dd,J=17,1.5Hz,1H),5.19(dd.J=10,1.5Hz,1H),3.74(s,3H),2.50(q,overlap with DMSO signal,J=9Hz,1H),1.86(dd,J=10,6Hz,1H),1.64(dd,J=8,6Hz,1H).實(shí)施例21合成1-氨基環(huán)丁基羧酸甲酯 按照Kavin Douglas；Ramaligam Konareddiar；Woodard Ronald,Synth.Commun.(1985),15(4),267-72的方法制備1,1-氨基環(huán)丁基羧酸。將氨基酸鹽(21a)(1.00g,6.6mmol)在-20℃的無(wú)水甲醇中攪拌并將混合物用無(wú)水鹽酸飽和，生成21b。將此混合物繼續(xù)攪拌4小時(shí)。過(guò)濾熱的溶液并將濾液濃縮(Rotavap,30℃)，殘留物在乙醚中研制，在過(guò)濾和干燥后得到白色粉末(0.907g,83％)。1HNMR(400MHz,D2)δCH3O(3H,s,3.97ppm)；CH2(2H,m,2.70-2.77ppm)；CH2(2H,m,2.45-2.53ppm)and CH2(2H,m,2.14-2.29ppm).
三肽實(shí)施22在固相載體上進(jìn)行偶合反應(yīng)的一般方法該合成是在一個(gè)有96孔板的由Advanced Chem Tech出品的平行合成器模型中進(jìn)行的。通常，用標(biāo)準(zhǔn)固相技術(shù)平行合成24肽。原料(Fmoc-氨基)環(huán)丙基(取代或不取代的)羧酸-Wang樹(shù)脂是通過(guò)DCC/DMAP偶合方法制備的(Atherton,E；Scheppard,R.C.Solid Phase Peptide Synthesis,a PracticalApproach；IRL Press:Oxford(1989)；pp131-148)。
每孔裝有100mg原料樹(shù)脂(大約0.05mmol)。該樹(shù)脂相繼用1.5ml NMP洗一次，再用1.5ml DMF洗3次。用1.5ml,25％v/v的哌啶在DMF中的溶液處理20分鐘除去Fmoc保護(hù)基。再用1.5ml DMF(4X)、MeOH(3X)和DMF(3X)清洗。在DMF(350μl)中進(jìn)行偶合，使用的是400μl(0.2mmol)Fmoc-氨基酸/HOBt水合物在DMF中的0.5M溶液、400μl(0.4mmol)DIPEA在DMF中的1M溶液、和400μl(0.2mmol)TBTU在DMF中的0.5M溶液。振搖1小時(shí)后，取出孔中的樹(shù)脂，用1.5ml DMF清洗，在相同條件下將該偶合重復(fù)一次。然后如上所述清洗樹(shù)脂，用下一批氨基酸重復(fù)這樣的循環(huán)。
用兩種方法引入端基1．羧酸形式的端基，用上面所述的方法(如乙酸)，或
2．用?；瘎┤缢狒蛩嵝月然?。下面的例子說(shuō)明用琥珀酸酐封端在Fmoc脫保護(hù)并接著洗滌后，加DMF(350μl)，接著每次用400μl琥珀酸酐的DMF溶液(0.5M,0.2mmol)和DIPEA的DMF溶液(1.0M,0.4mmol)。將樹(shù)脂攪拌2小時(shí)，再進(jìn)行偶合。在合成結(jié)束時(shí)，用1.5ml分次洗滌該樹(shù)脂DCM(3X)、MeOH(3X)、DCM(3X)，并在真空下干燥2小時(shí)。加1.5ml的TFA、H2O、DTT和TIS(92.5∶2.5∶2.5∶2.5)混合物使樹(shù)脂裂解并使伴隨產(chǎn)生的側(cè)鏈脫保護(hù)。振動(dòng)2.5小時(shí)后，將樹(shù)脂過(guò)濾，用1.5ml DCM清洗。合并濾液并通過(guò)真空離心方法濃縮。通過(guò)制備反相HPLC，用C18柱(22mm×500mm)純化每種化合物。用MALD1-TOF質(zhì)譜鑒定每種含產(chǎn)物的餾份，合并和凍干。實(shí)施例23在溶液中進(jìn)行偶合反應(yīng)的一般方法(亦見(jiàn)R.Knorr et al.,TetrahedronLetters,(1989),30,1927.)將反應(yīng)試劑，即游離胺(1當(dāng)量)(或它的鹽酸鹽)和游離羧酸(1當(dāng)量)溶解在CH2Cl2,CH3CN或DMF中。在氮?dú)夥障孪蛟摂嚢璧娜芤褐屑?當(dāng)量N-甲基嗎啉和1.05當(dāng)量偶合劑。20分鐘后，加1當(dāng)量第二種反應(yīng)試劑，即游離羧酸。常用和有效的偶合劑為此目的用的是(苯并三唑-1-基氧)三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸鹽(HOBT)或優(yōu)選的是2-(1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基尿四氟硼酸鹽(TBTU)或0-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基尿四氟硼酸鹽(HATU)。該反應(yīng)用TLC控制。反應(yīng)完成后，減壓蒸發(fā)溶劑。殘留物溶于EtOAc。用10％檸檬酸水溶液，飽和NaHCO3水溶液和鹽水相繼清洗上述溶液。將有機(jī)相用MgSO4干燥、過(guò)濾及減壓濃縮。純化殘留物是用上述的閃蒸色譜方法進(jìn)行。實(shí)施例24合成化合物304 a)將酶催化拆分所得的(實(shí)施例13)(R,R)異構(gòu)體Boc-Et-Acca-Ome13c(0.12g,0.49mmol)用4N HCl/二烷處理45分鐘后真空濃縮得到白色固體。在該HCl鹽(約0.49mmol)中加TBTU(0.17g,0.54mmol),Boc-4(R)-(8-喹啉-甲氧)脯氨酸5(實(shí)施例5制得)(0.18g,0.49mmol)和DIPEA(0.3ml,1.7mmol)的10ml MeCN。該混合物在室溫下攪拌3.5小時(shí)后真空濃縮。將所得物質(zhì)溶于EtOAc并用飽和NaHCO3水溶液和鹽水清洗。干燥(MgSO4)過(guò)濾和濃縮，得到24b白色固體(0.122g,50％)。
b)在室溫下用4N HCl/二烷處理24b(0.12g,0.25mmol)(30分鐘)，然后真空濃縮。所得的鹽酸鹽(大約0.25mmol)用Boc-Chg-OH·H2O(75mg,0.27mmol)和MeCN(10ml)中的TBTU(87mg,0.27mmol)，最后在0℃用DIPEA(0.15ml,0.87mmol)處理。殘留物用EtOAc稀釋，接著用飽和NaHCO3水溶液和鹽水清洗，干燥(MgSO4)，過(guò)濾和濃縮，得到24c是灰白色固體(0.2g)。將該物質(zhì)(0.14g)溶于DMSO并用制備HPLC純化凍干后得到24c為白色固體(35mg,33％)。HPLC(98％)；MS(FAB)m/z:637.8(MH+)；HRMS的C35H48N4O7(MH+)計(jì)算值637.36011；實(shí)測(cè)值637.36250；1H-NMR(DMSO-d6)表示旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的總體，δ8.91(2×d,J=4.1和4.1Hz,1H), δ8.91(2×d,J=4.1 and 4.1Hz,1H),8.40-8.36(m,2H),7.90(d,J=7.6Hz,1H),7.77(d,J=7.0Hz,1H),7.6-7.54(m,2H),6.80(d,J=8.6Hz,1H),5.18 and 5.16(2×s,2H),4.40(bs,1H),4.31(t,J=8.3Hz,1H),4.12(d,J=11.44Hz,1H),4.03(t,J=7.9Hz,1H),3.78-3.72(m,1H),3.56(s,3H),2.35-2.27(m,1H),2.06-1.97(m,1H),1.71-1.55(m,10H),1.53-1.38(m,2H),1.26(s,9H),1.18-1.06(m,2H),1.02-0.93(m,2H),0.89(t,J=7.3Hz,3H).化合物304
c)向24c(30mg,大約0.047mmol)中加MeOH(1ml)、THF(1ml)、和1ml水中的氫氧化鋰一水合物(12mg,0.29mmol)。將此清亮的溶液快速攪拌48小時(shí)，然后真空濃縮。將粗肽溶于DMSO中并用制備HPLC純化，凍干后得到化合物304為白色固體(21mg,72％)。HPLC(99％)；MS(FAB)m/z:(MH+)623.3；HRMS的C34H46N4O7(MH+)計(jì)算值623.3448，實(shí)測(cè)值623.34630,1HNMR(DMSO-d6)表示旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體總體為1∶1,δ8.90(2×d,J=4.1Hz,1H),8.37(d,J=8.3Hz,1H),8.26(s,1H),7.89(d,J=8.3Hz,1H),7.77(d,J=6.7Hz,1H),7.6-7.53(m,2H),6.88 and 6.79(2×d,J=8.6 and 7.9Hz,1H),5.17 and 5.16(2×s,2H),4.43-4.35(bs,1H),4.29(t.J=8.3Hz,1H),3.82-3.71(m,1H),2.35-2.27(m,1H),2.06-1.97(m,1H),1.72-1.53(m,10H),1.52-1.44(m,2H),1.37 and 1.29(2×s,9H),1.18-1.05(m,3H),1.0-0.94(m,1H),0.91(t,J=7.3Hz,3H).實(shí)施例25合成化合物301 a)將化合物25a(=12a)(282mg,1.23mmol)懸浮于無(wú)水CH3CN(6ml)中。相繼加DBU(221μl,1.48mmol)和芐基溴化物(161μl,1.35mmol)并將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。將混合物濃縮，用EtOAc和10％含水檸檬酸稀釋所得的油，并相繼用10％檸檬酸(2X)、飽和NaHCO3水溶液(2X)、水(2X)和鹽水(1X)清洗。用MgSO4干燥EtOAc層，過(guò)濾和蒸干。無(wú)色油粗產(chǎn)品用閃蒸色譜純化(洗脫液∶EtOAc；95∶5-90∶10)，得到無(wú)色油MS(FAB)318.2 MH-320.2 MH+342.2(M+Na)+1HNMR(CDCl3)δ7.37-7.28(m,5H),5.22-5.10(m,1H),5.19(d,J=12Hz,1H),5.16(d,J=12Hz,1H),1.60-1.40(m,4H),1.39(s,9H),1.31-1.22(m,1H),0.91(t,J=7.5,14.5Hz,3H).
b)化合物25b(368mg,1.15mmol)用4N HCl/二噁烷(6ml)按前面所述的方法處理。粗的鹽酸鹽用CH2Cl2(6ml)中的NMM(507μl,4.61mmol)和HATU(代替TBTU,525.6mg,1.38mmol)與化合物4(實(shí)施例4)(470.8mg,1.27mmol)偶合(如實(shí)施例22所述)，得到橙色油狀的外消旋二肽。該粗產(chǎn)物用閃蒸色譜(洗脫液-己烷∶Et2O=50∶50)得到純的二肽25c(無(wú)極性洗脫斑)白色泡沫(223mg；68％理論產(chǎn)率)。MS571.4 MH-573.3 MH+595.3 (M+Na)+1H NMR(CDCl3),ca.1∶1旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，δ8.03(bd,J=8Hz,1H),7.86(bd,J=7.5Hz,1H),7.82(bd,J=6.5Hz,1H),7.61(bs,0.5H),7.57-7.40(m,4H),7.31-7.21(m,5H),6.48(bs,0.5H),5.22-5.11(m,1H),5.08-4.81(m,3H),4.41-3.74(m,3H),3.49-3.18(m,1H),2.76-1.90(m,2H),1.69-1.48(m,3H),1.40(s,9H),1.40-1.23(m,2H),0.92(t,J=7.5,15Hz,3H).
c)將二肽25c(170.1mg,0.297mmol)用4N HCl/二噁烷(2ml)按前面所述的方法處理。在室溫下用NMM(130μl,1.19mmol)和HATU(代替TBTU,135.5mg；0.356mmol)在CH2Cl2(2ml)中的溶液將粗的鹽酸鹽與Boc-Chg-OH(84.1mg,0.327mmol)偶合2.75小時(shí)，然后按前面所述處理得到粗的三肽25d為象牙色泡沫(約211.4mg；100％)。MS(FAB)712.5MH+化合物301d)將粗的三肽25d(約15.4mg,0.022mmol)溶于無(wú)水乙醇(2ml)中，加10％Pd/C催化劑和乙酸鋁(兩者均估計(jì)為刮勺尖的量)。將該混合物在室溫和大氣壓下的充氫氣球形瓶中氫化過(guò)夜。反應(yīng)混合物通過(guò)一個(gè)0.45μMMillex過(guò)濾器過(guò)濾，蒸干，然后用EtOAc和10％含水檸檬酸稀釋，再用10％含水檸檬酸(1X)、水(2X)和鹽水(1X)清洗。有機(jī)層用MgSO4干燥，過(guò)濾，蒸干及凍干，得到三肽301白色無(wú)水固體(11.0mg；82％)。MS(FAB)622.5 MH+644.5(M+Na)+1HNMR(DMSO),ca.1∶4旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，δ8.54 & 8.27(s,1H),8.06-7.99(m,1H),7.96-7.91(m,1H),7.87(d,J=8Hz,1H),7.57-7.42(m,4H),6.81(d,J=8Hz,1H),4.99(d,J=12Hz,1H),4.88(d,J=12Hz,1H),4.46-4.19(m,2H),4.17-4.02(m,2H),3.88-3.67(m,1H),2.28-2.19(m,1H),2.05-1.93(m,1H),1.73-1.43(m,8H),1.32-1.07(m,6H),1.28(s,9H),1.03-0.85(m,2H),0.91(t,J=7.5,15Hz,3H)實(shí)施例26合成化合物306 a)酸26a(180mg,0.500mmol)與胺15d(96mg,0.500mmol)用CH2Cl2(10ml)中的TBTU(192mg,0.600mmol)和DIPEA(226mg,1.75mmol)偶合20小時(shí)。濃縮該反應(yīng)混合物，放入乙酸乙酯，用飽和NaHCO3洗兩次，鹽水洗一次。有機(jī)層在MgSO4上干燥，過(guò)濾，濃縮，得到26c棕色油，不純化用于下一步。
b,c)粗的化合物26c(約0.500mmol)在HCl 4N/二噁烷(4ml)中攪拌30分鐘并濃縮至干燥。將該固體物放入CH2Cl2(10ml)中，加DIPEA(226mg,175mmol)，接著加Boc-Chg-OH的一水合物(138mg,0.500mmol)和TBTU(192mg,0.600mmol)。在室溫?cái)嚢枞芤?小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物，放入乙酸乙酯，用飽和NaHCO3洗兩次，鹽水洗一次。有機(jī)層在MgSO4上干燥，過(guò)濾和濃縮，得到棕色油，用閃蒸色譜純化得到26d黃色油，204mg,64％(兩種偶合)。1HNMR(CDCl3)δ8.77-8.74(m,1H),8.14(d,J=8Hz,1H),8.02(d,J=9Hz,1H),7.69(dd,J=9,7Hz,1H),7.52(d,J=5Hz,1H),7.47(dd,J=8,7Hz,1H),6.78(d,J=5Hz,1H),5.80-5.70(m,1H),5.35-5.27(m,2H),5.14-5.07(m,2H),4.89-4.83(m,1H),4.39-4.32(m,1H),4.30-4.24(m,1H),4.20-4.07(m,2H),4.00-3.92(m,1H),3.04-2.92(m,1H),2.39-2.29(m,1H),2.16-2.04(m,1H),1.91-1.83(m,1H),1.82-1.62(m,7H),1.45-1.35(m,9H),1.27-1.07(m,8H).
d)將26d(136mg,0.214mmol)溶于THF(4ml)和MeOH(2ml)中。加LiOH水合物(72mg,1.72mmol)的含水溶液(2ml)，在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌20小時(shí)。溶液經(jīng)濃縮和制備HPLC純化，得到化合物306(無(wú)極性異構(gòu)體)白色固體(25mg)。
化合物306:MS(FAB)607.4(MH+)1HNMR(DMSO-d6)δ9.16(d,J=6Hz,1H),8.55(s,1H),8.35(d,J=8Hz,1H),8.12(d,J=9Hz,1H),8.05(dd,J=8,7Hz,1H),7.76(dd,J=8,7Hz,1H),7.59(d,J=6Hz,1H),7.02(d,J=8Hz,1H),5.75-5.66(m,2H),5.19(d,J=18Hz,1H),5.07(d,J=10Hz,1H),4.55(d,J=12Hz,1H),4.43(dd,J=10,8Hz,1H),4.03(d,J=10Hz,1H),3.87-3.83(m,1H),2.66-2.59(m,1H),2.36-2.30(m,1H),1.98(dd,J=18,9Hz,1H),1.75-1.56(m,8H),1.38-1.35(m,1H),1.25-1.22(m,1H),1.09(s,9H),1.12-0.95(m,3H).實(shí)施例27合成化合物307 c)從實(shí)施8得到的酸8(505mg,105mmol)在5ml二氯甲烷中的溶液，用TBTU(376mg,1.17mmol)處理。將在7ml含(0.60ml,5.46mmol)N-甲基嗎啉的二氯甲烷中該(R,S)乙烯基AccaOEt(18)(實(shí)施例18)(279mg,1.46mmol)的HCl鹽加到前述的活化酯溶液中。所得溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。真空蒸發(fā)溶劑。殘留物用乙酸乙酯清洗，用飽和的碳酸氫鈉溶液洗兩次，用鹽水洗一次。有機(jī)層在MgSO4上干燥，真空蒸發(fā)。殘留物經(jīng)硅膠色譜純化(60∶40v/v，己烷-乙酸乙酯)得到173mg(27％)二肽27c。
d,e)將二肽27c(70mg,0.114mmol)在3ml鹽酸在1,4-二噁烷中的4.0M溶液中的溶液在室溫下攪拌1小時(shí)(10分鐘后從反應(yīng)中取出沉淀)。真空除去溶劑。將1.5ml乙腈中稀釋的胺的鹽酸鹽(0.114mmol)通過(guò)加65μl(0.591mmol)N-甲基嗎啉使其中和。將該Boc Chg·H2O(39mg,0.142mmol)在1.5ml乙腈中的溶液用TBTU(46mg,0.143mmol)處理，然后將其加到前面的胺溶液中。所得溶液在室溫下攪拌(2天)。真空除去溶劑。用乙酸乙酯稀釋的殘留物，用飽和的碳酸氫鈉溶液洗兩次，鹽水洗一次。有機(jī)層在MgSO4上干燥，過(guò)濾并真空蒸發(fā)。得到86mg(100％)三肽27e。該粗化合物不經(jīng)進(jìn)一步處理用于下一步。
f)向三肽27e(86mg,0.114mmol)在5ml THF∶H2O(2.5∶1)混合物的溶液中加氫氧化鋰一水合物(22mg,0.524mmol)。再加0.25ml MeOH，得到均勻的溶液。將所得溶液在室溫下攪拌過(guò)夜，然后真空蒸發(fā)溶劑。殘留物在水和EtOAc之間分配。含水層用1MHCl酸化，然后用乙酸乙酯萃取兩次。從第一次萃取出來(lái)的乙酸乙酯中已檢查出有所需的化合物。將該有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾和真空蒸發(fā)，得到69mg粗酸，用制備HPLC方法將它純化。將該化合物溶于MeOH(4ml)并注射在平衡的Whatman Partisil 10-ODS-3(2.2×50cm)C18反相柱上(λ=230nm，溶劑A=0.06％ TFA/H2O，溶劑B=0.06％TFA/CH3CN)。純化程序20％-70％溶劑B,60分鐘。用分析的HPLC分析各級(jí)份。收集所需的級(jí)份，凍干得到50mg(60％)所需的三肽307，白色非晶形固體。
化合物307:1HNMR(DMSO-d6)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體～2∶8δ8.86(d,J=2.5Hz,1H),8.85(s,0.2H),8.64(s,0.8H),8.49(dd,J=9.5,3Hz,0.2H),8.45(dd,J=9.2Hz,0.8H),8.39-8.33(m,2H),8.20(d,J=9.5Hz,0.2H),8.18(d,J=9.5Hz,0.8H),7.81(s,0.2H),7.78(s,0.8H),7.64-7.56(m,3H),6.87(d,J=8Hz,0.8H),6.36(d,J=9Hz,0.2H),5.82-5.67(m,2H),5.27-5.17(m,1H),5.09-5.03(m,1H),4.73(t,J=8Hz,0.2H),4.55(dd,J=10,7.5Hz,0.8H),4.49-4.40(m,1H),4.00-3.95(m,1H),3.83-3.76(m,1H),2.87-2.80(m,0.2H),2.69-2.62(m,0.8H),2.39-2.26(m,1H),2.08-2.00(m,1H),1.75-1.41(m,7H),1.37(s,1.8H),1.32-1.27(m,1H),1.17-0.82(m,5H),0.94(s,7.2H).實(shí)施例28合成化合物311 化合物311是用實(shí)施例24的方法、用相應(yīng)的結(jié)構(gòu)單元制備的?；衔?101HNMR(DMSO-d6)δ8.98(d,J=6Hz,1H),8.52(s,1H),8.24(d,J=9Hz,1H),8.08(d,J=2Hz,1H),7.63(d,J=9Hz,1H),7.37(d,J=6Hz,1H),6.98(d,J=8Hz,1H),5.75-5.66(m,1H),5.57(brs,1H),5.24-5.19(m,1H),5.08-5.01(m,1H).4.57-4.40(m,2H),4.00-3.96(m,1H),3.82(dd,J=9.8Hz,1H),2.59-2.54(m,1H),2.32-2.26(m,1H),1.99(dd,J=17,9Hz,1H),1.74-1.55(m,8H),1.37(s,1H),1.26-1.22(m,1H),1.14-1.08(m,9H),1.02-0.91(m,3H).實(shí)施例29合成化合物302 化合物302是用實(shí)施例27的方法，用相應(yīng)的結(jié)構(gòu)單元制備的。1HNMR(DMSO-d6)δ8.34(s,1H),8.04-8.01(m,1H),7.94-7.92(m,1H),7.87(d,J=8Hz,1H),7.54-7.50(m,3H),7.45(dd,J=17,8Hz,1H),7.22(d,J=8Hz,1H),4.94(dd,J=55,12Hz,2H),4.34(s,1H),4.27(dd,J=8,8Hz,1H),4.16(d,J=11Hz,1H),4.07(dd,J=8,8Hz,1H),3.72-3.65(m,2H),3.59-3.54(m,1H),2.24-2.18(m,1H),2.02-1.95(m,2H),1.75-1.70(m,1H),1.53-1.44(m,2H),1.32-1.27(m,1H),1.21-1.17(m,1H),0.96-0.85(m,10H),0.80-0.77(m,5H),0.62-0.57(m,1H).實(shí)施例30合成化合物308 化合物308是用實(shí)施例27方法,用相應(yīng)的結(jié)構(gòu)單元制備的。1HNMR(DMSO-d6)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體≡2∶8δ8.77(s,0.2H),8.45(s,0.8H),8.13(d,J=8.5Hz,0.8H),8.03(d,J=8.5Hz,0.2H),7.89-7.83(m,1H),7.55-7.37(m,4H),7.05-6.59(m,1H),6.95(d,J=8 Hz,0.8H),6.26(d,J=8.5Hz,0.2H),5.81-5.64(m,1H),5.33-5.28(m,1H),5.26-5.15(m,1H),5.08-5.02(m,1H),4.60(t,J=7.5Hz,0.2H),4.38-4.27(m,1.8H),4.09-3.91(m,1.8H),3.74(dd,J=12.5,4Hz,0.2H),2.69-2.60(m,0.2H),2.50-2.40(m,1H),2.36-2.28(m.0.2H),2.23-2.14(m,0.8H),2.05-1.97(m,0.8H),1.76-1.44(m,7H),1.37(s,1.8H),1.29(s,7.2H),1.28-1.20(m,1H),1.16-0.88(m,5H).實(shí)施例31合成化合物309 化合物309是用實(shí)施例27方法,用相應(yīng)的結(jié)構(gòu)單元制備的。1HNMR(DMSO-d6)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體≡2∶8δ8.75(s,0.2H),8.50(s,0.8H),7.89-7.78(m,3H),7.50-7.44(m,1H),7.42-7.32(m,2H),7.17-7.09(m,0.8H)7.08-7.03(m,0.2H),6.79(d,J=8.5Hz,0.8H),6.33(d,J=9Hz,0.2H),5.81-5.65(m,1H),5.30-5.16(m,2H),5.10-5.02(m,1H),4.56(t,J=7.5Hz,0.2H),4.33(t,J=8Hz,0.8H),4.10-3.90(m,2.8H),3.74-3.68(m,0.2H),2.45-2.37(m,1H),2.34-2.17(m,1H),2.05-1.97(m,1H),1.76-1.48(m,7H),1.37(s,1.8H),1.23(s,7.2H),1.21-0.88(m,6H).實(shí)施例32合成化合物305 化合物305是用實(shí)施例27方法,用相應(yīng)的結(jié)構(gòu)單元制備的。1HNMR(DMSO-d6)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體(1∶9)δ8.68(s,0.1H),8.43(s,0.9H),8.04-8.00(m,1H),7.95-7.91(m,1H),7.87(d,J=8.5Hz.1H),7.57-7.49(m,3H),7.47-7.42(m,1H),6.82(d,J=8.5Hz,0.9H),6.21(d,J=8.5Hz,0.1H),5.80-5.64(m,1H),5.21(dd,J=17,2Hz,0.1H),5.18(dd,J=17,2Hz,0.9H),5,06(dd,J=10.5,2Hz,1H),5.02-4.85(m,2H),4.43(t,J=7.5Hz,0.1H),4.34(brs,1H),4.23(t,J=8.5Hz,0.9H),4.16-4.05(m,1.8H),3.89-3.82(m,0.2H),3.74(dd,J=11,3.5Hz,0.9H),3.53(dd,J=12.5,4Hz,0.1H),2.30-2.21(m,1H),2.02-1.94(m,2H),1.74-1.38(m,7H),1.36(s,0.9H),1.28(s,8.1H),1.25-0.87(m,6H).實(shí)施例33合成化合物303 化合物303是用實(shí)施例27方法，用相應(yīng)的結(jié)構(gòu)單元制備的。1HNMR(DMSO-d6)δ8.29(s,1H),8.04-8.01(m,1H),7.94-7.92(m,1H),7.87(d,J=8Hz,1H),7.56-7.52(m,3H),7.46(dd,J=8,7Hz,1H),7.19(d,J=9Hz,1H),5.01(d,J=12Hz,1H),4.86(d,J=12Hz,1H),4.34(br.s,1H),4.24(t,J=8Hz,1H),4.18-4.09(m,2H),3.74-3.53(m,3H),2.24-2.18(m,1H),2.04-1.95(m,1H),1.74-1.45(m,10H),1.31-1.13(m,4H),0.96-0.86(m,7H),0.79-0.76(m,5H).實(shí)施例34合成化合物403 a)P2與P1偶合將7(34a)(170mg,0.355mmol)的甲基酯衍生物在50％THF甲醇(4ml)和含水LiOH(1M,1ml)在室溫下攪拌1小時(shí)。濃縮該溶液(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，30℃)，將殘留物酸化到pH6，凍干溶液。所得的粉末在無(wú)水DMF(3ml)在DIEA(0.4ml)存在下攪拌，接著依次加1,1-氨基環(huán)丁基羧酸甲酯鹽酸化物(34b)(140mg,0.845mmol)和TBTU(134mg,0.417mmol)。室溫下攪拌18小時(shí)后，通過(guò)閃蒸色譜，在硅膠(230-400目)上用1∶2乙酸乙酯-己烷進(jìn)行，得到橙色油(98mg，經(jīng)HPLC后純度90％)。
b)P1-P2與P3偶合 將二肽34b(97mg,90％,0.155mmol)在室溫下在4N HCl-二噁烷(5ml)中攪拌1小時(shí)。然后將溶液濃縮到干(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，高真空)得到米黃色固體。將該物質(zhì)在室溫干燥DMF(2ml)中在DIEA(0.4ml)存在下攪拌，接著加L-Boc-Tbg(80mg,0.35mmol)和TBTU(112mg,0.35mmol)。室溫下攪拌2天后，將溶液倒在乙酸乙酯中，用5％含水碳酸鉀產(chǎn)生游離堿。處理有機(jī)相得到黃色油狀殘留物。將此物質(zhì)在硅膠柱(230-400目)上用1∶2 & 3∶1 v/v乙酸乙酯∶己烷的閃蒸色譜純化，得到40mg油，經(jīng)HPLC勻化。
最后，將該甲基酯(40mg)在1N氫氧化鉀(2ml)的甲醇(4ml)中在RT下攪拌3小時(shí)。混合物濃縮(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，30℃)，酸化至pH4(用2N鹽酸)。在C18柱上用梯度為0-50％含水乙腈(0.1％TFA)在220nm上通過(guò)制備HPLC進(jìn)行純化。收集各級(jí)份，濃縮至一半體積，凍干，得到403化合物，白色松散的固體(10mg)。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物NH+(1H,s,8.6ppm),CH(3H,m,8.2ppm),Ph(5H,寬s,7.66 & 7.53ppm),CH(1H，寬，7.22ppm),NH(1H,d,J=7.6Hz.6.71ppm),CHO(1H，寬s,5.76ppm),CH(2H,m,4.58-4.49ppm),CH(1H,m,4.04ppm),CH3O(3H,s,3.97ppm),CH(1H,d,3.86ppm),CH(7H，非常寬，1.8-2.6ppm),Boc基(9H,s,1.25ppm) 和叔丁基(9H,s,0.97ppm).
MS在m/e 675處顯示M+H+(100％)。
HPLC在18.9分鐘時(shí)峰值為98％。實(shí)施例35合成化合物333(表3) 將間甲氧基苯胺(35a)(9.15ml,81.4mmol)和二甲基乙炔基二羧酸酯(35b)(10.0ml,81.3mmol)在160ml甲醇中的溶液回流加熱2小時(shí)。真空除去溶劑，殘留物用閃蒸柱色譜(90∶10己烷-乙酸乙酯)純化。得到化合物35c(17.0g,79％產(chǎn)率)，橙色油。1HNMR(CDCl3)δ9.62(broad s,1H),7.17(dd,J=7 and 8.5Hz,1H),6.66-6.62(m,1H),6.49-6.45(m,2H),5.38(s,1H),3.77(s,3H),3.74(s,3H),3.71(s,3H). 將二苯基醚(50ml)在砂浴中加熱至內(nèi)部溫度約250℃。將二醚加成物(35c)(7.5g,28.3mmol)(溶在5ml二苯醚中)在2分鐘內(nèi)加到沸騰的溶劑中。加熱維持5分鐘，然后使反應(yīng)混合物冷卻到室溫。迅速沉淀出米黃色固體。將該固體過(guò)濾，用甲醇研制，得到4.1g(62％產(chǎn)率)的所需化合物35d。1HNMR(DMSO-d6)δ7.97(d,J=9Hz,1H),7.40(d,J=2Hz,1H),6.96(dd,J=9和2Hz,1H),6.55(s,1H),3.95(s,3H),3.84(s,3H). 將順式4-羥基-左旋-脯氨酸衍生物(35e)(1.71g,5.33mmol)、4-羥基喹啉衍生物(35f)(1.25g,5.36mmol)和三苯基膦(2.8g,10.68mmol)在75ml THF中的溶液冷卻至0℃，滴加(約用1小時(shí))DEAD(1.70ml,10.80mmol)。然后將該反應(yīng)混合物緩慢溫?zé)嶂潦覝夭⑦B續(xù)攪拌過(guò)夜。真空蒸去溶劑，殘留物用閃蒸色譜(70∶30乙酸乙酯-己烷)純化。得到化合物35g(0.7純的化合物35g和1.8g沾污了大約50％三苯基磷酸鹽氧化物的化合物35g)，白色固體。1H NMR(CDCl3)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體(4∶6)δ8.04(d,J=9Hz,1H),7.54(d,J=2.5Hz,1H),7.40-7.32(m,6H),7.23(dd,J=9和2.5Hz,1H),5.33-5.13(m,3H),4.66(t,J=7.5Hz,0.4H),4.54(t.J=8Hz,0.6H),4.07(s,3H),3.94(s,3H),4.04=3.80(m,2H),2.78-2.65(m,1H),2.47-2.34(m,1H),1.45(s,3.6H),1.37(s,5.4H). 向脯氨酸芐基酯衍生物(35g)(0.70g,1.31mmol)在甲醇-乙酸乙酯(10ml-10ml)昆合物溶液中加100mg的10％Pd/C。所得懸浮液在室溫下和氫氣氛下攪拌11/2小時(shí)。然后在Millex-Hv Millipore(0.45μm過(guò)濾器單元)上過(guò)濾，真空蒸發(fā)溶劑。得到所需化合物酸35h(0.59g)的定量產(chǎn)率。1HNMR:(CDCl3)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體70∶30δ8.06(d,J=9.5Hz,0.3H),8.01(d,J=9Hz,0.7H),7.56(d,J=2Hz,1H),7.44(寬s,0.7H),7.41(寬s,0.3H),7.24(dd,J=9and 2.5Hz,1H),5.31-5.25(m,1H),4.67(t,J=7.5Hz,0.7H),4.55(t,J=7.5Hz,0.3H),4.08(s,3H),3.95(s,3H),4.04-3.80(m,2H),2.83-2.72(m,1H),2.71-2.47(m,1H),1.46(s,9H). 將胺35i(215mg,1.21mmol)在7ml乙腈中的鹽用0.95ml DIEA(5.45mmol)處理。然后將該溶液加到酸35h(590mg,1.32mmol)和TBTU(389mg,1.21mmol)在5ml CH3CN的溶液中，在室溫下將所得溶液攪拌過(guò)夜。真空蒸發(fā)溶劑，殘留物用乙酸乙酯稀釋，用飽和碳酸氫鈉溶液洗兩次，用鹽水洗一次，然后用MgSO4干燥。真空除去溶劑，殘留物通過(guò)閃蒸柱色譜(75∶25AcOEt-己烷)純化，得到527mg(70％產(chǎn)率)所需的二肽(35j)。1HNMR:(CDCl3)δ8.01(d,J=9Hz,1H),7.55(d,J=2.5Hz,1H),7.45(s,1H),7.22(dd,J=9 and 2.5Hz,1H),5.81-5.71(m,1H),5.36-5.28(m,2H),5.18-5.12(m,1H),4.61-4.45(m,1H),4.07(s,3H),3.94(s,3H),3.91-3.74(m,2H),3.72(s,3H),2.99-2.84(m,1H),2.49-2.34(m,1H),2.20-2.08(m,1H),1.97-1.84(m,1H),1.58-1.52(m,1H),1.44(s,9H). 將雙酯35j(716mg,1.25mmol)在THF∶MeOH=1.5ml∶1.5ml混合物中的溶液冷卻至0℃，然后用NaOH水溶液1M(1.25ml,1.25mmol)處理。0℃下攪拌1小時(shí)后，加三滴冰醋酸中和NaOH。真空蒸發(fā)溶劑，在泵上干燥幾小時(shí)。 將酸35k的鈉鹽(1.25mmol)和Et3N(0.19ml,1.36mmol)在8ml THF中的溶液冷卻到0℃，加異丁酸氯甲酸酯(0.18ml,1.39mmol)。40分鐘后，加重氮甲烷(9ml,6.30mmol)并將所得溶液在0℃攪拌30分鐘，在室溫?cái)嚢?小時(shí)。真空除去溶劑，殘留物用乙酸乙酯稀釋，用飽和NaHCO3洗兩次，鹽水洗一次，用MgSO4干燥，真空蒸去溶劑，殘留物經(jīng)閃蒸柱色譜(50∶50己烷/AcOEt)純化得到378mg(52％產(chǎn)率)所需的重氮丙酮351。1HNMR:(CDCl3)δ8.00(d,J=9Hz,1H),7.42(s,1H),7.35(d,J=2.5Hz,1H),7.20(dd,J=9 and 2.5Hz,1H),6.92(s,1H),5.81-5.71(m,1H),5.35-5.28(m,3H),5.17-5.13(m,1H).4.61-4.40(m,1H),3.97(s,3H),3.96-3.74(m,2H),3.72(s,3H),2.94-238(m,2H),2.18-2.06(m,1H),1.98-1.84(m,1H),1.57-1.52(m,1H),1.42(s,9H). 向冷卻(0°)的重氮酮35l(0.37g,0.642mmol)在15ml THF溶液中加0.25ml HBr 48％。所得黃色溶液在0°攪拌1小時(shí)。反應(yīng)混合物在乙酸乙酯與飽和NaHCO3之間分配。有機(jī)相用NaHCO3洗一次以上，用MgSO4干燥。真空蒸發(fā)溶劑后，分離0.36g(90％產(chǎn)率)α-溴酮35m。 將上述α-溴酮35m(170mg,0.271mmol)在10ml異丙醇的倍液用1-乙?；?2-硫脲(64mg,0.542mmol)。所得溶液在75℃下加熱1小時(shí)。真空除去溶劑。殘留物用乙酸乙酯稀釋并用NaHCO3飽和溶液洗兩次，用鹽水洗一次，用MgSO4干燥。真空蒸發(fā)溶劑，得到182mg(＞100％)粗物質(zhì)35n。 將二肽35n(145mg,0.223mmol)用3ml的HCl在二噁烷中溶液處理。所得溶液在室溫下攪拌1小時(shí)。真空除去溶劑，殘留物用泵干燥。
將胺35O在5ml CH3CN中的鹽用195μl(1.12mmol)DIEA處理。然后將此溶液加到Boc-叔丁基甘氨酸(103mg,0.446mmol)和HATU(186mg,0.489mmol)在3ml CH3CN中的溶液中。反應(yīng)混合物在室溫中攪拌過(guò)夜。真空蒸發(fā)CH3CN。殘留物用乙酸乙酯稀釋，用飽和NaHCO3溶液洗兩次，鹽水洗一次，用MgSO4干燥。除去溶劑后，得到274mg粗的三肽35P(＞100％)。 將三肽35P(56mg,0.0733mmol)在4ml的4M HCl的二噁烷溶液攪拌2小時(shí)。真空除去溶劑，殘留物用泵抽干。
得到的胺鹽溶于4ml CH2Cl2中，用0.13ml DIEA(0.746mmol)處理接看用26mg三光氣(0.0876mmol)處理。孵育3小時(shí)后，加1,2,2-三甲基丙基胺(20mg,0.146mmol)(用Moss N.,Gauthier J.,Ferland J.M.,Feb.1995,Synlett.(2),142-144所述方法合成)。移去冰浴，在室溫下將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜。真空除去CH2Cl2。殘留物用乙酸乙酯稀釋，用NaHO3飽和溶液洗兩次，鹽水洗一次，MgSO4干燥，得到60mg(≈100％)所需脲35g。 將甲基酯35g(57mg,0.0721mmol)在THF∶H2O(2.5ml∶1ml)混合物中的溶液用固體LiOH·H2O(25mg,0.595mmol)處理并加1ml MeOH使溶液澄清。室溫下攪拌4小時(shí)后，加1M HCl溶液使反應(yīng)中和。真空除去溶劑，殘留物用制備色譜純化。該化合物溶于2.5ml MeOH，注射到平衡的Whatman Partisil 10-ODS-3(2.2×50cm)C18反相柱。純化程序20ml/nm線性梯度，λ220nm，在10％A注射至60％A,60分鐘，A:0.06％TFA/CH3CN；B:0.06％；TFA/H2O。各級(jí)份用分析HPLC進(jìn)行了分析。將收集的產(chǎn)物凍干，得到15mg化合物333，灰白色固體(27％產(chǎn)率)。1HNMR:(DMSO-d6)δ8.88(s,0.2H),8.84(d,J=4.5Hz,0.2H),8.68(d,J=8.5Hz,0.H),8.56(s,0.8H),8.40-8.13(m,1,5H),7.96(d,J=9.0Hz,0.2H),7.72-7.44(m,2.4H),7.35-7.09(m,1.2H),6.98(d,J=9Hz,0.2H),6.15(d,J=9Hz,0.2H),6.06(d,J=9Hz,0.8H),5.93(d,J=9.5Hz,0.24H),5.86(d,J=9Hz,0.8H),5.79-5.67(m,1H),5.69-5.44(m,1H),5.24-5.14(m,1H),5.09-5.01(m,1H),4.50-4.35(m,2H),4.24(d,J=9.0Hz,0.2H),4.20(d,J=9.0Hz,0.8H),4.06-3.98(m,2H),3.95(s,3H),3.77-3.60(m,2H),2.58-2.50(m,1H),2.33-2.28(m,1H),2.22(s,2.4H),2.21(s,0.6H),2.02(q,J-9Hz,1H),1.56-1.38(m,1H),1.28-1.22(m,1H),0.97(s,9H),0.83(d,J=6Hz,3H),0.72(s,9H).MS(FAB)778.3(m+H)+,776.3(M-H)-.實(shí)施例36重組HCV NS3蛋白酶1b型的克隆、表達(dá)和純化通過(guò)外部合作(Bernard Willems MD,Hópital St-Luc,Montr殫1,Canada和Dr.Donald Murphy,Laboratoire de SantéPublique du Qu bec,Ste-Anna deBellevue,Canada)獲得感染HCV的患者的血清。從通過(guò)血清RNA的逆轉(zhuǎn)錄-PCR(RT-PCR)獲得的DNA片段并使用根據(jù)其它1b系基因型之間的同源性所選擇的特異性引物，構(gòu)建HCV基因組的基因工程全長(zhǎng)cDNA模板。由整個(gè)基因組序列的確定，根據(jù)Simmonds等(《臨床微生物學(xué)雜志》(1993),31,1493-1503)的分類將1b基因型排布于HCV分離物。非結(jié)構(gòu)區(qū)域NS2-NS4B的氨基酸序列顯示93％以上與HCV 1b基因型(BK、JK和483分離物)相同，88％與HCV 1a基因型(HCV-1分離物)相同。通過(guò)PCR產(chǎn)生編碼多蛋白前體(NS3/NS4A/NS4B/NS5A/NS/5B)DNA片段，并將其引入真核生物表達(dá)載體。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后，通過(guò)成熟NS3蛋白的存在、使用蛋白質(zhì)印跡分析說(shuō)明由HCV NS3蛋白酶介導(dǎo)的多蛋白加工。沒(méi)有觀察到成熟NS3蛋白伴有含突變S1165A的多蛋白前體的表達(dá)，其中的突變S1165A可使NS3蛋白酶失活，這一發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步證實(shí)了HCV NS3蛋白酶的功能。
在pET11的細(xì)菌表達(dá)載體中克隆編碼重組HCV NS3蛋白酶(氨基酸1027-1206)的DNA片段。通過(guò)在20℃用1mM IPTG培養(yǎng)3小時(shí)誘導(dǎo)大腸桿菌BL21(DE3)pLys中的NS3蛋白酶表達(dá)。典型的發(fā)酵(18L)得到約100g濕細(xì)胞糊。將該細(xì)胞再懸浮在由25mM磷酸鈉、pH7.5 10％甘油(v/v)、1mM EDTA、0.01％NP-40的裂解緩沖液(3.0mL/g)中、并于-80℃儲(chǔ)藏。加入5mM DTT使細(xì)胞解凍和均化。然后在最后濃度分別為20mM和20μg/mL勻漿中加入氯化鎂和DN酶。在4℃培養(yǎng)25分鐘后，將勻漿在4℃超聲并以15000xg離心30分鐘。然后用1M磷酸鈉溶液調(diào)節(jié)上清液的pH至6.5。
將另外一種凝膠過(guò)濾層析步驟加到WO95/22985(本發(fā)明參考文獻(xiàn))所述的2步純化方法中。簡(jiǎn)言之，即將從細(xì)菌提取物得到的上清液載在SPHiTrap柱(Pharmacia)上，此柱在緩沖液A(50mM磷酸鈉、pH6.5 10％甘油、1mM EDTA、0.01％NP-40)中以2mL/分鐘的流速預(yù)先進(jìn)行了平衡。然后用含0.15M NaCl的緩沖液A洗滌該柱，通過(guò)使用10柱體積的線性0.15-0.3M NaCl梯度洗脫蛋白酶。合并含蛋白酶的NS3組分并稀釋至0.1M的最終NaCl濃度。將酶在HiTrap肝素柱(Pharmacia)上進(jìn)一步純化，該柱在緩沖液B(25mM磷酸鈉、pH7.5 10％甘油、5mM DTT、0.01％NP-40)中進(jìn)行了平衡。以3mL/分鐘的流速加樣。然后用含0.15M NaCl的緩沖液B以1.5mL/分鐘的流速洗滌該柱。兩步洗滌是在含0.3或1M NaCl的緩沖液B存在時(shí)進(jìn)行的。在0.3M NaCl洗滌中回收蛋白酶，并用緩沖液B稀釋3倍，再將其用于HiTrap肝素柱上、并用含0.4M NaCl的緩沖液B洗脫。最后，將含蛋白酶的NS3組分用于Superdex 75 HiLoad 16/60柱(Pharmacia)上，該柱在含0.3M NaCl的緩沖液B中進(jìn)行了平衡。通過(guò)SDS-PAGE、再通過(guò)光密度測(cè)定分析判定從混合組分獲得的HCV NS3蛋白酶的純度大于95％。
該酶在-80℃下貯存并在冰上凍干，在使用前稀釋。實(shí)施例37重組HCV NS3蛋白酶/NS4A輔因子肽放射分析測(cè)定。
根據(jù)實(shí)施例30所述的方案對(duì)酶進(jìn)行克隆、表達(dá)和制備。將酶儲(chǔ)藏在-80℃，在用于含NS4A輔因子肽的測(cè)定緩沖液中之前將其在冰上解凍并稀釋。
將用于NS3蛋白酶/NS4A輔因子肽放射測(cè)定的底物，DDIVPC-SMSYTW，在半胱氨酸和絲氨酸殘基之間通過(guò)酶進(jìn)行裂解。序列DDIVPC-SMSYTW相應(yīng)于NS5A/NS5B天然裂解位點(diǎn)，其中P2中的半胱氨酸殘基取代了脯氨酸。在有或無(wú)抑制劑時(shí)，用重組NS3蛋白酶和NS4A肽輔因子KKGSVVIVGRIILSGRK(酶與輔因子的摩爾比1∶100)培養(yǎng)肽底物DDIVPC-SMSYTW和示蹤生物素-DDIVPC-SMS[125I-Y]TW。通過(guò)在過(guò)濾后的測(cè)定混合物中加入包覆親和素的瓊脂糖珠而從產(chǎn)品分離底物。在濾液中出現(xiàn)的SMS[125I-Y]TW產(chǎn)品數(shù)量可用于計(jì)算底物轉(zhuǎn)化的百分比和抑制百分比。A．試劑從Gibco-BRL.獲得Tris和Tris-HCl(超純的)。甘油(超純的)、MES和BSA是從Sigma購(gòu)得。從Pierce獲得TCEP,DMSO來(lái)自Aldrich,NaOH來(lái)自Anachemia。
測(cè)定緩沖液50mM Tris HCl,pH7.5,30％(w/v)甘油，1mg/mL BSA,1mM TCEP(使用前所加入的TCEP是來(lái)自水中的1M貯存液)。
底物DDIVPCSMSYTW，最終濃度25μM(來(lái)自儲(chǔ)藏在-20℃的DMSO中的2mM貯存液，以避免氧化)。
示蹤物還原的單碘化底物生物素DDIVPC SMS[125I-Y]TW(終濃度約1nM)。
HCV NS3蛋白酶1b型，最終濃度25nM(來(lái)自50mM磷酸鈉、pH7.510％甘油、300mM NaOH,5mM DTT、0.01％NP-40中的貯存液)。
NS4A輔因子肽KKGSVVIVGRIILSGRK，最終濃度2.5μM(來(lái)自儲(chǔ)藏于-20℃的DMSO中的2mM貯存液)。B．方法測(cè)定是在Coster的96孔聚丙烯平板上進(jìn)行的，每個(gè)孔包含測(cè)定緩沖液中的20μL底物/示蹤物；10μL±20％DMSO/測(cè)定緩沖液中的抑制劑；10μLNS3蛋白酶1b/NS4輔因子肽(摩爾比例1∶100)。
空白(無(wú)抑制劑和酶)和對(duì)照(無(wú)抑制劑)在同樣的測(cè)定平板上進(jìn)行制備。
通過(guò)加入酶/NS4A肽溶液開(kāi)始酶促反應(yīng)，將測(cè)定混合物在23℃在溫和的振蕩下培養(yǎng)40分鐘。加入10μL 0.5 NaOH，再加入10μL MES pH5.8以使酶促反應(yīng)猝停。
在Millipore MADP N65過(guò)濾板上加入20μL包覆親和素的瓊脂糖珠(從Pierce購(gòu)得)。將猝停的測(cè)定混合物轉(zhuǎn)移至過(guò)濾板，并在23℃在溫和的振蕩下培養(yǎng)60分鐘。
用Milipore Multiscreen Vacuum Manifold過(guò)濾裝置過(guò)濾該平板，將40μL濾液轉(zhuǎn)移在不透明的96孔平板上，每孔含60μL閃爍液。
用125I液體方法在Packard TopCount儀對(duì)濾液進(jìn)行計(jì)數(shù)1分鐘。
采用下列等式計(jì)算抑制％100-[(抑制數(shù)-空白數(shù))/(對(duì)照數(shù)-空白數(shù))×100]將與希爾模型擬合的非線性曲線用于抑制-濃度數(shù)據(jù)，通過(guò)使用SAS軟件(數(shù)據(jù)軟件系統(tǒng)；SAS協(xié)會(huì),Inc.Cary,N.C.)計(jì)算50％有效濃度(IC50)。實(shí)施例38全長(zhǎng)NS3-NS4A異二聚體蛋白測(cè)定使用從HCV 1b基因型感染個(gè)體的血清(由Dr.Bernard Wilems,HōpitalSt-Luc,Montr ēal,Quēbec,Canada提供)提取的RNA、通過(guò)RT-PCR將NS2-NS5B-3’非編碼區(qū)克隆在pCR3載體(Invitrogen)上。然后通過(guò)PCR將NS3-NS4A DNA區(qū)亞克隆在pFastBacTMHTa桿狀病毒表達(dá)載體(Gibol/BRL)上。該載體序列包括編碼含六組氨酸t(yī)ag的28-殘基N-末端序列的區(qū)域。將Bac-to-BacTM桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)(Gibol/BRL)用于制備重組桿狀病毒。通過(guò)在27℃以0.1-0.2感染復(fù)數(shù)用重組桿狀病毒感染106Sf21細(xì)胞/mL，來(lái)對(duì)全長(zhǎng)成熟NS3和NS4A異二聚體蛋白(His-NS3-NS4AFL)進(jìn)行表達(dá)。收獲感染的培養(yǎng)物48～64小時(shí)后在4℃離心。在蛋白酶抑制劑混合物存在下，將細(xì)胞粒狀沉淀在50mM NaPO4、pH7.5、40％甘油(w/v)、2mM β-氫硫基乙醇中勻漿。然后用1.5％NP-40、0.5％Triton X-100、0.5M NaCl和DN酶處理從細(xì)胞裂解物中提取His-NS3-NS4AFL。超離心后，將可溶性提取物稀釋4倍，并結(jié)合在Pharmacia Hi-Trap Ni-螯合柱上。使用50-400mM咪唑梯度，將His-NS3-NS4AFL在＞90％純形式(如SDS～PAGE所判定)中洗脫。將His-NS3-NS4AFL在-80℃貯存在50mM磷酸鈉、pH7.5、10％(w/v)甘油、0.5M NaCl、0.25M咪唑、0.1％NP-40中。將其在冰上解凍、并在使用前稀釋。
在50mM Tris-HCl、pH8.0、0.25M檸檬酸鈉、0.01％(w/v)n-十二烷基-β-D-麥芽糖甙、1mM TCEP中測(cè)定His-NS3-NS4AFL的蛋白酶活性。在23℃用1.5nM His-NS3-NS4AFL對(duì)各種濃度的抑制劑中的內(nèi)部驟冷的底物氨茴內(nèi)酐基-DDIVPAbu[C(O)-O]-AMY(3-NO2)TW-OH進(jìn)行培養(yǎng)45分鐘。最終的DMSO濃度沒(méi)有超過(guò)5.25％。加入pH5.8的1M MES使反應(yīng)終止。在裝有96孔平板讀數(shù)器的Perkin-Elmer LS-50B熒光計(jì)(激發(fā)波長(zhǎng)325nm；發(fā)射波長(zhǎng)423nm)上監(jiān)測(cè)N-末端產(chǎn)品的熒光。
采用下列等式計(jì)算抑制％100-[(抑制數(shù)-空白數(shù))/(對(duì)照數(shù)-空白數(shù))×100]將與希爾模型擬合的非線性曲線用于抑制-濃度數(shù)據(jù)，通過(guò)使用SAS軟件(數(shù)據(jù)軟件系統(tǒng)；SAS協(xié)會(huì)，Inc.Cary,N.C.)計(jì)算50％有效濃度(IC50)。實(shí)施例39基于NS3蛋白酶細(xì)胞的測(cè)定用Huh-7細(xì)胞進(jìn)行該測(cè)定，此細(xì)胞來(lái)源于肝癌的人細(xì)胞系，用2DNA構(gòu)件共轉(zhuǎn)染-一種表達(dá)多蛋白的構(gòu)件(叫做NS3)，該蛋白包含與按下列順序NS3-NS4A-NS4B-NS5A-tTA的tTA融合的HCV非結(jié)構(gòu)蛋白；-另一種在tTA控制下表達(dá)報(bào)道蛋白、分泌堿性磷酸酶的構(gòu)件(叫做SEAP)。
必須通過(guò)用于成熟蛋白酶釋放的NS3蛋白酶使多蛋白裂解。在成熟蛋白釋放時(shí)，一般認(rèn)為病毒蛋白會(huì)在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的膜上形成一種復(fù)合體，同時(shí)tTA將向核遷移并反式激活SEAP基因。因此，NS3蛋白酶解活性的降低將導(dǎo)致成熟tTA水平下降和伴隨SEAP活性降低。
為了控制化合物的其它作用，進(jìn)行了平行轉(zhuǎn)染，而將僅表達(dá)tTA的構(gòu)件(叫做tTA)與SEAP構(gòu)件共轉(zhuǎn)染以便SEAP活性不依賴于NS3蛋白酶解活性。
測(cè)定方法使用FuGene方法(Boehringer Mannheim)將Huh-7細(xì)胞(生長(zhǎng)在CHO-SFMII+10％FCS(胎牛血清)中)與NS3和SEAP或者與tTA和SEAP共轉(zhuǎn)染。在37℃放置5小時(shí)后，洗滌細(xì)胞，進(jìn)行胰蛋白酶消化、并在含一定濃度范圍的試驗(yàn)化合物的96孔平板中制板(80000細(xì)胞/孔)。為期24小時(shí)的培養(yǎng)后，抽取等份培養(yǎng)基，并用Phospha-Light試劑盒(Ttopix)測(cè)定此等份中的SEAP活性。
用SAS軟件分析關(guān)于化合物濃度的SEAP活性的百分抑制得到EC50。
然后用下列MTT測(cè)定法測(cè)定化合物的毒性(TC50)。
每孔中加入20μL MTT溶液(5mg/ml培養(yǎng)基)并在37℃培養(yǎng)4小時(shí)；去除培養(yǎng)基，并加入50μL 0.01N HCl+10％Triton X-100；在室溫下?lián)u動(dòng)至少1小時(shí)后在595nm波長(zhǎng)處讀取每個(gè)孔的OD。
按與EC50同樣的方法計(jì)算TC50。實(shí)施例40特異性測(cè)定測(cè)定化合物對(duì)抗各種絲氨酸蛋白酶的特異性，這些蛋白酶為人白細(xì)胞彈性蛋白酶、豬胰腺?gòu)椥缘鞍酌负团Ｒ认佴撩拥鞍酌负鸵环N半胱氨酸蛋白酶人肝臟B組織蛋白酶。在所有情況下均使用對(duì)每種酶特異的比色的對(duì)硝基苯胺(pNA)底物的96孔平板式方法，每種測(cè)定包括1小時(shí)于30℃的酶抑制劑預(yù)培養(yǎng)、然后加入底物并水解至UV Thermomax微板讀數(shù)器所測(cè)定的約30％轉(zhuǎn)化。盡可能使底物濃度保持可與KM相比的低水平、以減少底物的競(jìng)爭(zhēng)。根據(jù)化合物的效價(jià)，其濃度可在300-0.06μM不等。每種測(cè)定的最終條件如下
·50mM Tris-HCl pH8,0.5M Na2SO4,50mM NaCl,0.1mM EDTA,3％DMSO,0.01％Tween-20與；·[100mM Succ-AAPF-pNA和250pMα糜蛋白酶]，[133μM Succ-AAA-pNA和8nM豬彈性蛋白酶]，[133μM Succ-AAA-pNA和8nM白細(xì)胞彈性蛋白酶]；或·[100mM NaHPO4pH6,0.1mM EDTA,3％DMSO,1mM TCEP,0.01％Tween-20,30μM Z-FR-pNA和5nM B組織蛋白酶(使用前在含20mMTCEP的緩沖液中激活貯存酶)]。
有關(guān)豬胰腺?gòu)椥缘鞍酌傅拇硇岳涌偨Y(jié)如下用Biomek液體操作器(handler)(Beckman)在聚苯乙烯平底96孔平板中加入·40μL測(cè)定緩沖液(50mM Tris-HCl pH8,50mM NaCl,0.1mM EDTA)·20μL酶溶液(50mM Tris-HCl pH8,50mM NaCl,0.1mMEDTA,0.02％Tween-20,40nM豬胰腺?gòu)椥缘鞍酌?；和·20μL抑制劑溶液(50mM Tris-HCl pH8,50mM NaCl,0.1mMEDTA,0.02％Tween-20,1.5mM-0.3μM抑制劑，15％v/v DMSO)。
在30℃預(yù)培養(yǎng)60分鐘后，在每孔中加入20μL底物溶液(50mMTris/HCl pH8,0.5M Na2SO4,50mM NaCl,0.1mM EDTA,655μM Succ-AAA-pNA)，并將該反應(yīng)在30℃進(jìn)一步培養(yǎng)60分鐘，然后在UVThermomax板讀數(shù)器上讀取吸光度。將各排孔分配為對(duì)照(無(wú)抑制劑)和空白(無(wú)抑制劑和酶)。
通過(guò)液體操作器、用50mM Tris-HCl pH8,50mM NaCl,0.1mMEDTA,0.02％Tween-20,15％DMSO在分離平板上對(duì)抑制劑溶液依序進(jìn)行的2倍稀釋。所有其它特異性測(cè)定按同樣方式進(jìn)行。
采用下式計(jì)算抑制百分比[1-((UV抑制-UV空白)/(UV對(duì)照-UV空白)×100]將與希爾模型擬合的非線性曲線用于抑制-濃度數(shù)據(jù)，通過(guò)使用SAS軟件(數(shù)據(jù)軟件系統(tǒng)；SAS協(xié)會(huì)，Inc.Cary,N.C.)計(jì)算50％有效濃度(IC50)。
化合物表下表列出了本發(fā)明的代表性化合物。在實(shí)施例37測(cè)定法和實(shí)施例38測(cè)定法之一或兩者中對(duì)本發(fā)明化合物進(jìn)行了測(cè)定，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物小于50μM(A)、5μM(B)或0.5μM(C)的IC50具有活性。
細(xì)胞中的活性和特異性本發(fā)明的一些有代表性化合物也在實(shí)施例39的基于替代細(xì)胞測(cè)定法和實(shí)施例40的一種或幾種測(cè)定法中進(jìn)行了測(cè)試。例如，發(fā)現(xiàn)表6的化合物601的IC50在實(shí)施例37的測(cè)定法中測(cè)得50nM和實(shí)施例38的測(cè)定法中測(cè)得30nM。通過(guò)實(shí)施例39的測(cè)定法所測(cè)定的EC50為8.2μM。在實(shí)施例40的特異性測(cè)定中，發(fā)現(xiàn)同一化合物具有下列活性HLE＞75μM；PPE＞75μM；α-Chym.＞75μM；Cat.B＞75μM.
這些結(jié)果顯示此化合物族對(duì)NS3蛋白酶具有高度特異性并且該族化合物中某些化合物在替代細(xì)胞基測(cè)定中具有活性。
下表列出了本發(fā)明的代表性化合物。使用了下列縮寫(xiě)MS質(zhì)譜數(shù)據(jù)；Ac乙?；?；Bn芐基；Boc叔丁氧羰基；cHex環(huán)己基；Chg環(huán)己基甘氨酸(2-氨基-2-環(huán)己基-乙酸)；iPr異丙基；O-Bn芐氧基；Ph苯基；t-Bu叔丁基；Tbg叔丁基甘氨酸。1-or2-Np:1-或2-萘基；1-or2-NpcH2O:1-或2-萘甲氧基。 表2
表3
表4
表5
表6
表7
表8
表9
表10
權(quán)利要求
1．式(Ⅰ)化合物是外消旋體、非對(duì)映異構(gòu)體、旋光異構(gòu)體、或者其藥學(xué)上可接受的鹽或酯 其中B是H、C6或C10的芳基、C7-16的芳烷基；Het或(低級(jí)烷基)-Het，所有這些基團(tuán)均可被C1-6基取代或不取代；C1-6烷氧基；C1-6烷?；?；羥基；羥基烷基；鹵素；鹵烷基；硝基；氰基；氰基烷基；可被C1-6烷基取代或不取代的氨基；酰氨基；或(低級(jí)烷基)酰胺；或者B是式R4-C(O)-的酰基衍生物；式R4-O-C(O)-的羧基；式R4-N(R5)-C(O)-的酰胺基；式R-N(R5)-C(S)-的硫酰胺基；或式R4-SO2的硫?；?，其中R4是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷?；⒘u基、C1-6烷氧基、可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低級(jí)烷基)酰胺基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基、C3-7環(huán)烷氧基、或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可被羥基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低級(jí)烷基)酰胺基取代或不取代；(ⅲ)可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低級(jí)烷基)酰胺基；(ⅳ )C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het或(低級(jí)烷基)-Het，兩者均可被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；R5是H或C1-6烷基；條件是當(dāng)R4是酰胺基或硫酰胺基時(shí)，R4不是(ⅱ)的環(huán)烷氧基；以及Y是H或C1-6烷基；R3是C1-8烷基、C3-7環(huán)烷基、或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可被羥基、C1-6烷氧基、C1-6硫烷基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、C6或C10芳基、或C7-16芳烷基取代或不取代；R2是CH2-R20、NH-R20、O-R20或S-R20，其中R20是飽和或不飽和的C3-7環(huán)烷基或C4-10的(烷基環(huán)烷基)，這些均可不被取代或被R21單取代、二取代或三取代，或者R20是C6或C10芳基、或C7-14芳烷基，這些均可不被取代或被R21單取代、二取代或三取代，或者R20是Het或(低級(jí)烷基)-Het，兩者均可可不被取代或被R21單取代、二取代或三取代，其中每個(gè)R21各自為C1-6烷基；C1-6烷氧基；低級(jí)硫烷基；磺?；?；NO2；OH；SH；鹵素；鹵烷基；可不被取代或被C1-6烷基、C6或C10芳基、C7-14芳烷基、Het或(低級(jí)烷基)-Het單取代或二取代的氨基；可不被取代或被C1-6烷基、C6或C10芳基、C7-14芳烷基、Het或(低級(jí)烷基)-Het單取代或二取代的酰氨基；羧基；羧基(低級(jí)烷基)；C6或C10芳基、C7-14芳烷基或Het，所說(shuō)的芳基、芳烷基或Het均可被R22取代或不取代，其中R22是C1-6烷基；C3-7環(huán)烷基；C1-6烷氧基；可不被取代或被C1-6烷基的氨基；磺?；?；(低級(jí)烷基)磺?；?；NO2；OH；SH；鹵素；鹵烷基；羧基；酰胺基；(低級(jí)烷基)酰胺基；或被C1-6烷基取代或不取代的Het；R1是H、C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、C2-6環(huán)烯基、C2-6烷炔基，這些均可被鹵素取代或不取代。
2．權(quán)利要求1的式1化合物，其中B是C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷?；?、羥基、羥烷基、鹵素、鹵烷基、硝基、氰基、氰烷基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；或B是Het或(低級(jí)烷基)-Het，這些均可不被取代或被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷?；⒘u基、羥烷基、鹵素、鹵烷基、硝基、氰基、氰烷基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代。
3．權(quán)利要求1的式1化合物，其中B是R4-SO2，其中R4為C1-6烷基；酰氨基；(低級(jí)烷基)酰氨基；C6或C10芳基、C7-14芳烷基或Het，這些均可被C1-6烷基取代或不取代。
4．權(quán)利要求1的式1化合物，其中B是式R4-C(O)-的?；苌?，其中R4是(ⅰ)C1-10烷基，可被羧基、羥基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、或可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，兩者均可被羥基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低級(jí)烷基)酰胺基取代或不取代；(ⅳ )C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；(ⅴ)Het或(低級(jí)烷基)-Het，兩者均可被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代。
5．權(quán)利要求1的式1化合物，其中B是式R4-O-C(O)-的羧基，其中R4是(ⅰ)C1-10烷基，可被羧基、C1-6烷?；?、羥基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可不被取代或被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低級(jí)烷基)酰胺基取代；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可不被取代或被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代；或(ⅴ)Het或(低級(jí)烷基)-Het，兩者均可不被取代或被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代。
6．權(quán)利要求1的式1化合物，其中B是式R4-N(R5)-C(O)-的酰胺基，其中R4是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷?；⒘u基、C1-6烷氧基、可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低級(jí)烷基)酰胺基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低級(jí)烷基)酰胺基取代或不取代；(ⅲ)可任意被C1-3烷基單取代或二取代的氨基；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het或(低級(jí)烷基)-Het，兩者均可被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；和R5是優(yōu)選H或甲基。
7．權(quán)利要求1的式1化合物，其中B是式R4-NH-C(S)-的硫?；渲蠷4是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷?；駽1-6烷氧基取代或不取代的C1- 10烷基；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、氨基或酰氨基取代或不取代。
8．權(quán)利要求2的式1化合物，其中B是C6或C10芳基，可不被取代或被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷酰基、羥基、羥烷基、鹵素、鹵烷基、硝基、氰基、氰烷基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代。
9．權(quán)利要求2的式1化合物，其中B是Het，可不被取代或被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷酰基、羥基、鹵素、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代。
10．權(quán)利要求4的式1化合物，其中B是式R4-C(O)-的酰基衍生物，其中R4是(ⅰ)可被羧基、羥基、C1-6烷氧基取代或不取代的C1-6烷基；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，兩者均可被羥基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基取代或不取代；(ⅳ )C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基取代或不取代；或(ⅴ)Het，可被C1-6烷基、羥基、酰氨基、氨基取代或不取代。
11．權(quán)利要求5的式1化合物，其中B是式R4-O-C(O)-的羧基，其中R4是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷?；?、羥基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可不被取代或被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低級(jí)烷基)酰胺基取代；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可不被取代或被C1-6烷基、羥基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代；或(ⅴ)Het或(低級(jí)烷基)-Het，兩者均可不被取代或被C1-6烷基、羥基、酰氨基、或可被C1-6烷基單取代或不取代的氨基取代。
12．權(quán)利要求6的式1化合物，其中B是式R4-N(R5)-C(O)-的酰胺基，其中R4是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷酰基、羥基、C1-6烷氧基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低級(jí)烷基)酰胺基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可不被取代或被羧基、(C1- 6烷氧基)羰基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低級(jí)烷基)酰胺基取代；(ⅲ)可不被取代或被C1-3烷基單取代或二取代的氨基；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、氨基、或可不被取代或被C1-6烷基取代或不取代的酰氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het，可被C1-6烷基、羥基、氨基或酰氨取代或不取代，和R5是H。
13．權(quán)利要求7的式1化合物，其中B是式R4-NH-C(S)-的硫代酰氨基，其中R4是(ⅰ)C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基。
14．權(quán)利要求12的式1化合物，其中B是式R4-NH-C(O)-的酰氨基，其中R4是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷酰基、羥基、C1-6烷氧基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低級(jí)烷基)酰氨基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可不被取代或被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低級(jí)烷基)酰胺基取代；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、氨基或酰氨基取代或不取代。
15．權(quán)利要求1的式1化合物，其中B是 叔丁氧基羰基(Boc)或
16．權(quán)利要求1的式1化合物，其中Y是H或甲基。
17．權(quán)利要求16的式1化合物，其中Y是H。
18．權(quán)利要求1的式1化合物，其中R3是C1-8烷基、C3-7環(huán)烷基、或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可被羥基、C1-6烷氧基、C1-6硫烷基、乙酰氨基、C6或C10芳基、或C7-16芳烷基取代或不取代。
19．權(quán)利要求18的式1化合物，其中R3是叔丁基甘氨酸(Tbg)、Ile、Val、Chg或下式的側(cè)鏈
20．權(quán)利要求19的式1化合物，其中R3是Tbg、Chg或Val的側(cè)鏈。
21．權(quán)利要求1的式1化合物，其中R2是S-R20或O-R20，其中R20是C6或C10芳基、C7-16芳烷基、Het或CH2-Het，這些均可不被取代或被R21單取代、二取代或三取代，其中R21是C1-6烷基；C1-6烷氧基；低級(jí)硫烷基；可不被取代或被C1-6烷基、C6或C10芳基、C7-16芳烷基、Het或(低級(jí)烷基)-Het單取代或二取代的氨基或酰氨基；NO2；OH；鹵素；三氟甲基；羧基；C6或C10芳基、C7-16芳烷基或Het，所說(shuō)的芳基、芳烷基或Het均可被R22取代或不取代，其中R22是C1-6烷基；C3-7環(huán)烷基；C1-6烷氧基；氨基；單-或二(低級(jí)烷基)氨基；(低級(jí)烷基)酰胺基；磺?；榛?；NO2；OH；鹵素；三氟甲基；羧基或Het。
22．權(quán)利要求21的式1化合物，其中R21是C1-6烷基；C1-6烷氧基；氨基；二(低級(jí)烷基)氨基；(低級(jí)烷基)酰胺基；C6或C10芳基、或Het，所說(shuō)的芳基或Het均可被R22取代或不取代，其中R22是C1-6烷基；C3-7環(huán)烷基；C1-6烷氧基；氨基；單-或二(低級(jí)烷基)氨基；酰氨基；(低級(jí)烷基)酰胺基；鹵素；三氟甲基或Het。
23．權(quán)利要求22的式1化合物，其中R22是C1-6烷基；C1-6烷氧基；鹵素；可不被取代或被低級(jí)烷基單取代或二取代的氨基；酰氨基；(低級(jí)烷基)酰胺基；或Het。
24．權(quán)利要求23的式1化合物，其中R22是甲基；乙基；異丙基；叔丁基；甲氧基；氯代基；可不被取代或被低級(jí)烷基單取代或二取代的氨基；酰氨基；(低級(jí)烷基)酰胺基；或(低級(jí)烷基)2-噻唑基。
25．權(quán)利要求21的式1化合物，其中R2選取自以下這組基團(tuán)
26．權(quán)利要求21的式1化合物，其中R2是1-萘基甲氧基；2-萘基甲氧基；芐氧基；1-萘基氧基；2-萘基氧基；或可以被權(quán)利要求21所定義的R21不取代、單取代或二取代的喹啉氧基。
27．權(quán)利要求26的式1化合物，其中R2是1-萘基甲氧基；或可以被權(quán)利要求26所定義的R21不取代、單取代或二取代的喹啉氧基。
28．權(quán)利要求27的式1化合物，其中R2選自以下這組基團(tuán)
29．權(quán)利要求26的式1化合物，其中R2是 其中R21A是C1-6烷基；C1-6烷氧基；低級(jí)硫烷基；鹵素；可被C1-6烷基烷基取代或不取代的氨基；或C6或C10芳基、C7-16芳烷基、或Het，所說(shuō)的芳基、芳烷基或Het均可被R22取代或不取代，其中R22是C1-6烷基；C1-6烷氧基；酰氨基；(低級(jí)烷基)酰氨基；被C1-6烷基不取代、單取代或二取代的氨基；或Het；以及R21B是C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、二(低級(jí)烷基)氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、NO2、OH、鹵素、三氟甲基、或羧基。
30．權(quán)利要求29的式1化合物，其中R21A是C6或C10芳基或Het，這些均能被權(quán)利要求30所定義的R22取代或不取代。
31．權(quán)利要求30的式1化合物，其中R21A選自以下這組基團(tuán)
32．權(quán)利要求29的式1化合物，其中R2是 其中R22A是C1-6烷基；C1-6烷氧基；或鹵素；以及R21B是C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、二(低級(jí)烷基)氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、NO2、OH、鹵素、三氟甲基、或羧基。
33．權(quán)利要求29的式1化合物，其中R2是 其中R22B是C1-6烷基、可被C1-6烷基取代或不取代的氨基、酰氨基、或(低級(jí)烷基)酰氨基；而R21B是C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、二(低級(jí)烷基)氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、NO2、OH、鹵素、三氟甲基、或羧基。
34．權(quán)利要求32或33的式1化合物，其中R21B是C1-6烷氧基、或二(低級(jí)烷基)氨基。
35．權(quán)利要求32或33的式1化合物，其中R21B是甲氧基。
36．權(quán)利要求1的式1化合物，其中P1是環(huán)丁基或環(huán)丙基環(huán)，兩者均能被R1取代或不取代，其中R1是H、C1-3烷基、C3-5環(huán)烷基、或C2-4鏈烯基，這些均能被鹵素取代或不取代。
37．權(quán)利要求36的式1化合物，其中P1是環(huán)丙基，以及R1是乙基、乙烯基、環(huán)丙基、1或2-溴代乙基或1或2-溴代乙烯基。
38．權(quán)利要求37的式1化合物，其中R1是乙烯基。
39．權(quán)利要求37的式1化合物，其中在碳2上的R1對(duì)1位上的羰基為順式定向，由下式代表
40．權(quán)利要求37的式1化合物，其中在碳2上的R1對(duì)1位上的羰基為反式定向，由下式代表
41．權(quán)利要求37的式1化合物，其中碳1具有R構(gòu)型
42．權(quán)利要求41的式1化合物，其中所說(shuō)的R1取代基和順式定向的羰基具有以下絕對(duì)構(gòu)型
43．權(quán)利要求42的式1化合物，其中R1是乙基，因此在1和2位上的不對(duì)稱碳原子具有R,R構(gòu)型。
44．權(quán)利要求42的式1化合物，其中R1是乙烯基，因此在1和2位上的不對(duì)稱碳原子具有R,S構(gòu)型。
45．權(quán)利要求1的式1化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中B是C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷?；?、羥基、羥烷基、鹵素、鹵烷基、硝基、氰基、氰烷基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；或Het或(低級(jí)烷基)-Het，這些均可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷酰基、羥基、羥烷基、鹵素、鹵烷基、硝基、氰基、氰烷基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代，或者B是R4-SO2，其中R4為酰氨基；(低級(jí)烷基)酰氨基；C6或C10芳基、C7-14芳烷基或Het，這些均可被C1-6烷基取代或不取代，或B是式R4-C(O)-的?；苌?，其中R4是(ⅰ)C1-6烷基，可被羧基、羥基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，兩者均可被羥基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；(ⅴ)Het或(低級(jí)烷基)-Het，兩者均可被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代，或者B是式R4-O-C(O)-的羧基，其中R4是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷?；⒘u基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低級(jí)烷基)酰胺基取代或不取代；(ⅳ )C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het或(低級(jí)烷基)-Het，兩者均可不被取代或被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代，或者B是式R4-N(R5)-C(O)-的酰胺基，其中R4是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷?；?、羥基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、或被C1-6烷基不取代、單取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可不被取代或被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、可被C1-6烷基不取代、單取代或二取代的氨基取代；(ⅲ)可被C1-3烷基不取代、單取代或二取代的氨基；(ⅳ )C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het或(低級(jí)烷基)-Het，兩者均可被C1-6烷基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；以及R5是優(yōu)選H或甲基，或者B是式R4-NH-C(S)-的硫?；?，其中R4是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷?；駽1-6烷氧基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可不被取代或被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、氨基或酰氨基取代；Y是H或甲基；R3是C1-8烷基、C3-7環(huán)烷基、或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可被羥基、C1-6烷氧基、C1-6硫烷基、乙酰氨基、C6或C10芳基、或C7-16芳烷基取代或不取代；R2是S-R20或O-R20其中R20是C6或C10芳基、C7-16芳烷基、Het或CH2-Het，這些均可不被取代或被R21單取代或二取代，其中R21是C1-6烷基；C1-6烷氧基；低級(jí)硫烷基；可不被取代或被C1-6烷基、C6或C10芳基、C7-16芳烷基、Het或(低級(jí)烷基)-Het單取代或二取代的氨基或酰氨基；NO2；OH；鹵素；三氟甲基；羧基；C6或C10芳基、C7-16芳烷基或Het，所說(shuō)的芳基、芳烷基或Het均可被R22取代或不取代，其中R22是C1-6烷基；C3-7環(huán)烷基；C1-6烷氧基；氨基；單-或二(低級(jí)烷基)氨基；(低級(jí)烷基)酰胺基；磺?；榛?；NO2；OH；鹵素；三氟甲基；羧基或Het；或R2可選自以下這組基團(tuán) 或者R2是可以被上述所定義的R21不取代、單取代或二取代的1-萘基甲氧基；2-萘基甲氧基；芐氧基；1-萘基氧基；2-萘基氧基；或喹啉氧基；以及P1片段是環(huán)已基環(huán)，可被R1取代或不取代，其中R1是C1-3烷基、C3-5環(huán)烷基、或C2-4鏈烯基，這些均能被鹵素取代或不取代，并且在碳2上的所述R1對(duì)于1位上的羰基為順式定向，由以下基團(tuán)表示
46．權(quán)利要求45的式1化合物，其中B是C6或C10芳基，可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷酰基、羥基、羥烷基、鹵素、鹵烷基、硝基、氰基、氰烷基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；或B是Het，可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷酰基、羥基、鹵素、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、或可不被取代或被C1- 6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代，或者B是R4-SO2，其中R4為C6或C10芳基、C7-14芳烷基或Het，這些均可被C1-6烷基取代或不取代；酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基；或者B是式R4-C(O)-的酰基衍生物，其中R4是(ⅰ)可被羧基、羥基或C1-6烷氧基取代或不取代的C1-10烷基；或(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，兩者均可不被取代或被羥基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基取代；或(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基取代或不取代；或(ⅴ)Het，可被C1-6烷基、羥基、酰氨基或氨基取代或不取代；或B是式R4-O-C(O)-的羧基，其中R4是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷酰基、羥基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het或(低級(jí)烷基)-Het，兩者均可不被取代或被C1-6烷基、羥基、酰氨基、或可被C1-6烷基單取代或不取代的氨基取代，或B是式R4-N(R5)-C(O)-的酰胺基，其中R4是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷酰基、羥基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、或被C1-6烷基不取代、單取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可不被取代或被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、可被C1-6烷基不取代、單取代或二取代的氨基取代；和R5是H或甲基；或R4是(ⅲ)可被C1-3烷基不取代、單取代或二取代的氨基；或(ⅲ )C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、氨基或可被C1-6烷基取代或不取代的酰氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het，可被C1-6烷基、羥基、氨基或酰氨基取代或不取代；或B是式R4-NH-C(S)-的硫?；?，其中R4是(ⅰ)C1-10烷基；或(ⅱ)C3-7環(huán)烷基；或Y是H；R3是叔丁基甘氨酸(Tbg)、Ile、Val、Chg或下式基的側(cè)鏈 R2是1-萘基甲氧基；或被上述定義的R21不取代、單取代或二取代的喹啉氧基，或R2是R2是 其中R21A是C1-6烷基；C1-6烷氧基；C6、C10芳基或Het；低級(jí)硫烷基；鹵素；可不被取代或被C1-6烷基單取代的氨基；或C6、C10芳基、C7-16芳烷基或Het，所說(shuō)的芳基、芳烷基或Het均可被R22取代或不取代，其中R22是C1-6烷基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、或Het；P1是環(huán)丙基環(huán)，其中碳1具有R構(gòu)型， R1是乙基、乙烯基、環(huán)丙基、1或2-溴代乙基或1或2-溴代乙烯基。
47．權(quán)利要求46的式1化合物，其中B是式R4-NH-C(O)-的酰氨基，其中R4是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷?；?、羥基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰胺基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、氨基或酰氨基取代或不取代；R3是Tbg、Chg或Val的側(cè)鏈；R2是 其中R22A是C1-6烷基(如甲基)；C1-6烷氧基(如甲氧基)；或鹵素(如氯)；R21B是C1-6烷基、可被C1-6烷基單取代或不取代的氨基、酰氨基、或(低級(jí)烷基)酰胺基；而R21B是C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、二(低級(jí)烷基)氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基、NO2、OH、鹵素、三氟甲基、或羧基；以及P1是
48．權(quán)利要求45的式1化合物，由下式表示 其中B,R3,R2的定義如下
49.權(quán)利要求48的化合物#111。
50.權(quán)利要求45的化合物，由下式表示 其中B,R3,R2,R1的定義如下
51.權(quán)利要求49的化合物#203。
52.權(quán)利要求45的化合物，由下式表示 其中B,R3,R2和R1的定義如下
53.權(quán)利要求52的化合物，選自化合物#307,314,317,319,321,324,325,326,327,329,331,332,333和334。
54.權(quán)利要求45的化合物，由下式表示 其中B,R3,R2和R1的定義如下
55.權(quán)利要求54的化合物，選白化合物#403,405和406。
56.權(quán)利要求45的化合物，由下式表示 其中R3的定義如下
57.權(quán)利要求56的化合物，選自化合物#501,509和510。
58.權(quán)利要求46的化合物，由下式表示 其中R3,R21A和R21B的定義如下
59.權(quán)利要求58的化合物，選自化合物#601,602,603,604,605606,607,610,611,612,615,616,617,620,621,622,625,626,627,628,629和630。
60.權(quán)利要求46的化合物,由下式表示 其中R3和R21A的定義如下
61.權(quán)利要求60的化合物，選自化合物#701,702,703,704,705,706,707,708,709和711至737。
62.權(quán)利要求45的化合物，由下式表示 其中B,R3和R22的定義如下
63.權(quán)利要求62的化合物，選自化合物#801至825,827至858,和860至873。
64.權(quán)利要求45的化合物，由下式表示 其中B的定義如下
65.權(quán)利要求45的化合物，由下式表示 其中B,X,R3,z和R21B的定義如下
66．一種藥物組合物，包含病毒學(xué)上有效量的抗丙型肝炎的權(quán)利要求1的式Ⅰ化合物，或其治療上可接受的鹽或酯，并與藥學(xué)上可接受的載體介質(zhì)或助劑混合。
67．一種治療哺乳動(dòng)物丙型肝炎病毒感染的方法，包括給該哺乳動(dòng)物服用病毒學(xué)上有效量的抗丙型肝炎的權(quán)利要求1的式Ⅰ化合物、或其治療上可接受的鹽或酯。
68．一種治療哺乳動(dòng)物丙型肝炎病毒感染的方法，包括給該哺乳動(dòng)物服用病毒學(xué)上有效量的抗丙型肝炎的權(quán)利要求67的組合物。
69．一種抑制丙型肝炎病毒復(fù)制的方法，即將該病毒暴露于丙型肝炎病毒NS3蛋白酶抑制量的權(quán)利要求1的式Ⅰ化合物、或其治療上可接受的鹽或酯。
70．一種治療哺乳動(dòng)物丙型肝炎病毒感染的方法，即給該哺乳動(dòng)物服用病毒學(xué)上有效量的抗丙型肝炎的權(quán)利要求1的式Ⅰ化合物、或其治療上可接受的鹽或酯與另一種抗-HCV劑的組合物。
71．權(quán)利要求70的方法，其中所述的另一種抗-HCV劑是選自α-或β-干擾素、病毒唑和金剛胺。
72．權(quán)利要求70的方法，其中所述的另一種抗-HCV劑包括HCV生存期中的其它目標(biāo)的抑制劑，選自解旋酶、聚合酶、金屬蛋白酶或IRES。
73．一種制備式(1)的肽類似物的方法，其中P1是取代的氨基環(huán)丙基羧酸殘基，該方法包括一個(gè)選自APG-P3-P2或APG-P2的肽與下式P1中間體偶聯(lián)的步驟， 其中R1是C1-6烷基、環(huán)烷基或C2-6鏈烷基，這些均可被氫取代或不取代，CPG是羧基保護(hù)基，APG是氨基保護(hù)基，以及P3和P2均如上所定義。
74．一種制備1)絲氨酸蛋白酶抑制劑肽類似物或者2)HCV NS3蛋白酶抑制劑肽類似物的方法，該方法包括(適當(dāng)保護(hù)的)氨基、肽或肽片段與下式的P1中間體偶聯(lián)的步驟。 其中R1是C1-6烷基、環(huán)烷基或C2-6鏈烷基，這些均可被氫取代或不取代，以及CPG是羧基保護(hù)基。
75．一種制備1)蛋白酶抑制劑肽類似物或者2)絲氨酸蛋白酶抑制劑肽類似物的方法，該方法包括(適當(dāng)保護(hù)的)氨基、肽或肽片段與下式中間體偶合的步驟。 其中CPG是羧基保護(hù)基。
76．下式P1中間體的用途， 其中R1是C1-6烷基、環(huán)烷基或C2-6鏈烷基，這些均可被氫取代或不取代，以及CPG是羧基保護(hù)基，用于制備1)絲氨酸蛋白酶抑制劑肽類似物或者2)HCV NS3蛋白酶抑制劑肽類似物。
77．下式中間體的用途， 其中CPG是羧基保護(hù)基，用于制備1)蛋白酶抑制劑肽類似物或者2)絲氨酸HCV NS3蛋白酶抑制劑肽類似物。
78．下式P1中間體的用途， 其中R1是C1-6烷基、環(huán)烷基或C2-6鏈烷基，這些均可被氫取代或不取代，以及CPG是羧基保護(hù)基，用于制備如上定義的式1化合物。
79．一種氨基酸類似化合物，選自下式這組
80．權(quán)利要求73、74或75的方法，其中所述的氨基保護(hù)基(CPG)選自烷基酯、芳烷基酯、和經(jīng)弱堿處理或輕度還原方法而可被裂解的酯。
81．權(quán)利要求73、74或75的方法，其中所述的氨基保護(hù)基(APG)選自?；⒎甲灏被姿狨セ?、脂族氨基甲酸酯基、環(huán)烷基氨基甲酸酯基、烷基、三烷基甲硅烷基、和含硫羥基的基團(tuán)。
82．一種從(1R-2S)/(1S,2S)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙基羧酸甲酯的混合物拆分對(duì)映異構(gòu)體的方法，包括用酯酶處理所述的混合物得到相應(yīng)的(1R-2S)對(duì)映異構(gòu)體。
83．權(quán)利要求82的方法，其中所述的酯酶是阿卡酶
84．下式脯氨酸類似物的用途， 其中R21A是C1-6烷基；C1-6烷氧基；低級(jí)硫烷基；鹵素；可被C1-6烷基烷基取代或不取代的氨基；C6或C10芳基、C7-16芳烷基、或Het，所說(shuō)的芳基、芳烷基或Het均可被R22取代或不取代，其中R22是C1-6烷基；C1-6烷氧基；酰氨基；(低級(jí)烷基)酰胺；被C1-6烷基不取代、單取代或二取代的氨基；或Het；以及R21B是C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、二(低級(jí)烷基)氨基、(低級(jí)烷基)酰胺、NO2、OH、鹵素、三氟甲基、或羧基。用于合成1)絲氨酸蛋白酶抑制劑肽類似物，2)HCV NS3蛋白酶抑制劑肽類似物，或3)式1的肽類似物。
85．一種病毒學(xué)上有效量的抗丙型肝炎的權(quán)利要求1的式Ⅰ化合物、或其治療上可接受的鹽或酯在制備用于治療哺乳動(dòng)物丙型肝炎病毒感染的組合物中的用途。
86．一種丙型肝炎病毒NS3蛋白酶抑制量的權(quán)利要求1的式Ⅰ化合物、或其治療上可接受的鹽或酯在制備用于抑制該丙型肝炎病毒復(fù)制的組合物中的用途。
87．一種病毒學(xué)上有效量的抗丙型肝炎的權(quán)利要求1的式Ⅰ化合物或其治療上可接受的鹽或酯與干擾素結(jié)合在制備用于治療哺乳動(dòng)物丙型肝炎病毒感染的組合物中的用途。
全文摘要
式(1)化合物是外消旋體、非對(duì)映異構(gòu)體、旋光異構(gòu)體、或者其藥學(xué)上可接受的鹽或酯。其中B是H、C
文檔編號(hào)A61K31/13GK1323316SQ99810550
公開(kāi)日2001年11月21日 申請(qǐng)日期1999年8月9日 優(yōu)先權(quán)日1998年8月10日
發(fā)明者蒙特斯·林納斯-布魯內(nèi)特, 默里·D·貝利, 戴爾·卡梅倫, 安妮-瑪麗·福徹, 埃莉斯·吉羅, 納塔利·古德若, 特迪·哈爾莫斯, 馬克-安德烈·波帕特, 瓊·蘭考特, 揚(yáng)拉·S·桑特雷佐斯, 多米尼克·M·沃尼克 申請(qǐng)人:貝林格爾·英格海姆加拿大有限公司