專利名稱：：一種新的醫(yī)學(xué)、美容和化妝品用組合物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)美容化妝品領(lǐng)域，更具體地涉及一種利用反義多核苷酸作為活性組分來抑制黑色素生成的醫(yī)學(xué)、美容和化妝品用組合物及其應(yīng)用。皮膚中的色素主要是黑色素、胡蘿卜素和氧化血紅素。胡蘿卜素是類胡蘿卜素的一種，它通過食物進(jìn)入人體，由小腸進(jìn)入血液，被血液帶到皮膚中，很容易地在皮膚的角質(zhì)層中沉積下來，給皮膚染上黃色。一般女性皮膚中的胡蘿卜素比男性多；血紅蛋白的任務(wù)是向身體各處運(yùn)送氧氣，攜帶氧氣分子的血紅蛋白呈現(xiàn)鮮紅色，它們?cè)诩?xì)密的血管中流動(dòng)、讓皮膚紅潤(rùn)，充滿生機(jī)和活力。膚色與皮膚中黑色素的含量，黑色素存在的形式及黑色素細(xì)胞產(chǎn)生黑色素能力的強(qiáng)弱有關(guān)。如果黑色素的含量少，皮膚反映出來的就是血液的顏色，這是就是人們夢(mèng)寐以求的白里透紅的最佳膚色。黑色素是皮膚中最重要的色素它是黑色素細(xì)胞中的黑色素小體產(chǎn)生的。黑色素細(xì)胞是在胚胎中由神經(jīng)峪衍生而得，并遷移至人體很多組織中，包括表皮的底層和毛球等，黑色素細(xì)胞有樹枝狀突，多以有絲分裂形態(tài)出現(xiàn)，它沒有橋粒，并且局限于接近表皮的基底膜。樹枝狀突伸入表皮角蛋白細(xì)胞，其功能是傳遞給角蛋白細(xì)胞以成熟的黑色素顆粒。酪氨酸→多巴(DOPA)→多巴醌→多巴色素→DHICA、DHI→黑色素↑催化↑催化↑催化↑催化酪氨酸酶酪氨酸酶多巴色素互變酶DHICA氧化酶這張圖代表了近年來人們對(duì)黑色素形成過程的最新認(rèn)識(shí)，從中可以看出，酪氨酸酶、多巴色素互變酶、DHICA氧化酶在其中起了了很大的作用，在它們的幫助下，酪氨酸一步一步轉(zhuǎn)化成黑色素。黑色素形成以后，一部分會(huì)被分解，通過腎臟排出體外，另一部分會(huì)隨著表皮細(xì)胞的脫落而脫落。這一過程對(duì)年輕人來說大致需要4周，老年人可能需要10周以上。酪氨酸酶控制黑色素細(xì)胞中色素的形成過程。酪氨酸酶催化黑色素形成是開始的最關(guān)鍵的一步，即酪氨酸轉(zhuǎn)化為多巴醌。一般認(rèn)為，酪氨酸酶的活性程度對(duì)色素的沉積起著主要的作用。90年代初科學(xué)家發(fā)現(xiàn)了另外一種存在于細(xì)胞外部的物質(zhì)，也在起著推波助瀾的作用，而且是形成色斑的主要原因。由于最早是在血管的內(nèi)皮中發(fā)現(xiàn)的，所以被稱為內(nèi)皮素，其實(shí)它是皮膚的角質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的，當(dāng)皮膚受到外界的刺激，比如強(qiáng)烈的紫外線照射，內(nèi)皮素就大量地產(chǎn)主出來。黑色素細(xì)胞接受到內(nèi)皮素，就得到了加速制造黑色素的信息，這樣酪氨酸酶也被激活，黑色素大量增殖，皮膚就變黑了。如果皮膚不同區(qū)域產(chǎn)生的內(nèi)皮素多少不同，皮膚就會(huì)產(chǎn)生色斑。上面提到的酪氨酸酶、多巴色素互變酶、DHICA氧化酶和內(nèi)皮素，簡(jiǎn)稱“三酶一素”，是在皮膚變黑過程中起重要作用的物質(zhì)，也是解決黑色素問題的突破口。抑制黑色素的生成，從皮膚生理和醫(yī)學(xué)及美容角度而言都是重要的問題。目前，抑制黑色素的生成主要是利用一些化學(xué)制劑來干擾色素的形成和轉(zhuǎn)移的過程，其中包括(1)選擇性破壞黑色素細(xì)胞，抑制黑色素顆粒的形成和改變其結(jié)構(gòu)；(2)抑制酪氨酸的生物合成，抑制黑色素的生成；(3)干擾黑色素顆粒的轉(zhuǎn)移；(4)對(duì)黑色素的化學(xué)作用和增加角蛋白細(xì)胞中黑色素顆粒的降解。由于這些黑色素生成的抑制劑都不同程度的對(duì)皮膚有刺激和致敏作用，所以使用時(shí)必須慎重。因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種新的醫(yī)學(xué)、美容和化妝品用組合物，該組合物可從基因水平上阻斷、封閉或減少皮膚黑色素的合成，從而避免了化學(xué)制劑所產(chǎn)生的對(duì)皮膚的刺激和致敏作用。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供該醫(yī)學(xué)、美容和化妝品用組合物在抑制黑色素生成中的應(yīng)用。下面將描述實(shí)現(xiàn)這些目的所采用的技術(shù)方案。本發(fā)明的一個(gè)技術(shù)方案是提供一種醫(yī)學(xué)、美容和化妝品用組合物，該醫(yī)學(xué)、美容和化妝品用組合物包括至少一種多核苷酸和醫(yī)學(xué)、美容和化妝品用可接受的基質(zhì)，其中所述的多核苷酸是選自酪氨酸酶編碼基因或其mRNA、內(nèi)皮素-1編碼基因或其mRNA、DHICA氧化酶編碼基因或其mRNA、或多巴色素轉(zhuǎn)移酶編碼基因或其mRNA的反義多核苷酸片段。本發(fā)明的另一個(gè)技術(shù)方案涉及本發(fā)明所述的醫(yī)學(xué)、美容和化妝品用組合物在阻斷、封閉或減少皮膚黑色素合成中的應(yīng)用。本文所附附圖描述了本發(fā)明涉及的酪氨酸酶、內(nèi)皮素-1、DHICA氧化酶、多巴色素轉(zhuǎn)移酶的氨基酸序列及其編碼基因序列。圖1描述了酪氨酸酶的氨基酸序列及其基因序列。圖2描述了內(nèi)皮素-1的氨基酸序列及其基因序列。圖3描述了多巴素轉(zhuǎn)移酶的氨基酸序列及其基因序列。圖4描述了DHICA氧化酶的氨基酸序列及其基因序列。下面將結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作詳細(xì)描述。本發(fā)明的一個(gè)方面是提供一種醫(yī)學(xué)、美容和化妝品用組合物，該組合物含有至少一種多核苷酸，并含有醫(yī)學(xué)、美容或化妝品中可接受的基質(zhì)，其中所述的多核苷酸是選自酪氨酸酶、內(nèi)皮素-1、DHICA氧化酶、或多巴色素轉(zhuǎn)移酶的編碼基因或其mRNA的反義多核苷酸。多核苷酸的堿基長(zhǎng)度宜為10-100個(gè)堿基或更長(zhǎng)，較佳的為10-50個(gè)堿基，更佳的為15-25個(gè)堿基。本發(fā)明組合物中所含的反義多核苷酸可用以下方法制得根據(jù)酪氨酸酶、內(nèi)皮素-1、DHICA氧化酶和多巴色素轉(zhuǎn)移酶基因或mRNA的序列，設(shè)計(jì)長(zhǎng)度為10-100個(gè)堿基的反義多核苷酸并合成。多核苷酸的合成方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，例如可參見Maniatis，T等人的《分子克隆實(shí)驗(yàn)手冊(cè)》(冷泉出版社1989出版)等，或可以按照生產(chǎn)商提供的說明書來制得，因此在此不作詳細(xì)描述。在本發(fā)明中，可任選地對(duì)所述的多核苷酸作化學(xué)修飾，這些化學(xué)修飾例如包括以巰基代替DNA骨架中的磷酸羥基、合成巰代磷酸、二巰基代磷酸、甲基化磷酸DNA和肽核酸等。組合物中所含的作為有效組分的多核苷酸的含量應(yīng)能有效地抑制黑色素的生成，該用量取決于使用者以及需要抑制的黑色素生成的程度。但是，多核苷酸通常的濃度宜為0．1fmol／L-100μmol／L，較佳的為1fmol／L-10μmol／L。本發(fā)明中最佳的是，組合物中所含多核苷酸包括選自酪氨酸酶、內(nèi)皮素-1、DHICA氧化酶以及多巴色素轉(zhuǎn)移酶所有這些酶編碼基因或其mRNA的反義多核苷酸。本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及含有酪氨酸酶和／或內(nèi)皮素-1和／或DHICA氧化酶和／或多巴色素轉(zhuǎn)移酶的編碼基因或mRNA反義多核苷酸的醫(yī)學(xué)、美容和化妝品用組合物在封閉、阻斷或抑制黑色素生成中的應(yīng)用。該醫(yī)學(xué)、美容和化妝品用組合物可以直接涂抹于皮膚上，或用離子導(dǎo)入，基因槍或磷酸鈣沉淀等方法來促進(jìn)多核苷酸進(jìn)入細(xì)胞發(fā)揮其作用?，F(xiàn)已知道，反義多核苷酸能和其互補(bǔ)靶基因(或其產(chǎn)物)結(jié)合并使之失活，而且具有非常高的序列特異性。因而，用反義DNA或RNA來抑制與其互補(bǔ)的特異基因或mRNA是一種阻斷某種蛋白質(zhì)合成(從而阻斷其活性)的絕對(duì)精確的方法。一般說來，只需要約15個(gè)堿基就能特異性地抑制從人基因組中轉(zhuǎn)錄來的任何特定mRNA的活性。因此，反義療法在本質(zhì)上是應(yīng)用基因的天然順序的信息，創(chuàng)造出合理的藥物設(shè)計(jì)的理想模型。另外，也可以對(duì)這些多核苷酸進(jìn)行人工化學(xué)修飾，使之能夠以足夠高的濃度到達(dá)靶組織中，以增高或降低某種靶蛋白質(zhì)的量。反義和有義核酸相互作用并誘導(dǎo)出生物學(xué)作用的機(jī)制是非常復(fù)雜的，而且可能是多種多樣的，因?yàn)榛虮磉_(dá)可能在不同的水平上受到影響。反義抑制可以在mRNA生成到被翻譯成有功能活性的蛋白質(zhì)的各個(gè)階段中的各個(gè)位點(diǎn)上起作用。反義分子調(diào)節(jié)作用的主要部位是在細(xì)胞核中，在完整的細(xì)胞中，反義多核苷酸能夠和它們的互補(bǔ)順序相結(jié)合。這不但是和mRNA，而且亦可和前體mRNA甚至和DNA結(jié)合。這樣的結(jié)合就可能阻斷轉(zhuǎn)錄或剪接；或阻斷成熟mRNA被運(yùn)送入細(xì)胞漿。最近證明，基因表達(dá)或病毒復(fù)制能直接被多核苷酸所特異阻斷。大多數(shù)反義多核苷酸在設(shè)計(jì)時(shí)或研究時(shí)，不論在原核或真核細(xì)胞中，其機(jī)制均認(rèn)為是翻譯的停頓。通過形成雙股多核苷酸-mRNA結(jié)構(gòu)(針對(duì)AUG起始密碼子或其上游的5＇非翻譯區(qū))可以產(chǎn)生空間位阻效應(yīng)，從而阻止核糖體的結(jié)合或掃過該mRNA。另一種機(jī)制是靶mRNA可能被RNaseH核酸酶所降解，或被經(jīng)修飾的多核苷酸引發(fā)化學(xué)損傷，從而造成翻譯停頓。多核苷酸可以包入脂質(zhì)體中或通過與脂質(zhì)體形成復(fù)合物，利用脂質(zhì)體與細(xì)胞的高度親和性和細(xì)胞靶向性，與細(xì)胞發(fā)生吸附、融合、脂交換，被細(xì)胞內(nèi)吞等將包封的多核苷酸直接帶入細(xì)胞，與細(xì)胞膜融合而導(dǎo)入細(xì)胞中而提高治療指數(shù)或提高生物利用度。另外也可以用基因槍或磷酸鈣沉淀法將多核苷酸導(dǎo)入細(xì)胞。一旦組合物中的酪氨酸酶、內(nèi)皮素-1、DHICA氧化酶和／或多巴色素轉(zhuǎn)移酶的編碼基因或mRNA的反義多核苷酸被皮膚角質(zhì)細(xì)胞和黑色素細(xì)胞吸收，其就可阻斷或封閉酪氨酸酶、內(nèi)皮素-1、DHICA氧化酶和／或多巴色素轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)，從而通過基因治療的原理阻斷、封閉或減少皮膚黑色素的合成，抑制皮膚色素沉著，防治皮膚損傷愈合后的色素加深。另外，多核苷酸還可吸收200-320nm波段范圍紫外線(UVB／C)，保護(hù)皮膚免受該頻段紫外線的傷害，并具有良好的保濕和皮膚吸收性能。本發(fā)明組合物中所含的醫(yī)學(xué)、美容或化妝品中可接受的基質(zhì)是本領(lǐng)域中制備化妝料時(shí)常用的一些基質(zhì)。這些基質(zhì)，例如包括(但不局限于)磷脂、卵磷脂、膽固醇、乙醚、磷酸二氫鈉、卡波姆等。另外，本發(fā)明的組合物中還可摻入美白劑、賦形劑、香料等，以及油脂類、表面活性劑、保濕劑、pH調(diào)節(jié)劑、增稠劑、防腐劑、抗氧化劑、紫外線吸收劑、顏料、乳化劑、來自動(dòng)植物之成分、維生素類、氨基酸類等。這些添加劑及其用量不應(yīng)使本發(fā)明組合物中的多核苷酸片段斷裂。所述美白劑，例如包括麴酸、熊果苷、胎盤萃取物、抗壞血酸、磷酸L-抗壞血酸鎂等抗壞血酸磷酸鹽、抗壞血酸衍生物、桑白皮萃取物、甘草萃取物、泛酰硫氫乙胺-S-磺酸鈣等。所述油脂類，例如有液體石蠟、石蠟、鯨蠟醇、鱷梨油、橄欖油、薄荷巴油、椰子油等植物性油脂；牛脂、豬脂、馬脂、海龜油、貂油、鱸魚油、角鯊?fù)榈葎?dòng)物性油脂；甲基聚硅氧烷、山梨醇、甘油三癸酰癸酸酯、甘油三辛酸酯、甘油三異棕櫚酸酯，硅酮油等合成油脂等。所述表面活性劑，例如有月桂基硫酸鈉、月桂基硫酸三乙醇胺、月硅酸二乙醇酰胺等陽離子型表面活性劑；氯化硬脂酰三甲基銨、氯化鯨蠟基三甲基銨、氯芐烷胺等陽離子型表面活性劑；甘油單硬脂酸酯，山梨糖醇酐單硬脂酸酯、取聚乙烯(20)山梨糖醇酐單硬脂酸酯、聚氧乙烯硬化蓖麻油、蔗糖酯、脂肪酸酰胺等非離子型表面活性劑等。所述的保濕劑例如有甘油、丙二醇、1，3-丁二醇、吡咯烷酮羧酸蘇打、泛酰硫氫乙胺-S-磺酸鹽等合成保濕劑；玻璃糖醛酸、膠原蛋白、彈性蛋白、胎盤萃取物、蜂王漿、微生物發(fā)酵液、例如幾丁質(zhì)、殼聚糖、果膠等和其它來自植物和動(dòng)物的萃取液等天然保濕液等。所述pH調(diào)節(jié)劑，例如有檸檬酸、檸檬酸鈉等有機(jī)酸及其鹽類等。所述的增稠劑，例如有羧甲基纖維素、羥甲基纖維素、羥乙基纖維素、羧乙烯聚合物、聚乙烯醇、西黃蓍膠、藻酸鈉、角叉菜膠等。所述防腐劑例如有對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、對(duì)羥基苯甲酸丁酯、對(duì)羥基苯甲酸酯、苯氧基乙醇、乙醇、脫氫醋酸等。所述的抗氧化劑，例如有維生素E、丁基化羥基甲苯(BHT)、丁基化羥基茴香醚(BHA)等。所述的顏料，例如有氧化鐵紅、氧化鐵黃、氧化鐵黑、氧化鈦、耐龍粉末、絹云母、云母、滑石等。所述乳化劑例如大豆卵磷脂等。所述的賦形劑，例如有甘露糖醇、硫酸鈉等。下面將描述本發(fā)明的具體實(shí)施例。實(shí)施例1用ABI系列(美國(guó)PEsystem公司制造)或其他系列的DNA合成儀，按照Maniatis，T等人的《分子克隆實(shí)驗(yàn)手冊(cè)》(冷泉港出版社1989出版)中提供的方法固相合成下列多核苷酸酪氨酸酶反GCGGAGGTCTGGAAACTCCACAGCAGG反義多核苷酸1義多核苷酸CAGTACAAAACAGCCAGGAG內(nèi)皮素-1反AAGCCACAAACAGCAGAGAGAAAATC反義多核苷酸2義多核苷酸ATGAGCAAATAATC多巴色素轉(zhuǎn)移TGCAGCCCAAGCAACTGAGCAGAAACC反義多核苷酸3酶反義多核苷酸CCCACCAAAGGGGGCTDHICA氧化酶CAGGACCAGGAACATGTAACCCAGAG反義多核苷酸4反義多核苷酸AGAGGAGTGTAGGAGATTT將上述合成的各產(chǎn)物在NH3環(huán)境下55℃處理12小時(shí)，真空干燥后重新懸浮于2．5mol／L的乙酸銨溶液中，用2倍體積的冷乙醇(-20℃)沉淀，-80℃冷乙醇懸浮，沉淀，干燥，用分光光度計(jì)估測(cè)其含量后即可直接使用。實(shí)施例2配方<tablesid="table1"num="001"><table>成分重量份Tris(三羥甲基氨基甲烷)6．068HCl(1mol／L)42EDTA(0．1mol／L)0．5反義多核苷酸1O．12H2O加至100</table></tables>制法先以適量的水溶解Tris，加入HCl后，用1mol／L的HCl或1mol／L的NaOH將pH調(diào)至7．5，加入反義多核苷酸1，最后加水至設(shè)定的體積，制得含有反義多核苷酸的水溶液組合物(配方1)，灌封于適當(dāng)?shù)娜萜髦?。?shí)施例3按實(shí)施例2所述方法制得含有反義多核苷酸的溶液組合物(配方2)，只是用0．05份反義多核苷酸2代替其中的反義多核苷酸1。實(shí)施例4按實(shí)施例2所述方法制得含有反義多核苷酸的溶液組合物(配方3)，只是用0．005份反義多核苷酸3代替其中的反義多核苷酸1。實(shí)施例5按實(shí)施例2所述方法制得含有反義多核苷酸的溶液組合物(配方4)，只是用反義多核苷酸1、2、3、4各0．01份的組合物代替其中的反義多核苷酸1。實(shí)施例6<tablesid="table2"num="002"><table>成分重量百分比卵磷脂0．925膽固醇0．45乙醚25配方12水加至100</table></tables>制法(1)取卵磷脂、膽固醇，溶于乙醚中。(2)將配方1溶于水中，加熱至55℃，在磁力攪拌下，將(1)緩慢滴人(2)中，保持50℃，繼續(xù)攪拌30分鐘，制得含有反義多核苷酸的脂質(zhì)體組合物(配方5)并灌封于適當(dāng)?shù)娜萜髦小?shí)施例7按照實(shí)施例6所述方法制得含有反義多核苷酸的脂質(zhì)體組合物(配方6)，只是用2％(重量)的配方4代替配方1。實(shí)施例8<tablesid="table3"num="003"><table>成分重量百分比配方32磷脂2膽固醇0．4乙醚60磷酸二氫鈉．2H2O0．165磷酸氫二鈉3．37注射用水加至加至100</table></tables>制法取反義多核苷酸溶液(配方3)、磷脂、膽固醇溶于乙醚中，加入磷酸緩沖液80ml搖勻，超聲振蕩30分鐘。轉(zhuǎn)入薄膜旋轉(zhuǎn)儀，蒸發(fā)乙醚至盡，即得含有反義多核苷酸的多相脂質(zhì)體組合物。過濾，灌封于適當(dāng)?shù)娜萜髦?，?jīng)100℃水浴20分鐘滅菌，制得含有反義多核苷酸的多相脂質(zhì)體組合物(配方7)。實(shí)施例9按照實(shí)施例8所述方式制得含有反義多核苷酸的多相脂質(zhì)體組合物(配方8)，只是用相同百分比配方4代替配方3。實(shí)施例10<tablesid="table4"num="004"><table>成分重量百分比卡波姆0．2配方42水加至100</table></tables>制法將卡波姆完全溶于10倍重量的水后，與反義多核苷酸混合，加水至100％，制得含有反義多核苷酸的凝膠組合物(配方9)灌封于適當(dāng)?shù)娜萜髦小?shí)施例11下面研究本發(fā)明組合物的黑色素抑制水平。根據(jù)毛培坤等《功能性化妝品測(cè)定方法》(1998)中描述的測(cè)定方法，用惡性黑色瘤細(xì)胞試驗(yàn)本發(fā)明組合物的黑色素抑制水平(1)在MEM培養(yǎng)液中加入10％濃度的胎牛血清作B-16黑瘤細(xì)胞的傳代培養(yǎng)。對(duì)于黑瘤細(xì)胞的色素形成能隨培養(yǎng)次數(shù)按比例減少的場(chǎng)合，不僅要嚴(yán)格選擇血清的批量，而且時(shí)常要在BL57鼠背的皮下增殖黑瘤，分離新的黑瘤細(xì)胞，選擇其中色素形成能高的黑瘤細(xì)胞。(2)根據(jù)細(xì)胞顆粒的色調(diào)抑制黑色素產(chǎn)生的測(cè)定法添加0．1％葡糖胺培養(yǎng)至B-16黑瘤細(xì)胞完全白化時(shí)，洗去葡糖胺，再加入2mmol／L的茶堿，促進(jìn)回復(fù)到黑色素合成狀態(tài)，同時(shí)加入試驗(yàn)樣品，根據(jù)細(xì)胞顆粒的色調(diào)按以下標(biāo)準(zhǔn)的5階段制定對(duì)新生的黑色素抑制效果細(xì)胞顆粒的色調(diào)0……………………………·與對(duì)照樣呈相同黑色1……………………………·與對(duì)照樣相比稍淡些黑色2……………………………·與對(duì)照樣相比明顯淡些黑色3……………………………·近灰色的黑色4……………………………·灰色5……………………………·白色細(xì)胞顆粒的量1……………………………·與對(duì)照樣同量2……………………………·稍少些3……………………………·明顯少結(jié)果顯示在下表1中。表1配方編號(hào)細(xì)胞顆粒的色調(diào)細(xì)胞顆粒的量15級(jí)3級(jí)24級(jí)3級(jí)34級(jí)2級(jí)45級(jí)3級(jí)54級(jí)2級(jí)65級(jí)2級(jí)74級(jí)3級(jí)85級(jí)3級(jí)從上表可以看出，含有酪氨酸酶、多巴色素互變酶、DHICA氧化酶和內(nèi)皮素中任一種酶的編碼基因或mRNA的反義多核苷酸的組合物對(duì)新生的黑色素抑制效果均可達(dá)到4／5級(jí)色調(diào)水平和細(xì)胞顆粒的量2／3級(jí)水平，而含有各種酶的反義多核苷酸片段的混合物則可達(dá)5級(jí)水平和細(xì)胞顆粒的量2／3級(jí)水平。實(shí)施例12將10名女性作為對(duì)象，用分光測(cè)色計(jì)CM-1000在其上腕內(nèi)側(cè)部測(cè)定2×MED(MinimumErythemaDose)UV照射后的黑色素指數(shù)和紅斑指數(shù)隨時(shí)間的變化曲線。表中數(shù)值表示測(cè)定平均值。施用組1和組2測(cè)定前一小時(shí)內(nèi)在測(cè)定部位涂抹配方5和配方6，以后每天一次；對(duì)照組僅涂抹實(shí)施例6中除本發(fā)明反義多核苷酸組分外的其它基質(zhì)，用法相同。根據(jù)毛培坤等《化妝品功能性評(píng)價(jià)和分析方法》(中國(guó)輕工業(yè)出版社，1998)的方法作如下測(cè)定利用構(gòu)成皮膚色的色素的特定的反射分光特性，根據(jù)皮膚中血紅蛋白和黑色素的吸收光譜選擇光源，將568nm和655nm作為二種特定波長(zhǎng)，參照日本工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)JISZ8722擴(kuò)散照明／垂直受光方式。用分光測(cè)色計(jì)(CM-1000)，用脈沖氖燈作光源，測(cè)定反射光的強(qiáng)度。接觸式測(cè)定直徑是8mm。用下列式計(jì)算出紅斑和色素沉著的程度作為紅斑指數(shù)和黑色素指數(shù)。紅斑指數(shù)=lg(1／G)-lg(1／R)黑色素指數(shù)=lg(1／R)公式中G--綠色光的反射光的強(qiáng)度R--紅色光的反射光的強(qiáng)度結(jié)果顯示在下表2和3中。表2黑色素指數(shù)值<tablesid="table5"num="005"><table>0天1天2天3天7天14天21天28天35天56天對(duì)照組59．158．864．567．771．069．868．168．067．667．0組159．159．060．961．262．161．058．658．558．358．3組259．158．960．260．560．960．159．058．658．358．2</table></tables>表3紅斑指數(shù)值<tablesid="table6"num="006"><table>0天1天2天3天7天14天21天28天35天56天對(duì)照組11．525．119．517．817．517．016．716．215．915．2組111．517．915．515．414．313．913．412．912．712．3組211．517．115．3l5．114．313．513．212．712．412．1</table></tables>結(jié)果表明，含有“三酶一素”編碼基因或mRNA反義多核苷酸的組合物不僅對(duì)皮膚黑色素具有抑制作用，而且可減少紫外線對(duì)皮膚的損傷。很明顯，基于上面所作的描述，可對(duì)這些方法做多方面的改動(dòng)。這樣的改動(dòng)不能被視為超出了本發(fā)明的精神和目的，對(duì)于那些在本領(lǐng)域內(nèi)專家看來是顯而易見的改動(dòng)均應(yīng)包括于本發(fā)明所要求的權(quán)利范圍之內(nèi)。權(quán)利要求1．一種醫(yī)學(xué)、美容和化妝品用組合物，該醫(yī)學(xué)、美容和化妝品用用組合物包括至少一種多核苷酸和醫(yī)學(xué)、美容和化妝品用可接受的基質(zhì)，其中所述多核苷酸是選自酪氨酸酶編碼基因或其mRNA、內(nèi)皮素-1編碼基因或其mRNA、DHICA氧化酶編碼基因或其mRNA、或多巴色素轉(zhuǎn)移酶編碼基因或其mRNA的反義多核苷酸片段。2．根據(jù)權(quán)利要求1所述的醫(yī)學(xué)、美容和化妝品用組合物，其中所述反義多核苷酸片段序列的堿基長(zhǎng)度為10-100個(gè)。3．根據(jù)權(quán)利要求1所述的醫(yī)學(xué)、美容和化妝品用組合物，其中所述多核苷酸是經(jīng)過或未經(jīng)化學(xué)修飾的多核苷酸。4．根據(jù)權(quán)利要求3所述的醫(yī)學(xué)、美容和化妝品用組合物，其中所述修飾是以巰基代替DNA骨架中的磷酸羥基、合成巰代磷酸、二巰基代磷酸、甲基化磷酸DNA和肽核酸等。5．根據(jù)權(quán)利要求1所述的醫(yī)學(xué)、美容和化妝品用組合物，其中所述多核苷酸的濃度為0．1fmol／L-100μmol／L。6．根據(jù)權(quán)利要求1所述的醫(yī)學(xué)、美容和化妝品用組合物，它進(jìn)一步還包含其它防曬、護(hù)膚和細(xì)胞因子類藥品、化妝品和美容品。7．權(quán)利要求1所述的醫(yī)學(xué)、美容和化妝品用組合物在阻斷、封閉或減少皮膚黑色素合成中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種醫(yī)學(xué)、美容和化妝品用組合物,該組合物包括至少一種多核苷酸和醫(yī)學(xué)、美容和化妝品用可接受的基質(zhì),其中所述多核苷酸是選自酪氨酸酶編碼基因或其mRNA、內(nèi)皮素－1編碼基因或其mRNA、DHICA氧化酶編碼基因或其mRNA、或多巴色素轉(zhuǎn)移酶編碼基因或其mRNA的反義多核苷酸片段。本發(fā)明還涉及該醫(yī)學(xué)、美容和化妝品用組合物的應(yīng)用,利用脂質(zhì)體或其它基因?qū)爰夹g(shù),該組合物進(jìn)入皮膚細(xì)胞或被皮膚細(xì)胞吸收后通過反義核酸基因治療的原理阻斷、封閉或減少皮膚黑色素的合成,抑制皮膚色素沉著,防止皮膚損傷愈合后的色素加深。文檔編號(hào)A61K31/7052GK1293038SQ99116999公開日2001年5月2日申請(qǐng)日期1999年10月19日優(yōu)先權(quán)日1999年10月19日發(fā)明者姜寧,何政紅申請(qǐng)人:姜寧,何政紅