專利名稱：減輕炎癥作用的組合物和制品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般涉及藥物治療學(xué)和采用光動力學(xué)治療(“PDT”)的領(lǐng)域，以減輕或預(yù)防受損組織(無論是內(nèi)部損傷如外科手術(shù)，或意外損傷如皮膚劃破、關(guān)節(jié)和腱損傷)炎癥反應(yīng)及治療燒傷患者。在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及使用“低劑量”PDT治療因眼組織處理而發(fā)生炎癥的眼組織，特別是患者由必經(jīng)過程恢復(fù)由炎癥成為并發(fā)因素時。常見的應(yīng)用包括炎癥性眼病和各種類型的眼科手術(shù)或激光治療，例如常用于治療青光眼的移植術(shù)和眼科濾過手術(shù)。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及濾過泡存留(filtration bleb survival)的擴(kuò)展以改善濾過手術(shù)的結(jié)果。
背景技術(shù)：
炎癥概述通常與炎癥相關(guān)的四個基本癥狀是(1)紅、(2)腫、(3)熱和(4)痛，還可有第五個基本癥狀，即受累部位的功能障礙。損傷觸發(fā)一系列活動，大多數(shù)是同時發(fā)生并以各種方式相互作用，眾所周知，小血管以重要的方式參與炎癥的產(chǎn)生。事實(shí)上，炎癥是機(jī)體有價值的防御機(jī)制之一，一般認(rèn)為有3個期變性期、血管期和愈合期。見Klein，“活動的防御反應(yīng)”，Immunology，The Science of Self-Nonselfdiscrimination，第14章，577-84(1982)，其內(nèi)容納入本文作為參考。
具體地說，在變性期，受累細(xì)胞(主要是上皮細(xì)胞和纖維細(xì)胞)變得腫脹，其胞質(zhì)形成空泡，核增大、裂成碎片。受損血管中的一些血小板分裂，釋放出5-羥色胺和其它作用于交感神經(jīng)末梢的介質(zhì)。
血管期的特征是血管變化，所謂炎癥細(xì)胞(粒細(xì)胞-特別是中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)的廣泛移行和活化，及變性細(xì)胞和細(xì)胞碎片的清除。在主動性充血中，毛細(xì)血管網(wǎng)和毛細(xì)血管后微靜脈變得充盈、充血和腫脹。因?yàn)槊?xì)血管的數(shù)目也增加，人們觀察到炎癥組織外觀發(fā)紅，有時稱作“潮紅”。增加的血流還引起炎癥區(qū)域溫度接近較溫暖的主動脈血的溫度，與周圍正常組織相比，產(chǎn)生熱的感覺。
受傷時，受損組織釋放一些物質(zhì)，已知它們與組織胺有關(guān)，稱作H物質(zhì)，是由破碎組織肥大細(xì)胞釋放的組織胺和5-羥色胺的混合物。H物質(zhì)引起血管活動性擴(kuò)張，擴(kuò)張的血管的內(nèi)皮細(xì)胞互相分離，引起它們之間的間隙擴(kuò)大。沿血管排列的內(nèi)皮逐漸被白細(xì)胞覆蓋，使一些液體滲出到周圍組織中。滲出血管進(jìn)入周圍組織的富含蛋白質(zhì)的液體引起組織腫脹。滲出液還包含中和細(xì)菌毒素和有助于致炎因子破壞的物質(zhì)。
白細(xì)胞(特別是中心粒細(xì)胞和單核細(xì)胞)在血管壁上移行，直至找到合適的間隙，可通過該間隙遷移到血管周圍結(jié)構(gòu)和組織間隙中。白細(xì)胞攻擊死亡的和瀕死的細(xì)胞，通過吞噬作用在細(xì)胞內(nèi)消化它們或通過其自身死亡后從其溶酶體釋放的蛋白分解酶在細(xì)胞外消化它們。白細(xì)胞移行的刺激據(jù)信以趨化因子的形式來自受損組織。
血小板是深受組織損傷影響的另一細(xì)胞類型。損傷后不久，單個的或成團(tuán)的血小板粘附到血管壁上。同時，纖維蛋白纖維開始出現(xiàn)，形成細(xì)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，幫助捕獲細(xì)胞。形成的凝塊將受損組織的邊緣拉到一起。
中心粒細(xì)胞和單核細(xì)胞對壞死組織的細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外消化產(chǎn)生一種液體，它與從血管擠出來的漿液狀物質(zhì)結(jié)合。如果形成膿腫，在感染細(xì)菌的傷口中，致熱膜沿腔排列，阻止病原微生物播散到血液中并在其中繁殖。
在炎癥過程的前兩期中，外源體被摧毀(如當(dāng)外源體是生物體時)或其周圍的組織被松解(當(dāng)它是碎片時)。在愈合期，炎癥開始消退，各個血管和血管型重又恢復(fù)正常，傷口開始修復(fù)。修復(fù)過程中的三個主要變化是(1)通過成纖維細(xì)胞增殖形成新的結(jié)締組織；(2)上皮再生；和(3)新毛細(xì)血管過度生長。
甚至在炎癥消退前，成纖維細(xì)胞就開始從周圍正常組織移入受傷區(qū)域，在正常組織它們通常以休眠狀態(tài)存在。它們通過阿米巴樣運(yùn)動沿纖維蛋白絲移行，將自己分布在整個愈合區(qū)。一旦在受傷組織固定到位，它們就開始合成膠原并分泌這種蛋白，該蛋白自行進(jìn)入纖維。纖維自行定向，長軸取最大應(yīng)力的方向。膠原蛋白束長牢后，成纖維細(xì)胞逐漸變性，緊緊地附著于(膠原蛋白)束，受傷區(qū)域轉(zhuǎn)變?yōu)轳：劢M織。
瘢痕組織形成的同時，傷口周圍未受損的上皮細(xì)胞開始增殖并成片地向受傷區(qū)域中心移動。由于炎癥消退，對直接供血的要求增加，新血管開始長入傷口。
在分子基礎(chǔ)上看炎癥，人們知道，有很多活性化合物以復(fù)雜的方式相互作用。受傷損壞的細(xì)胞中有肥大細(xì)胞，它釋放介質(zhì)，觸發(fā)血管擴(kuò)張的早期相，伴有內(nèi)皮細(xì)胞的分離和內(nèi)皮下層的膠原纖維暴露。血管內(nèi)形成的細(xì)胞間隙中的纖維捕獲血小板，并觸發(fā)介質(zhì)從這些細(xì)胞的釋放。
除了血小板外，暴露的膠原纖維也與通過擴(kuò)張的血管壁的孔濾過的血漿蛋白(包括血凝級聯(lián)反應(yīng)的觸發(fā)因子)相互作用。這些蛋白質(zhì)還引發(fā)激肽-緩激肽級聯(lián)反應(yīng)，產(chǎn)生緩激肽，后者與血管擴(kuò)張、血管通透性增加和趨化性有關(guān)。
第四種分子系統(tǒng)即補(bǔ)體級聯(lián)反應(yīng)可被幾種刺激物激活受傷血管，損傷細(xì)胞釋放的蛋白分解酶，任何參與細(xì)菌的膜成分和抗原-抗體復(fù)合物。被激活的補(bǔ)體成分中有些作為趨化因子起作用，與白細(xì)胞流入炎癥區(qū)域有關(guān)，另一些促進(jìn)吞噬作用、參與細(xì)胞溶解。
眼部炎癥青光眼是一種眼病，該病眼內(nèi)壓升高，引起患者視覺損害。正常的眼睛中，位于虹膜內(nèi)側(cè)周緣(向著眼球內(nèi)側(cè))的睫狀體的上皮細(xì)胞產(chǎn)生液體。這種液體的作用包括滋養(yǎng)眼睛的細(xì)胞和保持眼球內(nèi)正壓，這是維持成象所需的視覺部件處于正常空間位置所必須的，類似于照相機(jī)中相機(jī)體的支撐結(jié)構(gòu)。
正常情況下，該液體通過圓周狀位于眼睛前部虹膜和角膜間角內(nèi)的環(huán)狀體小梁網(wǎng)濾過而從眼中除去。典型地，該液體通過小梁網(wǎng)中的微孔流入彐萊姆氏(Schlemm′s)管，然后通過集液管將液體引入鞏膜表層靜脈，流至眼外。在青光眼病理學(xué)中，液體從眼睛流出減少，導(dǎo)致眼內(nèi)壓急劇升高，損壞眼內(nèi)組織并最終使視力完全喪失。
治療青光眼的治療目的總是相同的，即通過減少液體產(chǎn)生或增加液體濾過或排出眼外來降低眼內(nèi)壓。雖然有很多方法達(dá)到此目的，但總是首先試用藥物療法。如果藥物療法不能成功地控制眼內(nèi)壓升高，則用其它創(chuàng)傷性技術(shù)，如激光處理或外科干預(yù)。
激光方法包括小梁成形術(shù)，用激光在小梁網(wǎng)上燒孔。外科技術(shù)包括(1)小梁切開術(shù)，用金屬探針或“小梁切開刀”在Schlemm′s管和眼前房之間形成開口，約為正常流出角圓周的三分之一；(2)小梁切除術(shù)，涉及切穿小梁網(wǎng)；(3)虹膜切除術(shù)，涉及切除部分虹膜。鞏膜切除術(shù)(鞏膜造口術(shù))涉及用激光或外科器械切穿鞏膜。小梁切除術(shù)、虹膜切除術(shù)和鞏膜切除術(shù)都伴有濾過泡形成，過量眼液被分流到此小泡中，加快排出眼睛。
青光眼濾過手術(shù)通常被推薦用于有進(jìn)行性青光眼性損害的患者，按其目前眼壓水平對疾病進(jìn)展有顯著危險(xiǎn)。對于有嚴(yán)重?fù)p害的患者，當(dāng)眼內(nèi)壓(“IOP”)可降至20mm Hg以下并維持低于此水平時，遠(yuǎn)期預(yù)后可改善。因此，對眼壓在18-20mm Hg以上損害有進(jìn)展的患者應(yīng)竭力主張濾過性手術(shù)。
手術(shù)一般選以下兩類之一(1)全厚度手術(shù)(full thickness)；或(2)有防護(hù)的瘺管手術(shù)。典型的有防護(hù)的瘺管(guarded fistula)手術(shù)，涉及如下小梁切除步驟a.牽開眼瞼；b.穿刺(角膜)緣部(代表眼的不透明鞏膜和透明的角膜之間的移行部位的半透明組織)，作一從眼前部外側(cè)通向前房(以有色澤虹膜和覆蓋虹膜的透明角膜為界)的開口；c.在虹膜下的一個點(diǎn)剪開并向后翻開球結(jié)膜，作一基底在角膜緣的三角形鞏膜瓣；d.從三角形鞏膜瓣的底部進(jìn)入前房；e.切去小梁網(wǎng)的一部分，形成一個瘺管或連接通道；f.通過瘺管切去一小部分虹膜；g.用縫線閉合鞏膜瓣；h.縫合結(jié)膜；和i.通過步驟b所完成的(角膜)緣部的切口將生理上可接受的液體，如平衡鹽溶液(BSS)注入前房，以形成沿角膜緣隆起的濾過泡，確認(rèn)瘺管未閉，并確認(rèn)濾過泡無滲漏。
全厚度手術(shù)不同之處在于不形成鞏膜瓣而直接作經(jīng)(角膜)緣連接前房與結(jié)膜的一開口。當(dāng)結(jié)膜外層被剪開并后翻后，用鞏膜切除術(shù)(在角膜緣部剪去一條鞏膜)、鞏膜灼瘺術(shù)(在平行于(角膜)緣表面的鞏膜上切開一個淺槽)、激光鞏膜造瘺術(shù)或環(huán)鉆法建造瘺管來實(shí)現(xiàn)(Stewart，“濾過手術(shù)-技術(shù)和手術(shù)合并癥”，ClinicalPractice of Glaucoma，第10章，333-61(1990))，其內(nèi)容納入本文作為參考。
手術(shù)后，有規(guī)律地仔細(xì)觀察濾過泡的情況。起先，濾過泡很好地隆起，高于鞏膜。手術(shù)后第一天，很多眼睛在結(jié)膜上開始顯示無血管區(qū)，通常圍繞著瘺管部位。鑒定無血管區(qū)的方法是觀察到毛細(xì)血管和微靜脈的局部消失。但是，檢查前房時，可存在輕變充血或房水閃輝，表示有炎癥。手術(shù)后第1周，IOP常低于5mmHg，范圍可以是6-10mm Hg。在初步檢查后，患者開始抗生素-類固醇合并用藥(Stewart，“濾過手術(shù)的手術(shù)后合并癥”，Clinical Practice of Glaucoma，第11章，363-90(1990))，其內(nèi)容納入本文作為參考。
手術(shù)后第2-4周，結(jié)膜和濾過泡炎癥減輕，前房變得“安靜”了，(房水)閃輝減少。由于結(jié)疤，濾過泡通常也略變小。而且，濾過泡一般繼續(xù)呈無血管區(qū)，其大小可增加。手術(shù)后第2-4周，IOP通常升高至10mm Hg或更高(Stewart，“濾過手術(shù)的手術(shù)后合并癥”， Clinical Practice of Glaucoma，第11章，363-90(1990))。
手術(shù)后無并發(fā)癥時期的第4周，結(jié)膜通常少有炎癥或無炎癥，功能良好的濾過泡典型地保持無血管區(qū)，可局限地或很好隆起于鞏膜。而且，這個時期，IOP應(yīng)當(dāng)理想地穩(wěn)定于10-15mm Hg。根據(jù)濾過泡和前房的炎癥程度，慢慢地減小手術(shù)后類固醇的量。如果濾過泡持續(xù)充血和有炎癥，常維持類固醇量，有時甚至加量，以加速解決前節(jié)炎癥，從而限制瘢痕的形成(Stewart，“濾過手術(shù)的手術(shù)后合并癥”，Clinical Practice of Glaucoma，第11章，363-90(1990))。
不幸的是，在濾過手術(shù)手術(shù)后早期，患者可能患各種不同的并發(fā)癥，其中之一是不形成濾過泡，很多患者在手術(shù)后1-6周之間出現(xiàn)濾過泡消失，最后濾過泡完全不能控制眼壓。臨床上，功能差的濾過泡通常小、不隆起，至少部分血管化，IOP又升高到正常范圍以上(Stewart，“濾過手術(shù)的手術(shù)后合并癥”，ClinicalPractice of Glaucoma，第11章，363-90(1990))。
濾過手術(shù)的成功取決于手術(shù)后濾過泡功能維持多久?；颊咭虔浌懿课蛔枞蚪Y(jié)膜和鞏膜界面瘢痕形成而發(fā)生濾過泡消失。如果瘺管部位阻塞，可用一種激光治療技術(shù)或常規(guī)的外科技術(shù)。但不幸，即使這樣打通瘺管，由于以前的濾過泡瘢痕形成到鞏膜，液體流出可能受阻。如果這些方法失敗，以最大限度的藥物治療患者的IOP仍未得到控制，可能必須在其它的部位進(jìn)行另一次濾過手術(shù)。如果瘺管維持開放，但濾過泡小，IOP的升高可能起因于結(jié)膜和鞏膜間的瘢痕形成，這是濾過泡消失的常見原因(Stewart，“濾過手術(shù)的手術(shù)后合并癥”，ClinicalPractice of Glaucoma，第11章，363-90(1990))。
濾過手術(shù)中對眼組織(特別是結(jié)膜)的操作必然引起炎癥，最終引起瘢痕，一般來說，操作越多，濾過泡存在時間越短。對青光眼高危病人的濾過手術(shù)常因手術(shù)后瘢痕形成而導(dǎo)致失敗，成纖維細(xì)胞在此過程中似乎起著重要作用(Katz等，“高危青光眼濾過手術(shù)中絲裂霉素C對5-氟尿嘧啶”，Ophthalmology，1029，1263-68(1995))。青光眼濾過手術(shù)失敗的原因之一是結(jié)膜下組織中成纖維細(xì)胞的存在(Bcrlin等，“青光眼手術(shù)中激光鞏膜切除術(shù)的作用”，Current Opinion inOphthalmology，6102-114(1995))，手術(shù)失敗常因在濾過部位有成纖維細(xì)胞增生和瘢痕形成(Mora等，＂Trabeculectomy with Intraoperative Sponge 5-fluorouracil＂，Ophthalmology，103963-70(1996))。
在因纖維變性而濾過泡消失百分率高的所謂“高?！辈∪酥?，有時在手術(shù)同時采用延長濾過泡存在時間的處理是有助的。人們設(shè)計(jì)很多技術(shù)來減輕炎癥和瘢痕形成，從而延長濾過手術(shù)中建造的濾過泡的作用時間，例如在手術(shù)后約4周的時間內(nèi)對眼睛作簡單的手指按摩。
也有人試驗(yàn)了通過抑制炎癥反應(yīng)和在膠原蛋白合成途徑的特定步驟阻止其生成來限制瘢痕形成的藥理學(xué)技術(shù)。常用皮質(zhì)類固醇(局部滴劑或結(jié)膜下注入)，通過抑制炎癥反應(yīng)和成纖維細(xì)胞增生來幫助防止瘢痕形成(Stewart，“濾過手術(shù)-技術(shù)和手術(shù)合并癥”，Clinical Practice ofGlaucoma，第10章，333-61(1990))。通常，連續(xù)局部使用類固醇以使瘢痕形成達(dá)到最低程度直至前部炎癥得到解決(Stewart，“濾過手術(shù)的手術(shù)后合并癥”，Clinical Practice of Glaucoma，第11章，363-90(1990))。一個典型的治療計(jì)劃可指示手術(shù)后局部使用，每3小時一次，20天左右快速遞減(Araujo等。“對小梁切除術(shù)后皮質(zhì)類固醇前瞻性、隨機(jī)試驗(yàn)的10年隨訪”，Ophthamology，1021753-59(1995))。
5-氟尿嘧啶(“5-FU”)是氟化的嘧啶，在發(fā)揮抗代謝活性(胸苷酸合成酶競爭性抑制劑)的同時，還通過減少成纖維細(xì)胞增生發(fā)揮抗纖維化效應(yīng)，從而防止濾過泡的瘢痕形成。5-FU有代表性地用于手術(shù)預(yù)后差的病例。2年時5-FU對濾過手術(shù)的成功率為60％-70％。5-FU常通過連續(xù)結(jié)膜下注射給藥。
但是，除了頻繁和反復(fù)的手術(shù)后注射的不方便和不舒服外，還報(bào)道了結(jié)膜下注射5-FU的很多嚴(yán)重并發(fā)癥，包括上皮缺損、上皮下瘢痕形成、角膜潰瘍、結(jié)膜傷口滲漏、濾過泡滲漏、脈絡(luò)膜上腔出血、視網(wǎng)膜脫離和內(nèi)眼炎。因此，雖然5-FU可延長濾過泡壽命，但由于此藥的綜合毒性，角膜上皮缺損、瘢痕形成和血管化的發(fā)生率也是高的(Stewart，“濾過手術(shù)-技術(shù)和手術(shù)后合并癥”，ClinicalPractice of Glaucoma，第10章，333-61(1990))。還參見Khaw等，“用氟尿嘧啶、氟尿苷和絲裂霉素作5分鐘治療對人Tenon′s Capsule成纖維細(xì)胞具有長期效應(yīng)”，Arch.Ophthalmol.，1101150-54(1992)；Kupin等，“Phakic眼的基礎(chǔ)小梁切除術(shù)中絲裂霉素的輔助使用”，Am.J.OfOphthalmology，11930-39(1995)；及Katz等，“在高危青光眼濾過手術(shù)中絲裂霉素C對5-FU”，Ophthalmology，1029，1263-69(1995)。還參見Kay等，“作為濾過手術(shù)輔助治療的抗成纖維細(xì)胞劑給藥-第II部分膠原植入中5-FU和博來霉素的給藥家兔小型試驗(yàn)”，OphthalmicSurg.，17796-801(1986)；及Khaw等，“手術(shù)中給予5-FU或絲裂霉素家兔青光眼濾過手術(shù)的效應(yīng)”，Ophthalmology，100367-72(1993)。
一些作者報(bào)告，以常用的結(jié)膜下注射使用低濃度5-FU(如10mg/ml，0.5ml)，可預(yù)防因疏忽造成眼內(nèi)暴露預(yù)期的角膜水腫(Chalfin等，“繼發(fā)于氟尿嘧啶針泡修復(fù)的角膜內(nèi)皮毒性作用”，Arch.Ophthalmol.，1131093-94(1993))。其它作者注意到，手術(shù)中使用5-FU，使用浸有50mg/ml該化合物的海綿、將此海綿與濾過泡部位短時間接觸，可使5-FU的使用較安全、較有效(Mora等，“手術(shù)中使用5-FU海綿的小梁切除術(shù)”，Ophthalmology，103963-970(1996))。但是，即使如此，某些病例需要補(bǔ)充手術(shù)后注射，它們的注射仍伴有不合要求的角膜上皮損傷的高發(fā)生率。
氟尿嘧啶的脫氧核糖苷，氟尿苷，在長時間抑制眼成纖維細(xì)胞上作用約為氟尿嘧啶的100倍，因此可單劑給藥。但是，在引起細(xì)胞死亡上的差異比起抑制作用來相對較小。因此，氟尿苷的使用易產(chǎn)生將正常組織暴露于相對高劑量潛在細(xì)胞毒物質(zhì)的危險(xiǎn)(Khaw等，“用氟尿嘧啶、氟尿苷和絲裂霉素作5分鐘治療對人Tenon′s Capsule成纖維細(xì)胞具有長期效應(yīng)”，Arch.Ophthalmol.，1101150-54(1992))。
用絲裂霉素或絲裂霉素C(“MMC”)觀察到類似的效應(yīng)。MMC比5-FU強(qiáng)得多，因此還可單劑手術(shù)中施用，典型地是1-5分鐘的接觸時間，接著充分沖洗。MMC是從特定鏈霉菌屬的發(fā)酵濾液中分離出來的抗增殖烷化劑。它是一種抗纖維變性、抗瘤抗生素，通過抑制成纖維細(xì)胞的增生防止濾過泡的瘢痕形成。它通常有效地降低手術(shù)后結(jié)膜下纖維變性，因此有助于延長濾過泡的存留時間和降低IOP。
但是，MMC在高濃度時也是殺細(xì)胞的，在多達(dá)1/3的用其治療的患者中產(chǎn)生不合要求的眼壓過低(IOP低于5或6mm Hg)。其它不合要求的副作用包括結(jié)膜傷口滲漏、脈絡(luò)膜脫離和低壓黃斑病(hypotony maculopathy)，可能有約25％的遲發(fā)性濾過泡滲漏(參見Khaw等，“用氟尿嘧啶、氟尿苷和絲裂霉素作5分鐘治療對人Tenon′s Capsule成纖維細(xì)胞具有長期效應(yīng)”，Arch.Ophthalmol.，1101150-54(1992)；Zacharia等“小梁切除術(shù)后用絲裂毒素C的眼低壓”Am.J.ofOphthalmology 116314-26(1993)；Kupin等，“Phakic眼的基礎(chǔ)小梁切除術(shù)中絲裂霉素的輔助使用”，Am.J.OfOphthalmology，11930-39(1995)；Katz等，“在高危青光眼濾過手術(shù)中絲裂霉素C對5-FU”，Ophthalmology，1029，1263-69(1995)；Shin等，“青光眼三重治療法中輔助結(jié)膜下絲裂霉素C給藥”，Ophthalmology，10210，1550-58(1995)；Nouri-Mahdavi等，“基本開角型青光眼的小梁切除術(shù)結(jié)果”，Ophthalmology，10212，1760-69(1995)；及Mora等，“手術(shù)中使用5-FU海綿的小梁切除術(shù)”，Ophthalmology，103963-970(1996))。一組研究者甚至報(bào)告了在小梁切除術(shù)中局部用MMC處理后，鞏膜炎的發(fā)生率提高，引起嚴(yán)重的疼痛和鞏膜發(fā)紅(Fourman，“用絲裂霉素C的青光眼濾過手術(shù)后的鞏膜炎”，Ophthalmology，10210，1569-71(1995)；還參見Liang等，“絲裂霉素C和5-氟尿嘧啶對家兔眼濾過手術(shù)成功的比較”，J.Glaucoma，187-93(1992))。
其它科學(xué)家報(bào)告了激光鞏膜切除術(shù)合用5-FU或MMC。Berlin等描述了激光處理后用5-FU給藥2周取得成功(“激光鞏膜切除術(shù)在青光眼手術(shù)中的作用”，Current Opinion in Ophthalmology，611，102-114(1995))。該文建議，激光處理的同時通過各種不同的渠道(結(jié)膜下注射、結(jié)膜下凝膠泡沫、局部滴劑或吸收型海綿)給予MMC，可更有效。但是，也注意到了常見的并發(fā)癥，即角膜毒性、傷口滲漏、慢性低壓、脈絡(luò)膜脫離和低壓黃斑病(hypotonous maculaopathy)。
β-氨基丙腈(“BAPN”)和D-青霉胺用來抑制膠原纖維的交聯(lián)，可有助于濾過手術(shù)后將膠原保持在不成熟狀態(tài)，繼而限制濾過泡瘢痕形成。手術(shù)后局部使用BAPN軟膏的一個初步報(bào)告發(fā)現(xiàn)，在74％患者中IOP保持在22mm Hg以下。但是，用BAPN和D-青霉胺進(jìn)行的動物研究僅顯示有限的強(qiáng)度(Stewart，“濾過手術(shù)-技術(shù)和手術(shù)并發(fā)癥”，Clinical Practice of Glaucoma，第10章，333-61(1990))。
對于博來霉素的討論，見Khaw等，“手術(shù)中給予5-FU或絲裂霉素對家兔青光眼濾過手術(shù)的效應(yīng)”，Ophthalmology，100367-72(1993)。對于浸漬胞嘧啶阿拉伯糖苷的聚合物的討論，見Lee等，“浸漬胞嘧啶阿拉伯糖苷的可生物侵蝕聚合物對家兔青光眼濾過手術(shù)的效應(yīng)”，J.Glaucoma，296-100(1993)。
光動力學(xué)治療光動力學(xué)治療(“PDT”)作為一種獲準(zhǔn)的癌癥治療方法為人們所知，它可用于很多目的，例如治療實(shí)體瘤(如美國專利No.4,932,934和5,283,255)；減少造血靶如白血病細(xì)胞、免疫反應(yīng)細(xì)胞(待批專利申請No.07/889,707；08/309,509；08/374,158和08/174,211)和不想要的微生物(美國專利No.5,360,734)；預(yù)防再狹窄(美國專利No.5,422,362)；診斷和治療某些新生血管性眼病(待批申請No.08/209,473，08/390,591和08/613,420)；去除動脈粥樣硬化斑塊(待批申請No.08/663,890)；及防止移植物排斥反應(yīng)(待批申請No.08/371,707)。
PDT涉及局部或全身使用選擇性地聚集在靶組織內(nèi)的吸收光的光敏劑(通常是卟啉衍生物)。用激活波長的可見光照射，含有光敏劑的細(xì)胞中產(chǎn)生活性氧，促進(jìn)細(xì)胞死亡。例如，有人認(rèn)為，在腫瘤治療中，光致敏過程產(chǎn)生單個氧，激活的分子氧的衍生物，它可與細(xì)胞和組織中一些特異部位發(fā)生氧化反應(yīng)。結(jié)果，腫瘤細(xì)胞在亞細(xì)胞水平(特別是細(xì)胞膜和線粒體)受到不可逆損傷。在體內(nèi)試驗(yàn)中，腫瘤損傷是多種因素復(fù)雜的相互作用的結(jié)果，這些因素影響形態(tài)支撐腫瘤基質(zhì)的結(jié)締組織骨架和滋養(yǎng)腫瘤的血管組織(Zhou，“光動力學(xué)治療引起腫瘤壞死的機(jī)理”，J.of Photochem.And Photobiol.，Bbiology，3，299-318(1989))。
顯然，光敏劑優(yōu)先在腫瘤組織被攝取和聚集，一些腫瘤基質(zhì)細(xì)胞壞死是選擇性地和直接地由PDT引起的。但是，PDT引起的腫瘤壞死過程中還涉及血管損傷和相繼的腫瘤細(xì)胞缺氧。特別在后一種情況，PDT引起的腫瘤壞死被認(rèn)為是血管壁中急性炎癥反應(yīng)所致物理化學(xué)變化的結(jié)果。迅速減少腫瘤中的血液供應(yīng)及炎癥水腫的發(fā)生，導(dǎo)致光損傷的瘤的細(xì)胞的低氧或甚至缺氧，最后發(fā)生壞死。腫瘤基質(zhì)中被光損傷的肥大細(xì)胞和中性白細(xì)胞釋放血管活性或溶組織物質(zhì)(如組織胺、蛋白酶和酸性磷酸酶)，它們也與炎癥過程相伴隨，從而使總的損傷過程倍增(Zhou，“光動力學(xué)治療引起腫瘤壞死的機(jī)理”，J.ofPhotochem.And Photobiol.，Bbiology，3，299-318(1989))。
現(xiàn)已認(rèn)識，在獲準(zhǔn)的癌癥腫瘤方案中由PDT常引起的急性炎癥期是一把雙刃劍。實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤模型的研究證明，在進(jìn)行PDT后，一種富含蛋白質(zhì)和中性脂的滲出物滲入細(xì)胞間隙，積聚在粘附于壞死細(xì)胞“形骸”上的周圍壞死的活細(xì)胞(“低氧細(xì)胞”)“壁”上。從積極的癌癥治療觀點(diǎn)來看，炎癥滲出物可能有助于將結(jié)合于蛋白質(zhì)的光敏劑輸送到腫瘤的內(nèi)部，否則是難以達(dá)到的。另一方面，炎癥滲出物的這種流動也可輸送氧和營養(yǎng)物質(zhì)，從而有助于滋養(yǎng)處于傷口修復(fù)過程的細(xì)胞。因此，伴隨PDT的炎癥狀態(tài)的出現(xiàn)已被認(rèn)識到是常使癌性腫瘤治療復(fù)雜化的生命現(xiàn)象(Freitas，“炎癥和光動力學(xué)治療”，J.Photochem.And Photobiol.，BBiology，8340-41(1991))。
有人用本紅紫素乙基錫(Tin ethyl etiopurpurin，＂SnET2＂)作為光敏劑作了一些PDT工作，達(dá)到與青光眼濾過手術(shù)有關(guān)的抗纖維變性效應(yīng)。對接受結(jié)膜下注射SnET2的家兔進(jìn)行濾過手術(shù)，然后作手術(shù)后光輻照(Hill等，“用本紅紫素乙基錫作為青光眼濾過手術(shù)后的另一個抗纖維化治療的光動力學(xué)治療”，Photochem.Photobiol.，61 Suppl.，68S，TPM-E9(1995)；和Hill等，“在家兔濾過手術(shù)模型上用于抗纖維變性的光動力學(xué)治療(PDT)”，Ivestigative Ophthalmology andVisual Science，364，S877(1995))。但是，在這一初步工作中，作者未報(bào)告任何對照數(shù)據(jù)，因此，難以確定Hill等的處理真正延長了濾過泡(與未處理濾過泡相比)的多少存留時間。
此外，Hill等公開了在外科手術(shù)前注射光敏劑后過了三個多小時進(jìn)行輻照步驟，這使光敏劑有足夠的時間被有損傷的組織吸收，但也使光敏劑擴(kuò)散到眼的其它非靶區(qū)域。因?yàn)樽髡邎?bào)道，直至手術(shù)后整整4周內(nèi)有大而短暫無血管結(jié)膜區(qū)產(chǎn)生，此無血管區(qū)域并不限于濾過泡，顯然，眼的不祈盼大面積受到了處理的影響。鑒于熟知的潛在危害性(PDT在其它應(yīng)用中的壞死作用)，有必要以藥理活性的程度能可靠地加以控制的方式來減輕或預(yù)防炎癥。
發(fā)明的揭示現(xiàn)已十分驚人地發(fā)現(xiàn)，適當(dāng)?shù)剡x擇能被損傷組織迅速吸收但在無光吸收時無毒性的光敏劑，PDT可有預(yù)期的有益的抗炎效應(yīng)，它甚至對脆弱的組織如眼部區(qū)域也是有用的。由于以前都認(rèn)為PDT與實(shí)際上引起炎癥反應(yīng)有關(guān)而不是具有減輕或預(yù)防炎癥反應(yīng)的能力，因此，這是一個特別驚人的發(fā)現(xiàn)。
具體地說，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)低劑量PDT可減輕或預(yù)防損傷組織發(fā)生的炎癥作用。本發(fā)明的減輕或預(yù)防這種炎癥反應(yīng)的方法具體有以下步驟a.使損傷組織或損傷前組織與能滲透到組織中的光敏劑接觸，在少于1小時內(nèi)形成所需程度的生物分布；和b.將組織曝光，使其與具有能被光敏劑吸收的波長的光接觸，接觸時間長短以足以減輕或預(yù)防曝光組織的炎癥但不引起曝光組織壞死或紅斑為限。
當(dāng)損傷組織對進(jìn)一步損傷或炎癥高度敏感(如眼部組織)時，本發(fā)明的方法特別有益，因?yàn)楹线m的光敏劑本身在效應(yīng)上不是抗增生的或在無激活輻照時對脆弱組織無細(xì)胞毒性。此外，因?yàn)榇蠖鄶?shù)光敏劑對人體組織無毒，除非被光激活，并且，因?yàn)楸景l(fā)明的光敏劑能相當(dāng)快地滲透到損傷組織中，因此輻照時通過輻照程度、與光敏劑物理接觸的程度或光敏劑的濃度(如在血流中)兩者，容易控制藥理活性的程度。其結(jié)果，本發(fā)明的治療效應(yīng)比已知的藥理學(xué)抗纖維變性技術(shù)更容易控制。
在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及用于減輕或預(yù)防起因于損傷組織的炎癥作用的組合物，包括a.約1μg/ml至約2mg/ml光敏劑，所述光敏劑能滲透到損傷組織或損傷前組織中，在少于1小時內(nèi)形成所需程度的生物分布；和b.可藥用載體。
在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及用于減輕或預(yù)防起因于損傷組織的炎癥作用的制品，所述制品包括a.能滲透到損傷組織或損傷前組織中、在少于1小時內(nèi)形成所需程度生物分布的光敏劑；和b.能吸收的涂藥器。
附圖的簡單說明

圖1A為未處理的對照濾過泡，手術(shù)后3天有顯著的血管形成(圖1-5的實(shí)驗(yàn)組在本申請的工作實(shí)施例中作更詳細(xì)的描述)。
圖1B為經(jīng)處理的濾過泡有很少血管形成，手術(shù)后4天血管形成，高度增長。
圖2表示4組家兔中每組的濾過泡存留百分率。
圖3表示手術(shù)后12天中每個實(shí)驗(yàn)日濾過泡程度的組間差異。
圖4表示手術(shù)后12天中每個實(shí)驗(yàn)日濾過泡高度的組間差異。
圖5表示手術(shù)后12天中每個實(shí)驗(yàn)日濾過泡上結(jié)膜紅斑的組間差異。
圖6表示用于本發(fā)明的方法、組合物和制品中的典型綠卟啉的結(jié)構(gòu)式。
圖7表示作為本發(fā)明中的光敏劑特別有用的4種BPD型化合物的結(jié)構(gòu)。
發(fā)明的詳細(xì)描述本發(fā)明中的術(shù)語“炎癥”指損傷后的活機(jī)體中出現(xiàn)的一系列變化。損傷可由物理因子(如過熱或過冷、壓力、紫外線或離子化照射、切割或磨損)、大量無機(jī)或有機(jī)化學(xué)物質(zhì)或生物因子(如病毒、細(xì)菌和其它寄生蟲)引起。
光敏劑“光敏劑”是一種化合物，當(dāng)其暴露于能被其吸收的波長的光下時則吸收光能，引起所需要的生理效應(yīng)，例如受控制的抗炎效應(yīng)。本發(fā)明的光敏劑以具有350nm-1200nm波長范圍內(nèi)的吸收譜為佳，該吸收譜可按本來已知的方式裁成所需要的穿透頻率，較佳約為400-900nm，最佳為600-800nm。
本發(fā)明的實(shí)踐中特別有意義的光敏劑的另一個性質(zhì)，概括地說是在缺乏光敏劑效應(yīng)時對細(xì)胞相對地?zé)o毒，在特定細(xì)胞和光敏劑之間缺乏靶特異性相互作用時從組織易于清除。
本發(fā)明的光敏劑可以是適合于光動力學(xué)治療(“PDT”)的任何光敏劑，它能在不到1小時內(nèi)滲透到受處理的損傷組織中，引起所需要程度的生物分布。潛在的光敏劑是否符合此標(biāo)準(zhǔn)可方便、快速地用如下簡單試驗(yàn)加以確定1.制備活的培養(yǎng)細(xì)胞(較佳從懸浮液生長培養(yǎng)物得到，任何細(xì)胞株均適合)；2.在10％血清存在下，將受試光敏劑以1-3μg/ml濃度加到細(xì)胞中；3.在培養(yǎng)的不同時期(如5、15、30和60分鐘)，離心除去過量培養(yǎng)液；4.用磷酸鹽緩沖鹽水洗滌細(xì)胞，用凍-融法將其溶解；
5.用熒光法測定細(xì)胞溶解物中的受試光敏劑濃度(對應(yīng)于合適的標(biāo)準(zhǔn)品)。
特別強(qiáng)的一組光敏劑包括綠卟啉，其詳細(xì)說明可參見1992年12月15授權(quán)Levy等的美國專利5,171,749，本文將其納為參考。術(shù)語“綠卟啉”指卟啉核與炔經(jīng)為獲得一氫苯并卟啉的Diels-Alder型反應(yīng)而獲得的卟啉衍生物。典型的是，綠卟啉選自乙炔與原卟啉在一定條件下發(fā)生Diels-Alder反應(yīng)而獲得的一類卟啉衍生物，所述條件促進(jìn)反應(yīng)只發(fā)生于存在于原卟啉-IX環(huán)系統(tǒng)中的兩個可用的共軛、非芳香二烯結(jié)構(gòu)(環(huán)A和環(huán)B)之一。
圖6顯示了幾種典型的綠卟啉的結(jié)構(gòu)。Diels-Alder反應(yīng)先形成環(huán)己二烯-在此稱為“氫化苯基”-與吡咯環(huán)A或B稠合，如圖6的結(jié)構(gòu)式1和2所示。環(huán)己二烯環(huán)內(nèi)的π系統(tǒng)重排形成結(jié)構(gòu)式3和4化合物，經(jīng)還原產(chǎn)生結(jié)構(gòu)式5和6化合物。但因?qū)嶋H的原因，進(jìn)行前述Diels-Alder反應(yīng)及將相應(yīng)的烯烴取代為乙炔化合物，優(yōu)先制成結(jié)構(gòu)式5和6的化合物，從而產(chǎn)生還原性更強(qiáng)的卟啉環(huán)結(jié)構(gòu)。這些化合物以結(jié)構(gòu)式1至6表示，其中氫原子結(jié)合著內(nèi)環(huán)氮原子。但是，應(yīng)該理解的是，也可以使用其甲基化形式，其中陽離子置換了兩個氫原子之一或全部。有關(guān)本發(fā)明所用綠卟啉化合物的制備參見美國專利5,095,030。
為方便起見，氫化單苯并卟啉衍生物-“BPD”-一般指圖6中結(jié)構(gòu)式3和4化合物。特別好的是結(jié)構(gòu)式3和4化合物以及它們的混合物。
如圖6所示，R1、R2、R3和R4是非干擾性的取代基，它們對本發(fā)明方法和組合物中的化合物活性沒有明顯影響。更具體地，術(shù)語“非干擾性取代基”指這樣的取代基，它不損害綠卟啉作為光敏劑、能在1小時內(nèi)被受損組織吸收發(fā)揮藥理效應(yīng)的能力。就圖6和7中的化合物而言，一般說來，R1和R2各自是吸電子取代基，或者是其它具備足夠吸電子能力的活性取代基，使Diels-Alder反應(yīng)的速率提高，該反應(yīng)可在A環(huán)和B環(huán)同時進(jìn)行，但較佳為只發(fā)生于一個環(huán)。合適的R1和R2取代基的例子包括烷酯基(2至6C)、烷基(1至6C)磺?；蚍蓟?6至10C)磺?；?、芳基(6至10C)、氰基和-CONR5CO-，其中的R5是芳基(6至10C)或烷基(1至6C)。R1和R2之一也可以是氫原子，只要另一個是足以促進(jìn)Diels-Alder反應(yīng)的吸電子取代基。最常見的是，R1和R2都是烷酯基，以甲酯基或乙酯基為佳。較好的化合物其R1和R2相同，都是烷酯基，特別是乙酯基。
在此，“羧基”根據(jù)常規(guī)定義是-COOH，“烷酯基”表示-COOR，R是烷基?！棒然榛敝溉〈?R’-COOH，其中R’是亞烷基?！巴轷セ榛敝?R’COOR，其中R’是亞烷基，R是烷基或鏈烷醇?！巴榛狈褐妇哂?至6個碳原子的飽和直鏈或支鏈烴基，例如甲基、正己基、2-甲基戊基、叔丁基、正丙基等。“亞烷基”指二價而非單價的同一烷基?！胺蓟北硎痉辑h(huán)基，如苯基、萘基、吡啶基等。本發(fā)明的芳基可被1至3個取代基取代，取代基可各自選自鹵素例如氟、氯、溴和碘；低級烷基(1至4C)；和低級烷氧基(1至4C)?！胺蓟酋；被颉巴榛酋；钡慕Y(jié)構(gòu)式為-SO2R，其中的R是以上所述的烷基或芳基。
R3各自為ω-羧基烷基(2至6C)或其鹽、酰胺、酯或酰腙，或者是烷基(1至6C)。較好的是，R3是2-羧基乙基或其烷酯或鏈烷醇酯，R4是乙烯基。但是，因?yàn)樘烊贿策目傻眯?，這些實(shí)例中的大多數(shù)較好，無需考慮生物學(xué)效應(yīng)。如圖6所示，R1-C≡C-R2與原卟啉-IX環(huán)系統(tǒng)(其中R3是2-羧基乙基的保護(hù)形式，例如2-甲酯基乙基或2-乙酯基乙基，R4是-CH＝CH2)反應(yīng)生成的加合產(chǎn)物是結(jié)構(gòu)式1和2化合物。結(jié)構(gòu)式1化合物來自與A環(huán)的加合，結(jié)構(gòu)式2化合物來自與B環(huán)的加合。
適合本發(fā)明綠卟啉化合物的方便的起始物質(zhì)包括天然存在的卟啉，其中R3是-CH2CH2COOH、-CH2CHRCONR2或-CH2CHRCOOR，其中R是烷基(1至6c)或鏈烷醇(1至6C)。但是，R3的確切特性一般與Diels-Alder反應(yīng)的進(jìn)程或所得產(chǎn)物的效果無關(guān)，除非它含有與環(huán)π鍵共軛的π鍵。所以，R3可以是多種基團(tuán)中的任意一種，例如低級烷基(1至4C)；和ω-羧基烷基(2至6C)或其酯和酰胺。R3取代基還可以被羥基、鹵素(如氟、氯、溴或碘)或其它非反應(yīng)性取代基所取代。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)R3是-CH2CHRCOOR時，水解或部分水解酯化的羧基是有利的。典型的是，發(fā)生在R3位置的水解作用通常比發(fā)生在R1或R2酯基團(tuán)位置的快得多。而且，所得化合物的溶解度和生物分布特性也較非水解形式的更好。水解產(chǎn)生二元酸或一元酸產(chǎn)物(或它們的鹽)。
在結(jié)構(gòu)式1和2化合物中，R4通常(至少最初)是-CH＝CH2，但是該乙烯取代基很容易通過與結(jié)構(gòu)式1或2中環(huán)B或環(huán)A的乙烯基的加成或氧化而變成其它R4。所以，R4可能是多種取代基中的任意一種，與易發(fā)生的加成反應(yīng)所形成的相一致。例如，加成試劑可以是HX形式，其中的H與靠近環(huán)的碳原子加合，得到具有以下結(jié)構(gòu)的R4位

所以，在實(shí)施例之一中，所加取代基之一是氫，而另一個則選自氫原子；鹵素(氟、氯、溴或碘)；羥基；低級烷氧基；氨基；酰胺；巰基；或有機(jī)硫化物。例如，與水的Markovnikov加成反應(yīng)在相關(guān)環(huán)處形成結(jié)構(gòu)類似血卟啉的取代基。作為R4位取代基的乙烯基還可以被氧化成-CH2OH、-CHO或COOH或其鹽或酯。這些加成和氧化產(chǎn)物本身也可以被取代，如果所加的取代基是功能性離去基團(tuán)。例如如果Br是取代基，它可以被-OH、-OR(R是如前所述的烷基(1至6C))、鹵素、-NH2、-NHR、-NR2等取代。
這樣，總的說來，R4代表這樣的取代基，即易因裂解或加成而轉(zhuǎn)化形成-CH＝CH2，并因離去基團(tuán)與其它基團(tuán)反應(yīng)形成的進(jìn)一步取代基。但較好的是，R4是乙烯基(-CH＝CH2)；-CHOR4’，其中R4’是氫或烷基(1至6C)，后者又可選性地被例如CH2OH之類親水性取代基所取代；-CHO；-COOR4’，例如COOH或COOCH3；-CH(OR4’)CH3，例如-CH(OH)CH3或CH(OCH3)CH3；-CH(OR4’)CH2OR4’；-CH(OH)CH2OH；-CH(SR4’)CH3，例如-CH(SCH3)CH3及其二硫化物；-CH(NR4’)CH3；-CH(CN)CH3；-CH(溴吡啶鎓)CH3；-CH(COOR4’)CH3；-CH(COOCR4’)CH3；-CH2(鹵素)CH3，例如-CH2BrCH3；或-CH(鹵素)CH2(鹵素)?；蛘撸琑4可以是由乙烯基直接或間接衍生化得到的少于12個碳原子的有機(jī)基團(tuán)。或者，R4可以是其它卟啉或卟啉相關(guān)性環(huán)系統(tǒng)，例如后文定義的具有結(jié)構(gòu)式-L-P的含有1至3個含有四吡咯型核的基團(tuán)。優(yōu)選的是R4是-CH＝CH2，-CH(OH)CH3，-CH(鹵素)CH3，或如后文定義的具有結(jié)構(gòu)式-L-P的含有1至3個含有四吡咯型核的基團(tuán)的化合物。
“四吡咯型核”在此指具有如下骨架的4環(huán)系統(tǒng)

或其鹽、酯、酰胺或酰腙，它是高度共軛的。它包括吡咯系統(tǒng)，它實(shí)際上是完全共軛的系統(tǒng)；二氫卟酚系統(tǒng)，它實(shí)際上是卟啉的二氫化形式；還原的二氫卟酚系統(tǒng)，它是共軛的卟啉系統(tǒng)的四氫化形式。當(dāng)說及“卟啉”時，所指的是完全共軛系統(tǒng)。綠卟啉實(shí)際上是卟啉系統(tǒng)的二氫形式。
在實(shí)施例之一中，取代基R4包括至少一個附加的四吡咯型核。本發(fā)明所得的化合物是二聚體或寡聚體，其中至少四吡咯型環(huán)系統(tǒng)之一是綠卟啉。綠卟啉部分在R4位與附加的四吡咯型環(huán)系統(tǒng)之間的連接可以是醚、胺或乙烯基連接。卟啉環(huán)系統(tǒng)有兩個與R4相應(yīng)的可用的取代基位置(在A環(huán)和B環(huán)中)可被進(jìn)一步衍生化，如以下所解說的。
當(dāng)R4是“-L-P”時，-L-選自

P是卟啉結(jié)構(gòu)或圖6結(jié)構(gòu)式1至6所示的第二綠卟啉結(jié)構(gòu)，所不同的是，任何第二R4基團(tuán)都被以上L所取代。
(而且，可以理解的是，當(dāng)-L-是上述結(jié)構(gòu)式(e)或(f)時，雙鍵所連接的環(huán)系統(tǒng)應(yīng)包含如下共振系統(tǒng)，

如上所示。)由前述Diels-Alder反應(yīng)直接得到氫化一苯并卟啉還可以異構(gòu)化成圖6結(jié)構(gòu)式3和4所示的化合物。圖6結(jié)構(gòu)式3和4所示沒有顯示環(huán)外甲基(結(jié)構(gòu)式3的A環(huán)和結(jié)構(gòu)式4的B環(huán))與R2取代基的相對位置。兩種異構(gòu)體都可以獲得。本發(fā)明方法和組合物中特別優(yōu)選的是結(jié)構(gòu)式3和結(jié)構(gòu)式4所示的化合物。
此外，Diels-Alder產(chǎn)物可以在鈀碳之類催化劑存在下經(jīng)氫氣處理選擇性還原成圖6中結(jié)構(gòu)式5和6所示飽和的環(huán)類似物，它們分別對應(yīng)于A環(huán)和B環(huán)的Diels-Alder產(chǎn)物。但是，如上所述，較常見的實(shí)踐是用烯烴起始物料代替常用的乙炔起始物料來開始Diels-Alder反應(yīng)，得到還原性較強(qiáng)形式的卟啉環(huán)系統(tǒng)。以上有關(guān)結(jié)構(gòu)式1和2化合物的說明，即涉及保留的乙烯取代基(R4)的轉(zhuǎn)化衍生化和R3的多樣性，同樣適用于結(jié)構(gòu)式3、4、5和6所示的化合物。
本發(fā)明較好的綠卟啉實(shí)例是Diels-Alder產(chǎn)物發(fā)生了重排并被部分水解。更好的是，結(jié)構(gòu)式3和4化合物(BPD類)，其中R3位置的烷酯基也被水解或部分水解。本發(fā)明含有-COOH的化合物可以被制備成游離酸，或其與有機(jī)堿或無機(jī)堿的鹽形式。
圖7顯示了結(jié)構(gòu)式3和4所代表的特別為本發(fā)明所優(yōu)選的4種化合物，總稱為苯并卟啉衍生物，即，BPD-DA、BPD-DB、BPD-MA和BPD-MB。這些是結(jié)構(gòu)式3和4重排產(chǎn)物的水解或部分水解形式，其中兩個被保護(hù)的R3的羧基之一或都被水解。R1和R2位上酯基的水解較慢，所以，向圖7所示形式的轉(zhuǎn)化很容易。在這些綠卟啉中最好的是BPD-MA。
在圖7中，R3是-CH2CH2COOR3’，其中的R3’隨各化合物而異。具體地說，在BPD-DA中，R1和R2是烷酯基，R3’是氫，衍生化發(fā)生在環(huán)A。BPD-DB是B環(huán)衍生化的相應(yīng)化合物。BPD-MA代表BPD-DA的部分水解形式，BPD-MB代表BPD-DB的部分水解形式。所以，在后兩種化合物中，R1和R2是烷酯基，R3’之一是氫原子，另一個是烷基(1至6碳)。
結(jié)構(gòu)式BPD-MA和BPD-MB化合物可以是均一性的，即只有C環(huán)烷酯基乙基或D環(huán)烷酯基乙基被水解，或者是C環(huán)和D環(huán)取代基水解物的混合物。此外，本發(fā)明方法和組合物可以使用BPD-MA，-MB，-DA和-DB中兩種或更多種的混合物。
需要指出的是，圖6中的許多化合物含有至少一個手性中心，所以可能以光學(xué)異構(gòu)體形式存在。本發(fā)明方法可以使用具有手性碳兩種構(gòu)型的化合物，不論化合物是以一種立構(gòu)分離體形式使用，還是以對映體和/或非對映體的混合物形式使用。可以用任意一種常規(guī)方法來分離非對映體的混合物。可以用任意一種常規(guī)技術(shù)來拆分對映體混合物，例如，令它們與光學(xué)活性制劑反應(yīng)，然后拆分所得的非對映體。
還必須指出的是，反應(yīng)產(chǎn)物可以是A環(huán)和B環(huán)加成的未分離的混合物，如結(jié)構(gòu)式1和2、或3和4、或5和6的混合物。本發(fā)明方法和組合物可以使用各種分離形式，即純結(jié)構(gòu)式3或純結(jié)構(gòu)式4化合物，或它們?nèi)我獗壤幕旌衔铩?br> 而且，可以使用綠卟啉二聚體和綠卟啉/卟啉組合的二聚體或多聚體形式，以達(dá)到每摩爾基質(zhì)吸收更多的光。本發(fā)明的二聚體和寡聚體化合物可以用與卟啉自身二聚或寡聚類似的反應(yīng)來制備?？梢詫⒍鄠€綠卟啉或綠卟啉/卟啉直接連接，或者，可以偶合卟啉，然后經(jīng)末端卟啉之一或兩者的Diels-Alder反應(yīng)將其轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的綠卟啉。
藥物組合物典型地，本發(fā)明的光敏劑配制成藥物組合物，即將光敏劑在室溫、合適的pH和所需要的純度下與一種或多種生理學(xué)上可接受的載體(即在所采用的劑量和濃度下對接受者無毒的載體)混合。合適的組合物包括那些適合于全身或局部給藥的組合物，包括注射用、經(jīng)粘膜或經(jīng)皮給藥的制劑。
本發(fā)明的組合物較佳包含約1μg/mL至約2μg/mL的光敏劑，主要根據(jù)給藥方式而定。局部給藥以用約0.1-0.2mg/ml為佳。全身給藥(如靜脈注射)，光敏劑的濃度較佳約為0.3-0.5mg/ml。
光敏劑以液體、凝膠或凝膠狀固體藥物組合物的形式給藥為佳，可單獨(dú)與水同服，或與其它藥學(xué)上可接受的賦形劑合用，如Remington′s PharmaceuticalSciences.Mack Publishing co.，Easton Pennsylvania(Gennaro，ed.1990)中所描述的賦形劑，該文納入本文作為參考。作為液體，含光敏劑的藥物組合物可以是懸浮液或乳劑。脂質(zhì)體或親脂性制劑常常是特別合乎需要的。本發(fā)明的光敏劑可以包括在脂質(zhì)體中、附著在其表面或兩者兼有。制備脂質(zhì)體的合適方法是本領(lǐng)域熟知的。這樣的制劑中包含綠卟啉化合物在例如下面的文獻(xiàn)中有所描述1993年5月25日授予Allison等的美國專利No.05,214,036和Desai等于1995年6月13日提交的待批申請No.08/489,850，這兩篇文獻(xiàn)均納入本文作為參考。如果使用懸浮液或乳劑，合適的賦形劑包括水、鹽水、右旋糖、甘油等。這些藥物組合物還可包含微量無毒的輔助物質(zhì)，如濕潤劑或乳化劑、抗氧化劑、pH緩沖劑等。
制劑的pH主要決定于特定的用途和光敏劑的濃度，但以約為3-8為佳，光敏劑保持在中性pH(如約6.5-7.5)以防止附著于所放置的容器，就象在接近生理水平的pH值下，從而保證光敏劑的活性。因此，在含平衡鹽緩沖劑但不含胎牛血清(＂FBS＂)的pH6.5的電解質(zhì)溶液中的光敏劑制劑是一個合適的實(shí)施例。省去胎牛血清的原因是因?yàn)樗锌杉觿⊙装Y反應(yīng)的抗原成分。如果光敏劑附著在放置含光敏劑的藥物組合物的容器上，可以任選地加入合適的非抗原成分，如人血清白蛋白，所加入的量不干擾附著在受處理的損傷組織上的光敏劑。
光敏劑可與一種或多種免疫抑制劑合用，以增強(qiáng)對損傷組織的抗炎作用。本文所用的術(shù)語“免疫抑制劑”指抑制或遮蔽T淋巴細(xì)胞反應(yīng)的物質(zhì)，包括抑制細(xì)胞因子產(chǎn)生、下調(diào)或抑制自身抗原表達(dá)或遮蔽MHC抗原的物質(zhì)。
這些因子的例子包括2-氨基-6-芳基-5取代嘧啶化合物硫唑嘌呤或環(huán)磷酰胺；溴隱亭；戊二醛；抗MHC抗原獨(dú)特型抗體；環(huán)孢菌素A；一種或多種類固醇，優(yōu)選皮質(zhì)類固醇和糖皮質(zhì)類固醇，如潑尼松、甲基潑尼松龍和地塞米松；抗γ-干擾素抗體；抗α-腫瘤壞死因子抗體；抗β-腫瘤壞死因子抗體；抗白介素-2抗體；抗細(xì)胞因子受體抗體，如抗IL-2受體抗體；異種抗淋巴細(xì)胞球蛋白；pan-T抗體，優(yōu)選OKT-3單克隆抗體；抗CD4抗體；鏈激酶；鏈球菌DNA酶；或來自宿主的RNA或DNA。
這種免疫抑制劑可以光敏劑同樣的劑量或減少的劑量補(bǔ)充或合并使用，可同時或分別、全身或局部使用。這些其它物質(zhì)的有效量易受很多治療處理的影響，取決于制劑中存在的光敏劑的量、損傷的類型、免疫抑制劑的類型、釋藥部位、給藥方式、給藥計(jì)劃、上面討論的其它因素和實(shí)施者知道的其它因素。但是，適用于本發(fā)明的免疫抑制劑的量典型地低于類似損傷組織治療正常所推薦的量。
使用免疫抑制劑時，可用任何合適的方法給藥，包括胃腸外給藥，及如果需要局部免疫抑制治療可從損傷部位內(nèi)給藥，即局部施用于損傷組織。胃腸外注射包括肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、腹腔內(nèi)、皮下和結(jié)膜下給藥。
如果局部施用本發(fā)明的藥物組合物，例如，如果涂到損傷組織上，可優(yōu)選使用粘稠溶液(如凝膠)而不是非粘稠溶液。通過例如將所需要的光敏劑溶液與膠凝劑(如多糖)混合可制得凝膠，多糖以水溶性多糖為佳，例如透明質(zhì)酸，淀粉和纖維素衍生物(如甲基纖維素、羥乙基纖維素和羧甲基纖維素)。凝膠制劑中存在多糖時，其量通常在凝膠重量的約1-90％范圍內(nèi)，較佳為約1-20％。為此目的的其它合適的多糖的例子及多糖的溶解度測定見1988年5月11日公開的EP267,017，其內(nèi)容納入本文作為參考。
合適的表面活性劑的例子包括poloxamer表面活性劑，它代表環(huán)氧乙烯和環(huán)氧丙烯嵌段共聚物一系列分子，單獨(dú)或與磷脂(如卵磷脂)合用?？蓮腉reen Cross購得的乳劑的另一個例子是Fluosol-DA 20％，它包含以poloxamer表面活性劑Pluronic F-68乳化的全氟萘烷和全氟三丙胺。全氟化合物乳劑及其對哺乳動物的作用在Bollands et al.，J.Pharm.Pharmacol.，391021-24(1987)中作了更全面的描述，其內(nèi)容納入本文作為參考。
本發(fā)明的藥物組合物以無菌的為佳?？赏ㄟ^0.2微米膜的除菌過濾容易地進(jìn)行無菌化。一旦配制和除菌，組合物對氧化變性可能不穩(wěn)定。但是，用于復(fù)原再配的冷凍干燥制劑(例如含有BPD的制劑)適于儲存。
使組織與光敏劑接觸的方式按照本發(fā)明的減輕或預(yù)防炎癥是用相當(dāng)簡單的方法進(jìn)行的，即將受損組織(或?qū)⑹軅蛞咽軅慕M織)在能使光敏劑和靶組織之間形成強(qiáng)締合的條件下與光敏劑接觸，而光敏劑的濃度達(dá)到最低限度，只要足以可定位于受傷靶組織的區(qū)域。
當(dāng)免受炎癥傷害的受保護(hù)細(xì)胞包含在活的整體動物中時，可局部或全身給予光敏劑。光敏劑可注射給藥，只要特定的注射方式使光敏劑可從機(jī)體快速清除即可。例如，靜脈注射是合適的。或者，光敏劑可局部或腸內(nèi)施用，如涂敷或噴灑到受處理組織的表面，或經(jīng)膏藥或植入物，它們在預(yù)定的光敏劑接觸時間結(jié)束時可除去。
當(dāng)免受炎癥傷害的受保護(hù)靶組織是眼組織時，以局部外用為佳，因?yàn)榫植拷o藥可達(dá)到與眼接觸的局限的實(shí)質(zhì)，導(dǎo)致較大的安全余地。在一個特別好的實(shí)施方案中，本發(fā)明的光敏劑是用本發(fā)明的制品施用的，該制品包括光敏劑和可吸收施藥器?？晌帐┧幤靼ㄈ魏纬幕蚩沙目晌詹牧?，它在與受損組織接觸時易于釋放光敏劑，并且不與光敏劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。可吸收材料最好也是不貴的和可處置的。合適的可吸收施藥器例子包括浸藥海綿和不起絨的柔軟織物。浸藥海綿(如Weck Cell)是較好的可吸收施藥器。使用這樣的施藥器時，最好飽含本發(fā)明的藥物組合物，并在損傷出現(xiàn)時或出現(xiàn)后短時間內(nèi)(如外科手術(shù)中)局部施用于靶組織。
接觸步驟可以在很寬的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行，只避免過高引起變性或?qū)κ軗p組織有害作用的溫度和過低使光敏劑的細(xì)胞攝取降低到極限的溫度。接觸步驟宜在約5-40℃的溫度下進(jìn)行，更好為約15-37℃，最好為室溫。
用藥在本發(fā)明的方法中，以一個或幾個劑量對受試者投予一定量的光敏劑或光敏劑組合物。以符合有效的醫(yī)學(xué)實(shí)踐的方式給予本發(fā)明的光敏劑，要考慮到被預(yù)防和減輕的炎癥的性質(zhì)、受試者的人種和醫(yī)學(xué)情況、受試者體內(nèi)任何其它藥物的存在、光敏劑的純度和化學(xué)類型、給藥方式、期望的吸收速度和程度，及實(shí)踐者已知的其它因素。光敏劑的治療有效量是這樣的量，暴露于光下時，該量有效地顯著減輕纖維細(xì)胞的增生，從而減輕炎癥反應(yīng)和已知可伴隨炎癥的不良反應(yīng)，如增加血管形成和/或瘢痕組織形成。
光敏劑的劑量因靶組織而異，如果是靜脈內(nèi)或全身給藥，則會受動物的體重和最適血水平的限制。合適的每劑全身用藥量典型地少于約1.0mg/kg體重，較佳約為每劑在約0.25-0.75mg/kg范圍，最佳為每劑約0.15-0.50mg/kg。BPD作為光敏劑的全身用藥劑量只在異常情況下超過0.3mg/kg。這些劑量范圍指建議性的，而不應(yīng)認(rèn)為是限制性的，因?yàn)樘囟ㄊ茉囌叩膫€體反應(yīng)也會不同。
根據(jù)光敏劑及給藥方式，可確立相當(dāng)?shù)淖钸m全身血水平，但難以做到，因?yàn)楣饷魟┣宄煤芸?。因此，在注射時血流中光敏劑的濃度與照光治療時的濃度之間可以有驚人的差異。例如，靜脈注射時BPD的濃度約為1-10mg/ml，而在照光時可以僅為0.5-0.05μg/ml。如果局部給藥，血液中典型地根本不可檢出光敏劑。
當(dāng)局部或全身給藥時，依據(jù)組合物的濃度和與靶組織接觸的時間長度對劑量要作最好的描述。光敏劑一般的有效濃度范圍約為0.1-10mg/ml，較佳約為0.1-5mg/ml，最佳約為0.25-2.0mg/ml。合適的接觸是對受損組織的一個或幾個表面使用本發(fā)明的藥物組合物。與光敏劑的局部接觸一般發(fā)生至少一分鐘，較佳為5分鐘以下，更佳為約1-2分鐘。接觸時間取決于組合物中光敏劑的濃度、受處理的組織和組合物的特定類型這些因素。
與光敏劑預(yù)定的接觸時間后，最好從處理區(qū)域除去過量的光敏劑。如果全身給予光敏劑，則選擇不但具有快速動力學(xué)特征、而且對快速從機(jī)體清除有敏感性的光敏劑。如果光敏劑是局部給藥的，則最好用生理上可接受的化學(xué)惰性液體(如標(biāo)準(zhǔn)鹽水或BSS(堿性鹽溶液))或用水或一些其它溶劑灌洗或沖洗去掉過量的光敏劑。又，鑒于方案設(shè)計(jì)用藥上允許的變化大，因此這些方案并不意味著是限制性的。
使受損組織或受損前組織與含本發(fā)明的光敏劑混合物接觸的步驟后，使組織暴露于具有被光敏劑吸收的波長的光，導(dǎo)致炎癥的減輕或預(yù)防。本申請中的術(shù)語“低劑量PDT”指不引起明顯的細(xì)胞損傷、壞死或紅斑而僅顯示抗炎效應(yīng)的劑量。因?yàn)镻DT總劑量取決于光敏劑劑量和輻照光劑量的結(jié)合，因此可將低劑量PDT給予，可以相對高的光敏劑劑量和低的光劑量組合，或?qū)⑾鄬Φ偷墓饷魟﹦┝亢透叩墓鈩┝拷M合。后一種低的光敏劑/高的光組合也可通過給相對高劑量光敏劑、然后在以光輻照前經(jīng)異常長“培育”時間來達(dá)到。因此，總的說來產(chǎn)生相對低劑量PDT的各種各樣情況都適合于本發(fā)明。
同樣，光敏劑劑量、接觸時間和給藥方式的各種不同組合也是合適的。但是，下面的粗略方針可能是有用的。與局部使用的高劑量光敏劑(如2mg/ml)短時間接觸(少于1小時)一般相當(dāng)于靜脈注射低劑量光敏劑(如0.15mg/kg)。然而，即使在靜脈注射高劑量光敏劑后，延遲一段時間(如給予光敏劑后3小時以上)以光輻照也可導(dǎo)致低劑量PDT，因?yàn)槿绻饷魟┠芸焖偾宄脑挘?小時后仍然存在于組織中的光敏劑極少。
“低劑量PDT”的特殊例子包括·局部施用或局部注射低于2mg/ml的苯并卟啉衍生物(“BPD”)光敏劑，使其與靶組織接觸少于10分鐘；·靜脈注射低于0.15mg/kg的BPD，在注射BPD后任何時間進(jìn)行輻照；·靜脈注射0.15-0.50mg/kg BPD，在注射BPD 6小時后進(jìn)行輻照；與如下條件下的輻照相結(jié)合·給予光敏劑后0-3小時內(nèi)施加低于15J/cm2的輻照；或·給予光敏劑6小時后施加≤100J/cm2的輻照。
在輻照步驟中，光敏劑吸收的和適用于受損組織的任何光均可使用，例如，根據(jù)光敏劑和所需穿透的組織深度，從約380nm至約850nm，以約400nm至約700nm為佳。對于一般的抗炎應(yīng)用，在電磁波可見部分的光(如紅光、藍(lán)光或甚至長波紫外線(UVA)光)均可使用。由于UVA光的潛在損害作用，故波長短于400nm的光可用但不是較好的。由于難以看見，故波長長于700nm的光可用但不是特別好的。對于眼科應(yīng)用來說，以紅光為佳，因?yàn)榕懦怂{(lán)光和UVA光譜范圍對眼的敏感視網(wǎng)膜的任何潛在有害作用。
濾過手術(shù)中所用特別好的方法的例子如下1.用2mg/ml脂質(zhì)體BPD的水懸浮液飽和浸藥海綿；2.將飽和了BPD的海綿與擬處理的組織接觸2分鐘；3.用大量滅菌鹽水或平衡鹽溶液除去過量BPD；及4.將BPD處理過的組織暴露于7-12J/cm2光下。
這時，沒有任何單一的方案看來是對所有情況均能滿意的。但是，典型的方案包括單次處理或初次處理后接著任選地再加1-4次處理。局部給予光敏劑進(jìn)行局部處理可每3或4天重復(fù)。但是，全身給予光敏劑，則重復(fù)處理一般間隔約1周或更長，以避免過量光敏劑積聚所致的任何不合要求的作用。
下面的實(shí)施例旨在闡述而非限制本發(fā)明。
實(shí)施例實(shí)施例1光輻照對6只正常家兔進(jìn)行單眼濾過手術(shù)。用光敏劑苯并卟啉衍生物單酸A環(huán)(BPD-MA，也稱作“BPD-verteporfin”)的2mg/ml水溶液將Weck Cell海綿飽和。手術(shù)時，用飽和的Weck Cell對手術(shù)野的鞏膜和結(jié)膜局部施加BPD-MA 2分鐘。用BSS洗去過量藥物后，將鞏膜和結(jié)膜均暴露于波長為690nm的紅光下，該紅光由置于受輻照組織1cm處的發(fā)光二極管(“LED”)產(chǎn)生。本試驗(yàn)中所用的6只家兔均接受不同劑量的光(具體為0、3、6、12、18和24J/cm2)30秒-4分鐘的時間。受處理的家兔手術(shù)后11-12天測定濾過泡高度、濾過泡血管形成(炎癥的指針)和眼內(nèi)壓(“IOP”)的下降。第5天和第11天得到的數(shù)據(jù)分別列入表1A和1B。
表1A手術(shù)后第5天試驗(yàn)性的BPD-MA對光劑量的結(jié)果家兔編號 輻照時間 IOP降低 濾過泡高度濾過泡(mmHg) 血管形成1 0(無BPD)2-3 中等 血管2 30秒 最小小 血管3 1分鐘＞20 最大 無血管4 2分鐘20 最大 無血管5 3分鐘2.5 小 血管64分鐘 0-4小到中等血管表1B 手術(shù)后第11天試驗(yàn)性的BPD-MA對光劑量的結(jié)果家兔編號 輻照時間 IOP降低 濾過泡高度濾過泡(mmHg)血管形成10(無BPD) 3-4中等血管2 30秒 2.3最小血管3 1分鐘 ＞20 最大 無血管4 2分鐘 ＞20 最大 無血管5 3分鐘 3-4 低 血管6 4分鐘死亡-濾過泡衰退結(jié)果表明，用中間劑量范圍的光(即相對低劑量藥物和光(“低劑量PDT”))處理的眼中濾過泡的存留時間最長。數(shù)據(jù)表明，預(yù)定水平的PDT是需要的，但較高劑量一般比較低劑量作用差。短時間BPD孵養(yǎng)和低劑量光照(12J/cm2)合用預(yù)期不會對受處理細(xì)胞造成過多的損害。然而，這種處理的藥理作用有限。濾過泡存留與無炎癥相伴隨，其標(biāo)志是無血管形成和灰白色濾過泡。
另一方面，過低或過高劑量光輻照，濾過泡高度和眼內(nèi)壓降低的量均減少。濾過泡衰敗與炎癥相伴隨。
相應(yīng)的濾過泡見圖1。
實(shí)施例2 PDT給藥時間實(shí)施例中所用的光敏劑制備如下配制成脂質(zhì)體的光敏劑苯并卟啉衍生物單酸A環(huán)(BPD-MA，也稱作“BPD-verteporfin”)是以凍干粉的形式由QLT光治療股份有限公司提供的，在使用前短時間內(nèi)用滅菌蒸餾水重配。重配成1.98mg/ml的BPD用來飽和分成(cut end)3mm的Well Cell。對照組Well Cell用標(biāo)準(zhǔn)鹽溶液(“BSS”)飽和。
48只家兔分成4組，每組12只，在隨機(jī)選擇的一個眼睛上進(jìn)行全厚度濾過手術(shù)。每只家兔未處理的另一個眼睛作為對照。濾過方法按如下進(jìn)行每只動物用氯胺酮和賽拉嗪混合麻醉。用金屬絲開張器分開眼瞼。在鼻上或眶上(superiornasal or superior temporal)象限建立穹隆基結(jié)膜瓣。穹隆基結(jié)膜瓣建立后，將飽和了BPD-MA(或BSS安慰劑)的Well Cell放置在鞏膜后至將造瘺管的緣部。將結(jié)膜披蓋在Well Cell上。從而，Well Cell置于結(jié)膜和鞏膜之間，與鞏膜外層和Tenon′s囊接觸2分鐘。然后除去Well Cell，用BSS沖洗該區(qū)域。儀器和手套在進(jìn)入眼前也進(jìn)行沖洗，用1.0mm的環(huán)鉆進(jìn)入前房。
然后將結(jié)膜瓣用7-0vicryl縫線固定在緣部。手術(shù)后立即用實(shí)施例1(QuantumDevices.Inc.)所用的光源(放在眼的1cm處)將每只家兔在波長690nm的光下暴露2分鐘、光源的最大輸出為100W/cm，提供總劑量約為7.2J。
手術(shù)后將一滴妥布霉素放進(jìn)每只眼中。手術(shù)后每天4次在兩個眼中滴入妥布霉素和醋酸潑尼松龍，共1周。
對照眼結(jié)膜下接受與手術(shù)眼同樣的光敏劑和輻照，但不造瘺管。用對照眼試驗(yàn)毒性和作為檢測手術(shù)眼IOP降低的基準(zhǔn)。施用BPD-MA的時間作如下變化第1組手術(shù)時，安慰劑處理；手術(shù)后48小時，安慰劑處理；第2組手術(shù)時，BPD處理；手術(shù)后48小時，安慰劑處理；第3組手術(shù)時，安慰劑處理；手術(shù)后48小時，BPD處理；第4組手術(shù)時，BPD處理；手術(shù)后48小時，BPD處理。
手術(shù)后48小時的BPD處理由以下步驟組成將以2mg/ml BPD-MA(或安慰劑)水溶液飽和的切成3mm的Well cell放在濾過泡上的結(jié)膜上2分鐘，然后洗去過量光敏劑。在波長688nm的紅色LED光下暴露1分鐘。
手術(shù)后第0天和每2天，用裂隙燈活體顯微鏡檢查家兔，評估濾過泡伸展程度、濾過泡高度、濾過泡上結(jié)膜紅斑、前房室閃輝及前房深度。在局部麻醉下用壓平眼壓測量法測量IOP。并且，按照如下所示計(jì)分法確定動物的安逸和飲食習(xí)慣來進(jìn)行受試者眼部不舒服的評估
0正常行為；1搖頭、歪頭、瞇眼；2用爪抓眼；3造成損害/自殘(用爪)。
與對照眼比較濾過泡的伸展程度和高度和IOP，評估濾過泡的存留情況。用濾過泡上的紅斑確定炎癥反應(yīng)的程度，按0-3分打分。當(dāng)觀察到濾過泡衰敗時，即手術(shù)眼的眼內(nèi)壓等于對照眼的眼內(nèi)壓、濾過泡扁平時，終止家兔試驗(yàn)。
圖2顯示本研究評估的4組中每一組家兔的濾過泡存留百分率。平均(±SD)存活時間為第1組；10.3±8天；第2組23.8±12天；第3組10.1±9天；和第4組23.2±8天。
大多數(shù)組間觀察到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.001)，但第2組和第4組之間無差異(p＜0.05)。手術(shù)時用BPD和光處理(第2和4組)，與安慰劑對照(第1組)或手術(shù)后僅48小時處理(第3組)相比，濾過泡存留時間延長。在48小時時用BPD和光作第2次處理(第4組)并未顯示任何額外的效應(yīng)。用Kruskal-Wallis試驗(yàn)作非參數(shù)分析來評估組間濾過泡存留時間的差異。
用ANOVA試驗(yàn)評估IOP，手術(shù)中給予BPD時，觀察到IOP降低的趨勢(p＝0.057)。當(dāng)時，由于用來測家兔IOP的眼壓計(jì)的問題，最可靠的參數(shù)是濾過泡的伸展程度(圖3)和高度(圖4)，它們均表明手術(shù)時低劑量PDT的有效性。濾過泡上紅斑的測定(圖5)表明第1組和第3組中炎癥反應(yīng)較劇，其中濾過泡在手術(shù)后早期就衰敗。圖3、4和5中，觀察到組間統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.001)。濾過泡高度和伸展程度及其它裂隙燈特性用卡方測驗(yàn)來進(jìn)行分析。不良反應(yīng)也用卡方測驗(yàn)來進(jìn)行分析。每個實(shí)驗(yàn)日，用Cox Proportional Hazard Model來評估最精確預(yù)示濾過泡存留的參數(shù)。
如下表2所示，與以前小梁切除術(shù)輔助醫(yī)藥的家兔研究相比，結(jié)果顯示BPD比正常對照(Ara-A和5-氟尿嘧啶)延長濾過泡的存留時間。
表2抗纖維濾過泡存留文獻(xiàn)變性治療 (平均天數(shù)±SD[范圍])無藥物12.06±6.2(6-23.2)Kay等，＂抗成纖維細(xì)胞劑給藥作為濾過手術(shù)輔助劑-第II部分5-氟尿嘧啶和博來霉素在膠原植入中的給藥，家兔試驗(yàn)性研究＂，Ophthalmic Surg.，17796-801(1986)；Khaw等，＂手術(shù)中5-氟尿嘧啶或絲裂霉素C對家兔青光眼濾過手術(shù)的效應(yīng)＂，Ophthalmology，100367-72(1 993)；Bergstrom等，＂結(jié)膜下絲裂霉素C對家兔青光眼濾過手術(shù)的效應(yīng)＂，Arch.Ophthalmol.，1091725-30(1991)；和Liang等，＂絲裂霉素C和5-氟尿嘧啶對家兔眼濾過手術(shù)成功的比較＂，J.Glaucoma.187-93(1992)。5-氟尿嘧啶19.5±5.5(14-25)Kay等，＂抗成纖維細(xì)胞劑作為濾過手術(shù)輔助劑-第II部分5-氟尿嘧啶和博來霉素在膠原植入中的給藥，家兔試驗(yàn)性研究＂，Ophthalmic Surg.，17796-801(1986)；Khaw等，＂手術(shù)中5-氟尿嘧啶或絲裂霉素C對家兔青光眼濾過手術(shù)的效應(yīng)＂，Ophthalmology，100367-72(1993)。博來霉素 25.5±14.5(21-50) Khaw等，＂手術(shù)中5-氟尿嘧啶或絲裂霉素C對家兔青光眼濾過手術(shù)的效應(yīng)＂，Ophthalmology，100367-72(1993)。絲裂霉素-C 34.8±28.8(6-23.2) Khaw等，＂手術(shù)中5-氟尿嘧啶或絲裂霉素C對家兔青光眼濾過手術(shù)的效應(yīng)＂，Ophthalmology，100367-72(1993)；Liang等，＂絲裂霉素C和5-氟尿嘧啶對家兔眼濾過手術(shù)成功的比較＂，J.
Glaucoma，187-93(1992)。
Ara-A15.2±1.8 Lee等，＂浸漬阿糖胞苷的生物可侵蝕聚合物對家兔青光眼濾過手術(shù)所效應(yīng)＂，J.Glaucoma，296-100(1993)。
結(jié)果還表明，BPD延長家兔濾過泡的壽命使其長于接受絲裂霉素C的一些家兔。用絲裂霉素C所作研究的平均存留時間較長，這與PDT比絲裂霉素C臨床上引起超濾過少但同樣使用方便、安全性又大的假設(shè)相符合。
數(shù)據(jù)清楚地表明，較長的濾過泡存留時間與無紅斑或只有最少紅斑相關(guān)，因此，與炎癥反應(yīng)的減輕有關(guān)。數(shù)據(jù)還提示，用BPD和光處理在相當(dāng)?shù)偷膭┝糠秶鷥?nèi)即預(yù)防炎癥的產(chǎn)生，特別是當(dāng)手術(shù)中使用時。
不良作用極少，且非特定與光敏劑的使用相關(guān)。最初4天內(nèi)在6只家兔上觀察到纖維蛋白凝塊，其中3只在第2組，3只在第3組。第1周末，每一例上纖維蛋白均消散，無后遺癥。一只家兔在第0天死亡，認(rèn)為是麻醉合并癥。未報(bào)告其它不良事件。
第7天，從每組取一只家兔，在濾過泡衰敗后從每組取2只家兔，處死，進(jìn)行組織學(xué)和透射電子顯微鏡(“TEM”)分析。首先用10％緩沖的中性福爾馬林固定尸體的眼睛后進(jìn)行組織學(xué)評估。將眼睛處理、切片和用蘇木精和曙紅及Masson′s Trichrome染色。用盲法，由互不相干擾的觀察者檢查樣本。
用以含7％蔗糖的0.1M卡可基酸鹽緩沖的2.5％戊二醛固定組織樣本，進(jìn)行透射電子顯微鏡檢查。將組織用2％四氧化鋨作1小時后固定，并經(jīng)梯度醇濃度至100％的乙醇脫水。然后用催化的環(huán)氧樹脂將2×5mm組織塊進(jìn)行浸潤。切成厚切片(0.5μm)，用甲苯胺藍(lán)染色，用光學(xué)顯微鏡檢查適當(dāng)?shù)膮^(qū)域。然后切成薄切片(80nm)，撈在銅網(wǎng)上，用乙酸雙氧鈾和檸檬酸鉛染色，用于TEM評估。用日立H7000透射電子顯微鏡檢測這些切片。
在手術(shù)時接受BPD而不是安慰劑的濾過泡中，手術(shù)后第7天的光學(xué)顯微鏡檢顯示，在第0天和第2天接受安慰劑的家兔存在成纖維細(xì)胞和輕度淋巴細(xì)胞反應(yīng)。另外，第7天，證明這些眼睛有一些血管增生和新的膠原沉積。
相反，接受BPD的家兔僅在第2天(第3組)除了成纖維細(xì)胞外還有淋巴管增加，但無血管增生。在手術(shù)時接受BPD的兩只眼睛上，注意到濾過泡有輕度淋巴細(xì)胞反應(yīng)。但是，未見成纖維細(xì)胞、血管增加或淋巴細(xì)胞管增加。研究結(jié)束時(手術(shù)后3周)，在接受BPD的眼瘺管中，在瘺管中只見少量淋巴細(xì)胞，而無血管增生。
第2組和第4組中，在第7天和處死時，觀察到增厚的上皮。但是，相對于PDT處理的毒性作用而言，這被認(rèn)為是濾過泡升高和隨之而來的淚液充填故障所致。
在對照眼睛上，前節(jié)眼檢查未見安慰劑和BPD處理的眼之間存在差異，表明本發(fā)明的方法和組合物在臨床上無毒性(p＞0.05)。另外，無論在手術(shù)眼或?qū)φ昭凵?，組織學(xué)和透射電子顯微鏡分析均未顯示除濾過部位外的毒性或炎癥。因此，臨床、組織學(xué)或透射電子顯微鏡均未觀察到BPD毒性。
權(quán)利要求
1.減輕或預(yù)防損傷組織發(fā)生的炎癥反應(yīng)的方法，其特征在于包括以下步驟a.使損傷組織或損傷前組織與能滲透到所述組織中的光敏劑接觸，在少于1小時內(nèi)形成所需程度的生物分布；和b.將組織曝光，使其與具有能被光敏劑吸收的波長的光進(jìn)行所述的接觸，接觸時間以足以減輕或預(yù)防曝光組織的炎癥反應(yīng)，但不引起曝光組織壞死或紅斑為限。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中損傷組織是眼組織。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中光敏劑包括一種或多種一氫化苯并卟啉化合物。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中光敏劑包括BPD-MA。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述接觸步驟a是通過局部施用光敏劑來完成的。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中光敏劑是濃度為2mg/ml或更低的溶液形式。
7.如權(quán)利要求5所述的方法，其中通過浸藥海綿使損傷組織與光敏劑接觸。
8.如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述接觸步驟a中使光敏劑與損傷組織接觸少于5分鐘。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述接觸步驟a通過全身給藥來完成。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中光敏劑的劑量少于0.30mg/kg。
11.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述接觸步驟a和所述曝光步驟b之間除去與損傷組織接觸的過量光敏劑。
12.如權(quán)利要求11所述的方法，其中所述除去是用滅菌鹽水或平衡鹽溶液沖洗掉光敏劑。
13.如權(quán)利要求1所述的方法，其中光的波長至少某些是在電磁波的可見部分。
14.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述曝光步驟b中光的劑量少于約100J/cm2。
15.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述接觸步驟a和所述曝光步驟b之間的時間約在0-3小時之間，并且所述曝光步驟b中光的劑量少于約15J/cm2。
16.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述曝光步驟b中光的劑量約為7-12J/cm2。
17.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述接觸步驟a和所述曝光步驟b之間的時間大于約6小時，并且所述曝光步驟b中光的劑量約為15-100J/cm2。
18.用于減輕或預(yù)防損傷組織發(fā)生的炎癥反應(yīng)的組合物，包括a.約1μg/ml至約2mg/ml光敏劑，所述光敏劑能滲透到損傷組織或損傷前組織中，在少于1小時內(nèi)形成所需程度的生物分布；和b.可藥用載體。
19.如權(quán)利要求18所述的組合物，其中損傷組織是眼組織。
20.如權(quán)利要求18所述的組合物，其中光敏劑包括一種或多種一氫化苯并卟啉化合物。
21.如權(quán)利要求18所述的組合物，其中光敏劑包括BPD-MA。
22.如權(quán)利要求18所述的組合物，其中所述組合物配制成局部施用的制劑。
23.如權(quán)利要求22所述的組合物，其中光敏劑是濃度為2mg/ml或更低的溶液形式。
24.如權(quán)利要求18所述的組合物，其中所述組合物配制成全身給藥的制劑。
25.如權(quán)利要求24所述的組合物，其中光敏劑的劑量少于0.50mg/ml。
26.如權(quán)利要求18所述的組合物，其中光敏劑吸收的光至少某些波長位于電磁波可見部分。
27.用于減輕或預(yù)防損傷組織發(fā)生的炎癥作用的制品，所述制品包括a.能滲透到損傷組織或損傷前組織中的光敏劑，通過與能滲透到所述組織中的光敏劑接觸，在少于1小時內(nèi)形成所需程度生物分布；和b.能吸收的涂藥器。
28.如權(quán)利要求27所述的制品，其中所述能吸收的涂藥器是浸藥海綿。
29.如權(quán)利要求27所述的制品，其中所述光敏劑包括一種或多種一氫化苯并卟啉化合物。
30.如權(quán)利要求29所述的制品，其中光敏劑包括BPD-MA。
全文摘要
減輕或預(yù)防損傷組織發(fā)生的炎癥反應(yīng)的方法,包括以下步驟:a.使損傷組織或損傷前組織與能滲透到組織中的光敏劑接觸,在少于1小時內(nèi)形成所需程度的生物分布;和b.將組織曝光,使其與具有能被光敏劑吸收的波長的光接觸,接觸時間以足以減輕或預(yù)防在曝光組織中的炎癥反應(yīng),但不引起曝光組織壞死或紅斑為限。用于減輕或預(yù)防損傷組織產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)的藥物組合物或制品。該組合物包括:a.約1μg/ml至約2mg/ml光敏劑,所述光敏劑能滲透到損傷組織或損傷前組織中,在少于1小時內(nèi)形成所需程度的生物分布;和b).可藥用載體。該制品包括:a).能滲透到損傷組織或損傷前組織中、在少于1小時內(nèi)形成所需程度生物分布的光敏劑;和b).能吸收的涂藥器。
文檔編號A61K41/00GK1269729SQ98802422
公開日2000年10月11日 申請日期1998年1月14日 優(yōu)先權(quán)日1997年2月11日
發(fā)明者W·C·斯圖爾特, M·法斯德尼, A·M·里克特, J·G·利維, C·A·A·哈里托, G·修伯, M·奧博奇 申請人:Qlt光治療股份有限公司, 不列顛哥倫比亞省大學(xué), 汽巴視覺股份公司