專利名稱：用于組織或器官移植物誘導(dǎo)t細(xì)胞耐受的方法
背景技術(shù)：
為了誘導(dǎo)抗原特異性的T細(xì)胞活化和克隆擴(kuò)增，由抗原呈遞細(xì)胞(APCs)提供的兩個(gè)信號(hào)必須傳遞至靜止的T淋巴細(xì)胞表面(Jenkins，M.和Schwartz，R.(1987)《實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》，165，302-319；Mueller，D.L，等，(1990)《免疫學(xué)雜志》，144，3701-3709；Williams，I.R和Unanue，E.R(1990)《免疫學(xué)雜志》，145，85-93)。第一個(gè)信號(hào)，授與特異性給免疫反應(yīng)，是由T細(xì)胞受體(TCR)介導(dǎo)，接著識(shí)別呈現(xiàn)于主要組織相容性復(fù)合物(MHC)中的外來抗原多肽。第二個(gè)信號(hào)稱為共刺激，它誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖和變成功能性的T細(xì)胞(Schwartz，R.H(1990)《科學(xué)》248，1349-1356)。共刺激既不是抗原特異性的，也不是MHC限制性的，被認(rèn)為是由APCs表達(dá)的一個(gè)或多個(gè)獨(dú)特性的細(xì)胞表面分子所提供(Jenkins，M.K，等，(1988)《免疫學(xué)雜志》，140，3324-3330；Linsley，P.S.，等，(1991)《實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》，173，721-730；Gimmi，C.D.，等，(1991)《美國國家科學(xué)院院刊》，88，6575-6579；Young，J.W，等，(1992)《臨床研究雜志》，90，229-237；Koulova，L，等，(1991)《實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》，173，759-762；Reiser，H.，等，(1992)《美國國家科學(xué)院院刊》，89，271-275；Van-Seventer，G.A，等，(1990)《免疫學(xué)雜志》，144，4579-4586；Lasslle，J.M，等，(1991)《免疫學(xué)雜志》，144，774-80；Dustin，M.I.，等，(1989)《實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》，169，503；Armitage，R，J，等，(1992)《自然》，357，80-82；Liu，Y.，等，(1992)《實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》，175，437-445)。參與T細(xì)胞激活的一個(gè)共刺激路徑包括T細(xì)胞表面的CD28分子。此分子能夠接受由B細(xì)胞或其它APCs細(xì)胞上的配體所傳遞的共刺激信號(hào)。CD28分子的配體包括B淋巴細(xì)胞激活抗原的B7家族成員，例如B7-1和/或B7-2(Freedman，A.S，等，(1987)《免疫學(xué)雜志》，137，3260-3267；Freeman，G.J.等，(1989)《免疫學(xué)雜志》，143，2714-2722；Freeman，G.J.等，(1991)《實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》，174，625-631；Freeman，G.J.等，(1993)《科學(xué)》，262，909-911；Azuma，M.等，(1993)《自然》，366，76-79；Freeman，G.J.等，(1993)《實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》，178，2185-2192)。B7-1和B7-2也是另一分子CTLA4的配體，CTLA4呈現(xiàn)于激活的T細(xì)胞表面，然而CTLA4在共刺激中的作用并不清楚。
傳遞給T細(xì)胞一個(gè)抗原特異性信號(hào)和一個(gè)共刺激信號(hào)導(dǎo)致T細(xì)胞激活，它包括T細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子的分泌。相反地，傳遞給T細(xì)胞一個(gè)抗原特異性信號(hào)而缺少共刺激信號(hào)時(shí)，則被認(rèn)為在T細(xì)胞中誘導(dǎo)了一種無應(yīng)答性或無反應(yīng)性狀態(tài)，所以在T細(xì)胞中誘導(dǎo)了抗原特異性耐受。
T細(xì)胞和B細(xì)胞的相互作用在免疫反應(yīng)中起了主要的作用。誘導(dǎo)對(duì)胸腺依賴性抗原的體液免疫需要由T輔助細(xì)胞(此后稱Th)提供的“幫助”。盡管提供給B淋巴細(xì)胞的某些幫助是由Th細(xì)胞釋放的可溶性分子介導(dǎo)的(例如淋巴因子IL-4和IL-5)，B細(xì)胞的激活也需要B細(xì)胞和Th細(xì)胞接觸依賴性的相互作用。Hirohata等《免疫學(xué)雜志》，1403736-3744(1988)；Bartlett.等，《免疫學(xué)雜志》1431745-1754(1989)；這表明B細(xì)胞的激活包括了B細(xì)胞和Th細(xì)胞的細(xì)胞表面分子之間必需的相互作用。T細(xì)胞上的分子因而介導(dǎo)了T細(xì)胞的接觸依賴性輔助效應(yīng)物的功能。B細(xì)胞和T細(xì)胞上的分子之間接觸依賴性相互作用被下列觀察進(jìn)一步支持，分離的激活的T細(xì)胞的原生質(zhì)膜，能夠提供對(duì)B細(xì)胞的激活必需的幫助功能。Brian，《美國國家科學(xué)院院刊》，85564-568(1988)；Hodgkin等，《免疫學(xué)雜志》，1452025-2034(1990)；Noelle等，《免疫學(xué)雜志》，1461118-1124(1991)。
一個(gè)分子，CD40，已被確認(rèn)存在于未成熟和成熟的B淋巴細(xì)胞表面，當(dāng)它被抗體交聯(lián)時(shí)，誘導(dǎo)B細(xì)胞增殖。Valle等，《歐洲免疫學(xué)雜志》，191463-1467(1989)；Gordon等，《免疫學(xué)雜志》，1401425-1430(1988)；Gruber等，《免疫學(xué)雜志》， 424144-4152(1989)。CD40已經(jīng)被分子克隆和確認(rèn)特性。Stamenkovic等《歐洲分子生物學(xué)組織雜志》，81403-1410(1989)。CD40的一個(gè)配體，gp39(也稱CD40配體和或CD40L)也已被分子克隆和確認(rèn)特性。Armitage等，《自然》，35780-82(1992)；Lederman等，《實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》1751091-1101(1992)；Hollenbaugh等，《歐洲分子生物學(xué)組織雜志》，114313-4319(1992)。gp39蛋白表達(dá)是在激活的，而不是靜止的CD4+Th細(xì)胞上。Spriggs等，《實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》1761543-1550(1992)；Lane等，《歐洲免疫學(xué)雜志》，222573-2578(1992)；Roy等，《免疫學(xué)雜志》，1511-14(1993)。轉(zhuǎn)染gp39基因并在表面表達(dá)gp39蛋白的細(xì)胞能啟動(dòng)B細(xì)胞的增殖，并與別的刺激信號(hào)一起可以誘導(dǎo)抗體的產(chǎn)生。Armitage等《自然》，35780-82(1992)，Hollenbaugh等，《歐洲分子生物學(xué)組織雜志》，114313-4319(1992)。發(fā)明簡述細(xì)胞表面分子介導(dǎo)T細(xì)胞的接觸依賴性輔助效應(yīng)物功能，它對(duì)于誘導(dǎo)需要T細(xì)胞幫助的免疫反應(yīng)是重要的。例如，T細(xì)胞上的gp39與B細(xì)胞上的CD40的相互作用對(duì)于激活B細(xì)胞對(duì)抗原的反應(yīng)起了關(guān)鍵性的作用。本發(fā)明至少是部分依據(jù)此發(fā)現(xiàn)，即細(xì)胞表面介導(dǎo)T細(xì)胞接觸依賴性輔助效應(yīng)物功能的分子在T細(xì)胞對(duì)同種抗原的反應(yīng)中也起重要作用，特別是已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在適宜的條件下，干擾gp39與同種細(xì)胞上的配體相互作用能夠誘導(dǎo)T細(xì)胞耐受，同種的這類細(xì)胞向T細(xì)胞呈遞同種抗原。優(yōu)選地說，向T細(xì)胞呈遞同種抗原的同種細(xì)胞為了提供T細(xì)胞活化所必需的信號(hào)，需要此細(xì)胞上的gp39配體與T細(xì)胞上的gp39相互作用。抑制同種細(xì)胞上的gp39配體與T細(xì)胞上的gp39相互作用防止了T細(xì)胞的激活，也就誘導(dǎo)同種抗原特異性的T細(xì)胞耐受，這里說明的誘導(dǎo)T細(xì)胞對(duì)同種抗原的耐受可以做為組織和器官移植的一種預(yù)備性制度。
因此，本發(fā)明的方法在組織和器官的受體中誘導(dǎo)對(duì)供體組織和器官的T細(xì)胞耐受尤其有用。此方法包括施子移植受體1)一種同種或異種的細(xì)胞，它至少表達(dá)一種供體抗原，它的細(xì)胞表面的配體能與受體T細(xì)胞表面的受體相互作用，這種T細(xì)胞表面的受體介導(dǎo)了接觸依賴性輔助效應(yīng)物功能；2)一種拮抗劑，它能夠拮抗存在于受體T細(xì)胞表面的分子，此分子介導(dǎo)了接觸依賴性輔助效應(yīng)物功能。這種拮抗劑抑制了T細(xì)胞上的分子與同種或異種細(xì)胞上的配體之間的相互作用。
在優(yōu)選實(shí)施方案中，受體T細(xì)胞表面介導(dǎo)接觸依賴性輔助效應(yīng)物功能的受體分子是gp39。在此實(shí)施方案中，拮抗劑是一種分子，它抑制了T細(xì)胞上的gp39與同種或異種細(xì)胞上gp39配體相互作用。一個(gè)特別優(yōu)選的gp39拮抗劑是抗-gp39抗體。在另一實(shí)施方案中，gp39拮抗劑是gp39配體的一種可溶形式，如可溶性的CD40。給予受體的同種或異種的細(xì)胞優(yōu)選淋巴樣細(xì)胞，比如B細(xì)胞。同種或異種細(xì)胞也可選擇小的靜止期的B細(xì)胞。同種或異種細(xì)胞和拮抗劑(如抗gp39抗體)一般在移植組織和器官進(jìn)入受體以前施予受體。例如在移植組織和器官進(jìn)入受體以前，把從組織或器官的供體中取得的淋巴樣細(xì)胞(如B細(xì)胞)與拮抗劑一起給予受體。
本發(fā)明的方法能被用于誘導(dǎo)T細(xì)胞對(duì)移植的組織和器官的耐受，例如肝、腎、心臟、肺、皮膚、肌肉，神經(jīng)組織、胃和腸。在一實(shí)施方案中，移植的組織包括胰島。因此，本發(fā)明提供了一種治療糖尿病的方法，包括給予需要治療的受體1)表達(dá)供體抗原的同種或異種的細(xì)胞；2)一種受體T細(xì)胞其表面受體的抑制劑，此T細(xì)胞表面受體可以介導(dǎo)接觸依賴性輔助效應(yīng)物功能，抑制劑例如gp39抑制劑(如抗-gp39抗體)；3)供體胰島。附圖簡述

圖1是圖解描述在化學(xué)性糖尿病小鼠中移植的胰島同種移植物的存活，此小鼠或單獨(dú)用抗-gp39抗體預(yù)處理或者單獨(dú)用全部或部分同種脾細(xì)胞預(yù)處理。
圖2是圖解描述在化學(xué)性糖尿病小鼠中，通過血漿葡萄糖濃度的降低來測(cè)定移植胰島同種移植物的存活，此小鼠用單一劑量的部分同種的脾細(xì)胞和抗gp39抗體提前處理2周(A組)或者7周(B)組，每條曲線示得自一個(gè)獨(dú)立的小鼠的數(shù)據(jù)開放的符號(hào)表明在受體內(nèi)胰島同種移植物自發(fā)失敗，閉合的符號(hào)表明小鼠的胰島移植物在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)是有功能的。
圖3A、B和C是流式細(xì)胞計(jì)數(shù)輪廓圖，它說明了用CD40Ig(A組)或mAb4D9-8(B組)或mAb4D9-9(C組)來染激活6小時(shí)的人外周血淋巴細(xì)胞。
圖4A，B和C是流式細(xì)胞計(jì)數(shù)輪廓圖，它說明了用mAb4D9-8(A組)或mAb4D9-9(B組)或CD40Ig(C組)來染培養(yǎng)在加有環(huán)孢霉素A(cycloporinA)的激活6小時(shí)的人外周血淋巴細(xì)胞。
圖5A和B是流式細(xì)胞計(jì)數(shù)輪廓圖，它說明了在加有未標(biāo)記的mAb4D9-8(A組)或未標(biāo)記的mAb4D9-9的條件下，用CD40Ig來染激活6小時(shí)的外周血淋巴細(xì)胞。
圖6是圖解描述當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)于加有抗人gp39mAbs4D9-8，4D9-9，24-31，24-43，89-76或89-79時(shí)，用gp39和I2-4來誘導(dǎo)的B細(xì)胞增殖的抑制。
圖7是圖解描述當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)于加有抗人gp39mAbs24-31或89-79時(shí)，同種特異性混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)的抑制。發(fā)明詳述本發(fā)明的特色是該方法為在移植接受體內(nèi)，體內(nèi)誘導(dǎo)T細(xì)胞對(duì)供體組織或器官移植物耐受。此方法包括給予移植接受體1)一種同種或異種的細(xì)胞，它表達(dá)供體抗原，其細(xì)胞表面的配體能與接受體T細(xì)胞表面介導(dǎo)接觸依賴性輔助效應(yīng)物功能的受體相互作用；2)一種拮抗劑，它通過拮抗T細(xì)胞表面受體來抑制配體與受體的相互作用。這里所用的術(shù)語“接受體”指的是組織和器官移植物將要、正在或已移植入的接受治療者。本文所定義的“同種細(xì)胞”是從和接受體同種的不同個(gè)體中獲取的，它表達(dá)的“同種抗原”不同于由接受體細(xì)胞表達(dá)的抗原，“異種細(xì)胞”是從和接受體異種的個(gè)體中獲取的，它表達(dá)的“異種抗原”不同于由接受體細(xì)胞表達(dá)的抗原。這里所用的術(shù)語“供體抗原”指的是移植到接受體內(nèi)的供體組織或器官移植物所表達(dá)的抗原。供體抗原依據(jù)移植物的來源可以是同種抗原或異種抗原，給予接受體的同種或異種細(xì)胞，做為耐受制度的一部分，表達(dá)供體抗原，比如表達(dá)呈現(xiàn)于移植的供體組織或器官的部分或全部相同的抗原。同種或異種的細(xì)胞優(yōu)選地從組織或器官移植物的供體中獲取，但也可以從與供體有相同的抗原決定簇的一個(gè)或更多來源中獲取。
除了同種或異種的細(xì)胞，做為耐受制度的一部分，T細(xì)胞上介導(dǎo)接觸依賴性輔助效應(yīng)物功能的分子的拮抗劑也給予接受體。這里所定義的介導(dǎo)接觸依賴性輔助效應(yīng)物功能的分子或受體是指表達(dá)于Th細(xì)胞上并與效應(yīng)物細(xì)胞(如B細(xì)胞)上的配體相互作用的分子或受體，這里所說的分子與其配體相互作用對(duì)于產(chǎn)生效應(yīng)物細(xì)胞反應(yīng)(如B細(xì)胞激活)是必需的。除了參與效應(yīng)物細(xì)胞反應(yīng)外，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這些分子或受體還參與了T細(xì)胞對(duì)抗原的反應(yīng)。優(yōu)選的，T細(xì)胞上介導(dǎo)接觸依賴性輔助效應(yīng)物功能的分子是gp39。因此，在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括給予移植接受體同種或異種細(xì)胞和gp39拮抗劑。由同種或異種細(xì)胞來激活接受體T細(xì)胞包括接受體T細(xì)胞上gp39和同種或異種細(xì)胞上gp39配體的相互作用。通過用gp39的拮抗劑來抑制此相互作用，接受體的T細(xì)胞就不能被同種或異種細(xì)胞所表達(dá)的供體抗原所激活，而是對(duì)供體抗原耐受。在接受體中誘導(dǎo)對(duì)供體抗原的耐受則使得供體組織或器官移植成功，而沒有免疫介導(dǎo)的供體移植物的排斥。
本發(fā)明的各個(gè)方面在下列小節(jié)中被更詳細(xì)說明。I.gp39拮抗劑依據(jù)本發(fā)明的方法，gp39拮抗劑施用于接受體，來干擾接受體T細(xì)胞上gp39與給予接受體的同種或異種細(xì)胞如B細(xì)胞上的gp39配體相互作用。gp39的拮抗劑被定義為干擾這種相互作用的一種分子。gp39的拮抗劑可以是gp39的抗體(如gp39的單克隆抗體)，gp39抗體的片段或衍生物(如Fab或F(ab)’2片段，嵌合性抗體或人源化抗體)gp39配體的可溶形式(如可溶性CD40)，gp39配體的融合蛋白的可溶形式(如可溶性CD40Ig)，或能分解或干擾gp39-CD40相互作用的藥劑。A.抗體哺乳動(dòng)物(如小鼠、倉鼠或家兔)用gp39蛋白或蛋白片段(如多肽片段)的免疫原性形式來免疫，以誘導(dǎo)抗體反應(yīng)。表面表達(dá)gp39的細(xì)胞也可以做為免疫原。另一種免疫原包括純化的gp39蛋白或蛋白片段。通過標(biāo)準(zhǔn)的純化技術(shù)，gp39可以從表達(dá)gp39的細(xì)胞中純化出來。此外，gp39的cDNA(Armitage等，《自然》，35780-82(1992)；Lederman等，《實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》，1751091-1101(1992)；Hollenbaugh等，《歐洲分子生物學(xué)組織雜志》，114313-4319(1992))也能在宿主細(xì)胞中表達(dá)，例如細(xì)菌或哺乳類細(xì)胞系，通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)， gp39蛋白能從細(xì)胞培養(yǎng)物中純化出來。此外，利用已知技術(shù)(如F-moc或T-moc化學(xué)合成)，gp39多肽依據(jù)gp39的氨基酸序列可以合成(說明見于Armitage等，《自然》，35780-82(1992)；Lederman等，《實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》，1751091-1101(1992)；Hollenbaugh等《歐洲分子生物學(xué)組織雜志》，114313-4319(1992))給蛋白授予免疫原性的技術(shù)包括與載體的結(jié)合或此領(lǐng)域已熟知的其它技術(shù)。例如，蛋白在佐劑存在下被給藥。通過檢測(cè)血清或血漿中抗體的效價(jià)來監(jiān)視免疫過程的發(fā)展。標(biāo)準(zhǔn)ELTSA或其它免疫學(xué)測(cè)定法與免疫原如抗原一起被用來估計(jì)抗體的水平。
免疫作用后，可以得到抗血清，如果想要的話，從血清中可以分離多克隆抗體，為了產(chǎn)生單克隆抗體，抗體產(chǎn)生細(xì)胞(淋巴細(xì)胞)從被免疫的動(dòng)物中收獲，通過標(biāo)準(zhǔn)體細(xì)胞融合技術(shù)與骨髓瘤細(xì)胞融合，然后使這些細(xì)胞不死，產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞。此技術(shù)在本領(lǐng)域內(nèi)是熟知的，例如，最初由Kohler和Nilstein所發(fā)展的雜交瘤技術(shù)(《自然》(1975)256495-497)以及別的技術(shù)，比如人B細(xì)胞雜交瘤技術(shù)(Kozbar等，《今日免疫學(xué)》，(1983)472)，EBV-雜交瘤技術(shù)來生產(chǎn)人單克隆抗體(Cole等，《腫瘤治療中的單克隆抗體》(1985)(Allen R Bliss.Inc.77-96頁)，和篩選結(jié)合的抗體文庫，(Huse等，《科學(xué)》(1989)2461275)。雜交瘤細(xì)胞可用免疫化學(xué)篩選以產(chǎn)生能與蛋白或多肽特異性反應(yīng)的抗體，單克隆抗體被分離。
這里所用的術(shù)語抗體也包括其片段，此片段與gp39蛋白或其多肽或gp39融合蛋白特異性反應(yīng)。能應(yīng)用傳統(tǒng)技術(shù)將抗體片段化，片段能夠與上述的完整抗體以同樣方式被篩選應(yīng)用，例如，用胃蛋白酶處理抗體產(chǎn)生F(ab’)2片段，得到的F(ab’)2片段被處理以減少二硫鍵來產(chǎn)生Fab’片段。本發(fā)明的抗體進(jìn)一步還包括有抗gp39部分的雙特異性的和嵌合的分子。
當(dāng)在非人類實(shí)驗(yàn)體中產(chǎn)生的抗體被治療性地用于人類時(shí)，它們被作為外來物不同程度被識(shí)別，在病人中可能產(chǎn)生免疫反應(yīng)。減少或去除此問題的方法是生產(chǎn)嵌合的抗體衍生物，該方法對(duì)一般的免疫抑制是可取的如抗體分子是由非人類動(dòng)物的可變區(qū)域和人類的穩(wěn)定區(qū)域聯(lián)合組成。嵌合的抗體分子包括，比如從小鼠、大鼠或其它種的抗體而來的抗原連結(jié)區(qū)和人的穩(wěn)定區(qū)。制造嵌合抗體的許多方法已被說明，并且能夠用于制造含有免疫球蛋白可變區(qū)域的嵌合抗體，此抗體識(shí)別gp39。例如，Morrison等，《美國國家科學(xué)院院刊》，816851(1985)；Takeda，等，《自然》314452(1985)，Cabilly等，U.S.Patent No.4,816,567Boss等，U.S.Patent No.4,816,397；Tanaguchi等，歐洲專利公開EP171496；歐洲專利公開0173494，英國專利GB2177096B。期望這些嵌合抗體在人體中比相應(yīng)的非嵌合抗體會(huì)少一些免疫原性。
為了人類治療的目的，特異性與gp39蛋白或多肽反應(yīng)的單克隆或嵌合抗體通過產(chǎn)生人的可變區(qū)域嵌合體被進(jìn)一步人源化，其中嵌合體中，可變區(qū)的部分，尤其是抗原連結(jié)區(qū)域的保守框架結(jié)構(gòu)區(qū)域是人類來源的，只有超變區(qū)是非人類來源的。此種變化的免疫球蛋白分子可以通過本領(lǐng)域已知的幾種技術(shù)中的任一個(gè)被制造，(例如Teng等，《美國國家科學(xué)院院刊》，807308-7312(1983)；Kozbor等，《今日免疫學(xué)》，47279(1983)；Olsson等，《酶學(xué)方法》，923-16(1982))，更優(yōu)選地可以依據(jù)PCT公開WO92/06193或者EP0239400上的指導(dǎo)來制造。人源化的抗體能被商業(yè)性地生產(chǎn)，例如Scotgen Limited，2 HollyRoad，Twickenham，Middlesex，Great Britain。
產(chǎn)生能與gp39蛋白或多肽反應(yīng)的特異性抗體或抗體片段的另一方法是用gp39蛋白或多肽來篩選表達(dá)于細(xì)菌內(nèi)的表達(dá)文庫，該文庫編碼免疫球蛋白基因或其部分。例如，完整的Fab片段，VH區(qū)域和FV區(qū)域能夠用噬菌體表達(dá)文庫表達(dá)于細(xì)菌內(nèi)。例子見于Ward等，《科學(xué)》，341544-546(1989)；Huse等，《科學(xué)》，2461275-1281(1989)；和Mc Cafferty等，《自然》，348552-554(1990)。用例如gp39多肽來篩選此文庫可以確定與gp39反應(yīng)的免疫球蛋白片段。另外，SCID-hu小鼠(從Genpharm獲得)也能用來生產(chǎn)抗體或其片段。
生產(chǎn)gp39，包括人gp39和鼠gp39單克隆抗體的方法學(xué)和本發(fā)明方法中所用的適宜的單克隆抗體在實(shí)例2中進(jìn)一步作詳盡說明。
本發(fā)明的抗人gp39單克隆抗體被優(yōu)選用于誘導(dǎo)抗原特異性T細(xì)胞耐受。優(yōu)選的抗體包括單克隆抗體3E4，2H5，2H8，4D9-8，4D9-9，24-31，24-43，89-76和89-79，在實(shí)例2中將被說明。尤其優(yōu)選的抗體是單克隆抗體89-76和24-31。分別產(chǎn)生89-76和24-31抗體的89-76和24-31雜交瘤在Budapest條約的規(guī)定下，于1994年9月2號(hào)貯存于美國典型培養(yǎng)物保藏中心，Parklawn Drive，Rockville，Md，89-76雜交瘤被指定為ATCC，登記號(hào)HB11713，24-31雜交瘤被指定為登記號(hào)HB11712。24-31和89-76抗體是IgG1同型。
在另一實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的方法中的抗人gp39mAb結(jié)合一個(gè)表位，此表位可以被選自3E4，2H5，2H8，4D9-8，4D9-9，24-31，24-43，89-76和89-79的單克隆抗體識(shí)別。更優(yōu)選地，抗人gp39單克隆抗體結(jié)合一個(gè)由單克隆抗體24-31或89-76所識(shí)別的表位。一個(gè)mAb結(jié)合到一個(gè)由前面提到的任一抗體識(shí)別的表位的能力可通過標(biāo)準(zhǔn)交叉競爭試驗(yàn)來確定。例如一種抗體，它結(jié)合的表位與mAb24-31所識(shí)別的表位相同，則該抗體會(huì)競爭標(biāo)記的24-31同已被激活的T細(xì)胞的結(jié)合，而如果一個(gè)抗體結(jié)合的表位不同于mAb24-31所識(shí)別的表位，則該抗體不會(huì)競爭標(biāo)記的24-31同已被激活T細(xì)胞的結(jié)合。B. 可溶性gp39配體其它被施用以誘導(dǎo)T細(xì)胞耐受的gp39拮抗劑包括gp39配體的可溶形式。單一效價(jià)的gp39可溶性配體，如可溶性CD40，能夠與gp39連結(jié)，因此抑制了gp39與B細(xì)胞上CD40的相互作用。術(shù)語“可溶的”指的是配體并非永久性結(jié)合到細(xì)胞膜上。可溶的gp39配體可以通過化學(xué)合成來制備，或優(yōu)選地通過重組DNA技術(shù)來制備，例如通過只表達(dá)配體細(xì)胞外的區(qū)域(缺少跨膜和細(xì)胞質(zhì)區(qū)域)。優(yōu)選的可溶性gp39配體是可溶性CD40。此外，可溶性gp39配體可以是融合蛋白的形式，此融合蛋白包括至少gp39配體的一部分，此部分附著于第二種分子上，例如CD40與免疫球蛋白被做為融合蛋白表達(dá)(如CD40Ig融合蛋白)。在一實(shí)施方案中，融合蛋白的生產(chǎn)，包括CD40細(xì)胞外區(qū)域部分的氨基酸殘基被連結(jié)到免疫球蛋白重鏈例如Cr1的對(duì)應(yīng)于鉸鏈CH2和CH3區(qū)域的序列的氨基酸殘基上，來形成CD40Ig融合蛋白(見Linsley等(1991)《實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》，1783721-730；Capon等，(1989)《自然》337，525-531；和Capon U.S.5,116,964)。融合蛋白可以通過化學(xué)合成來生產(chǎn)，或優(yōu)選地依據(jù)CD40的cDNA通過重組DNA技術(shù)來生產(chǎn)(Stamenkovic等，《歐洲分子生物學(xué)組織雜志》，81403-1410(1989))。II. 誘導(dǎo)抗原特異性耐受用的細(xì)胞本發(fā)明是依據(jù)，至少是部分依據(jù)此發(fā)現(xiàn)，即在gp39拮抗劑存在時(shí)，由同種細(xì)胞呈遞同種抗原給T細(xì)胞則誘導(dǎo)了T細(xì)胞對(duì)同種抗原的耐受。由此機(jī)制誘導(dǎo)耐受的細(xì)胞包括那些呈遞抗原組通過與gp39相互作用來激活T細(xì)胞的細(xì)胞，(即T細(xì)胞上gp39與呈遞的細(xì)胞上的gp39配體的相互作用對(duì)于傳遞適宜于T細(xì)胞激活的信號(hào)給T細(xì)胞是必須的)。抑制同種或異種細(xì)胞上的配體與接受體T細(xì)胞上gp39的相互作用阻止由同種或異種抗原引起的T細(xì)胞激活，這樣，誘導(dǎo)了T細(xì)胞對(duì)抗原的耐受。通過gp39干擾T細(xì)胞的激活也可以阻止同種細(xì)胞或異種細(xì)胞上共刺激分子的誘導(dǎo)(如B細(xì)胞上B7家族分子)，這樣在缺少共刺激信號(hào)時(shí)細(xì)胞只傳遞抗原信號(hào)給T細(xì)胞，誘導(dǎo)了耐受。
因此，在發(fā)明的方法中，同種或異種的細(xì)胞被給予接受體受治療者。同種或異種的細(xì)胞能夠呈遞抗原給受體的T細(xì)胞，例如B淋巴細(xì)胞，“職業(yè)性”的抗原呈遞細(xì)胞(如單核細(xì)胞，樹突狀細(xì)胞，郎格爾漢細(xì)胞)或其它呈遞抗原給免疫細(xì)胞的細(xì)胞(如角化細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、星形細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞)。而且，更優(yōu)的是，同種或異種的細(xì)胞有一種減弱的在接受體T細(xì)胞中刺激產(chǎn)生共刺激信號(hào)的能力。例如，同種或異種的細(xì)胞可以不表達(dá)，或只低水平表達(dá)共刺激分子如蛋白B7家族(如B7-1和B7-2)。用于本發(fā)明方法中的可能的同種細(xì)胞或異種細(xì)胞上共刺激分子的表達(dá)能夠通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)來估測(cè)，例如用共刺激分子的抗體進(jìn)行流式細(xì)胞計(jì)數(shù)。
誘導(dǎo)T細(xì)胞耐受優(yōu)選的同種或異種的細(xì)胞是淋巴樣細(xì)胞，例如外周血淋巴細(xì)胞，或脾細(xì)胞。誘導(dǎo)T細(xì)胞耐受的優(yōu)選淋巴樣細(xì)胞是B細(xì)胞。通過標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞分離技術(shù)，B細(xì)胞可以從混合的細(xì)胞群體中純化出來(如外周血或脾中其它細(xì)胞類型)，例如把脾細(xì)胞培養(yǎng)于塑料平皿中粘附性細(xì)胞被去除，重新獲得非粘附性細(xì)胞。用抗T細(xì)胞抗體(如抗Thy1.1和/或Thy1.2)和補(bǔ)體處理，T細(xì)胞可以從混合的細(xì)胞群體中去除。在一實(shí)施方案中，靜止期的淋巴樣細(xì)胞，優(yōu)選地用靜止期B細(xì)胞做為抗原呈遞細(xì)胞。通過本領(lǐng)域已知技術(shù)，靜止期的淋巴樣細(xì)胞，例如靜止期的B細(xì)胞依據(jù)它們較小的大小和密度能夠被分離出來。通過例1所說明的對(duì)流離心淘洗，靜止期的淋巴樣細(xì)胞能夠分離出來。應(yīng)用對(duì)流離心淘洗，通過收集在14-19ml/min的級(jí)分，優(yōu)選19ml/min(3,200rpm)級(jí)分，小的、靜止期的淋巴樣細(xì)胞群體可以獲得，此群體中排凈了能夠激活T細(xì)胞反應(yīng)的細(xì)胞。此外，通過不連續(xù)密度梯度離心比如用Ficoll或Percoll梯度，小的靜止期的淋巴細(xì)胞(如B細(xì)胞)能被分離，離心后一層含有小的靜止期的淋巴細(xì)胞能被獲取。通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)(如免疫熒光)檢測(cè)激活B細(xì)胞表面共刺激分子如B7-1和B7-2的表達(dá)，小的靜止期的B細(xì)胞也能從激活的B細(xì)胞中區(qū)分出來。
施予接受體的同種或異種的細(xì)胞的功能是，至少部分呈遞供體抗原給接受體T細(xì)胞。這樣，供體組織或器官所表達(dá)的抗原在細(xì)胞中也表達(dá)。典型地，這可以用從組織或器官移植物的供體中獲取的同種或異種的細(xì)胞來完成。例如，從組織或器官供體中來源的外周淋巴樣細(xì)胞，B細(xì)胞或脾細(xì)胞能被分離并用于本發(fā)明的方法中。此外，同種或異種的細(xì)胞也能從除了組織或器官的供體之外的來源獲取，只要細(xì)胞與組織或器官的供體有相同的抗原決定簇。例如與供體組織或器官表達(dá)相同的主要組織相容性復(fù)合物抗原的同種或異種的細(xì)胞能被使用，這樣從組織或器官的供體有著MHC單倍型相匹配的來源而來的同種或異種的細(xì)胞可以被使用(如移植供體的近親)。III.細(xì)胞和gp39拮抗劑的施用依據(jù)本發(fā)明，通過給移植接受體施用gp39拮抗劑和同種或異種的細(xì)胞，此細(xì)胞表達(dá)供體抗原，并通過gp39與受體T細(xì)胞相互作用，這樣可誘導(dǎo)了T細(xì)胞對(duì)組織或器官移植物的耐受。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，同種或異種的細(xì)胞和gp39拮抗劑被同時(shí)給予接受體。另一可選擇的方法是在給予同種或異種細(xì)胞之前，gp39拮抗劑被給予受體，例如當(dāng)gp39拮抗劑是一個(gè)有著長的半衰期的抗體。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，拮抗劑和同種或異種的細(xì)胞在組織或器官移植進(jìn)接受體之前給予受體。(即受體用拮抗劑和細(xì)胞提前處理)。例如給予同種或異種的細(xì)胞和拮抗劑可以在組織或器官移植之前幾天(如5-8天)進(jìn)行。
給予單劑量的同種的細(xì)胞同拮抗劑一起已發(fā)現(xiàn)足夠誘導(dǎo)T細(xì)胞對(duì)供體組織或器官的耐受(見例1)給予細(xì)胞的數(shù)目依據(jù)所用細(xì)胞類型、組織或器官移植物類型，接受體的重量，接受體總的條件，以及熟練的技術(shù)人員已知的其它變量而變化。用于本發(fā)明方法中的適宜的細(xì)胞數(shù)可以通過本領(lǐng)域中一個(gè)普通技術(shù)人員，通過傳統(tǒng)的方法來確定(例如例1中所描述的)細(xì)胞以有利于在接受體中誘導(dǎo)T細(xì)胞耐受的方式和路徑被給予。細(xì)胞可以在生理的可接受的溶液中給予受體，象緩沖鹽溶液或類似載體。優(yōu)選地細(xì)胞可以靜脈注射給接受體。
在適宜于體內(nèi)給藥的生物相容的形式內(nèi)，本發(fā)明的拮抗劑給予受試驗(yàn)體以誘導(dǎo)T細(xì)胞耐受?！斑m宜于體內(nèi)給藥的生物相容的形式”意味著給予拮抗劑的一種形式，其中形式內(nèi)，任何毒性效應(yīng)不超過此化合物治療的效應(yīng)。術(shù)語受試驗(yàn)體包括在其體內(nèi)免疫反應(yīng)可以被誘導(dǎo)的活的有機(jī)體如哺乳動(dòng)物，受試驗(yàn)體的例子包括人、狗、貓、小鼠、大鼠、和其轉(zhuǎn)基因種屬。gp39拮抗劑能夠以任何藥理學(xué)的形式，可選擇和藥用載體一起被給予。拮抗劑治療活性量的給予定義為在劑量和必須的一段時(shí)間內(nèi)，取得想要結(jié)果(如T細(xì)胞耐受)的有效量。例如，gp39的拮抗劑的治療活性量可能依據(jù)下列因素而變化，例如疾病的狀態(tài)、年齡、性別、個(gè)體重量和拮抗劑在個(gè)體內(nèi)誘導(dǎo)預(yù)期反應(yīng)的能力。為了產(chǎn)生理想的治療反應(yīng)，劑量可以調(diào)整。例如，幾個(gè)分開的劑量可以每日給藥，或依據(jù)治療情況的緊急狀態(tài)所顯示的量，把劑量成比例降低。就象例1中所說明的用抗gp39抗體來治療，一個(gè)有效的治療制度包括在組織或器官移植前(如5-8天)開始給予抗體，接著在移植后幾周內(nèi)(如2-7周)再次給予抗體(如每隔一天)。
有活性的化合物(例如拮抗劑如抗體)可以以方便的方式給藥，例如注射(皮下的，靜脈的等等)，口服給藥，吸入給藥，經(jīng)皮膚給藥或直腸給藥。依據(jù)給藥的途徑，有活性的化合物可以包裹在一種物質(zhì)內(nèi)防止化合物遭受可以使此化合物失活的酶，酸或其它自然條件的作用。優(yōu)選地給藥途徑是靜脈注射。
除去胃腸道外給藥，要給予gp39的拮抗劑，則有必要用一物質(zhì)包裹拮抗劑或與拮抗劑共同給藥以防止它的失活。例如拮抗劑能在合適的載體或稀釋劑中與酶的抑制劑共同給藥，或在合適的載體如脂質(zhì)體中給予個(gè)體。藥用稀釋劑包括鹽以及水性的緩沖溶液。酶的抑制劑包括胰蛋白酶抑制劑，二異丙基氟代磷酸酯(鹽)(DEP)和抑肽酶。脂質(zhì)體包括在水中的油包水乳液以及傳統(tǒng)的脂質(zhì)體(Strejan等，(1984)《神經(jīng)免疫學(xué)雜志》727)。
有活性的化合物也可以胃腸道外或腹膜內(nèi)給藥。膠體溶液也可制備于甘油、液體聚乙二醇、其混合物和油中。在通常的貯存和使用條件下，這些制備物可以含有防腐劑以防止微生物的生長。
適用于注射用的藥用組合物包括無菌水溶液(水溶的)或膠體溶液、和無菌粉末，這些粉末用于當(dāng)場(chǎng)制備無菌注射溶液或膠體溶液。在所有情況下，組合物必須無菌，并且必須具有一定程度的流動(dòng)性到以使之易于注射。在生產(chǎn)和貯存的條件它必須是穩(wěn)定的，必須能夠在保存時(shí)防止微生物象細(xì)菌和真菌的污染作用。載體可以是溶劑或膠體介質(zhì)，含有例如水，乙醇、多聚醇(如甘油、丙二醇、液體聚乙二醇和此類物質(zhì))及其適宜的混合物。通過使用包膜如卵磷脂，或在膠體溶液的情況下保持所需顆粒大小，或使用表面活性劑可以保持合適的流動(dòng)性。通過各種抗細(xì)菌和抗真菌藥劑，例如對(duì)羥基苯甲酸酯、氯代丁醇、苯酚、抗壞血酸(asorbic acid)，乙基汞硫代水楊酸鈉等等可以防止微生物的作用。在許多情況下，更可取的是在組合物中包括等滲劑，例如糖，多元醇如甘露醇、山梨醇，和氯化鈉。通過在組合物中加入延緩吸收的藥劑，如一硬脂酸鋁和白明膠，能使注射組合物的吸收延長。
無菌注射溶液也能如此制備，把在適宜溶劑中的所需量的活性化合物(如gp39拮抗劑)與上面所例舉的一個(gè)或多種成份混合，然后按照需要過濾除菌?？偟膩碚f，膠體溶液的制備是通過把活性化合物混入一無菌載體，此載體含有基本的膠體介質(zhì)和上面所枚舉的所需的其它成份。如果是制備無菌注射溶液的無菌粉末，優(yōu)選的制備方法是真空干燥和冷凍干燥，這些方法可從以前無菌過濾的溶液中產(chǎn)生一種粉末，包含活性成份(如拮抗劑)及任何所需的其它的添加成份。
當(dāng)活性化合物按上面描述被適宜保護(hù)時(shí)，蛋白也可以和惰性稀釋劑或可吸收載體一起口服給藥。這里所用的“藥用載體”包括所有溶劑，膠體溶液介質(zhì)，外包膜，抗細(xì)菌和真菌藥劑，等滲劑和吸收延緩劑等等。對(duì)于藥學(xué)活性物質(zhì)的這些介質(zhì)和藥劑的使用在本領(lǐng)域內(nèi)是眾所周知的。除非一些常規(guī)的介質(zhì)和藥劑與活性化合物不相容，都要考慮在治療組合物中使用這些物質(zhì)。輔助活性化合物也可以摻入組合物中。
為了易于給藥和劑量的統(tǒng)一，以劑量單位形式形成胃腸外組合物是尤其有利的。這里所用的劑量單位形式是指物理的獨(dú)立的單位，適于做為需要治療的哺乳動(dòng)物的單元?jiǎng)┝?，每一單位含有已確定的活性化合物數(shù)量，此數(shù)量已被計(jì)算能夠和所需的藥用載體一起產(chǎn)生想要的治療效應(yīng)。本發(fā)明中劑量單位形式的規(guī)格決定于或直接依賴于(a)活性化合物獨(dú)特的特征和所要達(dá)到的特定治療效果，(b)化合物領(lǐng)域中內(nèi)在的限制，如在個(gè)體敏感性治療中用到的這種活性化合物的限制。
繼這里所說明的耐受制度之后，或與之同步，用傳統(tǒng)技術(shù)，將供體的組織或器官移植入接受體中。IV 發(fā)明方法的使用發(fā)明的方法可以應(yīng)用到組織和器官移植的廣大范圍內(nèi)。此方法可用于在組織或器官移植的接受體中誘導(dǎo)T細(xì)胞耐受，如胰島、肝、肺、腎、心臟、皮膚、肌肉、神經(jīng)組織、胃和腸。因此發(fā)明的方法能用于治療必須移植組織或器官的疾病或情況(如肝移植治療血膽固醇過多，移植骨骼肌細(xì)胞治療骨骼肌營養(yǎng)障礙，移植神經(jīng)組織治療亨廷頓疾病或帕金森氏病等等)。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，移植的組織包括胰島，相對(duì)應(yīng)地，本發(fā)明中包括一種方法，可通過胰島移植來治療糖尿病。這種方法包括給予需要治療的受試驗(yàn)體1)表達(dá)供體抗原的同種或異種的細(xì)胞，2)對(duì)一種分子的拮抗劑，此分子表達(dá)于接受體T細(xì)胞上并介導(dǎo)接觸依賴性輔助效應(yīng)物功能，如gp39的拮抗劑(比如抗-gp39抗體)3)供體胰島細(xì)胞，優(yōu)選地，在給予胰島之前，給予接受體以同種或異種的細(xì)胞和拮抗劑。
發(fā)明通過下列例子被進(jìn)一步說明，這些例子不應(yīng)該理解為一種限制。在整個(gè)應(yīng)用中所引用的所有文獻(xiàn)、專利和公開的專利申請(qǐng)的內(nèi)容都在此引入做為參考。實(shí)施例1用同種細(xì)胞和抗-gp39處理接受體以誘導(dǎo)其對(duì)胰島同種移植物的耐受當(dāng)前同種移植物的研究依靠非特異去除免疫效應(yīng)物功能而產(chǎn)生全身免疫抑制。然而免疫抑制藥物能引起顯著的副作用。此外，郎格爾漢斯細(xì)胞的胰島的同種移植物用于治療糖尿病對(duì)此方法已證實(shí)是無效的(見例Robertson，R.P(1992)《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》327，1861)應(yīng)用T細(xì)胞的直接抗體來治療，在嚙齒動(dòng)物中也可以成功地同種移植胰島，但此方法也同樣會(huì)導(dǎo)致全身免疫抑制(Carpenter，C.B(1990)《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》322，1224，Roark，J.H等(1992)《移植》54，1098；Kahan，B.D.(1992)《當(dāng)前免疫學(xué)見解》(Curr.OpionImmunol)4，553)在本實(shí)施例中，通過操縱呈遞同種抗原給接受體T細(xì)胞以防止它們被激活，而在移植接受體中誘導(dǎo)對(duì)胰島同種移植物的耐受。胰島同種移植物在化學(xué)性糖尿病(57BL/6(H-2b)小鼠中的存活用下面的方法來檢測(cè)。糖尿病的誘導(dǎo)通過靜脈注射鏈尿霉素(Strepto gotocin)(140mg/kg)，使得雄性C57BL/6J(H-2b)小鼠產(chǎn)生糖尿病，一周時(shí)間內(nèi)有3次隨機(jī)機(jī)會(huì)中顯示血漿葡萄糖濃度≥400mg/dl。證明其為永久性糖尿病。同種脾細(xì)胞的分級(jí)分離用于預(yù)處理移植接受體的供體同種細(xì)胞是從(C57×BALB/c)(H-2B/d)雜交F1代動(dòng)物中獲取的，以防止移植物抗宿主的疾病。為了分離小淋巴細(xì)胞，來源于8周齡(C57×BALB/C)雜交F1代雌鼠中的脾細(xì)胞懸浮液去除紅細(xì)胞，然后如下的方法用淘洗法進(jìn)行大小分級(jí)分離H.P等(1985)《實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》761，223，和Gosselin E.J等(1988)《免疫學(xué)雜志》140，1408。簡言之，小淋巴細(xì)胞通過對(duì)流離心淘洗得到分離，例如用J-6B型離心(Beckman Instruments，Palo Alto CA)。存在于帶有1.5％的胎牛血清的8毫升培養(yǎng)基或平衡鹽溶液中的大約1-5×108細(xì)胞用脫氧核糖核酸酶處理，放入淘洗小室，開始對(duì)流速度為13.5ml/min，在4℃下以3,200rpm速度旋轉(zhuǎn)。盡管精確的流速依賴于懸浮細(xì)胞的介質(zhì)，一個(gè)幾乎不帶有任何大細(xì)胞的小細(xì)胞級(jí)分一般在14-19ml/min得到洗脫，其中說明的本實(shí)驗(yàn)中，小細(xì)胞級(jí)分在19ml/min(3200rpm)處收集，當(dāng)用對(duì)兔IgG和H2d或?qū)2b(D10.G4)有同種反應(yīng)的T細(xì)胞系來檢測(cè)時(shí)，此級(jí)分已被完全去除了輻射抵抗性(3000rads)輔助細(xì)胞功能，在尾靜脈注射到同種移植物接受體之前，小細(xì)胞和未分級(jí)細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中洗滌兩次。大約使用了40-100×106(C57×BALB/c)F1(H-2b/d)淘洗過的小的脾細(xì)胞。移植接受體的預(yù)處理移植接受體用未分級(jí)的(C57×BALB/c)F1(H-2b/d)同種脾細(xì)胞，或用淘洗的去除了APC活性(按上述說明分離)“19級(jí)分”小直徑脾細(xì)胞，抗-gp39單克隆抗體(MR1見例2，實(shí)驗(yàn)3)或同種細(xì)胞和抗-gp39抗體的組合來預(yù)處理。19級(jí)分細(xì)胞用兩個(gè)不同劑量范圍來實(shí)驗(yàn)，低劑量40-44×106細(xì)胞或高劑量77-88×106細(xì)胞。對(duì)照動(dòng)物既不接受同種細(xì)胞也不接受抗體處理。同種細(xì)胞在胰島同種移植物移植前5-8天通過尾靜脈注射給予移植接受體，MR1抗體處理是在胰島移植前7天，以每周2次，每次劑量為250μg/每只小鼠，連續(xù)處理2-7周或直至移植失敗?？贵w的第一次注射一般和同種脾細(xì)胞的第一次注射在同一天。胰島同種移植物移植通過已作改良的膠原酶消化方法(Gottlieb，PA等(1990)《糖尿病》39，643)使同種BALB/c(H-2d)胰島得到分離，分離后，胰島以30個(gè)小島/每克體重的劑量立即移植進(jìn)受體C57B1/6J(H-2b)小鼠的直腸下的被膜內(nèi)，移植物的成活定義為血漿葡萄糖的濃度維持在≤200mg/dl。結(jié)果在第一組實(shí)驗(yàn)中，胰島同種移植物接受體或者單獨(dú)用同種脾細(xì)胞或者用抗gp39抗體預(yù)處理。就象圖1所顯示的，在缺少脾細(xì)胞預(yù)處理的情況下，所有的胰島同種移植物在移植的13天內(nèi)遭到排斥(9±2天，范圍5-13天；N＝23)。同樣，只用含有正常APC活性的未分級(jí)的脾細(xì)胞(6±3天，范圍4-12天，N＝7)或低劑量的(40-44×106細(xì)胞)去除了APC的級(jí)分19脾細(xì)胞(7±3天，范圍3-14天，N＝16)處理動(dòng)物，也很少能觀察到胰島的生活。相反，注射了高劑量的去除了APC的級(jí)分19小的脾細(xì)胞(75-88×106細(xì)胞)延長了同種移植物的成活(19±10d，范圍7-40天；N＝16)，對(duì)移植物成活時(shí)間的延長的影響有著統(tǒng)計(jì)的顯著性(當(dāng)與無任何東西、全部脾細(xì)胞，或低劑量的級(jí)分19脾細(xì)胞處理的小組相比較，F(xiàn)3.58＝17.3p＜0.001)，但此影響并不持久。在用去除APC的級(jí)分19小細(xì)胞處理的糖尿病接受體中，同種胰島延長但有限的成活表明，單獨(dú)這些細(xì)胞不能維持同種移植物的成活。另一組移植接受體用77-88×106個(gè)級(jí)分20細(xì)胞處理。這個(gè)級(jí)分也含有絕大多數(shù)的小淋巴細(xì)胞，但不同于級(jí)分19細(xì)胞群體是其含有可檢測(cè)的APC功能，這些細(xì)胞的接受體(N＝6)全部迅速排斥它們的移植物(平均＝8.5天，范圍6-12)。另一組移植物接受體只用抗-gp39單克隆抗體MR1單獨(dú)處理。圖1表明，在只用抗gp39mAb處理的7/11小鼠中，在15天內(nèi)同種胰島移植物死亡，剩余的4只小鼠在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)48天有移植物功能。此結(jié)果表明，單獨(dú)把抗-gp39抗體MR1給予接受體可以延長胰島同種移植物的成活(平均20-19天；范圍9-自由度N＝5)。延長的程度在統(tǒng)計(jì)學(xué)上類似于單獨(dú)用高劑量級(jí)分19的脾細(xì)胞所得到的結(jié)果，顯著長于其余三組所得到的結(jié)果(p＜0.05)。
上面描述的一系列實(shí)驗(yàn)表明，高劑量級(jí)分19的去除APC的脾細(xì)胞或抗gp39mAb單獨(dú)處理與無任何處理相比能加強(qiáng)胰島同種移植物的成活。但是兩者中任一種單獨(dú)處理都不能在接受體中有效誘導(dǎo)對(duì)胰島同種移植物的長期耐受。在下面一系列實(shí)驗(yàn)中，同種脾細(xì)胞和抗gp39抗體聯(lián)合處理接受體。同種脾細(xì)胞和抗gp39抗體的聯(lián)合給藥被發(fā)現(xiàn)比任一單獨(dú)給藥更有效。圖2中所顯示的結(jié)果，其中，每一曲線代表從一個(gè)小鼠個(gè)體中獲取的資料。空心的符號(hào)代表胰島同種移植物自發(fā)失敗的接受體，實(shí)心的符號(hào)代表胰島在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)仍有功能的個(gè)體。圖2(B組)，表示一次注射級(jí)分19的去除APC脾細(xì)胞和用gp39mAb處理7周后在所有動(dòng)物中取得移植物無限期存活(N＝6)通過降低抗gp39處理延續(xù)的時(shí)間來修改此方案，會(huì)減弱，但不消除移植物成活的良好效果。當(dāng)抗-gp39mAb只連續(xù)兩周給藥，同時(shí)給予19組分脾細(xì)胞，在6/8受體中取得了無限期移植物成活(圖2，A組)在用抗gp39處理2或7周同時(shí)一次注射未分部同種脾細(xì)胞的接受體中，也可以觀察到移植物的無限期成活。
為了確定胰島移植物的功能并確定缺乏那些由沒有被鏈尿霉素破壞的天然的殘余胰島分泌的胰島素，含有腎下移植物的腎被去除。在所有情況下，單側(cè)腎切除術(shù)在3天內(nèi)產(chǎn)生了高血糖(＞300mg/dl)的再次發(fā)生。
無論移植失敗或在實(shí)驗(yàn)最后，在所有動(dòng)物中用組織學(xué)方法研究胰島同種移植物和天然的胰腺。在用分級(jí)的同種小淋巴細(xì)胞和連續(xù)的(7周)MR1mAb處理的受體的腎中，胰島同種移植物組織學(xué)切片表明在腎被膜下有大量可見的完整胰島，它缺少單核細(xì)胞的浸潤，含有完整顆粒狀胰島素和胰高血糖素陽性細(xì)胞。相反，在只單獨(dú)用抗gp39mAb處理的受體的腎中，胰島同種移植物組織學(xué)切片表明的特征性密集的單核細(xì)胞炎癥和伴隨的胰島細(xì)胞的破壞。在所有宿主的胰腺中，胰島的形態(tài)與鏈尿霉素糖尿病是一致的。實(shí)施例2抗gp39抗體的產(chǎn)生和特征實(shí)驗(yàn)1抗人gp39的抗體為了在人受試驗(yàn)體中誘導(dǎo)抗原特異性的T細(xì)胞耐受，優(yōu)選地給予抗人gp39抗體。下面的方法用于產(chǎn)生鼠抗人gp39單克隆抗體。Balb/c小鼠用存在于弗氏完全佐劑(CFA)中的可溶性gp39融合蛋白gp39-CD8來免疫。6周以后用存在于弗氏不完全弗氏佐劑(IFA)中的可溶gp39-CD8使小鼠接著被激發(fā)。第二次免疫4周以后，可溶性gp39-CD8以可溶性形式被給予。2周以后，小鼠被激活的人外周血淋巴細(xì)胞促進(jìn)，再過2周后，被可溶性gp39-CD8最后一次促進(jìn)，依照每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)方法，在最后一次免疫的第4天，脾細(xì)胞與NS-1融合。
基于多次篩選過程，挑選出產(chǎn)生抗人gp39抗體的克隆。通過平板結(jié)合實(shí)驗(yàn)用gp39-CD8來進(jìn)行克隆的初次篩選，篩選出的陽性克隆接著用對(duì)照CD8融合蛋白，CD72-CD8來進(jìn)行篩選，在CD8-CD72平板結(jié)合實(shí)驗(yàn)中顯示陽性的克隆被除去，通過流式細(xì)胞計(jì)數(shù)分析，剩余的克隆接下來在靜止期的和6小時(shí)激活的人外周血淋巴細(xì)胞(PBL)上篩選。可染色激活的而不是靜止期的PBL的雜交被認(rèn)為是陽性。最后，檢測(cè)剩下的克隆的封閉CD40Ig結(jié)合同平板結(jié)合的gp39的能力。
在平板結(jié)合實(shí)驗(yàn)中，最初被篩選出來的大約300個(gè)克隆是抗gp39CD8和CD72-CD8的，在這些克隆中，30個(gè)克隆被發(fā)現(xiàn)是檢測(cè)平皿連結(jié)的gp39而不是CD8接下來這些克隆被篩選檢測(cè)激活的外周血淋巴細(xì)胞上的gp39，大約15個(gè)克隆能在活化的外周血淋巴細(xì)胞上檢測(cè)到一個(gè)分子，在靜止的外周血淋巴細(xì)胞上則不能。通過決定克隆封閉CD40Ig檢測(cè)平板結(jié)合的gp39的能力，特異性進(jìn)一步得到證實(shí)，其中實(shí)驗(yàn)中，10個(gè)克隆中的3個(gè)被檢測(cè)到能封閉CD40Ig的結(jié)合。這三個(gè)克隆是3E4，2H5和2H8。這些克隆優(yōu)選用于此處介紹的方法中。在激活的而非靜止的外周血淋巴細(xì)胞上檢測(cè)陽性的克隆也被篩選，篩選是通過其與活化的大鼠T細(xì)胞克隆，POMC8的反應(yīng)性實(shí)現(xiàn)的?？寺?H8能與此大鼠T細(xì)胞系交叉反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)2人gp39的抗體一個(gè)與實(shí)驗(yàn)1類似的免疫方法用于生產(chǎn)另外的人gp39的抗體。Balb/c小鼠用存在于CFA中的可溶的gp39-CD8免疫，4周后用6小時(shí)活化的人外周血淋巴細(xì)胞激發(fā)，每一標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)方法中，在脾細(xì)胞和NS-1融合前4天，小鼠用可溶的gp39-CD8促進(jìn)。通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)激活6小時(shí)的人外周血淋巴細(xì)胞的染色，來篩選雜交瘤克隆。染色激活的而非靜止的人外周血淋巴細(xì)胞的克隆被挑選，6個(gè)克隆，4D9-8，4D9-9，24-31，89-76，和89-79被挑選出來做進(jìn)一步分析。
選出的克隆的特異性被下列幾個(gè)實(shí)驗(yàn)證實(shí)。第一，流式血細(xì)胞計(jì)數(shù)分析表明，所有6個(gè)mAb都染激活的，而非靜止期的人外周血T細(xì)胞。(典型例子見圖3B和3C，描述了分別用4D9-8和4D9-9來染色激活的T細(xì)胞)，6種抗體中任一種所識(shí)別的分子的表達(dá)在激活4小時(shí)內(nèi)是可檢測(cè)到的，激活后6-8小時(shí)之間的表達(dá)最大，激活后24小時(shí)則不能檢測(cè)到。所有mAb都識(shí)別表達(dá)在激活的CD3+外周血淋巴細(xì)胞上的一種分子，主要是CD4+表型，但一部分CD8+T細(xì)胞也表達(dá)此分子。6種mAbs所識(shí)別的分子的表達(dá)，就象gp39的表達(dá)一樣，被培養(yǎng)基中存在的環(huán)孢菌素A所抑制(典型的例子見圖4A和4B，描述了分別用4D9-8和4D9-9來染環(huán)孢菌素處理過的T細(xì)胞)，這些mAbs所識(shí)別的分子表達(dá)的動(dòng)力學(xué)和分布與gp39的相同，gp39是用人CD40Ig融合蛋白來檢測(cè)。此外，6種mAbs都能封閉由CD40Ig來進(jìn)行的gp39的染色(典型的例子見圖5A和5B，描述了分別在4D9-8和4D9-9存在下抑制了由CD40Ig來進(jìn)行的gp39染色)。在ELISA實(shí)驗(yàn)中，所有6種mAb都識(shí)別gp39-CD8，其為gp39分子的一種可溶的融合形式。而且，所有6種mAbs都能從35S-甲硫氨酸標(biāo)記的激活的人外周血淋巴細(xì)胞中免疫沉淀一個(gè)大約36Kd的分子。此免疫沉淀的分子和由人CD40Ig融合蛋白沉淀的分子是相同的。
6種選出的mAbs(4D9-8，4D9-9，24-32，24-43，89-76和89-79)的功能活性照下列方法被檢測(cè)。首先，檢測(cè)mAbs抑制純化的人B細(xì)胞增殖的能力，此純化的B細(xì)胞培養(yǎng)于IL-4和可溶的gp39存在的條件下。在加有或不加劑量為0-125μg/ml的純化的單克隆抗體或CD40Ig條件下，用gp39和IL-4來培養(yǎng)純化的人B細(xì)胞，在培養(yǎng)中通過胸腺嘧啶的摻入，培養(yǎng)3天以后來確定B細(xì)胞的增殖。結(jié)果(顯示于圖6)表明6種mAbs都能抑制由gp39和IL-4所誘導(dǎo)的B細(xì)胞增殖，mAbs89-76和24-31在抑制誘導(dǎo)的B細(xì)胞增殖中最有效。
下一步，通過測(cè)量由抗CD3+激活的T細(xì)胞和IL-2所誘導(dǎo)的免疫球蛋白的產(chǎn)量，檢測(cè)mAbs抑制B細(xì)胞分化的能力。用FACS來陽性選擇，以此制備純化的IgD+人B細(xì)胞，此細(xì)胞在加有或不加劑量在0-10μg/ml純化的抗gp39單克隆抗體的條件下，用抗CD3激活的人T細(xì)胞(絲裂霉素C處理)和IL-2培養(yǎng)6天。第6天IgM、IgG和IgA的產(chǎn)量用ELISA檢測(cè)，結(jié)果(顯示于表1)表明，通過檢測(cè)IgM，IgG和IgA的產(chǎn)量，所有6種抗體都能抑制T細(xì)胞依賴的B細(xì)胞分化。
表1免疫球蛋白的產(chǎn)量小鼠抗體 μg/mlIgM IgG IgA- 17,500671044714D9-8 0.1 4813 213028191.0 4394 2558151910.01081 389 3964D9-9 0.1 3594 919 17311.0 2659 1233160610.0374 448 26624-31 0.1 3863 981 3441.0 1287 314 16510.01120 596 2324-43 0.1 6227 41324321.0 3193 213019210.07021 1232108189-76 0.1 3783 10693441.0 2180 352 17110.0818 551 1989-79 0.1 9763 192430211.0 2314 460 15610.0183 135 434為了檢查抗-gp39 mAbs對(duì)T細(xì)胞反應(yīng)的影響，mAbs被引入標(biāo)準(zhǔn)的混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)。300,000個(gè)人外周血淋巴細(xì)胞(應(yīng)答者＝R)在加有或不加抗-gp39 mAbs(10μg/ml)的條件下同100,000個(gè)照射過的同種外周血淋巴細(xì)胞(刺激者＝S)一齊培養(yǎng)。培養(yǎng)物在4，5，6天時(shí)間用3H-胸腺嘧啶脈沖摻入，繼續(xù)培養(yǎng)18小時(shí)后收獲。通過測(cè)量MLR，所有6種抗人gp39都抑制同種特異的反應(yīng)(典型例子見圖7，描述了R和S在加有24-31或89-76的條件下孵育時(shí)，同種特異性反應(yīng)的抑制；CTLA4-免疫球蛋白融合蛋白和抗CD28 mAb做為陽性對(duì)照)。
為了確定6種mAbs在人gp39分子上是否識(shí)別獨(dú)特的表位，進(jìn)行了交叉封閉實(shí)驗(yàn)，激活的人外周血淋巴細(xì)胞首先用6種mAbs中的任一種封閉(25μg/ml未結(jié)合的抗體)洗滌細(xì)胞，然后用10μg/ml生物素結(jié)合的抗體染色，接著同植物赤蘚素(phytoerythrin)結(jié)合的親合素(PE-Av)反應(yīng)。細(xì)胞的PE-Av染色用FACS來分析。結(jié)果顯示于表2中。表2封閉 抗體染色抗體4D9-84D9-924-31 24-43 89-76 89-79無 +++ +++ ++++++++++++ ++++4D9-8ND - ++++++++++++++4D9-9+++ ND +++ ++++++++++24-31++ ND +++ ++ ++24-43++ +++ ND ++ +89-76++ +++ +++ ND +++89-79+++ +++ +++ +++ND染色的強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分率用+號(hào)代表(++++＝MI＞200；+++＝MI＞125；++＝MI＞50；+＝MI＞25；-＝無高于背景的染色)，ND＝不確定。所有的抗體都封閉了CD40Ig同激活的人外周血淋巴細(xì)胞的結(jié)合。然而，表2中顯示的資料也清楚地表明一些抗體不能封閉別的抗體同激活的人外周血淋巴細(xì)胞的結(jié)合，說明它們識(shí)別位于人gp39分子上的不同表位。
分別產(chǎn)生89-76和24-31抗體的89-76和24-31雜交瘤，在Budapest條約的規(guī)定下于1994年9月2號(hào)貯存于美國典型培養(yǎng)物保藏中心Parklawn Drive，Rockville，Md.89-76雜交瘤被指定為ATCC增添新成員，序號(hào)HB11713，24-31雜交瘤被指定為ATCC增添的新成員，序號(hào)HB712。實(shí)驗(yàn)3小鼠gp39抗體在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，gp39的拮抗劑是抗小鼠gp39的單克隆抗體， MR1。下列方法用于產(chǎn)生MR1單克隆抗體，也可以用于產(chǎn)生其它的抗gp39抗體。
倉鼠用5-106激活的Th1細(xì)胞(d1.6)腹腔內(nèi)免疫，以周為間隔延續(xù)6周。當(dāng)抗小鼠Th1的血清效價(jià)大于1∶10,000時(shí)，用聚乙二醇對(duì)免疫的倉鼠的脾細(xì)胞和NS-1進(jìn)行細(xì)胞融合。通過對(duì)靜止期的和激活的Th1進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)，篩選從含有生長的雜交瘤的孔中取出的上清。一個(gè)特定的雜交瘤，它能夠產(chǎn)生能選擇性識(shí)別激活的Th的Mab，此雜交瘤被進(jìn)一步檢測(cè)并被亞克隆以產(chǎn)生MR1。MR1在腹水中產(chǎn)生，并通過離子交換HPLC純化。雜交瘤MR1貯存于美國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)HB11048。類似方案那些在本領(lǐng)域中有經(jīng)驗(yàn)的人，僅僅用常規(guī)的試驗(yàn)，就能發(fā)現(xiàn)或確定許多類似方案，它們類似于此處提及的本發(fā)明中的特定的實(shí)施方案。這些類似方案將被包括在下面的權(quán)利要求中。在整個(gè)應(yīng)用中所引用的所有文獻(xiàn)和公開的專利申請(qǐng)的內(nèi)容在此被引入作為參考。
權(quán)利要求
1.一種在組織或器官接受體中誘導(dǎo)對(duì)供體組織或器官的T細(xì)胞耐受的方法，它包括給予接受體a)表達(dá)至少一種供體抗原的同種或異種細(xì)胞，細(xì)胞表面有一個(gè)配體，該配體能與接受體T細(xì)胞表面的介導(dǎo)接觸依賴性輔助效應(yīng)物功能的受體相互作用；b)T細(xì)胞表面受體的拮抗劑，它抑制配體和受體分子的相互作用。
2.權(quán)利要求1的方法，其中接受體T細(xì)胞表面介導(dǎo)接觸依賴性輔助效應(yīng)物功能的受體分子是gp39。
3.權(quán)利要求2的方法，其中拮抗劑是抗-gp39的抗體。
4.權(quán)利要求3的方法，其中抗-gp39的抗體是單克隆抗體。
5.權(quán)利要求3的方法，其中抗-gp39抗體是抗人gp39的抗體。
6.權(quán)利要求4的方法，其中單克隆抗體是MR1。
7.權(quán)利要求4的方法，其中單克隆抗體是嵌合的單克隆抗體。
8.權(quán)利要求4的方法，其中單克隆抗體是人源化的單克隆抗體。
9.權(quán)利要求1的方法，其中同種或異種細(xì)胞是淋巴樣細(xì)胞。
10.權(quán)利要求9的方法，其中淋巴樣細(xì)胞是B細(xì)胞。
11.權(quán)利要求10的方法，其中B細(xì)胞是靜止期的B細(xì)胞。
12.權(quán)利要求1的方法，其中同種或異種細(xì)胞以及拮抗劑在組織或器官移植之前給予接受體。
13.權(quán)利要求1的方法，其中組織或器官包括胰島。
14.權(quán)利要求1的方法，其中組織或器官選自肝、腎、心臟、肺、皮膚、肌肉、神經(jīng)組織和胃、腸。
15.一種在組織或器官的接受體中誘導(dǎo)對(duì)供體組織或器官的T細(xì)胞耐受的方法，其中包括給予接受體a)表達(dá)至少一種供體抗原的同種或異種細(xì)胞；和b)gp39的拮抗劑。
16.權(quán)利要求15的方法，其中g(shù)p39的拮抗劑是抗-gp39抗體。
17.權(quán)利要求16的方法，其中抗-gp39抗體是單克隆抗體。
18.權(quán)利要求16的方法，其中抗-gp39抗體是抗人gp39抗體。
19.權(quán)利要求17的方法，其中單克隆抗體是MR1。
20.權(quán)利要求17的方法，其中單克隆抗體是嵌合的單克隆抗體。
21.權(quán)利要求17的方法，其中單克隆抗體是人源化的單克隆抗體。
22.權(quán)利要求15的方法，其中g(shù)p39的拮抗劑是gp39配體的可溶形式。
23.權(quán)利要求22的方法，其中g(shù)p39配體的可溶形式是CD40融合蛋白。
24.權(quán)利要求15的方法，其中同種或異種細(xì)胞是淋巴樣細(xì)胞。
25.權(quán)利要求24的方法，其中淋巴樣細(xì)胞是B細(xì)胞。
26.權(quán)利要求25的方法，其中B細(xì)胞是靜止期B細(xì)胞。
27.權(quán)利要求15的方法，其中同種或異種細(xì)胞以及拮抗劑在組織或器官的移植之前給予接受體。
28.權(quán)利要求15的方法，其中組織或器官包括胰島。
29.權(quán)利要求15的方法，其中組織或器官選自肝、腎、心臟、肺、皮膚、肌肉、神經(jīng)組織、胃和腸。
30.一種治療糖尿病的方法，它包括給予需要治療的受試驗(yàn)者a)表達(dá)至少一種供體抗原的同種或異種細(xì)胞；b)gp39的拮抗劑；c)供體胰島細(xì)胞。
31.權(quán)利要求30的方法，其中抗-gp39抗體是單克隆抗體。
32.權(quán)利要求30的方法，其中抗-gp39抗體是抗人gp39抗體。
33.權(quán)利要求31的方法，其中單克隆抗體是MR1。
34.權(quán)利要求31的方法，其中單克隆抗體是嵌合的單克隆抗體。
35.權(quán)利要求31的方法，其中單克隆抗體是人源化的單克隆抗體。
36.權(quán)利要求30的方法，其中g(shù)p39的拮抗劑是gp39配體的可溶形式。
37.權(quán)利要求36的方法，其中g(shù)p39配體的可溶形式是CD40融合蛋白。
38.權(quán)利要求30的方法，其中同種或異種細(xì)胞是淋巴樣細(xì)胞。
39.權(quán)利要求38的方法，其中淋巴樣細(xì)胞是B細(xì)胞。
40.權(quán)利要求39的方法，其中B細(xì)胞是靜止期的B細(xì)胞。
41.權(quán)利要求30的方法，其中同種或異種的細(xì)胞以及拮抗劑在胰島細(xì)胞移植之前給予接受體。
42.一種在組織或器官的接受體中誘導(dǎo)對(duì)供體組織或器官的T細(xì)胞耐受的方法，其中包括給予接受體a)供體同種細(xì)胞；b)抗gp39抗體，其中供體同種細(xì)胞以及抗-gp39抗體在組織或器官移植之前給予接受體。
43.權(quán)利要求42的方法，其中抗-gp39抗體是單克隆抗體。
44.權(quán)利要求42的方法，其中抗-gp39抗體是抗人gp39的抗體。
45.權(quán)利要求43的方法，其中單克隆抗體是MR1。
46.權(quán)利要求44的方法，其中單克隆抗體是嵌合的單克隆抗體。
47.權(quán)利要求44的方法，其中單克隆抗體是人源化的單克隆抗體。
48.權(quán)利要求42的方法，其中供體同種細(xì)胞是淋巴樣細(xì)胞。
49.權(quán)利要求48的方法，其中淋巴樣細(xì)胞是B細(xì)胞。
50.權(quán)利要求49的方法，其中B細(xì)胞是靜止期的B細(xì)胞。
全文摘要
一種在移植接受體中誘導(dǎo)對(duì)組織或器官移植物的T細(xì)胞耐受的方法被揭示。該法包括給予受實(shí)驗(yàn)者1)同種的或異種的細(xì)胞，這些細(xì)胞可表達(dá)供體抗原，并在其表面有一種配體，此配體可同接受體T細(xì)胞表面上的介導(dǎo)接觸依賴性輔助效應(yīng)物功能的受體相互作用；和2)一種能抑制配體同受體相互作用的受體的拮抗劑。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，同種或異種細(xì)胞是B細(xì)胞，優(yōu)選靜止期B細(xì)胞，T細(xì)胞表面的介導(dǎo)接觸依賴性輔助效應(yīng)物功能的分子是gp39。優(yōu)選的gp39的拮抗劑是抗-gp39抗體。同種細(xì)胞或異種細(xì)胞和gp39拮抗劑典型的是在組織或器官移植前施用于移植接受體。本發(fā)明中的方法可用來誘導(dǎo)對(duì)諸如下列移植物的T細(xì)胞耐受肝、腎、心臟、肺、皮膚、肌肉、神經(jīng)組織、胃和腸。一種用來治療糖尿病的方法也被揭示，該法包括給予受實(shí)驗(yàn)者以能表達(dá)供體抗原的同種或異種細(xì)胞，gp39的拮抗劑及胰島。
文檔編號(hào)A61P37/00GK1150760SQ95193562
公開日1997年5月28日 申請(qǐng)日期1995年4月25日 優(yōu)先權(quán)日1994年4月25日
發(fā)明者R·J·諾爾, F·H·杜里, D·C·帕克, M·C·阿佩爾, N·E·菲利普斯, J·P·莫迪斯, D·L·格倫尼埃, A·A·羅辛尼 申請(qǐng)人:達(dá)特茅斯學(xué)院理事, 馬薩諸塞州大學(xué)醫(yī)學(xué)中心