專利名稱：抗擊具無環(huán)鳥苷抗性的單純性皰疹病毒感染的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種給哺乳動物治療對無環(huán)鳥苷具抗性的皰疹感染的方法。該方法包括施用一種肽衍生物或?qū)⒃撾难苌锱c一種抗病毒核苷類似物結(jié)合給藥。
無環(huán)鳥苷是在治療皰疹感染中使用最廣泛的藥物。但是近年來，有關(guān)對無環(huán)鳥苷具抗性的皰疹感染的報道次數(shù)一直在上升；參見，例如P.A.Chatis et al.，N.Engl.J.Med.，320，297(1989)以及S.Safrin，Res.Virol.，143，125(1992)。最近，在患有嚴重的人免疫缺陷病毒(HIV)感染的患者中越來越多地觀察到這種具抗性感染的類型。后一種患者免疫受損后，結(jié)果導(dǎo)致他們非常易于受到單純性皰疹病毒(HSV)1型并且尤其是2型的感染。
對具無環(huán)鳥苷抗性的HSV分離株特性的生化特征進行描述已受到極大關(guān)注；參見由C.S.Crumpacker，J.Am.Acad.Dermatol.，18190(1988)發(fā)表的有關(guān)抗無環(huán)鳥苷HSV的綜述。簡而言之，具抗性的病毒株的一種或二種由病毒編碼的酶，胸苷激酶(TK)或DNA聚合酶(POL)發(fā)生了功能性變化。
當將已感染了野生型HSV的細胞與無環(huán)鳥苷接觸時，病毒TK與細胞酶相比能在更大程度上催化無環(huán)鳥苷的一磷酸化作用。隨后由細胞酶將產(chǎn)生的該一磷酸化物轉(zhuǎn)化成三磷酸無環(huán)鳥苷。這后者三磷酸化物與病毒DNA聚合酶之間發(fā)生的相互作用比它與細胞DNA聚合酶之間發(fā)生的相互作用更易于進行。因此，該三磷酸化物由于成了該病毒酶的一種替換底物，以及由于具有鏈終止子的作用而能夠降低病毒DNA的合成。
已有人描述了涉及病毒胸苷激酶的兩種抗性機理(1)選擇胸苷激酶缺陷型突變株，該突變株在感染后誘導(dǎo)的酶活性非常低，以及(b)選擇具有其底物特異性被改變的胸苷激酶的突變株，該激酶能將胸苷磷酸化而不能將無環(huán)鳥苷磷酸化。
第三種抗性機理涉及DNA聚合酶，該抗性機理是選擇其編碼的聚合酶發(fā)生了變化的突變體，即該變異的酶對三磷酸無環(huán)鳥苷的失活作用具抗性。
基于上述抗性機理，可以將對無環(huán)鳥苷具抗性的HSV分離株劃分為胸苷缺陷型(TKD)毒株，胸苷變異型(TKA)毒株或DNA聚合酶變異型(POLA)毒株。
盡管已有人報道了一些用抗病毒劑膦甲酸成功地治療抗無環(huán)鳥苷HSV感染的病例，但抗無環(huán)鳥苷型感染出現(xiàn)的頻率一直在上升。這種現(xiàn)象在艾滋病患者中是普通存在的問題；參見K.S.Erlish etal.，N.Engl.J.Med.，320，293(1989)以及S.Safrin，J.AcquiredImmun.Defic.Syndr.，5(Suppl.1)，s29(1992)。因此迫切需要一種治理這種現(xiàn)象的方法。
本發(fā)明提供了一種用于治療抗無環(huán)鳥苷皰疹感染的有效的，比較安全的方法。
該方法包括使用由P.L.Beaulieu，R.Deziel，N.Moss以及R.Plante在1993年3月12日遞交的共同在審專利申請PCT/CA/93/0095中描述的肽衍生物，該在審專利申請涉及使用該化合物治療皰疹感染。但是，已知能有效地抵抗皰疹感染的抗病毒劑不一定能有效地抵抗具無環(huán)鳥苷抗性的單純性皰疹病毒；例如參見J.J.O′Bnienand D.M.Campoli-Richards，Drugs 37，233(1989)，pp 252-253。因此發(fā)現(xiàn)本發(fā)明所述肽衍生物能有效地抵抗具無環(huán)鳥苷抗性的單純性皰疹病毒是令人驚奇的并且是有益的。
本發(fā)明提供了一種給哺乳動物治療具無環(huán)鳥苷抗性的單純性皰疹病毒感染的方法。該方法包括給哺乳動物施用抵抗具無環(huán)鳥苷抗性的皰疹病毒有效量的結(jié)構(gòu)式1的肽衍生物或其藥用可接受鹽A-B-D-CH2CH{CH2C(O)R1}C(O)-NHCH{CR2(R3)COOH}C(O)-E1其中A是苯乙?；奖；?，(4-氨基苯基)丙酰基，(4-氟苯基)丙酰基，(4-羥苯基)丙?；?，(4-甲氧基苯基)-丙?；?，2-(苯甲基)-3-苯丙?；?，2-{(4-氟苯基)甲基}-3-(4-氟苯基)丙?；?，2-{(4-甲氧基苯基)甲基}-3-(4-甲氧基苯基)丙酰基或芐基氨基羰基；B是(N-Me)-Val或(N-Me)-Ile；或者A和B結(jié)合在一起形成一種飽和的烷基氨基羰基，它選自于下列基團丁基氨基羰基，1-甲基乙基氨基羰基，1-甲基丙基氨基羰基，1-乙基丙基氨基羰基，1，1-二甲基乙基丁基氨基羰基，1-乙基丁基氨基羰基，1-丙基丁基氨基羰基，1-乙基戊基氨基羰基，1-丁基戊基氨基羰基，1-乙基丁基氨基羰基，2-乙基戊基氨基羰基，1-甲基-1-丙基丁基氨基羰基，1-乙基-1-丙基丁基氨基羰基，1，1-二丙基丁基氨基羰基，(1-丙基環(huán)戊基)氨基羰基以及(1-丙基環(huán)己基)氨基羰基；D是Val，Ile或Tbg；R1是1-甲基乙基，1，1-二甲基乙基，1-甲基丙基，1，1-二甲基丙基，2，2-二甲基丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，1-甲基環(huán)戊基，NR4R5其中R4是氫或低鏈烷基而R5是低鏈烷基，或者R4和R5與結(jié)合它們的氮原子一起形成吡咯烷基(pyrrolidino)，哌啶子基(piperidino)，嗎啉代(morpholino)或者4-甲基-1-哌嗪基(4-methylpiperazino)；R2是氫以及R3是甲基，乙基，1-甲基乙基，1，1-二甲基乙基，丙基，2-丙烯基或芐基，攜帶R2和R3的碳原子具有(R)-構(gòu)型，或者R2和R3各自是甲基或乙基，或者R2和R3與結(jié)合它們的碳原子一起形成環(huán)丁基，環(huán)戊基或環(huán)己基；而E是NHR6其中R6是2-甲基丙基，2，2-二甲基丙基，1(R)，2，2-三甲基丙基，1，1，2，2-四甲基丙基，1(R)-乙基-2，2-二甲基丙基，2-(R，S)-甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3，3-二甲基丁基，1(R)，2，2-三甲基丁基，1(R)，3，3-三甲基丁基，2-乙基丁基，2，2-二乙基丁基，2-乙基-1(R)-甲基丁基，2-乙基-2-甲基丁基，1(R)-乙基-3，3-二甲基丁基，2，2-二甲基戊基，順式或反式-2-甲基環(huán)己基，2，2-二甲基環(huán)己基或環(huán)己基甲基；或E是NHCH(R7)-Z其中攜帶R7的碳原子具有(S)-構(gòu)型，R7是1，1-二甲基乙基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，2，2-二甲基丙基或環(huán)己基甲基和Z是CH2OH，C(O)OH)，C(O)NH2或C(O)OR8其中R8是甲基，乙基或丙基。
本發(fā)明用于治療抗無環(huán)鳥苷單純性皰疹感染的優(yōu)選的方法包括施用結(jié)構(gòu)式1所述肽或其藥物學上可接受的鹽，結(jié)構(gòu)式1中A是苯丙?；?，2-(苯甲基)-3-苯丙?；蚱S氨基羰基；B是(N-Me)Val；D是Tbg；R1是1-甲基乙基，1，1-二甲基乙基，1-甲基丙基，1，1-二甲基丙基，2，2-二甲基丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基或1-甲基環(huán)戊基；R2是氫并且R3是甲基，乙基，1-甲基乙基，丙基或芐基，并且攜帶R2和R3的碳原子具有(R)-構(gòu)型，或者R2和R3各自單獨是甲基或乙基，或者R2和R3與結(jié)合它們的碳原子一起形成環(huán)丁基，環(huán)戊基或環(huán)己基；并且E是NHR6其中R6是2，2-二甲基丙基，1(R)，2，2-三甲基丙基，1(R)-乙基-2，2-二甲基丙基，2，2一二甲基丁基或者1(R)-乙基-3，3-二甲基丁基或者E是NHCH(R7)-Z，其中攜帶R7的碳原子具有(S)-構(gòu)型，R7是2，2-二甲基丙基并且Z是CH2OH，C(O)OH，C(O)NH2或者C(O)OR8其中R8是甲基，乙基或丙基。
用于治療抗無環(huán)鳥苷的單純性皰疹感染的另一種優(yōu)選方法包括施用結(jié)構(gòu)式1所述的肽衍生物或該肽衍生物的藥物學上可接受的鹽，其中結(jié)構(gòu)式1中的A和B結(jié)合在一起形成一種飽和的烷基氨基羰基，它選自于下列一組基團1-乙基丙基氨基羰基，1-乙基丁基氨基羰基，1-丙基丁基氨基羰基，2-乙基戊基氨基羰基，1-甲基-1-丙基丁基氨基羰基，1-乙基-1-丙基丁基氨基羰基，1，1-二丙基丁基氨基羰基以及(1-丙基環(huán)戊基)氨基羰基；以及D，R1，R2，R3和E都按照上例中的定義。
本發(fā)明的另一方面涉及一種給哺乳動物治療抗無環(huán)鳥苷皰疹病毒感染的方法，該方法包括將能有效地抵抗具無環(huán)鳥苷抗性的庖疹所需量的結(jié)構(gòu)式1所述肽衍生物或其藥物學上可接受鹽，和一種抗病毒核苷類似物或其藥物學上可接受鹽聯(lián)合施藥給所述哺乳動物。
聯(lián)合給藥時使用到的抗病毒核苷類似物是一種可以酶促轉(zhuǎn)變(體內(nèi))為皰疹DNA聚合酶抑制劑的一種病毒DNA聚合酶抑制劑，和/或轉(zhuǎn)變?yōu)樵撁傅囊环N替換底物的物質(zhì)。該抗病毒核苷類似物可選自于已知的核苷類似物。本發(fā)明所述的優(yōu)選的核苷類似物包括無環(huán)鳥苷和其類似物；例如結(jié)構(gòu)式2的化合物 其中R9是氫，羥基或氨基，或該化合物的藥物學上可接受的鹽。(結(jié)構(gòu)式2中R9是羥基時該化合物為無環(huán)鳥苷。)根據(jù)本發(fā)明使用的其他優(yōu)選的抗病毒核苷類似物包括阿糖腺苷，碘脫氧尿苷，三氟尿苷，丙氧鳥苷，edoxudine，brovavir，fiac-itabine，penciclovir，famciclovir和rociclovir。
附圖描述

圖1和2圖解表示應(yīng)用isobole方法證明一個研究過程中的增效性時獲得的結(jié)果，所述研究是涉及將無環(huán)鳥苷和通式1的肽衍生物聯(lián)合給藥用于抵抗具無環(huán)鳥苷抗性的單純性皰疹病毒時顯示的作用。
換一種方式，結(jié)構(gòu)式1可以按如下描述
術(shù)語“殘基”在專指一種氨基酸或氨基酸衍生物時是指通過從其相應(yīng)的α-氨基酸中去除羧基上的羥基和α-氨基的-個氫以后得到的基團。
總的來說，在本文中用于命名氨基酸和保護性基團的縮寫是以IUPAC-IUB生化命名委員會推薦內(nèi)容為依據(jù)，參見European Journ-al of Biochemistry 138，9(1984)。例如Val，Ile，Asp和Leu分別代表L-纈氨酸殘基，L-異亮氨酸殘基，L-天冬氨酸殘基和L-亮氨酸殘基。
位于結(jié)構(gòu)式1肽衍生物的主線性軸(即主鏈)(末端基團A和(E的)Z除外，但包括當E為如本文中定義的NHCH(R7)-Z時攜帶R7的碳原子)上的不對稱碳原子具有S構(gòu)型。但有一種情況除外，即對于攜帶CH2C(O)R1側(cè)鏈的碳原子而其中R1為本文中定義的低級烷基或低級環(huán)烷基時。對于這種例外情況，該碳原子具有R構(gòu)型。
位于一個氨基酸或衍生的氨基酸殘基的側(cè)鏈上，以及位于末端A基團，和末端E基團(當E代表如本文中定義的NHR6)上的不對稱碳原子可具有S或R構(gòu)型。
“Me，“Et”，“Pr和“Bu”代號分別表示烷基基團甲基，乙基，丙基和丁基。
例如，代號“MeEt2C”和“EtPr2C”分別表示1-乙基-1-甲基丙基和1-乙基-1-丙基丁基基團。
代號“Tbg”代表氨基酸殘基(S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酸。“γMeLeu”代表氨基酸殘基(S)-2-氨基-4，4-二甲基戊酸。代號“γMeLeucinol”代表(S)-2-氨基-4，4-二甲基戊醇，該戊醇α-氨基上移去一個氫。
在本文中使用的其它代號是(N-Me)Val表示(S)-3-甲基-2-(甲氨基)-丁酸殘基；(N-Me)Ile表示殘基(S)-3-甲基-2(甲氨基)戊酸；(N-Me3)Tbg表示殘基(S)-2(甲氨基)-3，3-二甲基丁酸；ASP(cyBu)表示殘基(S)-α-氨基-1-羧基環(huán)丁烷乙酸；以及Asp(cyPn)表示殘基(S)-α-氨基-1-羧基環(huán)戊烷乙酸。
本文中使用的術(shù)語“低級烷基”，單獨形式或與其他基團相結(jié)合形式，是指含有1-6個碳原子的直鏈烷基基團以及含有3-6個碳原子的支鏈烷基基團，并且包括甲基，乙基，丙基，丁基，己基，1-甲基乙基，1-甲基丙基，2-甲基丙基和1，1-二甲基乙基。
本文中使用的術(shù)語“1-(低級烷基)-(低級環(huán)烷基)”是指一種低級環(huán)烷基基團，它在1位上攜帶一個低級烷基取代基；例如，1-乙基環(huán)丙基，1-丙基環(huán)戊基和1-丙基環(huán)己基。
本文中使用的術(shù)語“低級環(huán)烷基”，單獨形式或與其他殘基結(jié)合在一起形式是指含有3-6個碳原子的飽和的環(huán)狀烴基團，包括環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基和環(huán)己基。
本文中使用的術(shù)語“藥物學上可接受載體”是指作為活性成分賦劑的一種無毒的，通常為惰性的材料，該賦形劑并不會對該活性成分產(chǎn)生有害影響。
本文中使用的術(shù)語“生理學上可接受的載體”是指一種或多種非毒性賦形劑的一種可按受的化妝品用的賦形劑，所述賦形劑不會與所包含的活性成分發(fā)生反應(yīng)或降低其活性。
術(shù)語“有效量”指該抗病毒劑的預(yù)先測定的抗病毒量，即足以在體內(nèi)有效地抵抗病毒生物體的試劑的量。
本文中所用的術(shù)語“偶聯(lián)劑”是指能使一種氨基酸或肽的羧基與另一種氨基酸或肽的游離氨基發(fā)生脫水偶合從而在兩種反應(yīng)物之間形成酰胺鍵的試劑。同樣，這樣的試劑能使一種酸和一種醇發(fā)生偶合而形成相應(yīng)的酯。這些試劑通過激活羧基而促使或有助于發(fā)生脫水偶合。通常在有關(guān)肽化學的課本中描述這些偶聯(lián)劑和活化基團；例如，E.Schroder and K.L.Lubke，“The Peptides”，Vo.1，Ac-ademic Press，New York，N.Y.，1965，pp 2-128，and K.D.Ko-pple，“Peptides and Amino acids”，W.A.Benjamin，Inc.，NewYork，N.Y.，1966，pp 33-51。偶聯(lián)劑的例子有二苯基磷酰疊氮，1，1′-羰基二咪唑，二環(huán)己基碳化二亞胺，N-羥基琥珀酰亞胺，或者有二環(huán)己基碳化二亞胺存在時的1-羥基-苯并三唑。一種非?？尚械暮陀杏玫呐悸?lián)劑是由B.Castro等人在Tetrahedron Lett-ers，1219(1975)，也可參見D.Hudson，J.Org.Chem.，53，617(1988)描述的(苯并三唑-1-基氧)-三個-(二甲基氨基)鏻六氟磷酸鹽，可以單獨使用該化合物或者在1-羥基苯并三唑存在下使用。還有另一種非常可行的和有用的偶聯(lián)劑是可通過商業(yè)途徑購買的2(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N′N′-四甲基脲四氟硼酸鹽。
本發(fā)明中使用的抗病毒核苷類似物及其藥物學上可接受的鹽是本領(lǐng)域內(nèi)熟知的一類化合物。正如上文所述，這類化合物成員的特征在于其介導(dǎo)抵抗皰疹病毒的抗病毒作用的方式，即通過體內(nèi)抑制病毒DNA聚合酶來實現(xiàn)抗病毒效果。這類化合物的重要成員有無環(huán)鳥苷以及由H.J.Schaeffer在美國專利4,199,574(1980年4月22日公布)中描述的，也可參見H.J.Schaeffer等人，Nature(London)，272，583(1978)和T.A.Krenitsk等人，Proc.Natl.Acad.Sai.USA，81，3209(1984)中描述的無環(huán)鳥苷類似物。其中R9為羥基時，結(jié)構(gòu)式2的化合物為“無環(huán)鳥苷”，其還有熟知的化學命名9-[(2-羥基-乙氧基)甲基]鳥嘌呤。其中R9為氫時的結(jié)構(gòu)式2的各稱為6-脫氧無環(huán)鳥苷和2-氨基-9-[(2-羥基乙氧基)甲基]腺嘌呤；當R9是氨基時通式2的化合物的化學名稱為2，6-二氨基-9-[(2-羥基乙氧基)甲基]嘌呤。
當R9是羥基時結(jié)構(gòu)式2的化合物以其互變異構(gòu)形式即2-氨基-1，9-二氫-9-[(2-羥基乙氧基)甲基]-6H-嘌呤-6-酮形式存在是不言而喻的，并且該化合物可以是兩種互變異構(gòu)形式的混合物，在該混合物中各種互變異構(gòu)體的百分比依據(jù)該化合物的自然環(huán)境而定。對于具有可烯醇化羰基的其他抗病毒核苷類似物也可能有互變異構(gòu)形式。
本發(fā)明中考慮使用的其他抗病毒核苷包括阿糖腺苷(9-β-D-阿拉伯呋喃糖基腺嘌呤一水化合物)，參見R.J.Whitley等人，N.Engl.J.Med.，307，971(1982)；碘脫氧尿苷(2′-脫氧-5-碘尿苷)，參見W.H.Prusoff，Biochim.Biophys.Acta，32，295(1959)；三氟尿苷[2′-脫氧-5-(三氟甲基)尿苷]，參見C.Heidelberger，美國專利3,201,387(1965年8月17日頒發(fā))；丙氧鳥苷9-[(1，3-二羥基-2-丙氧基)甲基]-鳥嘌呤，參見J.P.Verheyden和J.C.Martin，美國專利4,355,032(1982年10月19日頒發(fā))；edoxudine(5-乙基-2′-脫氧尿苷)，參見K.K.Gauri，US專利3,553,192(1971年1月5日頒發(fā))；brovavir[(E)-5-(2-溴乙烯基)-2-脫氧尿苷]，參見Y.Benoit等人，Eur.J.Pediatrics，143，198(1985)；fiacitabine(2′-氟-脫氧-5-碘尿苷)，參見B.Leyla-nd-Jones等人，J.Infect.Dis.，154，430(1986)；penciclovir(9-[4-羥基-3-(羥基-甲基)-丁基]鳥嘌呤，參見S.E.Fowler等人，Br.J.Clin.Pharmacol.，28，2369(1989)；famciclovir(9-[4-乙酰氧基-3-(乙酰氧基甲基)丁基]腺嘌呤，參見P.A.V.Hodge等人，Antimicrob.Agents Chemotherap.，33，1765(1989)；以及rociclovir(9-[(1，3-二異丙氧基-2-丙氧基)甲基]腺嘌呤，參見E.Winklemann等人，Arzneim.-Forsch.，38，1545(1988)。
制備結(jié)構(gòu)式1肽衍生物的方法使用與肽合成中普遍采用的方法(例如偶合氨基酸殘基和/或肽片段的標準液相方法)可以制備結(jié)式1的肽衍生物。有關(guān)對這些方法的描述可參見例如，E.Schroder and K.Lubke，上文描述的教科書叢書，“The PeptidesAnalysis，Synthesis，Biology”，E.Gross等人編輯，Academic Press，New York，N.Y.，1979-1987，Vol.1-8，以及J.M.Stewart以及J.D.Young；“Solid Phase Pep-tide Synthesis”，2nd ed.，Pierce Chem.Co.Rockford，IL，USA，1984。
上面介紹的用于合成肽衍生物的方法的共同特征是用合適的保護性基團保護各種氨基酸殘基或衍生的氨基酸殘基(或者，如果需要，該肽衍生物的非肽片段)的反應(yīng)性側(cè)鏈基團，其中所述保護性基團可以防止在所述位點上發(fā)生化學反應(yīng)，直至最后去除該保護基團。另一共同點是當一個氨基酸或一個片段的羧基發(fā)生反應(yīng)時保護其α-氨基，隨后選擇性地去除該α-氨其保護性基團，以便在該位點上發(fā)生后面的反應(yīng)。還有一個共同特征是用一個合適的保護性基團在起始時保護該氨基酸殘基或肽片段上的C-末端羧基(如果存在，該羧基是該肽衍生物的C-末端功能基團)，該保護性基團阻止在該位點上發(fā)生化學反應(yīng)，直至所需的肽衍生物序列裝配完之后去除該保護性基團。
結(jié)構(gòu)式1的肽的一個關(guān)鍵的中間產(chǎn)物是結(jié)構(gòu)式2的中間產(chǎn)物。
W-D-CH2CH{CH2C(O)R1}C(O)OH 2其中W是一個α-氨基保護性基團，例如，叔-丁基-氧-羰基(BOC)，芐基-氧-羰基(Z)或芴-9-基甲氧基羰基(Fmoc)，以及D和R1按本文中定義的內(nèi)容。通過采用邁克爾(Michael)加成法將結(jié)構(gòu)式W-D-CH2C(O)OCH2CH＝CH2的烯丙基酯加到結(jié)構(gòu)式(低級烷基)-OC(O)CH＝CHC(O)R1的富馬酰衍生物上得到結(jié)構(gòu)式為W-D-CH{C(O)-OCH2CH＝CH2}CH{CH2C(O)R1}C(O)O-(低級烷基)的邁克爾加合物，從而可以制備該化合物。
此后，根據(jù)R.Deziel，Tetrahedron Letters，28，4371(1987)的方法在吡咯烷存在下用四個三苯基膦鈀以及三苯基膦處理得到的該化合物，這種處理作用導(dǎo)致烯丙基酯發(fā)生水解并且接著去羧基得到關(guān)鍵的中間產(chǎn)物相應(yīng)的烷基酯。這后一種酯在堿例如氫氧化鈉或氫氧化鋰存在下發(fā)生水解得到關(guān)鍵中間產(chǎn)物非對映異構(gòu)體的混合物。
另一種可采用的方法，是采用下列步驟制備通式2所示的關(guān)鍵中間產(chǎn)物，其中W和D是按照上面舉例中定義的內(nèi)容，而R1是NR4R5其中R4和R5各自是低級烷基或者R4和R5與它們相結(jié)合的氮原子一起形成吡咯烷基，哌啶子基，嗎啉代或者4-甲基-1-哌嗪基采用邁克爾反應(yīng)發(fā)生的條件將結(jié)構(gòu)式BzlOC(O)CH＝CHC(O)OBzl{(E)-2-丁烯二酸二芐酯的富馬酰衍生物與上面介紹的結(jié)構(gòu)式W-D-CH2C(O)O-CH2CH=CH2(其中W和D都按本文中定義內(nèi)容)的烯丙基酯發(fā)生反應(yīng)得到相應(yīng)的結(jié)構(gòu)式為W-D-(RS)-CH{CH{C(O)OBzl}CH2C(O)OBzl}C(O)-OCH2CH＝CH2的邁克爾加合物。在吡咯烷存在下用四個三苯基膦鈀以及三苯基膦處理這后一種加合物(Deziel，vide文獻同上)得到結(jié)構(gòu)式為W-D-CH2-(R，S)-CH{CH2C(O)OBzl}C(O)OBzl的相應(yīng)的二芐基酯。隨后在氫氧化鈀存在下在碳上發(fā)生氫解，得到相應(yīng)的二羧酸，將它與過量的乙酸酐一起加熱而轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的酸酐。在吡啶存在下將該酸酐與合適的二級胺發(fā)生反應(yīng)，得到各種部位異構(gòu)體(re-gioisomer)的混合物，該混合物中結(jié)構(gòu)式為W-D-CH2-(RS)-CH{CH2C(O)NR4R5}-C(O)-OH(其中W，D和NR4R5是按照本文中定義內(nèi)容)的所需要的異構(gòu)體占優(yōu)勢。將這一產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為芐基酯，并且采用高效液相色譜法將得到的部位異構(gòu)體混和物進行分離，得到作為優(yōu)勢產(chǎn)物的所需的異構(gòu)體。在氫氧化鈀存在下將這一產(chǎn)物的碳原子隨后發(fā)生氫化產(chǎn)生關(guān)鍵中間產(chǎn)物結(jié)構(gòu)式2，其中W和D都按本文中定義，R1和NR4R5也按本文定義。
因此，一般來說，采用次序為肽序列，將合適的氨基酸或衍生的氨基酸殘基，以及該肽的非肽片段(例如關(guān)鍵中間產(chǎn)物)(如果需要，可合適地保護這些片段)逐步偶合，以及在逐步偶合完成之后消除所有保護基因(如果存在)，從而制備得到結(jié)構(gòu)式1的肽。更具體的方法將在下文實施例部分描述。
可以制備本發(fā)明的結(jié)式1肽的治療學上可接受的鹽形式。對于一種特定的肽含有具堿作用的殘基的情況，該堿的這樣的鹽的例子有那些有機酸鹽例如乙酸鹽，乳酸鹽，琥珀酸鹽，甲烷磺酸鹽或?qū)?甲苯磺酸鹽，以及聚合酸例如丹寧酸鹽或者羧甲基纖維素鹽，還可以是無機酸鹽如與氫鹵酸，例如鹽酸，或硫酸，或磷酸所形成的鹽。如果需要，可按R.A.Boissonnas等人，Helv.Chim.Acta，43，1849(1960)描述的方法用適當?shù)碾x子交換樹脂處理，將特定的酸加成鹽轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪环N酸加成鹽，例如一種無毒的，藥物學上可接受的鹽。
對于一種特定的肽含有一個或多個游離羧基團的情況，該羧基的所述鹽的例子有鈉鹽，鉀鹽或鈣鹽，或者有機堿鹽，例如與三乙胺或N-甲基嗎啉所形成的鹽。
抗皰疹活性采用顯示結(jié)構(gòu)式1的肽衍生物對具無環(huán)鳥苷抗性單純性皰疹病毒1型和2型(HSV-1和HSV-2)的抑制作用的生化學、微生物學以及生物學方法可以證明該化合物的抗病毒活性。
用于證明結(jié)構(gòu)式1的肽衍生物對病毒復(fù)制的抑制作用的方法是細胞培養(yǎng)技術(shù)，參見例如，T.Spector等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，82，4254(1985)。
可用實驗動物證明該肽衍生物的治療效果，例如通過以患有單純性皰疹病毒誘導(dǎo)的眼睛疾病的鼠模型進行抗病毒藥物檢測為依據(jù)實施的檢測方法，參見C.R.Brandt等人，J.Virol.Meth.，36，209(1992)描述。
當將本發(fā)明的一種肽衍生物或其一種治療學上可接受的鹽用作為一種抗病毒劑時，可將它包含于一種賦形劑中給溫血動物例如人，豬或馬局部或全身給藥，該賦形劑含有一種或多種藥物學上可接受載體，該藥劑各成份比例由該肽衍生物的溶解性和化學性質(zhì)以及所選擇的給藥途徑和標準的生物學慣例決定。對于局部給藥，可將該衍生物與藥物學上可接受賦形劑一起配制，活性成分含量為0.1-5％，優(yōu)選為0.5-2％。這種藥劑可以是溶液，乳膏或洗劑。
對于全身給藥，可將結(jié)構(gòu)式1的肽衍生物與藥學上可接受的賦形劑或載體結(jié)合成組合物形式給患者口服或者靜脈注射、皮下注射或肌肉內(nèi)注射。注射給藥時，優(yōu)選的是使用該肽溶于一種無菌水相賦形劑形成的溶液，該賦形劑也可以含有其他溶質(zhì)如緩沖劑或防腐劑以及用于保持該溶液等滲性的足夠量的藥物學上可接受的鹽或足夠量的葡萄糖。
用于上面介紹的藥劑中的適當?shù)馁x形劑或載體描述于經(jīng)典的藥學課本中，例如“Remington′s Pharmaceutical Sciences”，18th ed，Mack Publishing Company，Easton，Penn.，1990。
該肽衍生物的劑量隨給藥方式和所選擇的特定的活性試劑而變化。此外，也隨進行治療的特定的患病個體而變化。通常，開始治療時給藥量呈小幅增長，直到達到該條件下的最大效果。一般來講，最令人滿意的是將該肽衍生物以某一濃度水平給藥，在這一濃度水平時通常能有效地抗病毒，但不會產(chǎn)生任何有害或有毒的副作用。
至于局部使用該藥，將該肽衍生物的合適的局部用制劑直接施用到身體的受感染區(qū)，例如皮膚，眼睛或口腔或生殖腔部位，所施用該藥劑的量足于覆蓋該受感染區(qū)。這種過程應(yīng)重復(fù)進行，例如每隔4-6小時重復(fù)一次直到損傷痊愈。
至于全身用藥，將結(jié)構(gòu)式1所述肽衍生物以每天每公斤體重施用1.0mg-10mg的劑量給藥，盡管會出現(xiàn)前面介紹的變化。但是，最令人滿意的劑量水平是每天每千克體重使用1.0mg-5mg的范圍，從而獲得有效結(jié)果。
雖然上文中公開的制劑用于治療皰疹病毒感染時顯示出它是一種有效和相對安全的藥劑，但是并不排除將這些制劑與其他抗病毒藥劑或試劑合理地同時給藥時會得到更有效的結(jié)果。這樣的抗病毒藥物或試劑包括前面描述的抗病毒核苷，抗病毒表面活性試劑或抗病毒干擾素例如由S.S.Asculai和F.Rapp在美國專利4,507,281(1985年3月26日)中公開的內(nèi)容。
更具體地講，對于采用同時給藥方法治療具無環(huán)鳥苷抗性的皰疹病毒感染，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)將一種抗病毒核苷類似物與結(jié)構(gòu)式1的肽衍生物結(jié)合起來使用時可協(xié)同地增強該類似物的抗皰疹活性，而沒有伴隨毒副作用的增加。因此，本發(fā)明提供了一種給哺乳動物治療具無環(huán)鳥苷抗性的皰疹感染的藥物組合物，該藥物組合物含有一種藥物學上或獸醫(yī)學上可接受的載體，以及有效量的一種抗病毒核苷類似物或其藥物學上可接受的鹽，與結(jié)構(gòu)式1的肽衍生物或其藥物學上可接受的鹽的組合物。
當術(shù)語“協(xié)同效應(yīng)”用于表示上文中所定義的核苷類似物與結(jié)構(gòu)式1的肽衍生物的組合物的抗病毒或抗皰疹活性時，它是指該抗病毒或抗皰疹效應(yīng)大于預(yù)定的兩種單獨成分結(jié)合后的加和作用。
在用本發(fā)明的組合物治療具無環(huán)鳥苷抗性的皰疹感染時，將該組合物包含于含有一種或多種藥物學上可接受載體的賦形劑中給溫血動物例如人，豬或馬給藥，該組合物中各成分的比例由該核苷類似物和結(jié)構(gòu)式1的肽衍生物的溶解性和化學特性，以及所選擇的給藥途徑，經(jīng)典的生物學慣例決定，也取決于該兩種活性成分的相對含量能否提供協(xié)同的抗病毒效應(yīng)。在一種優(yōu)選的方法中，將該組合物局部給藥。例如，將該兩種活性試劑(即抗病毒核苷類似物和結(jié)構(gòu)式1的肽衍生物或其治療學上可接受的鹽)與藥物學上可接受的賦形劑配制成溶液形式，乳劑形式，乳油形式或洗劑形式。這種制劑中可以含有重量百分率為0.01-1.0％的核苷類似物或其治療學上可接受的鹽，以及含有約0.05-1％重量的結(jié)構(gòu)式1的肽衍生物或其治療學上可接受的鹽。
在任何情況下，該兩種活性試劑都以能提供協(xié)同抗皰疹效應(yīng)的量存在于該藥物組合物中。
下面的實施例進一步描述本發(fā)明。所述溫度是指攝氏溫度。溶液百分比或比例表示體積與體積的相對比值，除非另有說明。核磁共振光譜是由Bruker 200MHz或400MHz分光計記錄的(在開頭記載了400MHz光譜)；所記錄的化學位移(δ)是指在一百萬中所占比例。在實施例中使用的縮寫包括Boc叔-丁氧羰基；Bu丁基；Bzl芐基；DMF二甲基甲酰胺；Et乙基；EtoH乙醇；EtOAc乙酸乙酯；Et2O二乙基酯；Me甲基；MeOH甲醇；Pr丙基；TLC薄層層析；THF四氫呋喃。
實施例1偶合反應(yīng)的總方案{也可參見R.Knorr.等人，Tetrahedron Letters，30，1927(1989).}將第一種反應(yīng)物，即一種游離胺(或其鹽酸鹽)溶于CH2Cl2或乙腈中，將該溶液冷卻至4℃。在氮氣存在下，將4當量的N-甲基嗎啉加到該振動的溶液中。在20分鐘之后，加入1當量的第二種反應(yīng)物即一種游離羧酸，以及1.05當量的偶聯(lián)劑。為了上述目的，實用和有效的偶聯(lián)試劑是(苯并三唑-1-基氧)三-(二甲基胺)膦六氟磷酸鹽或者優(yōu)選的是2-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′，-四甲基脲四氟硼酸鹽。用TLC法監(jiān)控該反應(yīng)進程。在反應(yīng)完成之后，在減壓下蒸發(fā)CH2Cl2(或乙腈)。將殘留物溶于EtOAc。用1N檸檬酸水溶液，10％Na2CO3水溶液和鹽水依次洗滌該溶液。在減壓下將有機相干燥(MgSO4)，過濾并濃縮至干。按照Still的急聚色譜法(fl-ash chromatography technique){W.C.Still等人，J.Org.Chem.，43，2923(1978)}在硅膠(SiO2)上純化該殘留物。
實施例2中間產(chǎn)物H-Asp(cyPn)(Bzl)-NH-(S)-CH(CH2CMe3)CH2OBzl的制備(a)(s)-α-疊氮基-1-{(苯甲氧基}羰基}-環(huán)戊烷乙酸按照利用Evan的輔助物(參見D.A.Evans等人，J.Amer.Chem.Soc.，112，4011(1990)]的不對稱疊氮化方法，以及M.N.Aboul-Enein等人，Pharm.Acta Helv.，55，50(1980)的描述，由2-氧代螺旋[4.4]壬烷-1，3-雙酮制備該化合物。
更明確地說，在氬氣存在，-40℃條件下將丁基鋰(469ml，750mmol)的1.6M己烷溶液逐滴加到存在于無水THF中的手性輔助物4(S)-(1-甲基乙基)-2-噁唑烷酮(4(S)-(1-methylethyl)-2-Oxazolidinone){96.8g，750mmol，由L.N.Pridgen和J.Prol.，J.Org.Chem.，54，3231(1989)}中。將該混合物在-40℃搖動30分鐘，然后冷卻至-78℃。將2-氧代螺旋[4.4]壬烷-1，3-雙酮滴加到該冷卻的混合物中。然后將該混合物在0℃振動1小時。此后，將20％(w/v)檸檬酸水溶液(600ml)加到該混合物中。將有機相分離開，用EtOAc萃取水相。將合并起來的有機相用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并在減壓條件下濃縮，得到一種粉紅色固體(300g)形式的3-{2-(1-羧基-環(huán)戊基)-1-氧代乙基)}-4(S)-(1-甲基乙基)-2-噁唑烷酮。
將這一種粉紅色固體(約750mmol)溶解于乙腈(1升)中。將芐基溴(128.3克，89.2ml，750mmol)和1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]-7-十一烯(114克，112ml，750mmol)加到該溶液中。將該混合物在氬氣中振動16小時。在減壓條件下除去揮發(fā)物。將殘留物溶解于H2O/EtOAc中。分離出有機相，用10％(w/v)檸檬酸水溶液和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并在減壓條件下濃縮至干燥，得到一種油。將該油從己烷/EtOAc中結(jié)晶出來得到一種白色固體(204克，73％)形式的相應(yīng)芐基酯。
將最后得到的化合物(70克，187mmol)溶于無水THF(200ml)中的溶液冷卻至-78℃。將含有6％(w/v)異丙基苯的鉀1，1，1，3，3，3-六甲基二硅氮烷(286ml，189mmol)的0.66M THF溶液在15分鐘內(nèi)加入到該冷卻溶液中。將該混合物在-78℃振動45分鐘。將溶于無水THF(100ml)中的疊氮化2，4，6-三異丙基苯磺酸(67克，216mmol)一次加入該冷卻混合物中，接著在二分鐘之后，加入冰醋酸(50ml，860mmol)。將該混和物加熱，在35-45℃振動1小時。在減壓條件下除去揮發(fā)物。用己烷/EtOH(4∶1，1.7升)將該黃色殘留物磨碎。將得到的白色固體收集到一張濾紙上。將濾液與SiO2(230-240目過篩)混合。在減壓條件下除去揮發(fā)物，并在減壓條件下將得到的固體在35℃干燥以便除去異丙基苯。然后將殘留的固體置于一個SiO2柱子中。用9∶1的己烷-EtOAc洗脫殘留的固體和SiO2，并將洗脫液濃縮后得到3-{{2(S)-疊氮基-1-氧代-2-{1-{(苯基甲氧基)羰基}環(huán)戊基}-乙基}-4(S)-(1-甲基乙基}-2-噁唑烷酮(66克，86％)。
將最后得到的化合物(13.42克，32.4mmol)溶于THF/H2O(3∶1，608ml)中的溶液冷卻到0℃。將H2O2/H2O(3∶7，16.3ml，518mmol的H2O2)加到該冷卻溶液中；隨后加入LiOH·H2O(2.86克，68.2mmol)。將該混合物在0℃振蕩45分鐘，然后用10％(w/V)的硫酸鈉的水溶液(400ml)猝滅。在加入NaHCO3(1.93克)之后在減壓條件下將該混合物濃縮。通過連續(xù)萃取(NaHCO3水溶液/氯仿)20小時回收手性輔助物。此后，將該水相冷卻至0C并加入濃HCl使其呈酸性，然后用EtOAc提取。用鹽水洗滌提取物，干燥(MgSO4)并在減壓條件下濃縮得到白色固體(8.2克，84％)形式的所需化合物。該化合物的1H NMR(CDCl3)結(jié)果顯示δ1.6-1.8(m，5H)，1.95-2.05(m，2H)，2.20-2.30(m，1H)，4.55(s，1H)，5.12(s，2H)以及7.4(m，5H)。
在本實施例的(C)部分中使用了該化合物。
(b)NH2-(S)-CH(CH2CMe3)CH2OBzl根據(jù)A.Giannis和K.Sandh-off，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.，28，218(1989)的方法用LiBH4/Me3SiCl還原H-γMeLeu-OH得到氨基醇NH2-(S)-CH(CH2CMe3)CH2OH。在氮氣中，4℃條件下將后一化合物(812mg，6.2mmol)，三乙胺(659mg，6.51mmol)以及二叔丁基重碳酸鹽(1.42克，6.51mmol)溶于無水THF(15ml)中得到的混合物振動15分鐘，然后在室溫下振動4小時。在減壓條件下將THF蒸發(fā)。將殘留物溶于EtOAc中。用10％檸檬酸水溶液，5％NaHCO3水溶液以及鹽水洗滌該溶液。將該有機相干燥(MgSO4)并在減壓條件下濃縮至干。通過急聚色譜法(SiO2，洗脫液己烷-EtOAc，2∶1)將該殘留物進行純化。得到Boc-NH-(S)-CH(CH2CMe3)-CH2OH(1.23克，86％)。
將二硫酸四丁基銨(106mg)和50％MaOH水溶液(3ml)依次加入到Boc-NH-(S)-CH(CH2CMe3)CH2OH(1.23克，5.35mmol)的芐基氯(13ml)溶液中。將得到的混合物在35-40℃振動90分鐘。用EtOAc稀釋，并用H2O和鹽水洗滌。將有機相干燥(MgSO4)并在減壓條件下濃縮至干燥狀態(tài)。將殘留物溶解于己烷中。將該溶液注入到SiO2柱中。用己烷洗脫該柱，以便除去芐基氯，然后用己烷-EtOAc(2∶1)洗脫至得到Boc-NH-(S)-CH(CH2CMe3)CH2OBzl。這后一化合物的1H NMR(CDCl3)結(jié)果顯示δ0.95(S，9H)，1.42(S，9H)，1.30-1.55(m，2H)，3.42(d，J＝4Hz，2H)，3.88(寬，1H)，4.54(m，3H)，7.23-7.4(m，5H)。將這后一化合物(1.28克，3.99mmol)溶于6N HCl/二噁烷(10ml)中。將該溶液在氮氣，4℃條件下振動45分鐘。蒸發(fā)掉溶劑得到所需化合物的鹽酸鹽(1.05克)。在本實施例的下一節(jié)中將使用不經(jīng)進一步純化的該化合物。
(c)本實施例的標題化合物按照實施例1的偶合步驟，利用前面章節(jié)中的NH2-(S)-CH(CH2CMe3)CH2OBzl的鹽酸鹽作為第一反應(yīng)物，以本實施例(a)節(jié)中的(S)-α-疊氮-1-{(苯基甲氧基)-羰基}環(huán)戊烷乙酸作為第二反應(yīng)物，得到N-{(S)-1-芐氧基甲基-3，3-二甲基丁基}-(S)-α-疊氮-1-{(苯甲氧基)羰基}環(huán)戊烷乙酰胺。采用N.Maiti等人，Tetrahedron Letters，27，1423(1986)的方法將得到的化合物在MeOH中用氯化錫(II)還原得到本實施例的標題化合物。該化合物的1H NMR(CDCl3)分析結(jié)果顯示δ0.98(s，9H)，1.22-2.25(m，12H)，3.4(d，J＝4 Hz，2H)，3.64(s，1H)，4.18(寬m，1H)，4.52(s，2H)，5.12(s，2H)，7.18(d，J＝7Hz，1H)，7.22-7.38(寬m，10H)。
實施例3中間產(chǎn)物Boc-Tbg-CH2-(RS)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)OH的制備(a)丙二酸烯丙單酯的鎂鹽在回流裝置中，將2，2-二甲基-1，3-二噁烷-4，6-雙酮(100克，0.69mol)和烯丙醇(47ml，0.69mol)溶于苯(800ml)得到的溶液加熱24小時。在減壓條件下將溶劑蒸發(fā)掉。將殘留物在減壓條件下蒸餾得到丙二酸烯丙單酯(71克，71％，沸點123-127°/2.7mmHg)。將該酯(71克，0.48mol)溶于無水THF(300ml)中。將乙醇鎂(28.5克，0.245mol)加入到該溶液中。在氬氣和室溫(20-22℃)下將該混合物振動4小時。在減壓下蒸發(fā)掉溶劑，用Et2O磨碎該殘留物得到一種棕褐色固體。將該固體研磨成微小顆粒并在減壓條件下干燥得到所需鎂鹽(56克，73％)。在本實施例的下一節(jié)中使用該鹽。
(b)Boc-Tbg-CH2C(O)OCH2＝CH2向Boc-Tbg-OH(15克，64mmol)溶于無水乙腈(150ml)中的溶液中加入1，1-羰基二咪唑(12.6克，78mmol)。在氬氣、室溫條件下，將該混合物振蕩2小時。將丙二酸烯丙酯的鎂鹽(24克，78mmol)和4-(N，N-二甲基胺)吡啶(100mg)加入到該混合物中。將該混合物在回流裝置中加熱1小時，然后在室溫下振蕩18小時。此后，將該混合物在減壓條件下濃縮。將殘余物溶于EtOAc(300ml)中。用10％檸檬酸水溶液(2×100ml)和鹽水(2×100ml)洗滌該溶液，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)至干。用急聚色譜法(flash chromatography)(SiO2，洗脫液∶己烷-EtOAc，9∶1)純化該殘余物得到所需的烯丙酯(19.4克，96％)，該酯為一種棕色油。持續(xù)一段時間后該油結(jié)晶。進行1H NMR(CDCl3)分析發(fā)現(xiàn)該化合物在氯仿中以酮基-烯醇互變異構(gòu)體混合形式存在，兩者的比較為3∶1，δ0.96(s，9H，烯醇形式)，1.04(s，9H)，1.46(s，9H)，3.65(s，2H)，3.90(d，J＝8.5Hz，1H，烯醇形式)，4，20(d，J＝7.5Hz，1H)，4.65(m，2H)，5.10(寬d，J＝7.5 Hz，1H)，5.20-5.40(m，2H)，5.80-6.05(m，1H)，12(s，1H烯醇形式)。在本實施例的(d)節(jié)中使用該烯丙酯。
(c)(E)-5，5-二甲基-4-氧代-2-己烯酸乙酯按照S.Ma-nfredini等人，Tetrahedron Letters，29，3997(1988)的方法制備該乙酯。將該油性的粗制產(chǎn)品用急聚色譜法(SiO2，洗脫液己烷)純化得到黃色油狀物形式的所需的乙酸。該化合物的1H NMR(CDCl3)分析結(jié)果為δ1.21(s，9H)，1.33(t，J＝7.5Hz，3H)，4.28(q，J＝7.5Hz，2H)，6.78(d，J＝15.5Hz，1H)，7.51(d，J＝15.5Hz，1H)。在本實施例的下一節(jié)中使用該乙酯。
(d)本實施例的標題化合物將本實施例(b)章節(jié)中描述的Boc-Tbg-CH2C(O)OCH2＝CH2(0.67克，2.1mmol)在氬氣存在下溶于無水THF(25ml)中。將氫化鈉(60％油懸液，0.095克，2.4mmol)加到該溶液中。將該混合物在室溫下振蕩30分鐘。將本實施例(c)節(jié)中描述的(E)-5，5-二甲基-4-氧代-2-己烯酸乙酯(0.4 35克，2.36mmol)加入該混合物。振動該反應(yīng)混合物直到由TLC監(jiān)測判斷反應(yīng)已經(jīng)完成(約6小時)。此后，用10％檸檬酸水溶液淬火該混合物。在減壓條件下除去THF，將得到的濃縮物用EtOAc(3×25ml)萃取。用水洗滌該提取物，干燥(MgSO4)并在減壓條件下濃縮。將殘余物用急聚色譜法(SiO2，洗脫液己烷-EtOAc，9∶1)純化得到相應(yīng)的邁克爾反應(yīng)加合物(Michael reaction adduct)(1.06克，100％)。
按下列方法將該邁克爾加合物轉(zhuǎn)化為Boc-Tbg-CH2-(RS)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)OH在氬氣中將四個三苯基膦鈀(0)(0.20克，0.18mmol)和三苯基膦(0.060克，0.23mmol)溶解于CH2Cl(10ml)中。將乙腈(20ml)加入到溶液中，將該溶液冷卻至0℃。向該溶液中加入吡咯烷(0.28ml，2.7mmol)，然后加入邁克爾加合物(1.06克，2.1mmol)。將該混合物在1小時內(nèi)降至室溫，然后搖動20小時。之后在氬氣中于回流裝置中將該反應(yīng)混合物加熱1小時完成該反應(yīng)。蒸發(fā)掉溶劑，用急聚色譜法(SiO2，洗脫液己烷-EtOAC，9∶1)純化殘余物，得到Boc-Tbg-CH2-(RS)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)OEt(0.77克，83％)。此后，得到的后一化合物(0.77克，1.7mmol)溶解于乙二醇二甲醚-H2O(1∶1，10ml)中。將一水合氫氧化鋰(0.31克，7.4mmol)加入到該溶液中。將該混合物在室溫下振動4小時，用10％檸檬酸水溶液(20ml)使之呈酸性，并用EtOAc(3×25ml)提取。將提取物干燥(MgSO4)并在減壓條件下濃縮，得到本實施例的標題化合物，一種棕色固體(0.69克，從Boc-Tbg-CH2C(O)O-CH2CH＝CH2的總產(chǎn)率為80％)。該產(chǎn)物是一種比例為55∶45的非對映異構(gòu)體的混合物(由NMR證明)。1H NMR(CDCl3)的結(jié)果為δ0.97(s，9H，次要異構(gòu)體)，0.99(s，9H，主要異構(gòu)體)，1.14(s，18H)，1.48(s，18H)，2.68-3.12(m，8H)，3.30(m，2H)，4.08(d，J＝9Hz，1H，次要異構(gòu)體)，4.10(d，J＝9Hz，1H，主要異構(gòu)體)，5.11(d，J＝9Hz，2H)。
實施例4
中間產(chǎn)物H-Tbg-CH2CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)(Bzl)-NH-(S)-CH(CH2C(O)Me3)CH2OBzl的制備按照實施例1的偶合步驟，利用實施例2的標題化合物(3.42克，7.13mmol)作為第一反應(yīng)物，利用實施例3的標題化合物(2.50克，6.48mmol)作為第二反應(yīng)物，將粗制產(chǎn)品物進行急聚色譜法(SiO2，洗脫劑己烷-EtOAc，4∶1)得到相應(yīng)的標題化合物的N-Boc衍生物(4.64克，84％；Rf＝0.21，己烷-EtOAc，7∶3)。將該衍生物(4.64克，5.44mmol)溶于6N HCl/二噁烷(50ml)中的溶液在室溫下振動1小時，然后在減壓條件下濃縮。將殘余物溶于Et2O中。用飽和的NaHCO3水溶液和鹽水洗滌得到的溶液，將它干燥(MgSO4)，并濃縮得到由兩種非對映異構(gòu)體組成的黃色油。采用急聚色譜法(SiO2，洗脫液己烷-EtOAc-MeOH，5∶4.5∶0.5)分離這二種異構(gòu)體。得到無色油狀物形式(2.52克，52％)的所需異構(gòu)體(即更極化(themore polar)；Rf＝0.18，EtOAc-己烷-MeOH，7∶3∶0，5)。在下面實施例中直接使用該異構(gòu)體本實施例的標題化合物，而沒有進一步純化。
實施例5Boc-(N-Me)Val-Tbg-CH2(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-ASP(cyPn)(Bzl)-NH-(S)-CH(CH2CMe3)CH2OBzl的制備按照實施例1的偶合步驟方法，利用實施例4的標題化合物(4.45克，5.95mmol)作為第一反應(yīng)物并且以N-甲基纈氨酸(4.41克，17.9mmol)作為第二反應(yīng)物，將粗制產(chǎn)物進行急聚色譜法分析(SiO2，洗脫液己烷-EtOAc，7∶3)得到本實施例的標題化合物(4.02克，72％產(chǎn)率)，1H NMR(CDCl3)δ0.87(d，J＝7Hz，6H)，0.90(s，18H)，1.10(s，9H)，1.48(s，9H)，1.5-2.0(m，10H)，2.30(m，1H)，2.5-3.1(m，5H)，2.80(s，3H)，3.30(m，2H)，4.0(d，J＝12.5Hz，1H)，4.20(m，1H)，4.32(d，J＝8.5Hz，1H)，4.49(d，J＝4.5Hz，2H)，4.64(d，J＝11Hz，1H)，5.18(d，J＝5Hz，2H)，6.78(寬d，J＝8.5Hz，1H)，7.11(寬d，J＝8.5Hz，1H)，7.18(寬d，J＝11Hz，1H)，7.2-7.45(m，10H)。
實施例6PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPh)-γMeLeucinol的制備將實施例5的標題化合物(4.02克，4.25mmol)溶于6N HCl/二噁烷(30ml)中得到的溶液在室溫下振蕩1小時，然后在減壓下濃縮得到其鹽酸鹽形式的實施例5的標題化合物的具游離N-末端氨基的衍生物。此后，按照實施例1的偶合步驟，并以該氨基衍生物作為第一反應(yīng)物并以苯丙酸(2.00克，13.3mmol)作為第二反應(yīng)物，采用急聚色譜法(SiO2，洗脫液己烷-EtOAc，3∶2)將粗產(chǎn)品純化得到PhCH2CH2C(O)-N-Me-Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp-(cyPn)(OBzl)-NH-(S)-CH(CH2CMe3)CH2OBzl，一種白色沫劑形式(4.00克，94％；Rf＝0.35，己烷-EtOAc，1∶1)。
將得到的化合物(4.00克，4.03mmol)氫解{20％Pd(OH)2/C(200mg)，1大氣壓的H2，EtOH，5小時}。在該反應(yīng)完成之后，通過用45μm膜過濾而將催化劑從反應(yīng)混合物中除去。在減壓條件下將濾液濃縮得到一種透明油。將該油溶于Et2O(100ml)。在減壓條件下將該溶液蒸發(fā)至干。將溶解和蒸發(fā)步驟重復(fù)進行，直至得到一種白色固體。用己烷磨碎該固體，過濾，并在減壓條件下干燥得到標題化合物(3.12克，95％)。其1H NMR(d6-DMSO)為400 MHz；注該化合物以兩種旋轉(zhuǎn)異物體比例為50∶50的混合物形式存在于DMSO中，其δ0.71-0.92(m，24H)，1.05(s，4.5H)，1.06(s，4.5H)，1.20-1.78(m，10H)，1.93-2.16(m，2H)，2.48-2.83(m，6H)，2.84(s，1.5H)，2.92(s，1.5H)，2.96-3.06(m，1H)，3.10-3.23(m，2H)，3.72-3.81(m，1H)，4.09-4.14(m，1H)，4.22(d，8Hz，0.5H)，4.54-4.62(寬m，1H)，4.73-4.81(m，1.5H)，7.12-7.29(m，6H)，7.94(d，J＝10Hz，1H)，8.04(d，J＝8Hz，0.5H)，8.32(d，J＝8.5Hz，0.5H)。
按照實施例6的步驟，但以2-(苯甲基)-3-苯丙酸(二芐基乙酸)代替苯丙酸，得到(PhCH2)2CHC(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)-CMe3)C(O)-Asp(cyPh)-γMeLeucinol。
實施例7制備Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-R-(CH2C(O)-CMe3)CO-Asp(cyPn)-γMeLeucinol將異氰酸1-乙基丙酯(28mg，0.248mmol)加到實施例4的標題化合物(23mg，0.030mmol)和三乙胺(6mg，0.057mmol)溶于無水CH2Cl2中得到的溶液中。在氬氣，0℃下將該反應(yīng)混合物振動1小時，然后在室溫下振動18小時。TLC(EtOAc-己烷，1∶1)指示該反應(yīng)的完成。在減壓條件下將溶劑蒸發(fā)掉。采用急聚色譜法(SiO2，洗脫液己烷-EtOAc，6∶4)將殘余物純化得到本實施例標題化合物的相應(yīng)的二芐基衍生物(16mg)。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ0.9(t，J＝7Hz，3H)，0.92(t，J＝7Hz，3H)，0.94(s，9H)，0.95(s，9H)，1.10(s，9H)，1.25-1.90(m，14H)，2.52(m，1H)，2.68(m，1H)，2.81(m，1H)，2.94-3.07(m，2H)，3.27(dd，J＝7.2，9Hz，1H)，3.36(dd，J＝5.5，9Hz，1H)，3.46(m，1H)，4.07(d，J＝9Hz，1H)，4.23(m，1H)，4.28(d，J＝9Hz，1H)，4.48(dd，J＝10Hz，2H)，4.66(d，J＝10Hz，1H)，4.74(d，J＝9Hz，1H)，5.17(dd，J＝14Hz，2H)，7.10(d，J＝8.5Hz，1H)，7.2-7.45(m，11H)。
將得到的二芐基衍生物氫解(10％負載于碳上的鈀，1個大氣壓，EtOH)得到該主題化合物。質(zhì)譜703(M＋Na)+。
實施例8用于制作結(jié)構(gòu)式1的肽的C-末端的其他代表性中間體的制備(a)NH2-(R)-CH(Et)CMe3向4，4-二甲基-3-戊酮(106克，0.92mmol)和(R)-α-甲芐胺(111克，0.92mmol)溶于苯(1升)中得到的冷卻溶液中(0℃)加入TiCl4(50.5ml，0.46mmol)溶于苯(200ml)中的溶液，添加的速率應(yīng)保持該混合物的溫度低于10°以下。此后，將該混和物在40℃機械振動3小時，冷卻到室溫，并用硅藻土過濾。用Et2O洗滌硅藻土。將合并的濾液和洗滌液濃縮。將殘留物溶于無水MeOH(2升)中。將該溶液冷卻到0℃，在將混合物溫度維持于5℃以下時將NaBH4(20克，0.53mmol)分成幾部分加入。將甲醇蒸發(fā)掉。將殘余物溶于Et2O中。用鹽水洗滌該溶液，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)至干，得到一種紅色油(由NMR鑒別指示這是一種比例為18∶1的非對映異構(gòu)體的混合物)。將該油用急聚色譜法(SiO2，洗脫液EtOAc/己烷，7∶93)純化得到一種液體形式的N-(1(R)-苯乙基)-1(R)-乙基-2，2-二甲基丙胺(110克，54％)。將該物質(zhì)溶于己烷(1.5升)中。將溶于二噁烷(90ml)中的6N HCl在15分鐘期間內(nèi)加入該溶液中。用濾紙收集得到的白色固體，然后用二噁烷洗滌得到N-(1(R)-苯乙基)-1(R)-乙基-2，2-二甲基丙基鹽酸化物(125克，97％)。1H NMR(CDCl3)δ0.55(t，J＝7.5Hz，3H)，1.14(s，9H)，1，54-1.95(m，2H)，2.23(d，J＝6.5Hz，3H)，2.36-2.44(m，1H)，4.31-4.49(m，1H)，7.30-7.48(m，3H)，7.74-7.79(m，2H)。
將得到的化合物(41.5克)溶于MeOH(120ml)中得到的溶液與10％(w/w)Pd/C混合，在室溫下，在一個Parr氫化器，以及50psi氫氣條件下振動該混合物48小時。將該混合物過濾，將濾液濃縮至一種白色固體形式的所需的NH2-(R)-CH(Et)CMe3，其鹽酸加成鹽形式(25g，100％)。1H NMR(CDCl3)δ1.10(s，9H)，1.22(t，J＝7Hz，2H)，1.58-1.90(m，2H)，2.70-2.85(m，1H)，8.10-8.40(寬s，3H)。
以同樣的方法，但是在前面的步驟中用3，3-二甲基-2-丁酮代替4，4-二甲基-3-戊酮，得到NH2-(R)-CH(Me)CMe3·HCl。
實施例9按照實施例7的步驟制備用于構(gòu)建結(jié)構(gòu)式1的肽衍生物的N-末端的其他代表性中間體(a)異氰酸1-丙基丁酯采用V.S.Goldesmidt和M.Wick，Lie-bigs Ann.Chem.，575，217(1952)的方法從購買到的4-氨基庚烷制備該中間體。
(b)異氰酸1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯酯將丙腈(14.5克，264mmol)溶于無水Et2O(40ml)得到的溶液滴加到1.0M烯丙基溴化鎂/Et2O(880ml)中。將該反應(yīng)混合物在回流裝置中機械振動2小時。此后將它冷卻到0℃。將NH4Cl飽和水溶液(320ml)小心地加到該冷卻反應(yīng)混合物中。分離開有機相，干燥(MgSO4)，冷至0℃，然后在相同溫度下與1M HCl/Et2O(200ml)混合。收集得到的固體，在減壓下干燥(約27克)。將得到的物質(zhì)溶于CH2Cl2(200ml)中。用10％(w/v)的Na2CO3(2×)水溶液洗滌該溶液，然后用鹽水洗，干燥(MgSO4)并濃縮至干，得到一種黃色油。將該油蒸餾(82-85°/20 Torr)得到1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯胺(11.6克，34％)，它是一種無色液體；1H NMR(CDCl3)，400MHz)δ0.89(t，J＝7Hz，3H)，1.39(q，J＝7Hz，2H)，2.11(d，J＝7Hz，2H)，5.06-5.14(m，4H)，5.80-5.89(m，2H)。
采用上文中描述的V.S.Goldesmidt和M.Wick的方法將上面得到的化合物轉(zhuǎn)化為異氰酸1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯酯。
前面b節(jié)方法的第一個步驟，即制備1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯胺，是基于由G.Alvernhe和A.Laurent，TetrahedronLett.，1057(1973)描述的綜合方法。利用該綜合方法，以及適當?shù)剡x擇反應(yīng)物，可以制備其他必需的異氰酸酯中間體，這些中間體適用于最終制備在N-末端未飽和的肽衍生物，即一種未飽和的烷基氨基羰基例如1-甲基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基。但是值得注意的是，當將必需的異氰酸酯中間體用于實施例7的方案中時，那么最后的產(chǎn)物將是結(jié)構(gòu)式1的相應(yīng)的肽衍生物，其中N-末端是飽和的。而且該最后的步驟是一種制備這樣的相應(yīng)肽；例如，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，(FAB/質(zhì)譜(m/z)693[M＋H]+，下文中實施例10中注明的主題肽衍生物)的有效方法。
因此，使用合適的中間體，使用實施例1-7的一系列偶合步驟以及去保護步驟，可以制備結(jié)構(gòu)式1的其它化合物，例如在下面實施例的表中列舉的那些。在某些情況下，終產(chǎn)物的沉淀沒有提供純化物質(zhì)，這樣就可以在C-18反相柱上利用各含0.06％TFA的乙腈和水梯度進行半制備HPLC分析將該產(chǎn)品純化。為了完成這一過程，將粗產(chǎn)物溶于0.1M NH4OH水溶液中并在純化前用0.1M AcOH水溶液將該溶液的pH調(diào)回至約7。如果適用，可用該方式將非對映異構(gòu)體混合物分離開。
可以制備的結(jié)構(gòu)式1的其他化合物的幾個例子是(PhCH2)2CHC(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3和(PhCH2)2CHC(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3。
結(jié)構(gòu)式1的化合物的另外幾個例子是Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，F(xiàn)AB/質(zhì)譜(m/z)665[M＋H]+；EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，F(xiàn)AB/質(zhì)譜(m/z)722[M＋H]+以及EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，F(xiàn)AB/質(zhì)譜(m/z)693[M＋H]+。
實施例10顯示肽衍生物，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)-Me3)-C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，以及該衍生物和無環(huán)鳥苷的結(jié)合物抵抗一種野生型HSV-1臨床分離株，以及兩種無環(huán)鳥苷抗性HSV-1臨床分離株的效果的研究。
病毒這些臨床分離株已由S.L.Sacks等人，Annals of Inte-rnal Medicine，111，893(1989)描述。它們來自于一名患有急性骨髓性白血病并且在同種異體骨髓移植后第一次復(fù)發(fā)的25歲婦女。在骨移植后第8天發(fā)現(xiàn)單純性皰疹病毒的起始培養(yǎng)物呈陽性(294分離株，定義為野生型HSV-1)。然后開始用無環(huán)鳥苷治療，第36天該病毒培養(yǎng)物仍呈陽性(615分離株，表示HSV-1抗性株)。對一種亞分離株615.9(ACVITK臨床分離株)進行特性分析發(fā)現(xiàn)其對無環(huán)鳥苷具抗性，但對膦甲酸敏感并且其胸苷激酶(TK)活性也受到削弱。隨后證實615.9是一種TK缺陷型突變株。相反，615.8亞分離株(ACVIPOL臨床分離株)的特性是對無環(huán)鳥苷和膦甲酸具抗性并且其胸苷激酶活性接近于在治療前的294分離株中觀察到的活性。隨后證實615.8是一種DNA聚合酶突變體。
分析在150cm2T-燒瓶(1.5×106個細胞/瓶)中將BHK-21/C13細胞(ATCC CCL 10)培養(yǎng)2天，該培養(yǎng)瓶中裝有補充了8％(v/v)胎牛血清(FBS，Gibco Canada Inc.)的α-MEM培養(yǎng)基(Gibco Canada Inc.，Burlington，Ontario，Canada)。將細胞用胰蛋白酶消化，然后轉(zhuǎn)移到一塊有24孔的平板的新鮮培養(yǎng)基中，使得每個孔的750μl培養(yǎng)基中含有2.5×105個細胞。將細胞在37℃培養(yǎng)6小時，以便使細胞粘附到該平板上。此后，用補充了0.5％(v/v)FBS(胎牛血清)的500μlα-MEM將細胞洗滌一次，然后用750μl的相同培養(yǎng)基(低血清)培養(yǎng)3天。在忍受這一血清饑餓階段之后，除去該低血清培養(yǎng)基并將細胞在500μl的BBMT中培養(yǎng)2-3小時。[BBMT培養(yǎng)基由P.Braz-eau等人，Proc.Natl.Acacl.Sci.USA，79，7909(1982)描述]。此后，在100μl的BBMT培養(yǎng)基中用HSV-2感染細胞(感染復(fù)數(shù)＝0.02PFU/細胞)。(注意使用的HSV-2是HG-52株，參見Y.Langelierand G.Buttin，J.Gen.Virol.，57，21(1981)；該病毒貯存于-80℃)。在37℃病毒吸收1小時之后，除去培養(yǎng)基并用BBMT洗滌細胞(3×250μl)。將每個孔中的細胞用或不用(對照)適當濃度的溶于200μl BBMT培養(yǎng)基中的檢測試劑一起培養(yǎng)。在37℃培養(yǎng)29小時之后，首先在-80℃冷凍細胞，隨后將細胞凍融，從而收集受感染細胞。在融化的冰片幫助下將每個孔中的細胞從孔表面上刮下來。在完全凍融后，收集細胞懸液并用150μl BBMT的培養(yǎng)基浸洗每個孔。在4℃將該病毒樣品(懸液＋洗液)輕緩地超聲處理4分鐘。通過離心(在4℃以1000×g離心10分鐘)除去細胞碎片。收集上清液，并貯存于-80℃，直到用于測定病毒效價。
將M.Langlois等人，Journal of Biological Standardizati-on，14，201(1986)的比色分析法加以修改后用于測定病毒效價。
更具體地講，在上面描述的同樣方式中，用胰蛋白酶處理BHK-21/C13細胞，并轉(zhuǎn)移到一個96孔微滴平板的新鮮培養(yǎng)基中，以使每個孔中的100μl培養(yǎng)基中含20,000個細胞。將在該制備好的平板中的細胞在37℃培養(yǎng)2小時。在該期間，將病毒樣品凍融，然后將它輕微地超聲處理15秒，并制備該樣品的等級稀釋液(1/5稀釋度50μl的樣本加上200μl的BBMT培養(yǎng)基，用一個多通道的移液管完成連續(xù)稀釋過程)。
上面所述的將BHK-21/C13細胞培養(yǎng)2小時完成之后，用補充了3％(V/V)FBS的α-MEM培養(yǎng)基替代其中的培養(yǎng)基。這時細胞已準備好接受各種不同的病毒樣品稀釋液的感染。將各種稀釋度的等分樣品(50μl)轉(zhuǎn)移至平板的合適孔中。將得到的受感染細胞在37℃培養(yǎng)2天。然后將溶于Hank平衡鹽溶液(pH 7.3，Gibco Canada Inc.)中的0.15％(V/V)中性紅染料溶液50μl加到各個孔中。將該制備好的平板在37℃培養(yǎng)45分鐘。然后從每個孔中吸出培養(yǎng)基，用200μl的Hank平衡鹽溶液將細胞洗滌一次。在洗滌之后，加入0.1MSorensen檸檬酸鹽緩沖液(pH 4.2)和乙醇的1∶1混合物100μl，使染料從細胞中釋放出來。[Sorensen檸檬酸鹽緩沖液按如下方法制備首先，將檸檬酸一水合物(21克)溶于1N NaOH水溶液(200ml)中并加入足夠量的過濾過的水達到1升體積，從而制備了0.1M檸檬酸二鈉溶液。第二步，將0.1M檸檬酸二鈉溶液(61.2ml)與0.1NHCl水溶液(38.8ml)混合，如果必要，將得到的溶液的pH調(diào)整至4.2]。將孔中的混合物接受輕緩振蕩，以確保恰當?shù)鼗旌?。用一個分光光度計平板讀數(shù)器對平板上的孔在540nm處掃描，估計存活細胞數(shù)。以這種方式檢測各種濃度的測試試劑對病毒生長抑制百分率，并且可以計算出導(dǎo)致50％的病毒復(fù)制受抑制的測試試劑的濃度即IC50。
前述分析方法用于對無環(huán)鳥苷和肽衍生物進行單獨的、和它們各種不同的組合物進行估測。由此，可以證明兩種化合物抗去病毒株的比較效果。再者，將這些研究中獲得的結(jié)果應(yīng)用isobole的方法評估和證實兩種化合物的協(xié)同效果；參見J.Suhnel，J.Antivir-al Research，13，23(1990)描述的isobole方法。
對isobole方法的更清楚的描述，該方法需要由兩種測試化合物單獨使用時產(chǎn)生的，以及具有相等效應(yīng)水平的兩種化合物的不同劑量的結(jié)合物產(chǎn)生的實驗數(shù)據(jù)。根據(jù)這種方法，加入選定濃度的主題肽衍生物(IC5，IC10，IC20和IC30)與不同劑量的無環(huán)鳥苷的組合物，估測IC50。在該實驗中，主題肽衍生物的IC5，IC20和IC30以及無環(huán)鳥苷的劑量都來自于前面得到的曲線。利用稱為FIC60(無環(huán)鳥苷)的值(該值是在固定濃度的主題肽衍生物存在的情況下抑制60％的HSV所需的無環(huán)鳥苷的濃度與沒有該肽衍生物存在時所需的濃度的比例)產(chǎn)生等效線圖解法(isobologram)。將它相對于代表肽衍生物的固定濃度與在沒有無環(huán)鳥苷時降低60％的HSV復(fù)制的肽衍生物的濃度之比的值來繪制圖譜。方程式X抽 Y軸 結(jié)果表1列舉了在前面所述的用野生型HSV-1臨床分離株和兩種具無環(huán)鳥苷抗性的HSV-1臨床分離株進行的細胞培養(yǎng)檢測法中僅用無環(huán)鳥苷和本實施例的主題肽進行檢測時獲得的結(jié)果。
表1分離株分離株分離株分離株化合物 294 615.8615.9IC50(μM) IC50(μM)IC50(μM)無環(huán)鳥苷 1.1 1955主題肽衍生物 2.0 2.0 6.2表1所述結(jié)果證明了結(jié)構(gòu)式1所述化合物具有抗野生型HSV-1的活性，并且這些化合物對具無環(huán)鳥苷抗性的HSV-1，例如POL突變株以及TK缺陷型突變株具有同樣的抵抗效果；而用無環(huán)鳥苷抵抗這些突變株時其效率降低很多(比上述效率低20-40倍)。
下面的表II，III和IV表示根據(jù)用野生型HSV-1臨床分離株和兩種具無環(huán)鳥苷抗性HSV-1臨床分離株進行的前面所述細胞培養(yǎng)檢測法，估測無環(huán)鳥苷和本實施例的主題肽衍生物的組合物時獲得的結(jié)果。
表II抗病毒活性協(xié)同增效研究分離株294(治療前臨床分離株)主題肽衍生物 與主題肽衍生物組合的固定濃度 時無環(huán)鳥苷的IC50(1)(μM)(μM)0.3 0.850.5 0.700.7 0.350.9 0.301.0 0.301.2 0.221.4 0.101.6 0.13
表III抗病毒活性協(xié)同增效研究分離株615.8(ACVIPOL治療分離株)主題肽衍生物與主題肽衍生物組合的固定濃度 時無環(huán)鳥苷的IC50(2)(μM) (μM)0.315.00.513.00.7 7.00.9 8.01.0 5.31.2 5.01.4 1.71.6 2.4
表IV抗病毒活性協(xié)同增效研究分離株615.9(ACVITK治療分離株)主題肽衍生物 與主題肽衍生物組合的固定濃度 時無環(huán)鳥苷的IC50(2)(μM) (μM)1.033.02.017.03.0 5.54.0 5.65.0 2.06.0 0.97.0 ＜0.028.0 ＜0.02關(guān)于前面四個表中的注釋·IC50值沒有針對溶解性進行校正。
·所有貯存溶液在使用之前都在4℃以100,000×g進行超離心30分鐘。
·該標題肽衍生物在20μM時的溶解度是85％。
·該標題肽衍生物的細胞毒性是89μM(該值未進行校正)。
(1)在左邊欄中顯示的相應(yīng)的固定濃度的主題肽衍生物存在下，當無環(huán)鳥苷的濃度為7.6×10/-4至1.5×101范圍內(nèi)時產(chǎn)生的劑量應(yīng)答曲線上獲得IC50。
(2)在左邊欄中顯示的相應(yīng)的固定濃度的標題肽衍生物存在下，當無環(huán)鳥苷的濃度為1.5×10-4至1.5×102范圍內(nèi)時產(chǎn)生的劑量應(yīng)答曲線上獲得的IC50。
表II，III和IV顯示，當將兩種試劑結(jié)合使用時，結(jié)構(gòu)式1的肽能夠加強無環(huán)鳥苷抵抗野生型HSV-1和具無環(huán)鳥苷抗性的HSV-1突變株的活性。該結(jié)果顯示當肽與無環(huán)鳥苷濃度比增加時，無環(huán)鳥苷的IC50成比例降低。
附圖1是圖解表示應(yīng)用isobole方法研究時獲得的陽性結(jié)果(協(xié)同增效)，該研究是用無環(huán)鳥苷和本實施例的標題肽，以及亞分離株615.8(ACVγPOL臨床分離株)進行的。
同樣，附圖2是圖解表示在用無環(huán)鳥苷和本實施例的標題肽，以及亞分離株615.9(ACVγTK)進行的研究中獲得的陽性結(jié)果。
權(quán)利要求
1.一種肽衍生物在給哺乳動物治療具無環(huán)鳥苷抗性的單純性皰疹病毒感染中的應(yīng)用，其中，所述肽衍生物是結(jié)構(gòu)式1表示的化合物或其治療學上可接受的鹽A-B-D-CH2CH{CH2C(O)R1}C(O)-NHCH{CR2(R3)COOH}C(O)-E1其中A是苯乙?；?，苯丙?；?，(4-氨基苯基)丙酰基，(4-氟苯基)丙?；?，(4-羥基苯基)丙?；?，(4-甲氧基苯基)丙?；?，2-(苯甲基)-3-苯丙酰基，2-{(4-氟苯基)甲基}-3-(4-氟苯基)丙酰基，2-{(4-甲氧基苯基)甲基}-3-(4-甲氧基苯基)丙酰基或芐基氨基羰基；B是(N-Me)-Val或(N-Me)-Ile；或A和B一起形成一種飽和的烷基氨基羰基，它選自于下列基團丁基氨基羰基，1-甲基乙基氨基羰基，1-甲基丙基氨基羰基，1-乙基丙基氨基羰基，1，1-二甲基乙基丁基氨基羰基，1-乙基丁基氨基羰基，1-丙基丁基氨基羰基，1-乙基戊基氨基羰基，1-丁基戊基氨基羰基，1-乙基丁基氨基羰基，2-乙基戊基氨基羰基，1-甲基-1-丙基丁基氨基羰基，1-乙基-1-丙基丁基氨基羰基，1，1-二丙基丁基氨基羰基，(1-丙基環(huán)戊基)氨基羰基以及(1-丙基環(huán)己基)氨基羰基；D是Val，Ile或Tbg；R1是1-甲基乙基，1，1-二甲基乙基，1-甲基丙基，1，1-二甲基丙基，2，2-二甲基丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，1-甲基環(huán)戊基，NR4R5其中R4是氫或低級烷基，而R5是低級烷基，或者R4和R5與其結(jié)合的氮原子一起形成吡咯烷基，哌啶子基，嗎啉代或者4-甲基-1-哌嗪基；R2是氫，R3是甲基，乙基，1-甲基乙基，1，1-二甲基乙基，丙基，2-丙烯基或芐基，攜帶R2和R3的碳原子具有(R)-構(gòu)型，或者R2和R3各自單獨是甲基或乙基，或者R2和R3與其結(jié)合的碳原子一起形成環(huán)丁基，環(huán)戊基或環(huán)己基；而E是NHR6其中R6是2-甲基丙基，2，2-二甲基丙基，1(R)，2，2-三甲基丙基，1，1，2，2-四甲基丙基，1(R)-乙基-2，2-二甲基丙基，2-(R，S)-甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3，3-二甲基丁基，1(R)，2，2-三甲基丁基，1(R)，3，3-三甲基丁基，2-乙基丁基，2，2-二乙基丁基，2-乙基-1(R)-甲基丁基，2-乙基-2-甲基丁基，1(R)-乙基-3，3-二甲基丁基，2，2-二甲基戊基，順式或反式-2-甲基環(huán)己基，2，2-二甲基環(huán)己基或環(huán)己基甲基；或者E是NHCH(R7)-Z其中攜帶R7的碳原子具有(S)-構(gòu)型，R7是1，1-二甲基乙基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，2，2-二甲基丙基或環(huán)己基甲基，以及Z是CH2OH，C(O)OH，C(O)NH2或C(O)OR8其中R8是甲基，乙基或丙基。
2.如權(quán)利要求1所述肽衍生物的應(yīng)用，其中，該肽衍生物是結(jié)構(gòu)式1的化合物或其治療學上可接受的鹽，其中A是苯丙?；?，2-(苯甲基)-3-苯丙?；蚱S基氨基羰基；B是(N-Me)Val；D是Tbg；R1是1-甲基乙基，1，1-二甲基乙基，1-甲基丙基，1，1-二甲基丙基，2，2-二甲基丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基或者1-甲基環(huán)戊基；R2是氫，R3是甲基，乙基，1-甲基乙基，丙基或芐基，以及攜帶R2和R3的碳原子具有(R)構(gòu)型，或者R2和R3各自單獨是甲基或乙基，或者R2和R3與其結(jié)合的碳原子一起形成環(huán)丁基，環(huán)戊基或環(huán)己基；E是NHR6，其中R6是2，2-二甲基丙基，1(R)，2，2-三甲基丙基，1(R)-乙基-2，2-二甲基丙基，2，2一二甲基丁基或1(R)-乙基-3，3-二甲基丁基或者E是NHCH(R7)-Z其中攜帶R7的碳原子具有(S)構(gòu)型，R7是2，2-二甲基丙基，Z是CH2OH，C(O)OH，C(O)NH2或C(O)OR8，其中R8是甲基，乙基或丙基。
3.如權(quán)利要求1所述肽衍生物的應(yīng)用，其中該肽衍生物是結(jié)構(gòu)式1所述化合物或其治療學上可接受的鹽，其中A和B一起形成一種飽和的烷基氨基羰基，它選自于下組1-乙基丙基氨基羰基，1-乙基丁基氨基羰基，1-丙基丁基氨基羰基，2-乙基戊基氨基羰基，1-甲基-1-丙基丁基氨基羰基，1-乙基-1-丙基丁基氨基羰基，1，1-二丙基丁基氨基羰基以及(1-丙基環(huán)戊基)氨基羰基；D是Tbg；R1是1-甲基乙基，1，1-二甲基乙基，1-甲基丙基，1，1-二甲基丙基，2，2-二甲基丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基或1-甲基環(huán)戊基；R2是氫和R3是甲基，乙基，1-甲基乙基，丙基或芐基，攜帶R2和R3的碳原子具有(R)-構(gòu)型，或者R2和R3各自單獨是甲基或乙基，或者R2和R3與其結(jié)合的碳原子-起形成環(huán)丁基，環(huán)戊基或環(huán)己基；E是NHR6其中R6是2，2-二甲基丙基，1(R)，2，2-三甲基丙基，1(R)-乙基-2，2-二甲基丙基，2，2一二甲基丁基或者1(R)-乙基-3，3-二甲基丁基或者E是NHCH(R7)-Z，其中攜帶R7的碳原子具有(S)構(gòu)型，R7是2，2-二甲基丙基，Z是CH2OH，C(O)OH，C(O)NH2或者C(O)OR8，其中R8是甲基，乙基或丙基。
4.權(quán)利要求1所述的肽衍生物的應(yīng)用，其中該肽衍生物選自下組PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)-CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeucinol，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeucinol，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，和EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3.
5.權(quán)利要求1所述肽衍生物，或其治療學上可接受的鹽與一種抗病毒核苷類似物，或其治療學上可接受的鹽的組合物在治療哺乳動物的具無環(huán)鳥苷抗性的單純性皰疹病毒感染中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物的應(yīng)用，其中該肽衍生物是一種結(jié)構(gòu)式1的化合物或其治療學上可接受的鹽，其中A是苯丙?；?，2-(苯甲基)-3-苯丙酰基或芐基氨基羰基；B是(N-Me)Val；D是Tbg；R1是1-甲基乙基，1，1-二甲基乙基，1-甲基丙基，1，1-二甲基丙基，2，2-二甲基丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基或1-甲基環(huán)戊基；R2是氫和R3是甲基，乙基，1-甲基乙基，丙基或芐基，攜帶R2和R3的碳原子具有(R)-構(gòu)型，或者R2和R3各自單獨是甲基或乙基，或者R2和R3與其結(jié)合的碳原子一起形成環(huán)丁基，環(huán)戊基或環(huán)己基；以及E是NHR6其中R6是2，2-二甲基丙基，1(R)，2，2-三甲基丙基，1(R)-乙基-2，2-二甲基丙基，2，2-二甲基丁基或1(R)-乙基-3，3-二甲基丁基或者E是NHCH(R7)-Z，其中攜帶R7的碳原子具有(S)構(gòu)型，R7是2，2-二甲基丙基，Z是CHOH，C(O)OH，C(O)NH或者C(O)OR8其中R8是甲基，乙基或丙基。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述組合物的應(yīng)用，其中該肽衍生物是結(jié)構(gòu)式1的化合物或其治療學上可接受的鹽，該結(jié)構(gòu)式1中A和B一起形成一種飽和的烷基氨基羰基，它選自于下組1-乙基丙基氨基羰基，1-乙基丁基氨基羰基，1-丙基丁基氨基羰基，2-乙基戊基氨基羰基，1-甲基-1-丙基丁基氨基羰基，1-乙基-1-丙基氨基羰基，1，1-二丙基丁基氨基羰基以及(1-丙基環(huán)戊基)氨基羰基；D是Tbg；R1是1-甲基乙基，1，1-二甲基乙基，1-甲基丙基，1，1-二甲基丙基，2，2-二甲基丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基或者1-甲基環(huán)戊基；R2是氫和R3是甲基，乙基，1-甲基乙基，丙基或芐基，以及攜帶R2和R3的碳原子具有(R)-構(gòu)型，或者R2和R3各自單獨是甲基或乙基，或者R2和R3與其結(jié)合的碳原子一起形成環(huán)丁基，環(huán)戊基或環(huán)己基；E是NHR6其中R6是2，2-二甲基丙基，1(R)，2，2-三甲基丙基，1(R)-乙基-2，2-二甲基丙基，2，2-二甲基丁基或者1(R)-乙基-3，3-二甲基丁基或者E是NHCH(R7)-Z其中攜帶R7的碳原子具有(S)構(gòu)型，R7是2，2-二甲基丙基，Z是CH2OH，C(O)OH，C(O)NH2或者C(O)OR8，其中R8是甲基，乙基或丙基。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述組合物的應(yīng)用，其中該肽衍生物選自下組PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)-CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeucinol，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeucinol，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，和EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3.
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述組合物的應(yīng)用，其中該核苷類似物是結(jié)構(gòu)式2的化合物或其治療學上可接受的鹽，結(jié)構(gòu)式2中R9是氫，羥基或氨基。
10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物的應(yīng)用，其中該核苷類似物選自下組阿糖腺苷，碘脫氧尿苷，三氟尿苷，丙氧鳥苷，edoxu-dine，broavir，fiacitabine，penciclovir，famciclovir和roc-iclovir。
11.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物的應(yīng)用，其中該肽衍生物選自下組PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)-CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeucinol，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeucinol，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，和EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3；以及其中該核苷類似物是無環(huán)鳥苷。
12.一種肽衍生物在制備一種藥劑中的應(yīng)用，所述藥劑用于治療哺乳動物的具無環(huán)鳥苷抗性的單純性皰疹病毒感染，其中該肽衍生物是結(jié)構(gòu)式1的化合物或其治療學上可接受的鹽，結(jié)構(gòu)式(1)為A-B-D-CH2CH{CH2C(O)R1}C(O)-NHCH{CR2(R3)COOH}C(O)-E1其中A是苯乙酰基，苯丙?；?，(4-氨基苯基)丙?；?，(4-氟苯基)丙?；?4-羥基苯基)丙?；?，(4-甲氧基苯基)-丙?；?，2-(苯甲基)-3-苯丙?；?-{(4-氟苯基)甲基}-3-(4-氟苯基)丙?；?，2-{(4-甲氧基苯基)甲基}-3-(4-甲氧基苯基)丙?；蚱S基氨基羰基；B是(N-Me)-Val或(N-Me)-Ile；或A和B一起形成一種飽和的烷基氨基羰基，它選自于下列基團丁基氨基羰基，1-甲基乙基氨基羰基，1-甲基丙基氨基羰基，1-乙基丙基氨基羰基，1，1-二甲基丁基氨基羰基，1-乙基丁基氨基羰基，1-丙基丁基氨基羰基，1-乙基戊基氨基羰基，1-丁基戊基氨基羰基，1-乙基丁基氨基羰基，2-乙基戊基氨基羰基，1-甲基-1-丙基丁基氨基羰基，1-乙基-1-丙基丁基氨基羰基，1，1-二丙基丁基氨基羰基，(1-丙基環(huán)戊基)氨基羰基以及(1-丙基環(huán)己基)氨基羰基；D是Val，Ile或Tbg；R1是1-甲基乙基，1，1-二甲基乙基，1-甲基丙基，1，1-二甲基丙基，2，2-二甲基丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，1-甲基環(huán)戊基，NR4R5其中R4是氫或低級烷基，而R5是低級烷基，或者R4和R5與其結(jié)合的氮原子一起形成吡咯烷基，哌啶子基，嗎啉代或者4-甲基-1-哌嗪基；R2是氫，R3是甲基，乙基，1-甲基乙基，1，1-二甲基乙基，丙基，2-丙烯基或芐基，攜帶R2和R3的碳原子具有(R)構(gòu)型，或者R2和R3各自單獨是甲基或乙基，或者R2和R3與其結(jié)合的碳原子一起形成環(huán)丁基，環(huán)戊基，或環(huán)己基；而E是NHR6其中R6是2-甲基丙基，2，2-二甲基丙基，1(R)，2，2-三甲基丙基，1，1，2，2-四甲基丙基，1(R)-乙基-2，2-二甲基丙基，2(R，S)-甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3，3-二甲基丁基，1(R)，2，2-三甲基丁基，1(R)，3，3-三甲基丁基，2-乙基丁基，2，2-二乙基丁基，2-乙基-1(R)-甲基丁基，2-乙基-2-甲基丁基，1(R)-乙基-3，3-二甲基丁基，2，2-二甲基戊基，順式或反式-2-甲基環(huán)己基，2，2-二甲基環(huán)己基或環(huán)己基甲基；或者E是NHCH(R7)-Z其中攜帶R7的碳原子具有(S)構(gòu)型，R7是1，1-二甲基乙基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，2，2-二甲基丙基或環(huán)己基甲基，以及Z是CH2OH，C(O)OH，C(O)NH2或C(O)OR8其中R8是甲基，乙基或丙基。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的肽衍生物的應(yīng)用，其中該肽衍生物是結(jié)構(gòu)式1的化合物或其治療學上可接受的鹽，結(jié)構(gòu)式1中A是苯丙?；?-(苯甲基)-3-苯丙?；蚱S基氨基羰基；B是(N-Me)Val；D是Tbg；R1是1-甲基乙基，1，1-二甲基乙基，1-甲基丙基，1，1-二甲基丙基，2，2-二甲基丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基或1-甲基環(huán)戊基；R2是氫，R3是甲基，乙基，1-甲基乙基，丙基或芐基，以及攜帶R2和R3的碳原子具有(R)構(gòu)型，或者R2和R3各自單獨是甲基或乙基，或者R2和R3與其結(jié)合的碳原子一起形成環(huán)丁基，環(huán)戊基或環(huán)己基；E是NHR6，其中R6是2，2-二甲基丙基，1(R)，2，2-三甲基丙基，1(R)-乙基-2，2-二甲基丙基，2，2-二甲基丁基或1(R)-乙基-3，3-二甲基丁基或者E是NHCH(R7)-Z，其中攜帶R7的碳原子具有(S)構(gòu)型，R7是2，2-二甲基丙基，Z是CH2OH，C(O)OH，C(O)NH2或C(O)OR8其中R8是甲基，乙基或丙基。
14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的肽衍生物的應(yīng)用，其中該肽衍生物是結(jié)構(gòu)式1的化合物或其藥物學上可接受的鹽，其中結(jié)構(gòu)式1中A和B一起形成一種飽和的烷基氨基羰基，它選自于下組1-乙基丙基氨基羰基，1-乙基丁基氨基羰基，1-丙基丁基氨基羰基，2-乙基戊基氨基羰基，1-甲基-1-丙基丁基氨基羰基，1-乙基-1-丙基丁基氨基羰基，1，1-二丙基丁基氨基羰基以及(1-丙基環(huán)戊基)氨基羰基；D是Tbg；R1是1-甲基乙基，1，1-二甲基乙基，1-甲基丙基，1，1-二甲基丙基，2，2-二甲基丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基或1-甲基環(huán)戊基；R2是氫和R3是甲基，乙基，1-甲基乙基，丙基或芐基，攜帶R2和R3的碳原子具有(R)-構(gòu)型，或者R2和R3各自單獨是甲基或乙基，或者R2和R3與其結(jié)合的碳原子一起形成環(huán)丁基，環(huán)戊基或環(huán)己基；E是NHR6其中R6是2，2-二甲基丙基，1(R)，2，2-三甲基丙基，1(R)-乙基-2，2-二甲基丙基，2，2-二甲基丁基，或者1(R)-乙基-3，3-二甲基丁基或者E是NHCH(R7)-Z，其中攜帶R7的碳原子具有(S)構(gòu)型，R7是2，2-二甲基丙基，Z是CH2OH，C(O)OH，C(O)NH2或者C(O)OR8，其中R8是甲基，乙基或丙基。
15.根據(jù)權(quán)利要求12所述肽衍生物的應(yīng)用，其中該肽衍生物選自于下組PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)-CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeucinol，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeucinol，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，和EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3.
16.權(quán)利要求12所述肽衍生物或其治療學上可接受鹽和一種抗病毒核苷類似物，或其治療學上可接受的鹽的組合物，用于制備一種藥劑的應(yīng)用，該藥劑用于治療哺乳動物的具無環(huán)鳥苷抗性的單純性皰疹病毒感染。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的組合物的應(yīng)用，其中該肽衍生物是結(jié)構(gòu)式1的肽衍生物或其治療學上可接受的鹽，結(jié)構(gòu)式1中A是苯丙?；?，2-(苯甲基)-3-苯丙?；蚱S基氨基羰基；B是(N-Me)Val；D是Tbg；R1是1-甲基乙基，1，1-二甲基乙基，1-甲基丙基，1，1-二甲基丙基，2，2-二甲基丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基或1-甲基環(huán)戊基；R2是氫和R3是甲基，乙基，1-甲基乙基，丙基或芐基，攜帶R2和R3的碳原子具有(R)-構(gòu)型，或者R2和R3各自獨立是甲基或乙基，或者R2和R3與其結(jié)合的碳原子一起形成環(huán)丁基，環(huán)戊基或環(huán)己基；以及E是NHR6其中R6是2，2-二甲基丙基，1(R)，2，2-三甲基丙基，1(R)-乙基-2，2-二甲基丙基，2，2-二甲基丁基或1(R)-乙基-3，3-二甲基丁基或者E是NHCH(R7)-Z其中攜帶R7的碳原子具有(S)構(gòu)型，R7是2，2-二甲基丙基，Z是CH2OH，C(O)OH，C(O)NH2或者C(O)OR8，其中R8是甲基，乙基或丙基。
18.根據(jù)權(quán)利要求16所述組合物的應(yīng)用，其中該肽衍生物是結(jié)構(gòu)式1的化合物或其治療學上可接受的鹽，結(jié)構(gòu)式1中A和B一起形成一種飽和的烷基氨基羰基，它選自于下組1-乙基丙基氨基羰基，1-乙基丁基氨基羰基，1-丙基丁基氨基羰基，2-乙基戊基氨基羰基，1-甲基-1-丙基丁基氨基羰基，1-乙基-1-丙基氨基羰基，1，1-二丙基丁基氨基羰基以及(1-丙基環(huán)戊基)氨基羰基；D是Tbg；R1是1-甲基乙基，1，1-二甲基乙基，1-甲基丙基，1，1-二甲基丙基，2，2-二甲基丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基或者1-甲基環(huán)戊基；R2是氫和R3是甲基，乙基，1-甲基乙基，丙基或芐基，以及攜帶R2和R3的碳原子具有(R)構(gòu)型，或者R2和R3各自獨立是甲基或乙基，或者R2和R3與其結(jié)合的碳原子一起形成環(huán)丁基，環(huán)戊基或環(huán)己基；E是NHR6，其中R6是2，2-二甲基丙基，1(R)，2，2-三甲基丙基，1(R)-乙基-2，2-二甲基丙基，2，2-二甲基丁基或者1(R)-乙基-3，3-二甲基丁基或者E是NHCH(R7)-Z其中攜帶R7的碳原子具有(S)構(gòu)型，R7是2，2-二甲基丙基，Z是CH2OH，C(O)OH，C(O)NH2或者C(O)OR8，其中R8是甲基，乙基或丙基。
19.根據(jù)權(quán)利要求16所述的組合物的應(yīng)用，其中該肽衍生物選自下組PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)-CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeucinol，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeucinol，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，和EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3.
20.根據(jù)權(quán)利要求16所述組合物的應(yīng)用，其中該核苷類似物是結(jié)構(gòu)式2的化合物或其治療學上可接受的鹽，結(jié)構(gòu)式2中R9是氫，羥基或氨基。
21.根據(jù)權(quán)利要求16所述組合物的應(yīng)用，其中該核苷類似物選自下組阿糖腺苷，碘脫氧尿苷，三氟尿苷，丙氧鳥苷，edoxudi-ne，broavir，fiacitabine，penciclovir，famciclovir和rocic-lovir。
22.根據(jù)權(quán)利要求16所述組合物的應(yīng)用，其中該肽衍生物選自下組PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)-CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeucinol，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeucinol，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，和EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3；其中該核苷類似物是無環(huán)鳥苷。
23.一種治療具無環(huán)鳥苷抗性的單純性皰疹病毒感染的藥物組合物，包括作為活性成分的結(jié)構(gòu)式(1)的肽衍生物，或其治療學上可接受的鹽以及一種藥物學上可接受載體A-B-D-CH2CH{CH2C(O)R1}C(O)-NHCH{CR2(R3)COOH}C(O)-E1其中A是苯乙酰基，苯丙?；?，(4-氨基苯基)丙酰基，(4-氟苯基)丙?；?，(4-羥基苯基)丙?；?，(4-甲氧基苯基)-丙?；?，2-(苯甲基)-3-苯丙?；?-{(4-氟苯基)甲基}-3-(4-氟苯基)丙?；?-{(4-甲氧基苯基)甲基}-3-(4-甲氧基苯基)丙?；蚱S基氨基羰基；B是(N-Me)-Val或(N-Me)-Ile；或A和B一起形成一種飽和的烷基氨基羰基，它選自于下列基團丁基氨基羰基，1-甲基乙基氨基羰基，1-甲基丙基氨基羰基，1-乙基丙基氨基羰基，1，1-二甲基乙基丁基氨基羰基，1-乙基丁基氨基羰基，1-丙基丁基氨基羰基，1-乙基戊基氨基羰基，1-丁基戊基氨基羰基，1-乙基丁基氨基羰基，2-乙基戊基氨基羰基，1-甲基-1-丙基丁基氨基羰基，1-乙基-1-丙基丁基氨基羰基，1，1-二丙基丁基氨基羰基，(1-丙基環(huán)戊基)氨基羰基，以及(1-丙基環(huán)己基)氨基羰基；D是Val，Ile或Tbg；R1是1-甲基乙基，1，1-二甲基乙基，1-甲基丙基，1，1-二甲基丙基，2，2-二甲基丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，1-甲基環(huán)戊基，NR4R5其中R4是氫或低級烷基，而R5是低級烷基，或者R4和R5與其結(jié)合的氮原子一起形成吡咯烷基，哌啶子基，嗎啉代或者4-甲基-1-哌嗪基；R2是氫，R3是甲基，乙基，1-甲基乙基，1，1-二甲基乙基，丙基，2-丙烯基或芐基，攜帶R2和R3的碳原子具有(R)-構(gòu)型，或者R2和R3各自獨立地是甲基或乙基，或者R2和R3與其結(jié)合的碳原子一起形成環(huán)丁基，環(huán)戊基，或環(huán)己基；而E是NHR6其中R6是2-甲基丙基，2，2-二甲基丙基，1(R)，2，2-三甲基丙基，1，1，2，2-四甲基丙基，1(R)-乙基-2，2-二甲基丙基，2-(R，S)-甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3，3-二甲基丁基，1(R)，2，2-三甲基丁基，1(R)，3，3-三甲基丁基，2-乙基丁基，2，2-二乙基丁基，2-乙基-1(R)-甲基丁基，2-乙基-2-甲基丁基，1(R)-乙基-3，3-二甲基丁基，2，2-二甲基戊基，順式或反式-2-甲基環(huán)己基，2，2-二甲基環(huán)己基或環(huán)己基甲基；或者E是NHCH(R7)-Z其中攜帶R7的碳原子具有(S)構(gòu)型，R7是1，1-二甲基乙基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，2，2-二甲基丙基或環(huán)己基甲基，以及Z是CH2OH，C(O)OH)，C(O)NH2或者C(O)OR8其中R8是甲基，乙基或丙基。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的藥物組合物，其中該活性成分包括權(quán)利要求23定義的結(jié)構(gòu)式1的肽衍生物或其治療學上可接受的鹽，與一種抗病毒核苷類似物或其治療學上可接受的鹽組成的組合物，用于治療具無環(huán)鳥苷抗性的單純性皰疹病毒感染。
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的藥物組合物，其中該肽衍生物選自下組PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)-CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeucinol，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeucinol，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，和Etpr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3；其中該核苷類似物是無環(huán)鳥苷。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療哺乳動物的具無環(huán)鳥苷抗性的皰疹感染的方法。該方法包括給受感染哺乳動物施用一種肽衍生物或該肽衍生物和一種抗病毒核苷的組合物。本方法中使用的肽衍生物其代表通式為A-B-D-CH
文檔編號A61P43/00GK1126438SQ94192662
公開日1996年7月10日 申請日期1994年4月29日 優(yōu)先權(quán)日1993年5月3日
發(fā)明者詹姆斯·G·查弗里斯, 羅伯特·德齊爾 申請人:比奧-梅加/貝林格爾·英格海姆研究公司