專利名稱：超聲回波記錄儀用液載懸浮體之充氣聚合物微氣球的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及由有機(jī)聚合物氣囊封入而充有空氣或其它氣體之微囊或微氣球，它們可以分散或懸浮于水介質(zhì)中并以此形式使用于口服、直腸和尿道施用的醫(yī)療操作，或者注射于人或動(dòng)物體內(nèi)，以作超聲回波記錄和其它醫(yī)療操作之用。
本發(fā)明亦提供了干態(tài)的上述微氣球的制法。干態(tài)微氣球是可以即時(shí)分散于水介質(zhì)載體中從而得到其性質(zhì)比現(xiàn)有類似產(chǎn)品優(yōu)良之懸浮液。因此，隨時(shí)可以施用之液載微氣球懸浮體同樣是本發(fā)明之一部分。
眾所周知，懸浮于液體中的空氣或氣體之微體或微球，例如，微氣泡或微氣球之類的微球體，是作回波記錄的特別有效之超聲波反射體。在本說明書中，術(shù)語“微氣泡”專指液載體中懸浮狀的空氣或氣體微球體，這通常是由于在液載體中以分散的形式引入空氣或其它氣體所造成的。在液載體中最好還含有表面活性劑，以控制表面性質(zhì)和氣泡的穩(wěn)定性。在微氣泡中，氣-液界面基本上由該液載體之松結(jié)合的分子所組成。術(shù)語“微囊”或“微氣球”則更可取地指，空氣或氣體之微體是由不同于該液載體之分子構(gòu)成其實(shí)質(zhì)界面或氣囊者。也即，具有聚合物膜壁者。微氣泡和微氣球兩者通常都可用作超聲波對(duì)照劑。例如，把于液載體中氣體微氣泡或微氣球(大小范圍為0.5至10μm)之懸浮液注射到人或動(dòng)物體血液中，將大大增強(qiáng)超聲回波記錄之成像效果，從而幫助內(nèi)部器官之顯形。脈管及內(nèi)部器字之成像能有力地幫助醫(yī)療診斷，例如查明心血管和其它疾病。
在可注射的液載體中，適用于回波記錄的微氣泡懸浮劑之形成，可以通過使一種在壓力下溶于此液體的氣體釋放出來，或者通過產(chǎn)生氣態(tài)物質(zhì)的化學(xué)反應(yīng)，或者通過在此液體中摻入其中吸收或吸附空氣或氣體的可溶或不溶性固體物質(zhì)而引起。
例如，美國專利US-A-4，446，442(Schering)揭示了一系列生產(chǎn)減菌注射載體液中氣體微氣泡懸浮劑的技術(shù)，它使用(a)表面活性劑(tenside)在載體液(水的)中的溶液和(b)用作穩(wěn)定劑的增粘劑溶液。為了產(chǎn)生氣泡，其揭示的技術(shù)包括，迫使(a)、(b)和空氣的混合物以高速度通過一個(gè)小孔;或者把(a)與一種生理學(xué)上可接受的氣體在使用之前不久噴入(b)，或者在(a)中加一種酸，并在(b)中加一種碳酸鹽，兩種組分恰在使用之前混在一起，于是酸同碳酸鹽起反應(yīng)而產(chǎn)生二氧化碳?xì)馀?或者向貯器中(a)和(b)的混合物中加入超壓氣體，當(dāng)此混合物使用于注射時(shí)，所說的氣體便釋放成為微氣泡。
存在于微氣泡的問題之一是，通常它們都是短暫的，甚至有穩(wěn)定劑存在也是如此。因此，歐洲專利EP-A-131，540(Schering)中揭示了一種微氣泡懸浮劑的制備方法，其中以一種穩(wěn)定化的注射用載液，例如生理鹽水，或者諸如麥芽糖、葡萄糖、乳糖或半乳糖之類的糖的溶液，與含有截留空氣的同一種類之固態(tài)微粒(大小范圍0.1至1μm)相混合。為了增進(jìn)氣泡在載液中之懸浮，液態(tài)和固態(tài)這兩種組份在無菌條件下互相拌合數(shù)秒鐘，而一旦懸浮液形成，便必須立即使用，就是說必須在5至10分鐘內(nèi)注射以進(jìn)行回波記錄測量;實(shí)際上，由于氣泡是很快消失的，所以其濃度在此時(shí)間之后變得太低而不能應(yīng)用。
用于回波記錄之微氣泡在注射之后的另一個(gè)問題是氣泡大小問題。如通常所認(rèn)為，氣泡通過小血管轉(zhuǎn)移流暢之容許大小其范圍從約0.5至10μm;如若氣泡比較大，則有凝塊及接連而來的栓塞之危險(xiǎn)。例如，在美國專利US-A-4，446，442(Schering)中揭示的氣泡懸浮劑中，抵有大約50%之微氣泡是小于40至50μm的，以致使這樣的懸浮劑不適合許多回波記錄之用。其制備方法是，以諸如卵磷酯、脂肪酸酯和醚，以及脂肪族醇等表面活性劑之水溶液，同聚氧乙烯以及聚氧乙烯化的多元醇(如山梨糖醇、乙二醇和丙三醇)、膽甾醇、或聚氧乙烯-聚氧丙烯聚合物一起，與提高粘度及穩(wěn)定性的化合物，諸如單或多糖(葡萄糖、乳糖、蔗糖、山梨糖醇);多元醇，例如丙三醇、聚乙二醇;以及多肽，諸如蛋白質(zhì)、明膠、氧化聚明膠以及血漿蛋白，一起進(jìn)行劇烈的搖動(dòng)。
與此對(duì)照，已經(jīng)開發(fā)了微囊或微氣球技術(shù)，以圖消除某些或上述之缺陷。如上所述，微氣泡只具有非實(shí)質(zhì)或逐漸消失的氣囊，即，它們僅是由液壁所包圍，而其表面張力是借助表面活性劑改善的;然而微氣球或微氣囊則具有由不同于載體本身之實(shí)質(zhì)性物質(zhì)構(gòu)成的氣囊，例如具有一定強(qiáng)度之聚合物膜構(gòu)成之氣囊。換句話說，它們是固體物質(zhì)的微球體，其中的氣體或空氣或多或少是被密封起來的。
例如，美國專利US-A-4，276，885(Tickner等)揭示了用于提高超聲成像效果之使用表面泥的含氣微囊，該表面膜包含了許多無毒且非抗原的有機(jī)分子。在揭示的一個(gè)實(shí)施例中，這些微囊具有抗凝聚的明膠膜，它們的優(yōu)選大小為5-10μm。據(jù)稱，這些微氣泡的膜對(duì)于作回波記錄儀測量來說是足夠穩(wěn)定的;但是，在過了一段時(shí)間之后，截留其中的空氣據(jù)說將溶解于血液之中，而這氣泡也將逐漸消失，這可能是由于明膠逐漸溶解所致。使用之前，微囊被保存明膠溶液中，在那里它們可以穩(wěn)定地貯存。但是，在懸浮劑被用來注射的時(shí)候，明膠須進(jìn)行加熱融化才成為液體。
美國專利US-A-4，718，433(Feinstein)中揭示了不含明膠而改善貯藏穩(wěn)定性的微球體。這種微球體是由粘蛋白例如血清的蛋白5%溶液進(jìn)行聲處理(5至30仟赫)而制得的，其大小在2-20μm直徑范圍，以2-4μm為主。微球體的穩(wěn)定作用是由于成膜蛋白質(zhì)經(jīng)聲處理之后的變性處理，例如使用加熱或化學(xué)手段，如與甲醛或戊二醛進(jìn)行反應(yīng)。據(jù)說由該技術(shù)制得穩(wěn)定微球體的濃度，約為8×106/毫升是2-4μm大小范圍的，約106/毫升是4-5μm范圍的，而5-6μm范圍的小于5×105/毫升。這些微球體的穩(wěn)定時(shí)間據(jù)稱是48小時(shí)或更長，從而使它們?cè)陟o脈內(nèi)注射之后可以方便地進(jìn)行左心成像，例如，經(jīng)聲處理之白蛋白微氣泡注射入外表靜脈是能夠透過肺通道的，這就導(dǎo)致左心室腔以及心肌組織在超聲波心動(dòng)圖上的不透明。
近來用于超聲回波記錄注射用微氣球之進(jìn)一步改良已于歐洲專利申請(qǐng)EP-A-324，938(Widder)中報(bào)道。該文獻(xiàn)揭示高濃度(大于108)顆粒小于10μm空氣充填蛋白質(zhì)邊界的微球體其使用期限為數(shù)月以上。這些微氣球在水中的懸浮體是把可變性蛋白質(zhì)溶液經(jīng)超聲空穴作用而制得的，例如，使用人體血清白蛋白。該操作也導(dǎo)致成膜蛋白質(zhì)一定程度起泡沫并引入其隨后的加熱硬化。據(jù)稱，其它蛋白質(zhì)諸如血紅蛋白和膠原蛋白也是很合宜的。
再新近M.A.Wheatley等人在“Biomaterials”1990年第11期，713-717頁，報(bào)導(dǎo)了以藻朊酸鹽離子移變的膠凝作用來制備聚合物涂敷之微球體的方法。該文獻(xiàn)提到數(shù)種技術(shù)制備這種微囊;一個(gè)例子是，迫使藻朊酸鹽溶液通過一個(gè)在空氣射流中的小針，噴霧而產(chǎn)生充空氣之初生囊，然后在1.2%CaCl2水溶中進(jìn)行硬化。第二個(gè)例子包括氣液共噴，借助一個(gè)三筒體噴頭，引入氣泡成為初生的囊，即，空氣噴入中心毛細(xì)管，藻朊酸鹽溶液被迫通過一個(gè)較大的與該毛細(xì)管同軸的管子，而無菌空氣則在包圍該第二根管子的套筒中流出。第三個(gè)例子是，藻朊酸鹽溶液在噴霧之前既可用均質(zhì)器也可用聲處理使氣體吸收于其中。如此制得微氣球其直徑在30至100μm范圍，但仍然太大而不易通過肺毛細(xì)管。
歐洲專利申請(qǐng)EP-A-324，938揭示微氣球懸浮液之高貯存穩(wěn)定性使它們能夠照原樣投放市場，即，包括載體液相在內(nèi)一起投放市場，這在商業(yè)上是一大好處，因?yàn)椴辉傩枰谑褂们芭R時(shí)進(jìn)行制備。但是，用于上述文獻(xiàn)中的蛋白質(zhì)對(duì)敏感的病人可能引起過敏反應(yīng)，而且成膜物質(zhì)的過份強(qiáng)度和穩(wěn)定性還有一些缺點(diǎn)，例如，由于它們的剛性，膜體不能承受這些微球體可能遭到的突然壓力變化，譬如說有血液中流動(dòng)期間，由于心臟跳動(dòng)而產(chǎn)生這樣的壓力變化。于是，在實(shí)際聲波檢測下，一部分微球體將破裂，從而使成像再現(xiàn)性變差;再者，這些微氣球并不適用于口部應(yīng)用，因?yàn)樗鼈兊挚共蛔〈嬖谟谖改c道系統(tǒng)中的消化酶之作用。況且，已知的是，柔性壁之微球體較之剛性壁之相應(yīng)微球體更能產(chǎn)生回波。
此外，在注射的情況下，微球體壁形成物質(zhì)之過度穩(wěn)定性將減慢被測器官有機(jī)組織對(duì)它的生物降解作用，而且可能引起代射問題。因此，十分可取的是，開發(fā)軟而有彈性膜為界面之承壓微氣球，使其在壓力變化時(shí)能夠臨時(shí)變形并且具有提高的回波產(chǎn)生率;也可以設(shè)想，具有可控生物降解性的微氣球可能是很有優(yōu)越性的，譬如說，以具有允許生物液體緩慢透入且可控制微孔隙的半滲透可生物降解聚合物制得之微氣球就可能有較高的優(yōu)越性。
本發(fā)明如權(quán)利要求1和2以及隨后的權(quán)利要求所定義的微氣球已經(jīng)達(dá)到了這些希望的特點(diǎn)。而且，雖然本發(fā)明之微球體一般被制成相對(duì)地較短貯存期，即選擇聚合物的類型使其易受生物降解以克服上述的代謝問題，這個(gè)特點(diǎn)(實(shí)際上由制備參數(shù)所控制)并不是商業(yè)上的缺點(diǎn)，因?yàn)楸景l(fā)明的微氣球既可干態(tài)貯存及運(yùn)送，在這狀態(tài)下它們可以在長時(shí)期內(nèi)穩(wěn)定;也可把膜制成基本上不受載液影響，而僅在注射之后才開始發(fā)生降解。在第一種情況下，以干粉形式提供之微氣球可在使用之前簡易地同一定比例之水相載體混合，這種比例可按照需要進(jìn)行選擇。請(qǐng)注意這是相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)產(chǎn)品之另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)，因?yàn)闈舛瓤梢噪S意選擇，而且遠(yuǎn)超過上述108/毫升，即在105至1010范圍的初始濃度也是容易達(dá)到的。應(yīng)指出的是，本發(fā)明的方法(此后即示)能夠在很大程度上控制氣孔率;因此，能容易地制成具有基本上不可滲透膜的微氣球，它們?cè)谒暂d液中懸浮體是穩(wěn)定的，而且也可照原樣投放市場。
權(quán)利要求1所定義在邊界上沉積聚合物之膜的微球體，如以現(xiàn)有技術(shù)中周知的技術(shù)制成其中是以液體充滿的微球體，可以通常地使第一含水相在聚合物的一種有機(jī)溶液中乳化而產(chǎn)生微滴(其大小可以乳化參數(shù)為函數(shù)進(jìn)行控制)，接著將此乳化體分散于第二水相，并且隨著使此有機(jī)溶劑進(jìn)行蒸發(fā)。在揮發(fā)性溶劑蒸發(fā)期間，聚合物便在微滴邊界上的兩表面間沉積，并且形成了微孔性的膜，使包封起來的第一含水相同周圍的第二含水相有效地間隔起來。這種技術(shù)雖然可能實(shí)施，但在本發(fā)明中并非是優(yōu)先的。
另外，也可以把疏水相在水相中以乳化劑進(jìn)行乳化(通常在含水相中還含有增粘劑以作乳化穩(wěn)定劑)，如此得到疏水相微滴的一種水包油型的乳劑，雖然在其中加入溶于不與含水相混溶的揮發(fā)性有機(jī)溶劑的成膜聚合物。
如果聚合物是不溶于疏水相的，則其將在微滴與含水相邊界上的兩表面間沉積。換句話說，揮發(fā)性溶劑的蒸發(fā)將導(dǎo)致乳化之疏水相微滴周圍邊界上兩表面間沉積膜之形成。隨后包封之揮發(fā)性疏水相蒸發(fā)，便形成了以界面間沉積之聚合物膜包圍的充滿水的微球體。成功地使用于本發(fā)明中的這種技術(shù)，已由K.Uno等人在“Microencapsulation”期刊1984第1期3-8頁上，以及由K.Makino等人在“Chem.Pharm.Bull.”1984第33期1195-1201頁上發(fā)表。如上所述，微滴之大小可以改變?nèi)榛饔玫膮?shù)進(jìn)行控制，即，改變?nèi)榛瘎┑男再|(zhì)(表面活性劑的效能越高，就是，親水的對(duì)親油的差額越大，微滴便越小)，以及改變攪拌條件(攪拌越快越有力，微滴便越小)。
在另一派生例中，界壁形成聚合物是溶于初始疏水相本身的;后者便在含水相中乳化成微滴，該微滴周圍包封的膜便于被包封的疏水相在隨后的蒸發(fā)中形成。J.R.Farnand等人在“Powde Technology”1978，22期11-16頁報(bào)導(dǎo)了此法的一例。他們把一種聚合物(例如聚乙烯)在萘中的溶液在沸水中進(jìn)行乳化，冷卻之后，他們收集在冷水中呈懸浮體的聚合物為界面的微珠，然后使微珠遭到升華作用以除去萘，最終便制得了25μm大小的微氣球。也有其它一些例子，其中聚合物是溶解于混合的疏水相，它包含揮發(fā)性的疏水有機(jī)溶劑和水溶性的有機(jī)溶劑，然后使此聚合物溶液在含有乳化劑的水相中進(jìn)行乳化，從而水溶性有機(jī)溶劑便分散到水相中，于是幫助疏水相微滴乳化體之形成并且使聚合物沉積在界面上;這種技術(shù)揭示于EP-A-274，961(H.Fessi)。
上述技術(shù)，趟若能夠找到合適的條件以控制微球體大小在指望的范圍內(nèi)、室壁之滲透性或不透過性，并且以空氣或挑選的氣體替代包封著的液相，則它們是可以被適應(yīng)來制備空氣或氣體充填之適于超聲成像之微氣球的?？刂迫课⑶蝮w的尺寸大小對(duì)微氣球適于使用之目的顯然是重要的，就是說，對(duì)注射或口部輸入是重要的。注射的大小條件(約0.5-10μm平均尺寸)在前面已經(jīng)討論過了。對(duì)口服應(yīng)用，尺寸范圍可以寬得多，因?yàn)榭紤]到回波產(chǎn)生隨著尺寸增大而增加;因此，譬如說1μm至1000μm之間的數(shù)個(gè)尺寸范圍之微氣球便可根據(jù)需要而使用于口服，只要膜有足夠的彈性，當(dāng)其移動(dòng)到胃和腸中時(shí)不會(huì)破裂?？刂剖冶谥疂B透性是重要的，以保證注射用水相載體之滲透作用不存在或者足夠地低，以致不會(huì)影響回波儀的測量，但在有些情況下仍相當(dāng)大，以保證在測試之后有相當(dāng)快的生物降解性，也就是說，由被測機(jī)體對(duì)此懸浮體進(jìn)行迅速的代射作用。微氣球包囊之微孔結(jié)構(gòu)也是其回彈能力的一個(gè)因素(微氣球包囊壁厚范圍50-500mm，其氣孔為幾個(gè)nm至幾百nm或更大)，也就是說，微氣球能容易地接受壓力變化而不破裂。氣孔之優(yōu)選尺寸范圍約為50-2，000nm。
獲得這些結(jié)果的條件可以由采用權(quán)利要求17-18及其隨后的權(quán)利要求所揭示的方法來滿足。
能夠控制微氣球滲透性的一個(gè)因素是，權(quán)利要求17的方法第(4)步中疏水相之蒸發(fā)對(duì)于水蒸發(fā)的比率，例如在凍干的條件下，這是權(quán)利要求20中所列舉之實(shí)施例的情況。舉例來說，如若蒸發(fā)是在約-40至0℃之間進(jìn)行，而己烷用作疏水相，聚苯乙烯是界面間沉積的聚合物，則所得微珠將有相對(duì)較大的氣孔，這是因?yàn)樵谒x的溫度范圍內(nèi)，碳?xì)浠衔镏羝麎哼h(yuǎn)遠(yuǎn)地大于水的蒸汽壓，這就意味著，微球內(nèi)外之間的壓力差將增加球膜中氣孔的尺寸，因?yàn)榍騼?nèi)的物質(zhì)要通過這些膜中的氣孔而蒸發(fā)。與此對(duì)照，使用環(huán)辛烷作為疏水相(它在-17℃時(shí)的蒸汽壓與水的蒸汽壓相同)，制得的微珠將具有非常細(xì)小的氣孔，因?yàn)樵谡舭l(fā)時(shí)，球體內(nèi)外之壓力被減小到了最低程度。
根據(jù)氣孔率的程度，本發(fā)明微氣球可以被制成在含水載體中穩(wěn)定數(shù)小時(shí)至數(shù)個(gè)月，并且可以在一段較長的時(shí)間內(nèi)得到可再現(xiàn)的回波記錄信號(hào)。實(shí)際上，依賴于所選之聚合物，本發(fā)明微氣球的膜可以制成，當(dāng)其懸浮于有適當(dāng)滲透性之載液中即含有適當(dāng)濃度溶質(zhì)時(shí)，基本上是不可滲透的。應(yīng)該指出的是，本發(fā)明微氣球包囊中微氣孔之存在似乎也同回波記錄的響應(yīng)有關(guān)，即，當(dāng)其它所有因素不變時(shí)，微氣孔的小囊比相應(yīng)的無氣孔小囊產(chǎn)生更有效之回波記錄信號(hào)。這個(gè)原因還不太清楚，但是可以假定，某種氣體在一個(gè)封閉結(jié)構(gòu)作共振時(shí)，如果該封閉結(jié)構(gòu)是在氣孔的還是無氣孔的，其衰減作用可能是不同的。
其它在約-40℃至0℃之間其蒸汽壓大小具有相同數(shù)量級(jí)的非水溶性有機(jī)溶劑也能方便地用作本發(fā)明之疏水溶劑。還包括碳?xì)浠衔铮?，正辛烷，環(huán)辛烷二甲基環(huán)己烷，乙基環(huán)己烷，2-，3-以及4-甲基-庚烷，3-乙基-己烷，甲苯，二甲苯，2-甲基-2-庚烷，2，2，3，3-四甲基丁烷，等等諸如此類。酯，例如，丙基和異丙基丁酸酯和異丁酸酯，甲酸丁酯，以及諸如此類也適宜在此范圍使用。凍干的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是可在降低的一種氣體壓力之下而不是在空氣的壓力之下操作，因此可以制得氣體充填的微氣球。生理上可接受的氣體例如二氧化碳，一氧化二氮，甲烷，氟利昂，氦和其它稀有氣體都是可以使用的。具有放射示蹤活性的氣體能予以仔細(xì)考慮。
至于用本溶解沉積于界面間之聚合物的不溶于水的揮發(fā)性溶劑，可以列舉鹵素化合物，例如CCl4，CH3Br，CH2Cl2，氯仿，氟利昂;低沸酯，例如醋酸甲酯、乙酯和丙酯，以及弱水溶性的低級(jí)醚和酮。當(dāng)使用并非完全不溶于水的溶劑，例如二乙基醚時(shí)，事先以所述溶劑飽和的水溶液作為含水相來使用是有助的。
疏水相在其中乳化咸水包油型乳化液的含水相最好含有1-20%(重量的)水溶性親水化合物，例如糖類和聚合物作為穩(wěn)定劑，例如聚乙烯醇(PVA)，聚乙烯吡咯酮(PVP)，聚乙二醇(PEG)，明膠，聚谷氨酸，白蛋白，以及多糖例如淀粉，葡聚糖，瓊脂，黃原膠(Xanthan)，及諸如此類。相似的含水相可以用作在使用之前將微氣球懸浮其中的載體液。
部分水溶聚合物可以保留在微氣球包囊之內(nèi)，或者在將它們進(jìn)行蒸發(fā)其被包封的疏水芯相之前清洗這些微珠而除去這部分水溶聚合物。
用以使疏水相在含水相中生成水包油乳化體的乳化劑(0.1-5%重量)包括大部分生理上可接受的乳化劑，例如，蛋卵磷脂或大豆卵磷脂，或者合成的卵磷脂如飽和的合成卵磷脂，例如雙十四烷酰磷脂酰膽堿、雙十六烷酰磷脂酰膽堿或雙十八烷酰磷酯酰膽堿，或不飽和的合成卵磷脂，例如二油酰磷脂酰膽堿或二亞油烯磷脂酰膽堿。乳化劑還包括表面活性劑，例如游離脂肪酸、脂肪酸與聚亞氧烷基化合物如聚亞氧丙基乙二醇和聚亞氧乙基乙二醇的酯;脂肪族醇與聚氧化亞烴基乙二醇的酯;脂肪酸與聚氧化亞烴基化的山梨糖醇(酐)的酯;皂;甘油-聚亞烴的硬脂酸鹽;甘油-聚氧化乙烯的亞麻醇酸酯;聚亞烴乙二醇的均聚物和共聚物;聚乙氧基豆油和蓖麻油以及氫化的衍生物;蔗糖或其它碳水化合物與脂肪酸、脂肪族醇的醚和酯，這些是任選地進(jìn)行聚氧化亞烴化的;飽和或不飽和脂肪酸的單、雙和三甘油酯;甘油酯或豆油和蔗糖。
構(gòu)成可注射微氣球包封膜或邊界膜之聚合物可選自大部分親水的可生物降解且生理上兼容的聚合物。這些聚合物中可列舉的有弱水溶性的多糖，聚交酯和聚乙(醇酸)交酯以及它們的共聚物，交酯和內(nèi)酯例如ε-己內(nèi)酯、δ-戊內(nèi)酯的共聚物，多肽，以及蛋白質(zhì)例如明膠、骨膠原、球蛋白和白蛋白。在合成的聚合物選擇中的較大通用性是本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)，因?yàn)?，?dāng)處理過敏的病人時(shí)，可能希望避免使用如US-A-4，276，885或EP-A-324，938中使用的天然蛋白質(zhì)(白蛋白，明膠)。其它合適的聚合物包括聚-(原酸)酯(參閱諸如US-A-4，093，709;US-A-4，131，648;US-A-4，138，344;US-A-4，180，646);聚乳酸和聚乙二醇酸以及它們的共聚物，例如DEXON(參閱J.Heller《Biomaterials》1980第1期51頁);聚(DL-交酯-CO-δ-己內(nèi)酯)，聚(DL-交酯-CO-δ-戊內(nèi)酯)，聚(DL-交酯-CO-δ-丁內(nèi)酯)聚烷氰基丙烯酸酯(poly(alkyl)-cyano-acrylates);聚酰胺，聚羥基丁酸酯(polyhydroxybutyrate);聚二氧六環(huán)酮(polydioxanone);聚-β-氨基甲酮(Poly-β-aminoketones)(“Polymer”1982第23期1693頁);聚磷嗪(polyphosphazenes)(“Science”1976第193期1214頁);以及聚酐類(polyanhydrides)。關(guān)于可生物降解聚合物之參考資料可參閱R.Langer等人“Macromol.Chem.Phys.”1983第C23期，61126頁上的論文。聚氨基酸例如聚谷氨酸和聚天冬氨酸以及它們的衍生物，即與低級(jí)醇或乙二醇生成之偏酯，也可以使用。這類聚合物的一個(gè)有用的例子是聚-(特丁基-谷氨酸)，同其它氨基酸例如蛋氨酸、亮氨酸、纈氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸等的共聚物也是可能使用的。近來，已有報(bào)導(dǎo)具有控制的可生物降解性的聚谷氨酸和聚天冬氨酸的一些新衍生物(參閱本文引入作為參考資料的WO87/03891;US4，888，398以及EP-130，935)。這些聚合物(以及同其它氨基酸之共聚物)都具有下列類型的分子式-(NH-CHA-CO)x(NH-CHX-CO)y其中X代表一種氨基酸殘余的側(cè)鏈，而A則是分子式為-(CH2)nCOOR1R2-OCOR(Ⅱ)之基團(tuán)，其中R1和R2為H或低級(jí)烷基，R則是烷基或芳基;或者R和R1是相互由取代的或非取代的連結(jié)節(jié)聯(lián)結(jié)起來以形成5-或6-節(jié)的環(huán)。
A也可以代表下列分子式的基團(tuán)-(CH2)nCOO-CHR1COOR(Ⅰ)以及-(CH2)nCO(NH-CHX-CO)mNH-CH(COOH)-(CH2)pCOOH(Ⅲ)以及相應(yīng)的酐。在所有這些分子式中，n、m和P為較低的整數(shù)(不超過5)，而X和Y則是為其分子量不低于5000者選用的整數(shù)。
上面提到的聚合物都適用于制備本發(fā)明的微氣球，所得膜之性質(zhì)例如強(qiáng)度、彈性及可生物降解性都可加以控制，隨取代基R、R1、R2和X的性質(zhì)而定。例如，X可以是甲基(丙氨酸)，異丙基(纈氨酸)，異丁基(亮氨酸和異亮氨酸)，苯甲基(苯基丙氨酸)。
添加劑可以引入到微氣球之聚合物壁中，以改善其物理性質(zhì)例如分散性、彈性和水滲透性。為了引入到聚合物中，添加劑可以溶入到聚合物載送相中，例如欲被乳化入水相中之疏水相中，從而添加劑將與聚合物一道在界面間形成膜的階段沉積出來。
在有用的添加劑中，可以列舉某些化合物，它們可以使微氣球膜“疏水化”，以便降低其滲水性，例如脂肪，蠟和高分子量碳?xì)浠衔??？筛纳莆馇蛟谧⑸溆靡狠d體中分散性的添加劑有諸如磷脂等的兩親(既親水又親油)的化合物;它們也增加滲水性和生物降解性的速率。
用以制備在消化系統(tǒng)中使用的微氣球的非生物降解聚合物可以選自大部分不溶于水且生理可接受的抗生化(bioresistant)聚合物，包括，聚烯烴(聚苯乙烯)，丙烯酸樹脂(聚丙烯酸脂，聚丙烯腈)，聚酯(聚碳酸酯)，聚氨酯，聚脲，以及它們的共聚物。ABS(丙烯-丁二烯-苯乙烯)是一種可取的共聚物。
增加膜彈性之添加劑是諸如異丙基肉豆蔻酸酯(十四烷酸酯)以及甘油基單硬脂酸鹽之類的增塑劑。非常有用的添加劑也可以是類似于膜本身但分子量相對(duì)地低的聚合物所組成。例如，當(dāng)使用聚乳酸或聚乙二醇酸類型共聚物作為成膜物質(zhì)時(shí)，膜的性質(zhì)可以透過引入低分子量(1，000至15，000道爾頓)聚乙二醇酸交酯或聚丙交酯作為添加劑，得到有利的改善(增加柔軟性和生物降解性)。同樣，中或低分子量MN的聚烷撐二醇(例如聚乙二醇PEG2000)也是一種有用的軟化添加劑。
在本發(fā)明微氣球界面間沉積膜形成聚合物中引入添加劑的量是非?？勺兊?，且可根據(jù)需要而定。在某些情況中全然不用添加劑，而在另一些情況中添加劑的量可以達(dá)到聚合物重量的約20%也是可能的。
本發(fā)明之注射用微氣球，可以在有或無添加劑之存在條件下干燥地貯存在改善其守恒性并防止其聚結(jié)。作為這種添加劑，可以從0.1至20%(重量)的下列諸水溶且生理可接受的化合物中選擇，例如甘露醇，半乳糖，乳糖或蔗糖或親水聚合物如葡聚糖，黃原膠，瓊脂，淀粉，PVP，聚谷氨酸，聚乙烯醇(PVA)，白蛋白以及明膠。微氣球在注射用液載體中的有效使用期，即，能觀察到有用回波信號(hào)的時(shí)間，可以控制到延續(xù)數(shù)分鐘至數(shù)個(gè)月，視需要而定。這可以控制膜的氣孔率，使膜實(shí)質(zhì)上對(duì)載液不滲透一直到具有幾個(gè)毫微米至數(shù)百毫微米之氣孔的氣孔率，這樣來達(dá)到上述所需使用期范圍。氣孔率的這種程度是能夠控制的，除了適當(dāng)選擇成膜聚合物及聚合物添加劑之外，還可通過調(diào)節(jié)權(quán)利要求17所述方法第(4)步驟之蒸發(fā)速度和溫度，以及適當(dāng)選擇構(gòu)成疏水相之化合物的(或化合物之混合物的)性質(zhì)來加以控制，即，其蒸汽分壓與水相蒸汽分壓之差別越大，其在微氣球膜中的氣孔將越大。當(dāng)然，這種由選擇疏水相進(jìn)行之控制，還可以進(jìn)一步通過選擇穩(wěn)定劑并調(diào)節(jié)其濃度，以控制微氣球形成期間水的蒸發(fā)速率來加以精確控制。所有這些變化都能夠由技術(shù)熟練人員輕而易舉地?zé)o須施加創(chuàng)造性而做到，在此也無必要進(jìn)一步討論。
應(yīng)該提到的是，雖然本發(fā)明微氣球能以干燥狀態(tài)投放市場，更特別地是當(dāng)它們被指定一個(gè)注射后的有限壽命時(shí)，也可能希望銷售隨時(shí)準(zhǔn)備的產(chǎn)品，即隨時(shí)可以注射或口服施用的在含水載液中之微氣球懸浮劑。這就要求微氣球膜是基本上不滲透(至少幾個(gè)月或更長)此液載體的。本發(fā)明書中已經(jīng)揭示，本發(fā)明方法可以很容易地達(dá)到這種狀態(tài)，只需適當(dāng)選擇聚合物的性質(zhì)以及界間沉積的參數(shù)即可。實(shí)際上參數(shù)已經(jīng)找到(例如使用聚谷氨酸聚合物[其中A是分子式Ⅱ的基團(tuán)]，而環(huán)辛烷作為疏水相)，以致可以使膜在疏水相蒸發(fā)之后的氣孔率是如此地微細(xì)，其得到的微氣球是基本上對(duì)懸浮其中之水性載液不滲透的。
一種診斷用的優(yōu)選之施用制劑包括每毫升含108-1010微氣球于緩沖或未緩沖之鹽水(0.9%的NaCl水溶液;緩沖劑10mM tris-HCl)中的懸浮液。這可以主要按照下列例子中的說明加以制備，最好是按照例3和例4;使用聚-(DL-交酯)聚合物，可從德國Ingelhcim的Bochringer公司得到此聚合物。
下列例子說明本發(fā)明是切實(shí)可行的。
例1將1克聚苯乙烯溶解于9克100℃的液態(tài)萘。將此萘溶液在90-95℃下于含有0.1%吐溫-40乳化劑之聚乙烯醇(PVA)4%(重量)水溶液中進(jìn)行乳化。乳化設(shè)備是一臺(tái)Polytron PT-3000，轉(zhuǎn)速約為10，000rpm。然后，將乳化液在攪拌下以500毫升15℃之同一水溶液相進(jìn)行稀釋，于是萘滴便固化成小于50μm的微珠，這可以使其通過50μm的篩網(wǎng)加以確定。將此懸浮體在1，000g下進(jìn)行離心處理，所得之微珠以水清洗，然后再進(jìn)行離心。這一步驟重復(fù)兩次。
將微珠再懸浮于溶解了0.8克乳糖的100毫升水中，然后將此懸浮體在-30℃凍成一塊。此后，將此凍塊在0.5-2乇的真空下于約-20℃至-10℃溫度之間進(jìn)行蒸發(fā)。于是便獲得了平均尺寸5-10μm且有控制的氣孔率的空氣充填微氣球。此微氣球分散于水中(3%wt，分散液)之后可在2.25和7.5兆赫給出回波信號(hào)。這種微氣球之穩(wěn)定性在干態(tài)下是無限期地有效;一旦懸浮于水溶液載體中，其有效的回波儀使用期約為30分鐘或更長。聚苯乙烯是非生物降解物質(zhì)，故其并不給予注射回波記錄之用，但對(duì)消化系統(tǒng)之探查是有用的。本例清楚地確立了本發(fā)明方法之可行性。
例20.3克之DL-交酯與乙交酯(杜邦Medisorb)之50∶50共聚物混合體，以及16毫克蛋卵磷脂溶解于7.5毫升之CHCl3中成為溶液(1)。
制備含有20毫克石蠟(熔點(diǎn)54-56℃)于10毫升環(huán)辛烷(熔點(diǎn)10-13℃)中的溶液(2)，并將其于150毫升，含有1.2克CHCl3的，Pluronic F-108(一種環(huán)氧乙烷與氧化丙烯的嵌段共聚物)的0.13%wt.水溶液中進(jìn)行乳化。以Polytron設(shè)備在室溫下每分鐘7000轉(zhuǎn)乳化1分鐘。然后，將溶液(1)在攪拌中加入(每分鐘7000轉(zhuǎn))，30-60秒鐘之后，乳化設(shè)備換成螺旋攪拌器，繼續(xù)攪拌，在室溫下大約持續(xù)3個(gè)小時(shí)(22℃)。將此懸浮體濾過50μm的篩網(wǎng)，并凍成一塊。然后將此凍塊在高真空下-20至0℃之間進(jìn)行蒸發(fā)(收集器溫度-60至-80℃)。這樣便獲得了0.264克(88%)在干燥狀態(tài)穩(wěn)定之充空氣微氣球。
這種微氣球在水中的懸浮液(無穩(wěn)定劑)產(chǎn)生至少一小時(shí)強(qiáng)回波信號(hào)。注射于有機(jī)體之后，在幾天之內(nèi)便生物降解了。
例3用200毫升四氫呋喃(THF)，0.8克5050DL-交酯乙交酯共聚物(Boehringer AG)，80毫克蛋卵磷酯，64毫克石蠟和4毫升辛烷制成溶液。此溶液在螺旋攪拌下(500r.p.m)緩慢滴入400毫升Pluronic F-108的0.1%水溶液中進(jìn)行乳化。攪拌15分鐘之后，將此乳狀分散液置于旋蒸器(rotavapor)中在10-12乇，25℃，進(jìn)行蒸發(fā)，直至它的體積減少到大約400毫升。然后將此分散液在50μm的濾篩上過濾，冷凍至-40℃，并在約1乇之下進(jìn)行冷凍干燥。殘留物是1.32克極細(xì)粉末，將其放入40毫升蒸餾水，經(jīng)人工攪拌3分鐘之后便得到非常均質(zhì)的微氣球分散液，以顆粒分析儀(Malvern出品之Mastersizer型)測得其平均顆粒尺寸為4.5μm，微氣球的濃度約為2×109/毫升(以Coulter計(jì)數(shù)器測得)。這種懸浮液產(chǎn)生強(qiáng)回波信號(hào)持續(xù)約1小時(shí)。
如果在本例中將添加劑從成膜聚合物中略去，即，使用的只是800毫克交酯乙交酯共聚物在THF和辛烷中的溶液，那么就會(huì)觀察到壁氣孔率驚人地減少，其在水載體中的分散液產(chǎn)生之回波信號(hào)三天之后也無顯著衰減。
使用中等數(shù)量的添加劑，得到的微球具有中等程度的孔率和壽命。
例4本例中使用的聚合物分子式如權(quán)利要求8所定義，其中側(cè)基具有分子式(Ⅱ)，其中R1和R2都是H，而R則是特丁基。該聚合物(定義為聚合物-POMEG)的制備在US-A-4，888，398中敘述。
本例的程序類似例3，使用的是0.1克聚POMEG，70毫升THF，1毫升環(huán)辛烷以及100毫升Pluronic F-108之0.1%水溶液。不加任何卵磷脂或高分子量化合物。乳白的乳化液于27℃，10乇下進(jìn)行蒸發(fā)，直至剩下100毫升剩余物。然后在50μm篩網(wǎng)中過濾并冷凍。凍塊之蒸發(fā)在0.5-1乇下進(jìn)行到干燥為止。產(chǎn)量為0.18克，因?yàn)橛斜砻婊钚詣┐嬖凇⒋宋锓稚⒂?0毫升蒸餾水中并以Coulter計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù)，測得濃度發(fā)現(xiàn)為1.43×109微囊/毫升。以顆粒分析儀(Malvern之Mastersizer)確定其平均顆粒尺寸為5.21μm。將此分散液稀釋100×倍，即，稀釋成約1.5×107微囊/毫升。測量其回波性。回波信號(hào)在7.5兆赫時(shí)的振幅為2.25兆赫時(shí)的5倍。這些信號(hào)在長時(shí)間內(nèi)都能再現(xiàn)。
回波特性是用脈沖回波系統(tǒng)進(jìn)行測量的，它包括一個(gè)介電有機(jī)玻璃制的樣品夾持器(直徑30毫米)。該夾持器帶有一個(gè)20μm厚的密拉聚酯(Mylar)聲學(xué)窗口;一個(gè)浸沒于恒溫于溶中的傳感器夾;一臺(tái)脈沖發(fā)生一接收器(Accutron M3010JS型)，它帶有一個(gè)固定增益40dB的外接前置放大器;以及帶有可調(diào)增益從-40至+40dB和可更換之13毫米未聚焦傳感器的內(nèi)部放大器。在接收部插入一個(gè)10兆赫低通濾器以改善信噪比。IBM PC機(jī)中的A/D插件板是Sonotek STR832。測量是在2.25、3.5、5以及7.5兆赫進(jìn)行的。
如果在本例中，使用的聚合物代之以乳-內(nèi)酯共聚物，內(nèi)酯為δ-丁內(nèi)酯、δ-戊內(nèi)酯或ε-已內(nèi)酯(參閱Fukuzaki等人在“J.Biomedical Mater.Res.1991第25期，315-328頁上的論文)，可以獲得相似的有利結(jié)果。在一個(gè)類似的情況中，聚烷氰基丙烯酸酯和特別是90∶10共聚物聚(DL-交酯-CO-乙交酯)也產(chǎn)生滿意的結(jié)果。最終發(fā)現(xiàn)最優(yōu)選的聚合物是Boehringer-Ingelheim公司銷售之名稱為“Resomer R-206”或Resomer R-207的聚(DL-交酯)。
例5
以例4之制劑(1.43×109/毫升)分散液0.1-2毫升注射于試驗(yàn)狗外表靜脈沖，用一臺(tái)Acuson-128儀器進(jìn)行二維的回聲心電儀記錄。在通常期待的右半心對(duì)比增強(qiáng)成像之后，強(qiáng)而持久的左半心信號(hào)增強(qiáng)及心內(nèi)膜清晰輪廓也被觀察到了。由此證實(shí)，以(或至少含有相當(dāng)大部分)聚-POMEG制備的微氣球是能夠橫穿過肺毛細(xì)血管循環(huán)的，而且能在血液中維持足夠的時(shí)間來完成有效的回波圖象分析。
在另外的一系列實(shí)驗(yàn)中，在兔和鼠中觀察到全身動(dòng)脈和門靜脈多普勒信號(hào)的持久增強(qiáng)，這是在注射了以例4揭示的方法所制備的微氣球制劑之后觀察到的，但其中使用的是聚(DL-乳酸)作為聚合物相，所用的制劑成分含有1.9×108微氣球/毫升。
使用聚(特丁基-谷氨酸酯)按例4所述也能制得另一種制劑成分。將此制劑(0.5毫升稀釋至3.4×108微氣球/毫升，然后注射于鼠的門靜脈，隨即產(chǎn)生肝實(shí)質(zhì)之持久對(duì)比增強(qiáng)作用。
例6按例1所述制備微氣球懸浮液(1.1×109微氣球/毫升)，其樹脂為聚苯乙烯。將1毫升這種懸浮液用100毫升濃度為300mM的甘露醇溶液進(jìn)行稀釋，然后用7毫升所得的稀釋液從胃內(nèi)施用給一只試驗(yàn)用鼠。以一臺(tái)Acuson-128儀器對(duì)此試驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行檢測其消化系統(tǒng)二維回波成像，結(jié)果清晰也顯示了小腸和大腸的單回路。
權(quán)利要求
1.以聚合物膜為界面且充滿空氣或合適氣體之微米或亞微米級(jí)微囊或微氣球，其在液相載體中形成之懸浮液，可施用于人或動(dòng)物患者作治療或診斷，如超聲回波描記成像之用，其特征在于，其成膜聚合物是可變形且有回彈力的界面間沉積聚合物。
2.以彈性的界面間聚合的膜為界面且充滿空氣或氣體之微氣球，適于在相宜的生理可接受之水相載液中形成懸浮液，可從口部、直腸和尿道施用或注射入活的有機(jī)體中，以作治療或診斷之用，其特征在于，所述微氣球呈不聚結(jié)之干態(tài)，且可即時(shí)與所述之載液混合而分散于其中。
3.權(quán)利要求1或2之微氣球，其尺寸大部分在0.5-10μm范圍，適宜于注射入活機(jī)體的血液中，其特征在于，其膜聚合物是可生物降解的，而膜本身既可是不滲透的，也可含有可滲透生物活性液的氣孔以增加生物降解速度。
4.權(quán)利要求3之微氣球，其特征在于其中所述之聚合物膜具有氣孔率之范圍是從幾個(gè)毫微米到幾百或幾千毫微米，最好是在50-2，000nm范圍。
5.權(quán)利要求3之微氣球，其特征在于其中所述之膜是彈性的，厚度為50-500nm，可承受由心跳脈博產(chǎn)生在血液中的壓力變化。
6.權(quán)利要求3之微氣球，其特征在于其中所述膜聚合物是可生物降解的聚合物，選自多糖、聚氨基酸、聚交酯和聚乙交酯以及它們的共聚物，交酯和內(nèi)酯的共聚物，多肽，聚-(原)酸酯，聚二氧六環(huán)酮(polydioxanone)，聚-β-氨基酮(poly-β-amino-ketones)，聚磷嗪(polyphosphazenes)，聚酐類(polyanhydrides)以及聚(烷基-氰基-丙烯酸酯(poly(alkyi-cyano-acrylates))。
7.權(quán)利要求3之微氣球，其特征在于其中所述膜聚合物選自聚谷氨酸或聚天冬氨酸之衍生物以及它們同其它氨基酸之共聚物者。
8.權(quán)利要求7之微氣球，其特征在于其中所述聚谷氨酸和聚天冬氨酸之衍生物是選自含有其羧化側(cè)官能團(tuán)的酯和酰胺，所述側(cè)官能具有下列分子式-(CH2)nCOO-CHR1COOR(Ⅰ)或-(CH2)nCOOR1R2-O-COR(Ⅱ)或-(CH2)nCO(NH-CHX-CO)mNHCH(COOH)-(CH2)pCOOH(Ⅲ)，其中R是烷基或芳基的取代基;R1和R2是H或低級(jí)烷基，或者R和R1互相由取代的或未取代的連接節(jié)接合而形成5節(jié)或6節(jié)的環(huán)，n是1或2，p是1、2或3，m是1至5的整數(shù)，而X則是氨基酸殘余的一個(gè)側(cè)鏈。
9.權(quán)利要求3之微氣球，其特征在于其中膜聚合物含有控制彈性程度以及控制滲透性之氣孔大小和密度的添加劑。
10.權(quán)利要求9之微氣球，其特征在于其中所述之添加劑包括增塑劑、既親水又親油的(兩親的amphipatic)物質(zhì)以及疏水的化合物。
11.權(quán)利要求10之微氣球，其特征在于其中，增塑劑包括異丙基肉豆蔻酸鹽(脂)、甘油基單硬脂酸鹽(脂)以及諸如此類，以控制其柔韌性，既親水又親油的物質(zhì)包括表面活化劑及卵磷脂之類的磷脂，以增加其氣孔率來控制其滲透性，而疏水相包括石蠟之類的高分子量碳?xì)浠衔?，以降低其氣孔率?br> 12.權(quán)利要求10之微氣球，其特征在于其中添加劑包括如在1000至15000范圍內(nèi)的低分子量聚合物，以控制該微氣球之柔軟性及回彈性。
13.權(quán)利要求12之微氣球，其特征在于其中所述低分子量聚合物是選自聚交酯、聚乙交酯、聚乙二醇及聚丙二醇之類的聚烷撐二醇和聚甘油之類的多元醇者。
14.權(quán)利要求1或2之微氣球，尺寸大到約1000μm，適于口部、直腸或尿道施用，其特征在于，其膜聚合物在消化系統(tǒng)中是不能被生物降解，也不能透過生物液者。
15.權(quán)利要求14之微氣球，其特征在于其中所述膜聚合物是選自聚烯烴、聚丙烯酸酯、聚丙烯腈、不可水解的聚酯、聚氨酯和聚脲者。
16.按照權(quán)利要求1或2的微氣球之水成懸浮液，用于施用于病人，其特征在于，含有的濃度為約106至1010微氣球/毫升，且可穩(wěn)定至少一個(gè)月者。
17.一種可于載液中成懸浮液而作口部、直腸或尿道施用成作活機(jī)體注射用之充空氣或充氣體的微氣球制備方法，其步驟包括(1)使一疏水有機(jī)相在含水相中乳化，以便獲得所述疏水相之微滴在所述含水相中的一種水包油型乳化液，(2)將一至少含一種聚合物于一不溶于該含水相的易揮發(fā)溶劑中之溶液加入上述乳化液，以致圍繞所述微滴的整個(gè)周圍將形成一層所述的聚合物。(3)使所述易揮發(fā)溶劑蒸發(fā)，以致該聚合物將憑界面間之沉淀而沉積于所述微滴之整個(gè)周圍，遂使該微滴形成具有一由所述聚合物膜包封所述疏水相核心之微珠，成為在上述水相中的微珠懸浮液，(4)使上述微珠懸浮液在如此條件遭到減壓以致所述被包封疏水相經(jīng)蒸發(fā)而除去，其特征在于所述之疏水相是如此挑選者，以致于步驟(4)中其蒸發(fā)基本與含水相同時(shí)發(fā)生并被代之以空氣或氣體，從而便獲得了干的、自由流動(dòng)而易于分散的微氣球。
18.權(quán)利要求17之方法，其特征在于其中所述之聚合物是被溶解于所述疏水相的，以致步驟(2)和(3)便可省去，而聚合物膜將在步驟(4)中由界面間沉淀而形成。
19.權(quán)利要求17之方法，其特征在于步驟(4)中所述疏水相之蒸發(fā)是在其蒸汽分壓、與水蒸汽分壓處于同一數(shù)量級(jí)時(shí)的溫度進(jìn)行者。
20.權(quán)利要求17之方法，其特征在于其中所述步驟(4)之蒸發(fā)是在冷凍干燥條件下進(jìn)行者。
21.權(quán)利要求20之方法，其特征在于其中所述冷凍干燥是在溫度從-40℃至0℃的范圍完成。
22.權(quán)利要求17或9之方法，其特征在于其中疏水相是選自在包括在約-40℃至0℃間隔內(nèi)的一溫度具有約1乇蒸汽壓之有機(jī)化合物者。
23.權(quán)利要求17或18之方法，其特征在于其中含水相包括溶于其中的約從1%至20%(重量)之穩(wěn)定劑，其包括之親水化合物選自糖、PVA、PVP、明膠、淀粉、葡聚糖、聚右旋糖(polydextrose)、白蛋白以及類似物者。
24.權(quán)利要求18之方法，其特征在于其中，控制微氣球膜滲透程度之添加劑是加入于疏水相者，而微氣球注射于活機(jī)體之后其聚合物生物降解速度是所述滲透程度之函數(shù)。
25.權(quán)利要求24之方法，其特征在于其中所述之添加劑包括諸如脂肪、蠟以及高分子量碳?xì)浠衔镏惖氖杷虘B(tài)相，其于微氣球膜聚合物中之存在將降低對(duì)含水液相之滲透性者。
26.權(quán)利要求24之方法，其特征在于其中所述之添加劑包括磷脂之類的兩親化合物或低分子量聚合物，其于膜聚合物中之存在將增加微氣球?qū)合嘀疂B透性者。
27.權(quán)利要求18之方法，其特征在于其中所述在含水相中進(jìn)行乳化之疏水相還包含-可水溶之溶劑，經(jīng)其于乳化期間摻入所述含水相中，將協(xié)助減少微滴之尺寸，并于步驟(4)進(jìn)行之前誘導(dǎo)所述聚合物于界面間之沉淀者。
28.一種可于載液中成懸浮液而作口部、直腸或尿道施用或作活機(jī)體注射施用之充空氣或充氣體的微氣球之制備方法，其步驟包括(1)使一疏水有機(jī)相在含水相中乳化，以便獲得所述疏水有機(jī)相之微滴在所述含水相中的水包油型乳化液，所述有機(jī)相含有溶于其中之一種或多種非水溶性聚合物，(2)使所述乳化液在蒸發(fā)除去所述疏水相的條件下進(jìn)行減壓，從而溶于微滴中的聚合物將在界面間沉積并形成聚合物邊界膜，微滴便同時(shí)轉(zhuǎn)變成微氣球，其特征在于，所述疏水相是挑選而于步驟(2)中其蒸發(fā)基本上與含水相同時(shí)進(jìn)行并被代之以空氣或氣體，從而便獲得了干的、自由流動(dòng)而易于分散的微氣球者。
29.權(quán)利要求28之方法，其特征在于其中所述在含水相中進(jìn)行乳化之疏水聚合物溶液相還含有一可水溶之溶劑，經(jīng)其于乳化期間摻入所述含水相中，將協(xié)助減小微滴之尺寸，并于步驟(2)進(jìn)行之前誘導(dǎo)該聚合物于界面間之沉淀者。
30.權(quán)利要求28之方法，其特征在于其中所述于步驟(1)中被乳化之有機(jī)疏水相不含任何聚合物溶于其中，而且在完成步驟(2)之前還進(jìn)行了下列之附加步驟(1a)將溶于不溶于水相之易揮發(fā)溶劑中至少一種聚合物之溶液加入所述乳化液，以致在所述微滴之整個(gè)周圍將形成一層所述聚合物，(1b)使所述易揮發(fā)溶劑蒸發(fā)，以致該聚合物將由界面沉淀而沉積于微滴整個(gè)周圍，形成具有由所述聚合物膜包封疏水相核心之微氣球或微珠，該微氣球或珠是在所述含水相中之懸浮液，從而于步驟(2)中所述疏水相通過所述膜進(jìn)行蒸發(fā)，使該膜形成了顯著氣孔率。
31.一種注射用微氣球水成懸浮液，其特征在于其中微氣球含量為108-1010微氣球/毫升，微氣球是由面間沉淀之DL-交酯聚合物作為界面膜。
全文摘要
由界面間沉積聚合物膜為界面的充空氣或充氣體之微氣球、能夠分散于水相載體液中注射到活有機(jī)體內(nèi)，或者從口部、直腸和尿道施用，以為治療學(xué)或診斷學(xué)上之用(回波描記)。微氣球聚合物膜之性質(zhì)(彈性，滲透性，生物降解性)可以隨意控制，取決于所選擇之聚合物、界面間沉積的條件以及聚合物添加劑。
文檔編號(hào)A61K9/127GK1056634SQ9110341
公開日1991年12月4日 申請(qǐng)日期1991年5月17日 優(yōu)先權(quán)日1990年5月18日
發(fā)明者丹尼爾·比雄, 菲利普·布塞, 米切爾·施奈德 申請(qǐng)人:辛苔蒂加股份有限公司