本發(fā)明涉及gsdme蛋白的小分子抑制劑在腫瘤及其免疫治療中的作用，屬于生物醫(yī)藥。

背景技術(shù)：

1、近些年來(lái)，免疫檢查點(diǎn)抑制劑療法是臨床轉(zhuǎn)化和基礎(chǔ)研究的焦點(diǎn)，在某些癌癥患者中顯示出顯著的抗腫瘤效果。然而，耐藥性的普遍存在阻礙了其在大多數(shù)情況下的療效。因此，免疫檢查點(diǎn)抑制劑與其他藥物或治療方法的聯(lián)合有望成為腫瘤治療的創(chuàng)新策略。m1(促炎型)和m2(抗炎型)是巨噬細(xì)胞的兩種主要亞型。在實(shí)體腫瘤組織中，腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(tams)經(jīng)常表現(xiàn)出m2樣表型，這有助于促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。因?yàn)閠ams不僅直接影響腫瘤細(xì)胞的生存和死亡途徑，還具有顯著的免疫抑制作用，介導(dǎo)免疫治療抵抗，間接促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。有研究表明tams對(duì)cd8+t細(xì)胞的活性有直接或間接的抑制作用，因而巨噬細(xì)胞的耗竭可以增強(qiáng)cd8+t細(xì)胞的抗腫瘤效能。由于tams在腫瘤微環(huán)境中的調(diào)節(jié)作用，藥物靶向tams改善腫瘤免疫治療的研究引起了廣泛的關(guān)注。因此，開(kāi)發(fā)新的小分子藥物，使得其能重編程或重極化tams，重新獲得抗腫瘤特性，并結(jié)合免疫檢查點(diǎn)抑制劑(αpd1)來(lái)改善免疫治療具有重要的意義。

2、焦孔素e(gsdme)，一種可基于caspase-3蛋白裂解產(chǎn)生n端片段，定位于膜上并形成孔，引發(fā)細(xì)胞焦亡。而新的證據(jù)表明，gsdme能促進(jìn)胰腺腺癌和結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)直腸癌的發(fā)展，而這并不依賴于其n端片段所介導(dǎo)的焦亡機(jī)制。然而，其非n端片段在實(shí)體腫瘤中對(duì)于免疫微環(huán)境的調(diào)控作用和機(jī)制仍未被報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是：針對(duì)目前免疫檢查點(diǎn)抑制劑在癌癥治療中的療效較低，并存在耐藥性等問(wèn)題，本發(fā)明提供gsdme蛋白的小分子抑制劑eliprodil在腫瘤及其免疫治療中的作用。

2、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明的第一方面，提供eliprodil或eliprodil聯(lián)合免疫檢查點(diǎn)抑制劑在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述eliprodil的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下所示：

4、

5、所述藥物通過(guò)改善腫瘤免疫微環(huán)境和增強(qiáng)殺傷性cd8+t細(xì)胞來(lái)治療肝癌；所述藥物能夠增敏免疫檢查點(diǎn)抑制劑；所述藥物能夠逆轉(zhuǎn)腫瘤的免疫逃逸或制備逆轉(zhuǎn)腫瘤的免疫逃逸的產(chǎn)品；所述藥物能夠抑制腫瘤對(duì)免疫檢查點(diǎn)抑制劑的耐藥性。

6、優(yōu)選地，所述腫瘤包括肝癌。

7、優(yōu)選地，所述藥物包括活性成分及藥學(xué)上可接受的載體，所述活性成分為eliprodil或eliprodil與免疫檢查點(diǎn)抑制劑的組合。

8、優(yōu)選地，所述免疫檢查點(diǎn)抑制劑為αpd-1。

9、eliprodil中文名叫依利羅地，nr2b-nmda受體高效選擇性抑制劑。它對(duì)nr2a-和nr2c-nmda受體作用較弱，可用于研究帕金森病和運(yùn)動(dòng)障礙治療的試驗(yàn)。本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)eliprodil具有逆轉(zhuǎn)免疫檢查點(diǎn)抑制劑耐藥的作用，并且毒性小。同時(shí)經(jīng)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，eliprodil是抑制巨噬細(xì)胞m2樣極化并增強(qiáng)cd8+t細(xì)胞殺傷活性的新型小分子抑制劑，在逆轉(zhuǎn)腫瘤免疫逃逸及增敏免疫檢查點(diǎn)抑制劑方面具有應(yīng)用前景。

10、所述eliprodil為藥物或?qū)嶒?yàn)試劑。

11、所述藥學(xué)上可接受的載體可包括賦形劑及稀釋劑等。而且，根據(jù)通常的方法，所述藥物可以制作成粉劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、混懸劑、乳劑、糖漿劑、噴霧劑等的口服劑、外用劑、栓劑及無(wú)菌注射溶液形式的劑型使用。。

12、所述藥學(xué)上可接受的載體在本領(lǐng)域內(nèi)是熟知的，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能夠確定其符合臨床標(biāo)準(zhǔn)。

13、本發(fā)明的藥物可通過(guò)已知的方式施用至體內(nèi)。例如通過(guò)靜脈全身遞送或者局部注射遞送到感興趣組織中?？蛇x地，經(jīng)由靜脈內(nèi)、經(jīng)皮、鼻內(nèi)、粘膜或其他遞送方法進(jìn)行施用。這樣的施用可以經(jīng)由單劑量或多劑量來(lái)進(jìn)行。本領(lǐng)域技術(shù)人員理解的是，本發(fā)明中有待施用的實(shí)際劑量可以在很大程度上取決于多種因素而變化，如靶細(xì)胞、生物類(lèi)型或其組織、待治療受試者的一般狀況、給藥途徑、給藥方式等等。

14、優(yōu)選地，所述藥物施用對(duì)象可以是人和非人哺乳動(dòng)物，如小鼠、大鼠、豚鼠、兔、狗、猴、猩猩等。

15、本發(fā)明的第二方面，提供檢測(cè)巨噬細(xì)胞中g(shù)sdme蛋白表達(dá)的試劑在制備用于檢測(cè)肝癌或肝癌預(yù)后產(chǎn)品中的應(yīng)用。

16、優(yōu)選地，所述檢測(cè)巨噬細(xì)胞中g(shù)sdme蛋白表達(dá)的試劑包括檢測(cè)巨噬細(xì)胞標(biāo)志物cd68表達(dá)的試劑和檢測(cè)gsdme蛋白表達(dá)的試劑。

17、優(yōu)選地，所述巨噬細(xì)胞標(biāo)志物cd68表達(dá)的試劑為cd68抗體，所述檢測(cè)gsdme蛋白表達(dá)的試劑為gsdme抗體。

18、本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下有益效果：

19、(1)本發(fā)明通過(guò)對(duì)gsdme蛋白的非n段片段進(jìn)行計(jì)算機(jī)虛擬篩選，并通過(guò)體外分子對(duì)接實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)eliprodil主要作用于gsdme蛋白的pdpk1蛋白結(jié)合區(qū)域，并且通過(guò)蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞流式，多重?zé)晒饷庖呓M化實(shí)驗(yàn)等實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明eliprodil能抑制巨噬細(xì)胞m2樣極化，增強(qiáng)cd8+t細(xì)胞的殺傷活性。

20、(2)本發(fā)明經(jīng)體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)證明，eliprodil的直接作用靶點(diǎn)為焦孔素e(gsdme)，并確定巨噬細(xì)胞中g(shù)sdme高表達(dá)與肝癌的預(yù)后負(fù)相關(guān)，并且抑制巨噬細(xì)胞pi3k-akt通路的激活，是腫瘤治療的新靶點(diǎn)；eliprodil同時(shí)增強(qiáng)了cd8+t細(xì)胞的毒性功能，與免疫檢查點(diǎn)抑制劑αpd-1聯(lián)用具有明顯的協(xié)同增效作用，顯著提高腫瘤的免疫治療效果。

21、(3)本發(fā)明經(jīng)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，eliprodil顯著抑制巨噬細(xì)胞m2樣極化，增強(qiáng)cd8+t細(xì)胞殺傷功能，為一種能夠改善腫瘤免疫微環(huán)境的新型小分子抑制劑，在逆轉(zhuǎn)腫瘤免疫逃逸及增敏免疫檢查點(diǎn)抑制劑方面具有應(yīng)用前景。

22、(4)本發(fā)明經(jīng)過(guò)體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)表明，eliprodil顯著抑制腫瘤的增殖，減少腫瘤浸潤(rùn)的tams(m2樣)的數(shù)量，增加毒性cd8+t細(xì)胞的浸潤(rùn)，而且與免疫檢查點(diǎn)抑制劑αpd-1聯(lián)用顯著抑制腫瘤的生長(zhǎng)，具有很好的協(xié)同增敏作用，且毒性小，具有良好的應(yīng)用前景。

技術(shù)特征：

1.eliprodil或eliprodil聯(lián)合免疫檢查點(diǎn)抑制劑在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述eliprodil的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下所示：

2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述腫瘤包括肝癌。

3.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物包括活性成分及藥學(xué)上可接受的載體，所述活性成分為eliprodil或eliprodil與免疫檢查點(diǎn)抑制劑的組合。

4.如權(quán)利要求1～3中任意一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述免疫檢查點(diǎn)抑制劑為αpd-1。

5.檢測(cè)巨噬細(xì)胞中g(shù)sdme蛋白表達(dá)的試劑在制備用于檢測(cè)肝癌或肝癌預(yù)后產(chǎn)品中的應(yīng)用。

6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述檢測(cè)巨噬細(xì)胞中g(shù)sdme蛋白表達(dá)的試劑包括檢測(cè)巨噬細(xì)胞標(biāo)志物cd68表達(dá)的試劑和檢測(cè)gsdme蛋白表達(dá)的試劑。

7.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述巨噬細(xì)胞標(biāo)志物cd68表達(dá)的試劑為cd68抗體，所述檢測(cè)gsdme蛋白表達(dá)的試劑為gsdme抗體。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)了GSDME蛋白的小分子抑制劑在腫瘤及其免疫治療中的作用。本發(fā)明提供了Eliprodil或Eliprodil聯(lián)合免疫檢查點(diǎn)抑制劑在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，Eliprodil直接作用靶點(diǎn)為GSDME蛋白的非N端片段中的PDPK1結(jié)合區(qū)域，阻止GSDME發(fā)揮下游PI3K?AKT通路激活功能，從而抑制巨噬細(xì)胞M2樣極化，本發(fā)明經(jīng)過(guò)體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)表明，Eliprodil顯著抑制腫瘤的增殖，減少腫瘤浸潤(rùn)的TAMs(M2樣)的數(shù)量，增加毒性CD8+T細(xì)胞的浸潤(rùn)，而且與免疫檢查點(diǎn)抑制劑αPD?1聯(lián)用顯著抑制腫瘤的生長(zhǎng)，具有很好的協(xié)同增敏作用，且毒性小，具有良好的應(yīng)用前景。

技術(shù)研發(fā)人員：代智,陳世平,張佩玲,權(quán)冰,蔡佳亮,祝桂琦,宋麗娜
受保護(hù)的技術(shù)使用者：復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/26