本發(fā)明涉及一種野茉莉提取物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：野茉莉(styraxjaponicussieb.etzucc.)為安息香科安息香屬植物，又名野花棓、茉莉苞、木香柴、野白果樹、脆果子樹、木橘子和耳完桃。生于海拔400-1800m的林中，主要分布于我國北自秦嶺和黃河以南，東起山東、福建，西至云南東北部和四川東部，南達(dá)臺(tái)灣、廣東和廣西北部?！吨腥A本草》、《全國中草藥匯編》等典籍記載，野茉莉的藥用部位為其葉或果實(shí)，具有祛風(fēng)除濕，舒筋通絡(luò)之功效，主治風(fēng)濕痹痛，癱瘓。近幾年，野茉莉的研究報(bào)道主要集中在野茉莉葉和果實(shí)的化學(xué)成分和單體化合物體外生物活性的研究，現(xiàn)已分離鑒定44個(gè)化合物，木脂素和五環(huán)三萜類化合物為其主要成分，部分單體化合物具有抗腫瘤、抗氧化、抗菌、抗病毒和抗炎等作用。野茉莉的實(shí)際應(yīng)用，其藤莖用作器具、雕刻、傘柄、拐杖、玩具等細(xì)木工用材，種子油用于肥皂或機(jī)器潤(rùn)滑油，油粕可作肥料，花作庭園觀賞植物，以及植物用于水土保持。但是，野茉莉的臨床藥用和食用價(jià)值方面，研究少、報(bào)道少，中國專利cn1830976公開了安息香屬植物的果實(shí)中總苯并呋喃含量較多，其提取物可以用于治療雌性激素缺乏所引起的疾病。目前，基本沒有針對(duì)野茉莉葉相關(guān)的食品或藥品的開發(fā)和應(yīng)用。近幾年，野茉莉的研究報(bào)道主要集中在野茉莉葉和果實(shí)的化學(xué)成分和單體化合物體外生物活性的研究，現(xiàn)已分離鑒定44個(gè)化合物，木脂素和五環(huán)三萜類化合物為其主要成分，部分單體化合物具有抗腫瘤、抗氧化、抗菌、抗病毒和抗炎等作用。野茉莉的實(shí)際應(yīng)用，其藤莖用作器具、雕刻、傘柄、拐杖、玩具等細(xì)木工用材，種子油用于肥皂或機(jī)器潤(rùn)滑油，油粕可作肥料，花作庭園觀賞植物，以及植物用于水土保持。但是，野茉莉的臨床藥用和食用價(jià)值方面，研究少、報(bào)道少，中國專利cn1830976公開了安息香屬植物的果實(shí)中總苯并呋喃含量較多，其提取物可以用于治療雌性激素缺乏所引起的疾病。目前，基本沒有針對(duì)野茉莉葉和芽相關(guān)的食品或藥品的開發(fā)和應(yīng)用。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是將野茉莉葉或茶葉進(jìn)行提取，最大程度地得到的野茉莉的活性成分，發(fā)揮出野茉莉提取物的優(yōu)勢(shì)，可以將其制成多種類型的藥用或其他用途的制劑，應(yīng)用方便。本發(fā)明的技術(shù)方案是，提供一種野茉莉提取物的制備方法，用80-100℃的水對(duì)野茉莉植物干品進(jìn)行浸泡和/或煎煮，得到提取液，將提取液濃縮、干燥得到野茉莉提取物；所述野茉莉植物干品是指干燥的野茉莉植物的葉和/或芽，或者野茉莉植物的葉和/或芽制成的野茉莉茶。優(yōu)選地，先用80-100℃的水對(duì)野茉莉植物干品進(jìn)行浸泡，得到浸泡液和浸泡藥渣，再用80-100℃的水對(duì)浸泡藥渣進(jìn)行煎煮，得到煎煮液，將浸泡液和煎煮液合并得到提取液。優(yōu)選地，對(duì)浸泡藥渣進(jìn)行煎煮時(shí)，煎煮的次數(shù)為1-3次，煎煮的時(shí)間為20-120分鐘，優(yōu)選60-120分鐘，更優(yōu)選80-100分鐘。優(yōu)選地，煎煮時(shí)，每次用水量為浸泡藥渣重量的10-30倍。優(yōu)選地，所述浸泡的時(shí)間為3-120分鐘，浸泡的次數(shù)為1-2次；當(dāng)針對(duì)野茉莉茶葉進(jìn)行提取時(shí)(如茶飲)，可以只浸泡幾分鐘，如3-8分鐘即可；若需要提高野茉莉茶提取物的濃度，則需要較長(zhǎng)時(shí)間的浸泡，如20-120分鐘。優(yōu)選地，浸泡時(shí)，每次用水量為野茉莉植物干品重量的20-50倍。優(yōu)選地，在常壓下對(duì)所述野茉莉植物干品進(jìn)行浸泡和/或煎煮。優(yōu)選地，野茉莉茶是以野茉莉植物的葉、葉芽和/或花芽為原料；將原料攤放、殺青、揉捻、炒制、烘干后得到。本發(fā)明提供一種野茉莉提取物，由上述制備方法獲得。本發(fā)明進(jìn)一步提供所述的野茉莉提取物在制備治療咽喉炎、慢性氣管炎、舌痛、牙痛、肺癆吐血、急性關(guān)節(jié)炎、糖尿病或乳癰的藥物中的應(yīng)用。優(yōu)選地，將本申請(qǐng)的水提取物制成口服液，可以大大地節(jié)省濃縮所用的能耗；當(dāng)然，本申請(qǐng)的提取物的清涼潤(rùn)喉效果特別好，特別適合制成含片。也可以根據(jù)不同的需求制成多種其他制劑。本發(fā)明經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，野茉莉葉的藥用價(jià)值高，但是將野茉莉葉作為藥材，通過煎煮后，制得其提取物，本發(fā)明還意外地發(fā)現(xiàn)將野茉莉葉簡(jiǎn)單地浸泡后，某些方面的療效會(huì)更好。其原因可能是野茉莉葉中活性成分的熱穩(wěn)定性較差，或者高溫時(shí)會(huì)與其他成分發(fā)生反應(yīng)，長(zhǎng)時(shí)間的高溫煎煮會(huì)導(dǎo)致其活性成分的結(jié)構(gòu)被破壞；同時(shí)也有可能是由于此種植物的細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)不利于其中活性成分的溶出。本發(fā)明所說的煎煮一種常用的中藥提取方法，其特點(diǎn)是長(zhǎng)時(shí)間的保持高溫，將中藥的活性成分溶出。而浸泡與煎煮中長(zhǎng)時(shí)間加熱不同，它僅僅是使用熱水浸沒中藥進(jìn)行提取，提取期間不再需要加熱，其特點(diǎn)是提取溫度逐漸下降。對(duì)于野茉莉這種藥材，浸泡后得到的活性成分與煎煮后得到的活性成分差別比較大，且將為使得藥材的藥用價(jià)值最大化地體現(xiàn)，可將兩種提取工藝結(jié)合，先進(jìn)行浸泡，而后對(duì)浸泡后的藥渣進(jìn)行煎煮。本發(fā)明進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)野茉莉葉或芽經(jīng)過殺青、炒制等步驟后，其有效成分的溶出效果會(huì)提高，并且在短時(shí)間內(nèi)的浸泡后即可達(dá)到很高的溶出率?；诖耍景l(fā)明可通過制茶的工藝將新鮮的野茉莉葉制成野茉莉茶葉，由于飲茶時(shí)一般都是用熱水或沸水浸泡，高溫的持續(xù)時(shí)間較短，可以充分實(shí)現(xiàn)野茉莉葉的藥用價(jià)值。研究發(fā)現(xiàn)，野茉莉葉具有較高的藥用價(jià)值，但是野茉莉葉直接食用或藥用，味苦澀，有較強(qiáng)的草腥味，口感差。本發(fā)明意外地發(fā)現(xiàn)野茉莉葉經(jīng)過殺青、炒制等步驟后，用開水浸泡，苦味基本消失，飲時(shí)口腔和喉嚨有似薄荷樣的清涼感，口感非常好，按常規(guī)的飲茶標(biāo)準(zhǔn)添加野茉莉茶，發(fā)現(xiàn)飲后清涼感明顯且持續(xù)的時(shí)間很長(zhǎng)，飲用20ml的茶水，在1小時(shí)內(nèi)，口腔及喉嚨處可以保持明顯的清涼感。與未經(jīng)殺青、炒制的野茉莉葉相比具有明顯的優(yōu)勢(shì)。本發(fā)明進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)應(yīng)用制茶工藝中的殺青、炒制等步驟可以使野茉莉葉的有效成分在短時(shí)間浸泡后即可達(dá)到較高的溶出率。而且此種生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，成本低廉，節(jié)能環(huán)保，利用率高。經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，揉捻能夠破壞細(xì)胞組織，茶飲服用時(shí)能增加有效成分例如總萜類、茶多酚及主要活性成分的溶出率。并且殺青能夠破壞野茉莉植株中氧化酶的活性，從而避免對(duì)植物中含量較高的多酚類物質(zhì)的氧化，保證野茉莉茶葉外觀色澤的同時(shí)，最大限度的保持其有效成分不受破壞。另外，炒制、烘干可以降低含水率，提高茶的香味，并便于存儲(chǔ)。對(duì)于茶葉的殺青，方式有很多種，比如手工炒制殺青，工業(yè)機(jī)械殺青，微波殺青，蒸汽殺青。本發(fā)明主要采用工業(yè)機(jī)械殺青，具體的工藝條件為：采用滾筒殺青機(jī)殺青，筒腔內(nèi)空氣溫度設(shè)置在200-300℃之間，每次殺青時(shí)間為1-3min，當(dāng)進(jìn)口溫度達(dá)150℃-160℃時(shí)，出口溫度達(dá)120℃時(shí)，開始投葉，投葉量10-13kg/h。以使筒內(nèi)溫度平穩(wěn)，要求殺透殺勻，清香顯露，手握柔軟，有1/3左右葉緣略卷，手握有觸手感，失重在30％左右為宜。揉捻的具體的方式有：手工揉捻，機(jī)器揉捻。手工揉捻：在攤涼過程中趁溫度下降時(shí)用手將殺青后的新鮮嫩芽或/和花芽沿一個(gè)方向揉搓成團(tuán)，揉至有明顯汁液滲出后均勻攤開、抖散；再揉搓成團(tuán)，揉至有明顯汁液滲出后再均勻攤開、抖散；如此循環(huán)往復(fù)，揉捻至使新鮮嫩芽或/和花芽的成條率至少達(dá)到60％以上后，以1-3厘米的厚度均勻攤放于竹篩內(nèi)；機(jī)器揉捻：在攤涼過程中趁溫度下降時(shí)將殺青后的新鮮嫩芽或/和花芽置于揉捻機(jī)里，揉捻至使新鮮嫩芽或/和花芽的成條率達(dá)到60-80％后，以1-3厘米的厚度均勻攤放于竹篩內(nèi)。其中野茉莉茶的制備工藝優(yōu)選以下方法：以野茉莉植物的葉、葉芽和/或花芽為原料；將原料攤放、殺青、揉捻、炒制、烘干后得到。優(yōu)選殺青的次數(shù)為3-5次，殺青的溫度為160-200℃，每次殺青的時(shí)間為1-3分鐘；每次殺青完成后降至室溫再進(jìn)行下一次殺青。優(yōu)選地，殺青的溫度為170-190℃，每次殺青的時(shí)間為1.5-2分鐘。優(yōu)選地，殺青步驟完成后進(jìn)行揉捻，然后進(jìn)行炒制，炒制完成后繼續(xù)揉捻，依此循環(huán)2-4次。優(yōu)選地，炒制的溫度為80-100℃，每次炒制的時(shí)間為1.5-5分鐘。優(yōu)選地，揉捻和炒制的具體步驟為：殺青步驟完成后進(jìn)行第一次揉捻直至成條率達(dá)到60％以上，再進(jìn)行第一次炒制；第一次炒制至減重率達(dá)到15-25％時(shí)，進(jìn)行第二次揉捻，直至成條率達(dá)到90％以上，再進(jìn)行第二次炒制至減重率達(dá)到70-80％，再進(jìn)行烘干。優(yōu)選地，烘干的溫度為75-90℃，烘干的時(shí)間為4-6小時(shí)，烘干時(shí)通入空氣。本發(fā)明的野茉莉茶葉水提物經(jīng)小鼠口灌胃未見明顯異常毒性作用；經(jīng)體外抑菌試驗(yàn)表明，野茉莉茶葉對(duì)大腸埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌有顯著的抑菌作用。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，野茉莉茶葉水提物可顯著抑制角叉菜膠致大鼠足趾的腫脹，并可有效改善二甲苯涂布引起的小鼠耳廓腫脹，表明野茉莉茶葉具有抗炎作用；野茉莉茶葉水提物可有效延長(zhǎng)氨水引起小鼠咳嗽的潛伏期，并顯著減少咳嗽次數(shù)，表明其具有止咳作用。另外，使申請(qǐng)人意外的是，口腔潰瘍患者飲用本發(fā)明的茶飲品后，治療效果非常好，幾分鐘內(nèi)即可使大部分患者的疼痛感覺消失，一半左右的患者可在數(shù)小時(shí)內(nèi)痊愈。本發(fā)明的野茉莉葉或茶葉制成野茉莉提取物，尤其是采用浸泡的方式進(jìn)行提取野茉莉葉，具有明顯的創(chuàng)新性，來自純天然的原料，長(zhǎng)期使用強(qiáng)身健體。本發(fā)明的有益效果是，本發(fā)明制備的野茉莉茶葉具有清熱解毒、順氣化痰、止咳潤(rùn)肺的功能，提高了傳統(tǒng)野茉莉藥材的藥用價(jià)值。將野茉莉葉或茶葉進(jìn)行提取，最大程度地得到的野茉莉的活性成分，發(fā)揮出野茉莉提取物的優(yōu)勢(shì)，可以將其制成多種類型的藥用或其他用途的制劑，應(yīng)用方便。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。野茉莉植物干品既可以包括野茉莉茶，也可以包括那些按照類似制茶工藝獲得的野茉莉植物干品。經(jīng)過初步試驗(yàn)，未經(jīng)制茶或類似制茶工藝(如無殺青、揉捻步驟)獲得的野茉莉植物干品同樣也可以體現(xiàn)出一些功能和藥效，但是與野茉莉茶相比，口感、藥效均有較明顯的下降。所以以下實(shí)施例主要系統(tǒng)地對(duì)野茉莉茶的提取物進(jìn)行研究。實(shí)施例1：野茉莉茶葉的制備本實(shí)施例提供一種野茉莉茶葉制備方法，包括以下步驟：a、原料準(zhǔn)備：挑選野茉莉成熟植株新鮮嫩芽或/和花芽作為原料，以頂芽帶兩對(duì)新鮮嫩芽或/和花芽為采集對(duì)象，采集長(zhǎng)度0.3-8厘米，并經(jīng)流水快速?zèng)_掉所述原料表面的異物；b、原料攤放：將經(jīng)流水快速清洗后的新鮮或/和花芽均勻攤放在竹篩內(nèi)，置通風(fēng)且陰涼處攤放；攤放在竹篩內(nèi)的厚度為0.5-5厘米，晾干，時(shí)間為0.5-3小時(shí)；c、殺青：利用滾筒機(jī)殺青：筒腔內(nèi)溫度設(shè)置在280℃，殺青時(shí)間為1.5-2min，即茶葉從進(jìn)口到出口之間的時(shí)間。投放茶葉后，滾筒會(huì)降溫，形成連續(xù)投放后，筒腔內(nèi)溫度在180℃左右，投葉量10-13kg/h，溫度力求平穩(wěn)，要求殺透殺勻，清香顯露，手握柔軟，有1/3左右葉緣略卷，手握有觸手感，失重在30％左右為宜。d、攤涼：將經(jīng)過殺青處理后的新鮮嫩芽或/和花芽趁熱攤放于竹篩內(nèi)冷卻；e、一次揉捻：在攤涼過程中趁溫度下降時(shí)將殺青后的新鮮嫩芽或/和花芽沿一個(gè)方向揉搓成團(tuán)，揉至有明顯汁液滲出后均勻攤開、抖散；再揉搓成團(tuán)，揉至有明顯汁液滲出后再均勻攤開、抖散；如此循環(huán)往復(fù)，直至新鮮嫩芽或/和花芽成條率至少達(dá)到60％以上后，均勻攤放于竹篩內(nèi)；f、初炒：將一次揉捻后的新鮮嫩芽或/和花芽置于鐵鍋中進(jìn)行炒制，炒至減重率為20％；初炒時(shí)鐵鍋內(nèi)的溫度為60-80度，炒制時(shí)間為30-60分鐘；g、二次揉捻：將初炒后的新鮮嫩芽或/和花芽按照步驟e中的方法再次揉捻，直至新鮮嫩芽或/和花芽成條率達(dá)到90-100％后，再均勻攤放于竹篩內(nèi)；h、復(fù)炒：將二次揉捻后的新鮮嫩芽或/和花芽置于鐵鍋中進(jìn)行復(fù)炒，炒至減重率為70-80％；復(fù)炒時(shí)鐵鍋內(nèi)的溫度為50-70度，炒制時(shí)間為30-60分鐘；i、干燥冷卻：將復(fù)炒后的新鮮嫩芽或/和花芽置于干燥箱內(nèi)，干燥至恒重。其中干燥箱內(nèi)的溫度為60-80度，放置，干燥30-180分鐘，干燥后涼至室溫，即可得到野茉莉茶葉成品。實(shí)施例2：野茉莉茶葉的制備與實(shí)施例1的步驟類似，區(qū)別在于炒制的步驟中使用也使用滾筒，滾筒設(shè)置為180℃，形成穩(wěn)定投料后，溫度降低至80-90℃，每次炒制保持3-5分鐘。揉捻和炒制的循環(huán)次數(shù)由實(shí)施例1的2次提升至4次。實(shí)施例3：野茉莉葉鮮品、普通干品和野茉莉茶葉的口感比較(1)實(shí)驗(yàn)樣品野茉莉葉鮮品：成熟植株新鮮葉、嫩芽或/和花芽；野茉莉葉普通干品：將野茉莉葉鮮品曬干；野茉莉茶葉：實(shí)施例1制備得到野茉莉茶葉。(2)實(shí)驗(yàn)方法稱取野茉莉葉鮮品5g，野茉莉茶葉0.5g，分別加入開水200ml，浸泡15分鐘，通過口嘗和貯存等檢測(cè)指標(biāo)，分析野茉莉葉處理前后的品質(zhì)變化。(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表1野茉莉葉鮮品和野茉莉茶葉的口感比較野茉莉葉鮮品味苦，澀，有草腥味，使用量大，不易保存，使用不方便；野茉莉茶葉味微苦，有清涼感，飲后口腔和喉嚨有似薄荷樣的清涼感，浸泡量少，使用方便，易保存。野茉莉葉經(jīng)加工后，口感、應(yīng)用性均有明顯提高。類似地，將野茉莉葉鮮品曬干，得到野茉莉葉普通干品。將野茉莉葉干品用開水浸泡，發(fā)現(xiàn)青草味雖然較鮮品弱，但是依然明顯，苦味并未改善，清涼感也并不明顯。實(shí)施例4：野茉莉茶葉不同加工品體外抗氧化作用的比較(1)樣品制備實(shí)施例1制備得到野茉莉茶葉，隨機(jī)稱取100g，加沸水浸泡，制成1g生藥量/ml浸泡液，記為a。實(shí)施例1制備得到野茉莉茶葉，隨機(jī)稱取100g，加沸水煎煮1.5小時(shí)，制成1g生藥量/ml提取液，記為b。采收野茉莉成熟植株新鮮嫩芽或/和花芽，自然晾干，隨機(jī)稱取100g，加沸水煎煮1.5小時(shí)，制成1g生藥量/ml提取液，記為c。采收野茉莉成熟植株新鮮嫩芽或/和花芽，80-90度加熱至干，隨機(jī)稱取100g，加沸水煎煮1.5小時(shí)，制成1g生藥量/ml提取液，記為d。(2)1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(dpph)自由基清除能力的測(cè)定取野茉莉葉提取液，置于10ml具塞試管中，加入2×104mol/ldpph50％乙醇溶液2ml，充分混勻，室溫條件下，避光靜置30min后，在517nm下測(cè)定吸光度為ai，空白對(duì)照組以蒸餾水代替樣品測(cè)定的吸光值為ao。計(jì)算公式見：e(％)＝(ao-ai)/ao×100％。(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表2不同野茉莉茶葉提取液的dpph自由基清除能力(％)樣品e1e2e3平均值a74.873.277.675.2b64.761.860.762.4c48.551.650.250.1d53.853.959.755.8通過比較野茉莉葉的不同加工方法和提取方法制得樣品對(duì)dpph自由基清除能力的影響，如表2所示，不同樣品對(duì)dpph自由基清除能力分別為a>b>d>c，其中野茉莉茶葉的浸泡液表現(xiàn)出較強(qiáng)的dpph自由基清除活性，清除率達(dá)到75.2％。進(jìn)一步地，實(shí)施例1制備得到野茉莉茶葉，加沸水浸泡后，得到浸泡液和藥渣，對(duì)藥渣用沸水再進(jìn)行煎煮，得到煎煮液，煎煮液與浸泡液合并，濃縮制成1g生藥量/ml，測(cè)試dpph自由基清除能力達(dá)到80％。實(shí)施例5：野茉莉茶葉提取物體外抑菌作用(1)樣品制備實(shí)施例1制備得到野茉莉茶葉，隨機(jī)稱取100g，加水浸泡1.5小時(shí)，制成1g生藥量/ml提取液，即得。(2)實(shí)驗(yàn)方法無菌操作條件下，采用肉湯連續(xù)稀釋法將滅菌處理過的野茉莉茶葉水提物與mh液體培養(yǎng)基(2×)二倍稀釋，使培養(yǎng)基中受試物的終濃度分別為0.500、0.250、0.125、0.063g生藥量/ml，分別接種大腸埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌于含上述濃度受試物的mh液體培養(yǎng)基中，各試驗(yàn)菌最終濃度約為105cfu/ml，同時(shí)接種于不含受試物的mh液體培養(yǎng)基中，作為陽性對(duì)照，另設(shè)不接種菌液的mh液體培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照，36℃培養(yǎng)48h，觀察各菌株生長(zhǎng)情況及記錄受試物的最小抑菌濃度(mic)。(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果野茉莉茶葉對(duì)大腸埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌、沙門氏菌的mic為0.250生藥量/ml，對(duì)金黃色葡萄球菌的mic為0.125生藥量/ml，對(duì)白色念珠菌(0.063-0.500生藥量/ml)無抑菌活性。表3野茉莉茶葉提取物對(duì)實(shí)驗(yàn)菌株生長(zhǎng)的影響“+”：代表生長(zhǎng)；“-”：代表未生長(zhǎng)；實(shí)施例6：野茉莉茶葉提取物對(duì)足趾腫脹的影響(1)樣品制備實(shí)施例1制備得到野茉莉茶葉，隨機(jī)稱取100g，加水煎煮1.5小時(shí)，制成1g生藥量/ml提取液，即得。(2)實(shí)驗(yàn)方法野茉莉茶葉水提物的人體推薦食用量為5g/天，成人體重按60kg計(jì)，折合劑量約0.083g野茉莉茶葉/kg。該實(shí)驗(yàn)將野茉莉茶葉水提物的人體推薦食用量的5、10、30倍分別作為功效試驗(yàn)的低、中、高劑量，即野茉莉茶葉水提物低、中、高劑量分別為0.42、0.83、2.50g野茉莉茶葉/kg；陽性對(duì)照藥阿司匹林片的臨床用量為150mg/日，按體表面積法換算成小鼠等效劑量約為19.5mg/kg，該實(shí)驗(yàn)采用其等效劑量的2倍進(jìn)行試驗(yàn)，即阿司匹林片的劑量為39mg/kg(表4)。表4試驗(yàn)分組和劑量設(shè)計(jì)選取檢疫合格的雄性sd大鼠(spf級(jí))，體重范圍194.5～210.4g，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按體重隨機(jī)分為4組，即溶媒對(duì)照組、野茉莉茶葉水提物低、中和高劑量組，每組10只，各給樣組大鼠按10ml/kg灌胃給予相應(yīng)受試物，溶媒對(duì)照組灌胃給予等量蒸餾水，每日一次，連續(xù)給樣30天。足趾腫脹率：末次給予受試物1h后，測(cè)量各組大鼠注入致炎劑(1％角叉菜膠溶液，0.1ml/只)前和注入后1h、2h、4h及6h右后足趾容積，同一部位測(cè)量3次，取平均值，以注入致炎劑后不同時(shí)間點(diǎn)與注入前足趾容積之差為腫脹值，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)的足趾腫脹率，腫脹率(％)＝腫脹值/致炎前足趾容積×100％。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用spss16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的水平設(shè)定為p<0.05。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，足趾容積為重復(fù)測(cè)量資料，滿足球?qū)ΨQ和齊性，采用單樣本重復(fù)測(cè)量資料方差分析或成組重復(fù)測(cè)量資料方差分析，不符合球?qū)ΨQ時(shí)，要校正f界值。評(píng)價(jià)時(shí)考慮統(tǒng)計(jì)學(xué)差異和生物學(xué)意義。(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表5野茉莉茶葉提取物對(duì)足趾腫脹率的影響注：與模型對(duì)照組相比，*p<0.05，**p<0.01。與模型組相比，野茉莉茶葉水提物各給樣組動(dòng)物足趾腫脹率整體呈降低趨勢(shì)，注射致炎劑后1h、2h野茉莉茶葉水提物低、高劑量組足趾腫脹率均明顯或顯著降低(p<0.05或p<0.01)，其中野茉莉茶葉水提物低劑量組足趾腫脹率在注射致炎劑后4h、6h仍顯著降低(p<0.01)(表5)。上述結(jié)果表明，該實(shí)驗(yàn)條件下，野茉莉茶葉水提物對(duì)大鼠體重?zé)o明顯影響，對(duì)角叉菜膠致大鼠足趾腫脹具有明顯抑制作用。實(shí)施例7：野茉莉茶葉提取物對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響(1)樣品制備實(shí)施例1制備得到野茉莉茶葉，隨機(jī)稱取100g，加水煎煮1.5小時(shí)，制成1g生藥量/ml提取液，即得。(2)實(shí)驗(yàn)方法選用檢疫合格雄性icr小鼠50只(spf級(jí))，按體重隨機(jī)分為5組，即模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組(阿司匹林片，39mg/kg)、野茉莉茶葉水提物低劑量組(0.42g生藥量/kg)、中劑量組(0.83g生藥量/kg)、高劑量組(2.50g生藥量/kg)，每組10只，各給樣組小鼠按20ml/kg灌胃給予相應(yīng)劑量的受試物，模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組灌胃給予等量蒸餾水或阿司匹林藥液，每日一次，連續(xù)7天。末次給予受試物后1h于每只小鼠右耳廓內(nèi)外側(cè)涂二甲苯致炎，左耳不涂作為對(duì)照，30min后處死，沿耳廓基線剪下雙耳，用9mm直徑打孔器打下左耳和右耳相同部位的圓片，并立即用分析天平準(zhǔn)確稱取左、右耳片重量，計(jì)算耳腫脹率。(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表6野茉莉茶葉提取物對(duì)小鼠耳腫脹率的影響注：與模型對(duì)照組相比，*p<0.05，**p<0.01。與模型組相比，野茉莉茶葉水提物低、高劑量組耳廓腫脹率均明顯或顯著降低(p<0.05或p<0.01)，陽性對(duì)照藥組(阿司匹林片)耳腫脹率亦顯著降低(p<0.01)(表6)。上述結(jié)果表明，該實(shí)驗(yàn)條件下，野茉莉茶葉水提物可有效改善二甲苯涂布引起的小鼠耳廓腫脹，提示其具有抗炎作用。實(shí)施例8：野茉莉茶葉提取物的止咳作用(對(duì)氨水引起小鼠咳嗽的影響)(1)樣品制備實(shí)施例1制備得到野茉莉茶葉，隨機(jī)稱取100g，加水煎煮1.5小時(shí)，制成1g生藥量/ml提取液，即得。(2)實(shí)驗(yàn)方法選取檢疫合格的icr小鼠50只(spf級(jí))，雌雄各半，按性別體重隨機(jī)分為5組，即模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組(枸櫞酸噴托維林片，9.75mg/kg)、野茉莉茶葉水提物低劑量組(0.42g生藥量/kg)、中劑量組(0.83g生藥量/kg)、高劑量組(2.50g生藥量/kg)，每組10只，各給樣組小鼠按20ml/kg灌胃給予相應(yīng)劑量的受試物，模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組灌胃給予等量蒸餾水或枸櫞酸噴托維林片藥液，每日一次，連續(xù)7天。末次給予受試物1h后將小鼠放入誘咳引喘儀內(nèi)，噴入14％濃氨水5s刺激致咳，檢測(cè)小鼠首次咳嗽潛伏期及5min內(nèi)的咳嗽次數(shù)。數(shù)據(jù)處理全部數(shù)據(jù)均采用spss16.0統(tǒng)計(jì)處理軟件進(jìn)行方差分析，試驗(yàn)數(shù)據(jù)用表示。(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果與模型組相比，野茉莉茶葉水提物中、高劑量組咳嗽潛伏期均顯著延長(zhǎng)(p<0.01)；野茉莉茶葉水提物各給樣組咳嗽次數(shù)均顯著減少(p<0.01)，陽性對(duì)照藥組(枸櫞酸噴托維林片)咳嗽次數(shù)亦顯著減少(p<0.01)(表7)。上述結(jié)果表明，該實(shí)驗(yàn)條件下，野茉莉茶葉水提物可有效延長(zhǎng)氨水引起的咳嗽潛伏期，低、中、高劑量組均顯著減少咳嗽次數(shù)，提示其具有止咳作用。表7野茉莉茶葉提取物對(duì)小鼠咳嗽潛伏期和咳嗽次數(shù)的影響注：與模型對(duì)照組相比，**p<0.01。實(shí)施例9：野茉莉茶葉提取物急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)(1)樣品制備實(shí)施例1制備得到野茉莉茶葉，隨機(jī)稱取100g，加水煎煮1.5小時(shí)，制成1g生藥量/ml提取液，即得。(2)實(shí)驗(yàn)方法選取檢疫合格的spf級(jí)icr小鼠70只，雌雄各半，平均體重：19.9g，體重18.2～21.8g，按性別體重隨機(jī)分為7組，分別為溶媒對(duì)照組(蒸餾水)、野茉莉茶葉水提物劑量組1(32.2g野茉莉茶葉/kg)、劑量組2(38.6g野茉莉茶葉/kg)、劑量組3(46.3g野茉莉茶葉/kg)、劑量組4(55.6g野茉莉茶葉/kg)、劑量組5(66.7g野茉莉茶葉/kg)和劑量組6(80.0g野茉莉茶葉/kg)，每組10只。實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水15h后，按40ml/kg經(jīng)口灌胃給予相應(yīng)劑量的野茉莉茶葉水提物或蒸餾水，實(shí)驗(yàn)當(dāng)天給樣一次，給樣后0～4h內(nèi)仔細(xì)觀察并記錄各組動(dòng)物是否出現(xiàn)毒性反應(yīng)以及毒性反應(yīng)癥狀、出現(xiàn)時(shí)間以及死亡情況等，此后連續(xù)觀察14天，記錄動(dòng)物死亡情況及體重變化。表8試驗(yàn)分組及劑量設(shè)計(jì)(3)檢測(cè)指標(biāo)a、一般臨床觀察：給樣后0～4h內(nèi)仔細(xì)觀察并記錄各組動(dòng)物是否出現(xiàn)毒性反應(yīng)以及毒性反應(yīng)癥狀、出現(xiàn)時(shí)間以及死亡情況等，如動(dòng)物死亡，則進(jìn)行大體解剖觀察，存活動(dòng)物此后連續(xù)觀察14天；b、體重：給樣當(dāng)天及給樣后第4天、第7天、第10天、第14天進(jìn)行動(dòng)物稱重；c、大體解剖觀察：觀察結(jié)束時(shí)，麻醉后處死所有動(dòng)物，進(jìn)行大體解剖觀察；d、半數(shù)致死量(ld50)：根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，計(jì)算ld50。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析選用spss16.0，計(jì)量資料均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組間比較方差齊時(shí)采用單因素方差分析進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，兩兩比較，采用lsd-t或snk-q檢驗(yàn)，p≤0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ld50采用probitanalysis進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。評(píng)價(jià)時(shí)考慮統(tǒng)計(jì)學(xué)差異和生物學(xué)意義。(4)實(shí)驗(yàn)結(jié)果a、一般臨床觀察給藥當(dāng)天0～4h內(nèi)：溶媒對(duì)照組和野茉莉茶葉水提物劑量組1(32.2g野茉莉茶葉/kg)小鼠給樣后未見明顯異常，野茉莉茶葉水提物劑量組2(38.6g野茉莉茶葉/kg)、劑量組3(46.3g野茉莉茶葉/kg)、劑量組4(55.6g野茉莉茶葉/kg)、劑量組5(66.7g野茉莉茶葉/kg)小鼠給樣后均出現(xiàn)不同程度的毒性反應(yīng)，主要表現(xiàn)為俯臥不動(dòng)、行動(dòng)遲緩、呼吸急促、腹部凹陷、四肢劇烈抽搐，部分動(dòng)物死亡，野茉莉茶葉水提物劑量組6(80.0g野茉莉茶葉/kg)小鼠在給樣后6h內(nèi)全部死亡。給樣當(dāng)日野茉莉茶葉水提物劑量組1、2、3、4、5、6小鼠死亡率分別為0％、20％、30％、80％、90％、100％，毒性反應(yīng)呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。b、體重如表9所示：給樣前及給樣后存活小鼠第4天、第7天、第10天和第14天稱重，小鼠體重增長(zhǎng)均在正常范圍內(nèi)，無明顯異常。表9野茉莉茶葉經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)小鼠體重統(tǒng)計(jì)結(jié)果(n＝10)注：“/”表示無動(dòng)物存活。c、大體解剖觀察對(duì)給樣后死亡動(dòng)物進(jìn)行大體解剖，肉眼觀察各分泌器官未見明顯異常，臟器的位置、大小、色澤、表面和切面的質(zhì)地等均未見異常改變。最后一次觀察結(jié)束后采用麻醉處死所有存活小鼠并進(jìn)行大體解剖檢查，肉眼觀察臟器的位置、大小、色澤、粘連、表面和切面的質(zhì)地等，均未見積液及腫瘤等異常改變。d、半數(shù)致死量(ld50)小鼠經(jīng)口灌胃給予野茉莉茶葉水提物的ld50為48.9g野茉莉茶葉/kg(置信區(qū)間為44.3～53.9g野茉莉茶葉/kg)，按人體推薦食用量5g/天(體重60kg)計(jì)，該劑量相當(dāng)于人體推薦食用量的587倍。(5)實(shí)驗(yàn)結(jié)論本實(shí)驗(yàn)條件下，小鼠經(jīng)口灌胃給予野茉莉茶葉水提物未見明顯異常毒性反應(yīng)的劑量≥32.2g野茉莉茶葉/kg，按人體推薦食用量5g/天(體重60kg)計(jì)，該劑量相當(dāng)于人體推薦食用量的386倍。當(dāng)前第1頁12