本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種復(fù)方黃柏液透皮吸收制劑及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

復(fù)方黃柏液是中華人民共和國衛(wèi)生部批準(zhǔn)的國家級(jí)三類新藥，國家八五規(guī)劃開發(fā)項(xiàng)目，功能是清熱解毒，消腫止痛、祛腐生肌，適用于潰瘍潰破等皮膚疾病[姚俊，趙霞.復(fù)方黃柏液最新臨床應(yīng)用進(jìn)展[j].中國新藥雜志，2014,23(3):308-312]。復(fù)方黃柏液共由黃柏、連翹、金銀花、蒲公英和蜈蚣五味中藥組成，其中藥物黃柏為君藥。其為洗劑，用法是將紗布條浸泡于藥液外敷于感染傷口內(nèi)，或破潰的膿腫內(nèi)，若潰瘍較深，可用直徑0.5～1.0cm的無菌膠管，插入潰瘍深部，以注射器抽取本品進(jìn)行沖洗[江滟，易旭.黃柏膠囊與抗生素的體外聯(lián)合抗菌作用研究[j].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2014,23(3):309-310]。這種外用制劑可使藥物避開肝臟首過效應(yīng)及胃腸道破壞，中藥有效成分可直接、快速地作用于創(chuàng)面，減少給藥次數(shù)，還可在藥物出現(xiàn)副反應(yīng)時(shí)隨時(shí)終止給藥[吳巍，苗明三.常用中藥外用制劑的特點(diǎn)及應(yīng)用[j].中醫(yī)學(xué)報(bào)，2011,26(152):108-110]。國內(nèi)對(duì)其外用藥效學(xué)和臨床應(yīng)用的研究已很深入，但對(duì)其經(jīng)皮滲透的藥物動(dòng)力學(xué)行為并未見到報(bào)道。外用制劑透皮吸收是其主要的藥效基礎(chǔ)，因此對(duì)復(fù)方黃柏液的處方進(jìn)行改進(jìn)，通過添加不同的促透皮吸收劑來觀察其透皮吸收的效果，從而論證處方改進(jìn)的優(yōu)劣性，有助于復(fù)方黃柏液的處方優(yōu)化及質(zhì)量控制。

藥物的經(jīng)皮吸收受藥物的理化性質(zhì)、經(jīng)皮給藥系統(tǒng)和皮膚的生理病理三方面因素的影響。藥物的理化性質(zhì)因素包括藥物分子大小和形狀、熔點(diǎn)、溶解度和分配系數(shù)、分子形式等；經(jīng)皮給藥系統(tǒng)因素包括劑型、給藥系統(tǒng)的組成、中藥復(fù)方成分等；皮膚的生理病理因素包括年齡和性別差異、部位差異、病理因素以及皮膚水合程度、皮膚溫度等其他因素。

透皮吸收促進(jìn)劑(penetrationenhancers，pe)是一種具有能暫時(shí)性的調(diào)節(jié)經(jīng)皮通透性的物質(zhì)。目前被采用的pe種類較多，主要分為以下幾類：(1)水；(2)亞砜類；(3)吡咯烷酮類；(4)脂肪酸類和醇類；(5)氮酮類及其衍生物；(6)表面活性劑(包括陰離子表面活性劑、陽離子表面活性劑和非離子表面活性劑)；(7)尿素及其衍生物；(8)揮發(fā)油及萜類；(9)混合物pe。

中國期刊《中國醫(yī)院藥學(xué)雜志》2013年第21期刊出的論文“促滲劑對(duì)消喘巴布劑中白芥子體外透皮吸收特性的影響”，探討了不同的透皮促滲劑對(duì)消喘巴布劑中白芥子體外透皮吸收特性的影響，結(jié)果：芥子堿硫氰酸鹽體外透皮吸收符合零級(jí)動(dòng)力學(xué)方程，不同的促滲劑對(duì)芥子堿透皮吸收影響的順序?yàn)椋涸鹿鸬锿?gt;丙二醇>薄荷腦，同種促滲劑的不同濃度對(duì)消喘巴布劑透皮吸收影響的順序?yàn)椋涸鹿鸬锿?％>3％>5％；丙二醇5％>7％>3％；薄荷腦1％>3％>2％，結(jié)論：不同的透皮促滲劑都能促進(jìn)消喘巴布劑中芥子堿的透皮吸收，但是不同的濃度促滲效果卻不同，其中以1％月桂氮革酮促滲效果最好。

中國期刊《湖北中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)》2011年05期刊出的論文“幾種促滲劑對(duì)布洛芬巴布劑體外透皮性的影響”，研究了幾種促滲劑對(duì)布洛芬巴布劑透皮作用的影響。結(jié)果：不同促滲劑對(duì)5％布洛芬巴布劑的累積滲透量q及滲透速率k的影響大小為：氮酮、丙二醇、薄荷腦、冰片，但只有氮酮和丙二醇表現(xiàn)出顯著性(p<0.05)，冰片和薄荷腦對(duì)布洛芬巴布劑透皮作用基本無影響，2％氮酮和5％丙二醇對(duì)其影響最大。結(jié)論：提示2％氮酮和5％丙二醇可作為促滲劑在布洛芬巴布劑中使用。

中國期刊《福建中醫(yī)藥》2011年03期刊出的論文“薄荷腦、冰片及合用對(duì)青藤堿體外透皮吸收的影響”，用valia-chien雙室擴(kuò)散池研究青藤堿的透皮速率以及薄荷腦、冰片、薄荷腦與冰片合用等透皮促進(jìn)劑對(duì)青藤堿微乳吸收的影響。結(jié)果：青藤堿溶液分別加3％薄荷腦、3％冰片、薄荷腦與冰片合用后透皮速率分別為(63.42±3.28)、(51.46±2.12)、(97.41±10.32)μg/(cm²/h)，促滲作用由強(qiáng)到弱依次為3％薄荷腦加3％冰片、3％冰片、3％薄荷腦，與對(duì)照組相比，滲透速率分別提高了3.23倍、2.10倍、1.71倍。結(jié)論：薄荷腦、冰片及其合用對(duì)青藤堿體外透皮吸收都有促進(jìn)作用，其中兩者合用最強(qiáng)。

然而，目前還未見對(duì)復(fù)方黃柏液的體外透皮行為的研究。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種透皮吸收效果更好的復(fù)方黃柏液透皮吸收制劑及其制備方法和應(yīng)用。

本發(fā)明第一方面提供了一種復(fù)方黃柏液透皮吸收制劑，其包含復(fù)方黃柏液、冰片和薄荷腦。

作為一個(gè)優(yōu)選例，所述的復(fù)方黃柏液透皮吸收制劑為洗劑、噴霧劑、膏劑或凝膠劑。

較優(yōu)地，所述的復(fù)方黃柏液透皮吸收制劑為洗劑，所述的冰片質(zhì)量濃度為0.2％-1.2％，所述的薄荷腦質(zhì)量濃度為0.2％-1.2％。

更優(yōu)地，所述的復(fù)方黃柏液透皮吸收制劑的制備方法包括以下步驟：取冰片和薄荷腦混合后充分研磨，融化后加入吐溫80再研磨，邊攪拌邊加入復(fù)方黃柏液。更優(yōu)地，所述的吐溫80的體積與加入復(fù)方黃柏液后制劑總體積的比例為：(2-6):100。

本發(fā)明的另一方面提供了如上所述的復(fù)方黃柏液透皮吸收制劑的制備方法，包括以下步驟：取冰片和薄荷腦混合后充分研磨，融化后加入吐溫80再研磨，邊攪拌邊加入復(fù)方黃柏液。

作為一個(gè)優(yōu)選例，所述的吐溫80的體積與加入復(fù)方黃柏液后制劑總體積的比例為：(2-6):100。

本發(fā)明的再一方面提供了如上任一所述的復(fù)方黃柏液透皮吸收制劑在制備防感染藥物中的應(yīng)用。

本文中，所述的復(fù)方黃柏液由黃柏、連翹、金銀花、蒲公英和蜈蚣五味中藥組成，其中藥物黃柏為君藥，鹽酸小檗堿為其主要藥效成分。其組方可以為：連翹80g、黃柏40g、金銀花40g、蒲公英40g、蜈蚣2.4g，常規(guī)方法煎煮制備成1000ml?；诒景l(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以知曉，冰片和薄荷腦合用可以有效促進(jìn)鹽酸小檗堿的透皮吸收，因此，本發(fā)明所述的復(fù)方黃柏液并不限于上述五味中藥組成的特定洗劑，其還包含對(duì)復(fù)方黃柏液進(jìn)行原料藥的替換、減少或增加后獲得的組方，只要其仍然含有鹽酸小檗堿成分。所述的薄荷腦分子式c10h20o，英文名為menthol，為無色針狀或棱柱狀白色結(jié)晶。所述的冰片分子式c10h18o，英文名borneol，為白色、半透明結(jié)晶。

本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于：

本研究以黃柏的有效成分鹽酸小檗堿的累積滲透量、透皮速率常數(shù)為指標(biāo)，首次對(duì)復(fù)方黃柏液的體外透皮行為開展了比較研究。在研究過程中發(fā)明人克服了指標(biāo)選擇、分析色譜條件和透皮吸收接受液的摸索等種種困難，最終測(cè)試了多種促透皮吸收劑對(duì)復(fù)方黃柏液的促滲透作用，結(jié)果表明加入復(fù)合冰片和薄荷腦后冰片和薄荷腦產(chǎn)生了協(xié)同作用(與對(duì)照組相比，1％冰片、1％薄荷腦、復(fù)合0.5％冰片和0.5％薄荷腦使復(fù)方黃柏液中小檗堿的滲透速率分別提高了0.36倍、0.29倍、0.74倍)，其透皮吸收率明顯提高。此外，冰片本身具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗細(xì)菌和抗真菌的藥理作用，因此在復(fù)方黃柏液中加入冰片、薄荷腦后，不僅能增加該制劑的有效成分的透皮吸收，而且將提高其臨床清熱解毒，消腫祛腐的功效。本發(fā)明為復(fù)方黃柏液的處方優(yōu)化、質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

附圖說明

圖1-4.專屬性色譜圖譜。圖1.鹽酸小檗堿陽性對(duì)照液色譜圖；圖2.供試品溶液色譜圖；圖3.復(fù)方黃柏液供試品溶液色譜圖；圖4.陰性對(duì)照液色譜圖。

圖5.鹽酸小檗堿的線性關(guān)系圖。

圖6.四種接受液鹽酸小檗堿累積透過量。

圖7.三種改進(jìn)處方制劑鹽酸小檗堿累積透過量。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式作詳細(xì)說明。

實(shí)施例1

1.儀器與材料

1.1儀器

高效液相色譜儀(島津lc-10at，spd-10avp紫外可見光譜檢測(cè)器)；藥物透皮擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)儀(長海醫(yī)院)；擴(kuò)散池(上海玉妍科學(xué)儀器有限公司)；十萬分之一電子分析天平(mettlertoledoxp105dr)；1ml移液槍(江蘇盛奧華環(huán)?？萍加邢薰?；親水ptfe針式過濾器(孔徑0.45μm)(上海安譜科學(xué)儀器有限公司)；ph2型酸度計(jì)(上海天達(dá)儀器有限公司)。

1.2試劑和材料

復(fù)方黃柏液(山東漢方制藥，批號(hào)131212)；鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品(86.7％，中國食品藥品檢定研究院，110713-201212)；磷酸二氫鉀(江蘇永華精細(xì)化學(xué)品有限公司，批號(hào)130608)；庚烷磺酸鈉(上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司，批號(hào)140418)；三乙胺(南京威爾化工有限公司，批號(hào)130115)；甲醇(色譜純，美國天地有限公司)；乙腈(色譜純，美國天地有限公司)；超純水；氯化鈉(江蘇永華精細(xì)化學(xué)品有限公司，批號(hào)141015)；無水乙醇(常熟市楊園化工有限公司，批號(hào)20140425)；聚乙二醇-400(南京威爾化工有限公司，批號(hào)20140425)。

雄性sd大鼠，體重(200±20)g，由第二軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物飼養(yǎng)中心提供。

2.方法與結(jié)果

2.1鹽酸小檗堿測(cè)定方法的建立

2.1.1色譜條件

色譜柱：diamonsilc18(5μm，4.6mm*250mm)，流動(dòng)相：乙腈-磷酸鹽緩沖液[0.05mol/l磷酸二氫鉀溶液和0.05mol/l庚烷磺酸鈉溶液(1:1)含0.2％的三乙胺，并用磷酸調(diào)節(jié)ph至3.0](40:60)，檢測(cè)波長265nm，流速1.0ml/min，柱溫：30℃，進(jìn)樣量：20μl。

2.1.2對(duì)照品溶液的制備

精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加入甲醇溶解，即得。

2.1.3供試品溶液的制備

按復(fù)方黃柏液制備工藝制得供樣品溶液。

2.1.4復(fù)方黃柏液供試品的制備

精密量取復(fù)方黃柏液3ml置10ml量瓶中，加甲醇5ml，置60℃水浴鍋中保溫15min，取出，超聲處理(功率500w，頻率40khz)30min，加甲醇稀釋至刻度線，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.5陰性對(duì)照溶液的制備

按復(fù)方黃柏液的處方比例和生產(chǎn)工藝按照“2.2”項(xiàng)下的操作制備不含黃柏的陰性對(duì)照溶液，然后將陰性溶液置于擴(kuò)散池。

2.1.6專屬性實(shí)驗(yàn)

分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液、復(fù)方黃柏液供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液，按照“2.1.1”色譜條件檢測(cè)，得到相應(yīng)圖譜(見圖1-4)，在陰性對(duì)照?qǐng)D譜中，在鹽酸小檗堿相應(yīng)的出峰時(shí)間里無峰出現(xiàn)，說明該方法專屬性較好。

2.1.7標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

精密稱定鹽酸小檗堿1.38mg置于50ml容量瓶中，加入40ml甲醇，加熱溶解，自然冷卻，再加甲醇定容至50ml，得到濃度為23.8μg/ml的母液1，再從母液1中取出2.5ml置于20ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，得到濃度為2.975μg/ml的母液2，用移液槍精密量取母液21.25ml置于20ml容量瓶，再分別量取1.25ml、2.5ml、5ml置于10ml容量瓶，用甲醇定容得到濃度為0.18595μg/ml、0.3719μg/ml、0.7438μg/ml、1.4875μg/ml的對(duì)照品溶液，再從母液1中精密量取2.5ml、5ml分別置于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到濃度為5.95μg/ml、11.9μg/ml的對(duì)照品溶液。分別按“2.1.1”中的色譜條件進(jìn)行進(jìn)樣，以鹽酸小檗堿濃度x(mg/ml)對(duì)吸收峰面積y回歸，得回歸方程y＝121135x-10758，r²＝0.9998，結(jié)果表明鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在0.00372-0.0238μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。見圖5。

2.1.8精密度實(shí)驗(yàn)

取濃度為1.4875μg/ml的對(duì)照品溶液20μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定結(jié)果的rsd＝0.47％，表明儀器的精密度良好。結(jié)果見表1。

表1精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n＝5)

2.1.9穩(wěn)定性試驗(yàn)

按“2.3.1”項(xiàng)下操作，取生理鹽水為接受液時(shí)24h的供試液，按“2.1.1”中的色譜條件于0、2、4、6、8、12、24h進(jìn)行進(jìn)樣，測(cè)定結(jié)果的rsd＝1.35％，表明供試品在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。結(jié)果見表2。

表2穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n＝7)

2.1.10加樣回收實(shí)驗(yàn)

按“2.3.1”項(xiàng)下操作，取生理鹽水24h的接受液，精密量取一定體積的樣品液9份，分別精密加入相當(dāng)于供試品中鹽酸小檗堿含量80％、100％、120％的標(biāo)準(zhǔn)品。依法測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。平均回收率為x＝107.82％，rsd＝1.95％。結(jié)果見表3。

表3加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n＝9)

2.2樣品的制備

①單加冰片改進(jìn)處方：取1g冰片加入4ml吐溫80進(jìn)行研磨，邊攪拌邊加入復(fù)方黃柏液至100ml，即得。

②單加薄荷腦改進(jìn)處方：取1g薄荷腦加入4ml吐溫80進(jìn)行研磨，邊攪拌邊加入復(fù)方黃柏液至100ml，即得。

③復(fù)合添加改進(jìn)處方：取0.5g冰片和0.5g薄荷腦混合后充分研磨，融化后加入4ml吐溫80再研磨，邊攪拌邊加入復(fù)方黃柏液至100ml，即得。

2.3透皮吸收試驗(yàn)的研究

2.3.1透皮吸收實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)前24小時(shí)，將sd大鼠的腹部絨毛用脫毛膏脫除干凈，然后將大鼠頸椎脫臼處死，小心迅速剝皮，將取下的腹部皮膚平鋪于干凈的玻璃板上，角質(zhì)層朝下。用刀片小心剔除皮下的脂肪組織及粘連物，用生理鹽水反復(fù)沖洗干凈，置于生理鹽水中，低溫冰箱中保存?zhèn)溆?，每次?shí)驗(yàn)前目視檢查皮膚的完整性，不能有任何破損。

在透皮擴(kuò)散試驗(yàn)儀上，采用水平擴(kuò)散池[程力惠，盧麗霞.復(fù)方黃柏液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[j].亞熱帶植物科學(xué)，2012,28(9):524-526]，該擴(kuò)散池由兩只筒狀玻璃管對(duì)合而成，夾于其中的鼠皮將其分為兩室，分別為擴(kuò)散池和接受池，在擴(kuò)散池和接受池中分別放入磁力攪拌子以維持接收池的動(dòng)態(tài)環(huán)境，在接受池的右邊連一取樣管，供進(jìn)樣、取樣及排除氣泡用，接受池的體積為5ml，擴(kuò)散面積為2.8cm²，從冰箱中取出離體鼠皮，以生理鹽水洗凈，用濾紙吸干表面水分，將處理好的鼠皮固定于擴(kuò)散池和接受池之間，角質(zhì)層朝向擴(kuò)散池，然后向擴(kuò)散池中加入復(fù)方黃柏液5ml，各接受池中分別加入接受液5ml，水域恒溫至32℃，恒速攪拌(200r/min)。分別于實(shí)驗(yàn)開始后2h、4h、8h、12h、24h從樣品接受池中取出1ml接受液，同時(shí)各補(bǔ)加同體積的32℃預(yù)熱的試液，排除氣泡。將取出的樣品液經(jīng)0.45μm的微孔濾膜過濾后，進(jìn)行含量測(cè)定。所測(cè)樣品峰面積根據(jù)當(dāng)日標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度，然后按下式計(jì)算單位面積累積透過量：

式中，cn為第n個(gè)取樣點(diǎn)測(cè)得的藥物質(zhì)量濃度(μg·ml^-1)，ci為第i個(gè)取樣點(diǎn)測(cè)得的藥物質(zhì)量濃度(μg·ml^-1)，vi為取樣體積，a為擴(kuò)散池有效滲透面積(cm²)，v為擴(kuò)散池容積(ml)，以時(shí)間t為橫坐標(biāo)，單位面積累積滲透量q為縱坐標(biāo)，繪制經(jīng)皮滲透曲線。以q對(duì)t進(jìn)行回歸得線性方程，直線部分斜率即為穩(wěn)態(tài)透皮速率常數(shù)j(μg·cm^-2·h^-2)。

2.3.2透皮吸收不同接受液的選擇

將生理鹽水、20％乙醇生理鹽水、40％乙醇生理鹽水、20％聚乙二醇-400(peg-400)溶液作為接受液分別按上述有關(guān)操作方法進(jìn)行透皮吸收實(shí)驗(yàn)。結(jié)果見表4和圖6。通過實(shí)驗(yàn)觀察，本研究選擇生理鹽水作為接受液。

表4四種接受液鹽酸小檗堿累積透過量

2.3.3改進(jìn)處方后制劑的透皮吸收實(shí)驗(yàn)

將2.2中進(jìn)行處方改進(jìn)后的制劑分別按上述有關(guān)操作方法進(jìn)行透皮吸收實(shí)驗(yàn)。結(jié)果見表5和圖7。

表5三種改進(jìn)處方制劑鹽酸小檗堿累積透過量

實(shí)施例2

我們?cè)谘芯窟^程中同時(shí)使用了其他幾種促透皮吸收劑，現(xiàn)以其中之一示例如下。

按照與實(shí)施例1相同的有關(guān)操作方法制備以下樣品，測(cè)試對(duì)于復(fù)方黃柏液的透皮吸收效果的影響：

①單加樟腦改進(jìn)處方：取1g樟腦加入4ml吐溫80進(jìn)行研磨，邊攪拌邊加入復(fù)方黃柏液至100ml，即得。

②冰片和樟腦復(fù)合添加改進(jìn)處方：取0.5g冰片和0.5g樟腦混合后充分研磨，融化后加入4ml吐溫80再研磨，邊攪拌邊加入復(fù)方黃柏液至100ml，即得。

以上兩種改進(jìn)后的制劑透皮吸收實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表6。

表6兩種改進(jìn)處方制劑鹽酸小檗堿累積透過量

實(shí)施例3

我們?cè)谘芯窟^程中同時(shí)考察了不同濃度冰片和薄荷腦對(duì)于復(fù)方黃柏液的透皮吸收效果的影響，該實(shí)驗(yàn)的有關(guān)操作方法同實(shí)施例1。結(jié)果見表7。

表7冰片/薄荷腦不同濃度下的改進(jìn)處方制劑鹽酸小檗堿累積透過量

在本發(fā)明的研究中，發(fā)明人不斷地克服了很多困難。中藥外用復(fù)方制劑在進(jìn)行經(jīng)皮實(shí)驗(yàn)時(shí)，測(cè)定指標(biāo)往往不易選擇。既由于中藥復(fù)方制劑的復(fù)雜性，也常因?yàn)橥高^量少而不易測(cè)出。因黃柏為本方制劑主藥，其中所含小檗堿藥理作用明確且與本方功能相符[侯巍，于海，焦淑清，于蓮.兩種擴(kuò)散池在透皮實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用[j].黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2002,25(5):66]，所以，本發(fā)明采用hplc法測(cè)定其經(jīng)皮滲透量，作為衡量經(jīng)皮滲透效果的指標(biāo)，具有良好的代表性。2010版中國藥典中對(duì)于黃柏藥材中鹽酸小檗堿的測(cè)定條件是向流動(dòng)相中加入十二烷基磺酸鈉，進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)品后發(fā)現(xiàn)峰型雜亂，推測(cè)可能是十二烷基磺酸鈉損毀色譜柱，故用庚烷磺酸鈉代替十二烷基磺酸鈉。按照藥典，磷酸鹽緩沖液:乙腈(50:50)，在測(cè)定鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)，在5分鐘出峰較好，然而在測(cè)定復(fù)方黃柏液時(shí)，分離度不好，要使分離度達(dá)標(biāo)就需要減低乙腈比例，延長出峰時(shí)間[程力惠，盧麗霞.復(fù)方黃柏液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[j].亞熱帶植物科學(xué)，2012,28(9):524-526]，于是調(diào)整流動(dòng)相的比例，改為(55:45)測(cè)得的分離度仍然不理想，之后又調(diào)整比例為(65:45)此時(shí)出峰時(shí)間較晚，15分鐘左右才出峰且峰拖尾比較嚴(yán)重，乙腈比例過低，會(huì)造成峰形拖尾及出峰時(shí)間過長[潘軍.rp-hplc法同時(shí)測(cè)定復(fù)方黃柏液中鹽酸小檗堿、綠原酸和連翹苷的含量[j].齊魯藥事，2009,28(9):524-526]，經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)，當(dāng)磷酸鹽緩沖液-乙腈比例為60:40時(shí)，其分離度較好，出峰時(shí)間8分鐘左右，為了改善峰型，減弱其拖尾程度，加入0.2％的三乙胺，此時(shí)的峰型較好，且在出峰部分無陰性干擾，適合測(cè)得透皮吸收后鹽酸小檗堿的含量。

選擇適合的透皮吸收接受液是開展藥物的體外經(jīng)皮滲透試驗(yàn)的重要基礎(chǔ)。接受液應(yīng)具有接受通過離體皮膚的藥物的能力，一般應(yīng)考慮藥物在其中的溶解度。常用的接受液如生理鹽水、磷酸鹽緩沖液可滿足水溶性藥物的體外透皮試驗(yàn)要求，但對(duì)于在水中溶解度較小的藥物，上述接受液難以達(dá)到漏槽條件而需加入一定添加劑以增加藥物溶解度，常用的是不同濃度乙醇。鹽酸小檗堿在水中溶解度小，常使用低濃度乙醇作為接受液。但經(jīng)過多次大量實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)加入乙醇、peg-400的生理鹽水透過量反而沒有生理鹽水高，與其他制劑實(shí)驗(yàn)的結(jié)果不一致[劉俊紅，王紅孫，曲鵬飛，等.金黃膏中小檗堿體外透皮吸收研究[j].中成藥，2014，36(l)：65-69]。其原因可能是中藥復(fù)方中其他藥物的成分對(duì)其透皮吸收有干擾作用，也可能是由于我們實(shí)驗(yàn)的藥物是液體制劑的水溶液，長時(shí)間覆蓋于皮膚上，增加了皮膚角質(zhì)層的含水量，從而有利于角質(zhì)層細(xì)胞的膨脹而增加藥物的透過。而乙醇雖能增加鹽酸小檗堿的溶解度但同時(shí)會(huì)改變皮膚結(jié)構(gòu)，其由下向上擴(kuò)散到皮膚表層，反而增加了大鼠皮膚角質(zhì)層結(jié)構(gòu)的致密性，從而對(duì)藥物體外透皮實(shí)驗(yàn)的測(cè)定產(chǎn)生一定影響。根據(jù)結(jié)果，我們最終選擇生理鹽水溶液為接受液。

復(fù)方黃柏液是外用液體制劑，由連翹、黃柏、金銀花、蒲公英、蜈蚣五味中藥組成，臨床應(yīng)用于瘡瘍潰后、傷口感染較為廣泛。但該制劑處方缺乏外用制劑普遍存在的透皮吸收輔料，為此我們選用冰片、薄荷腦、樟腦、桉樹腦等進(jìn)行處方設(shè)計(jì)，通過透皮吸收實(shí)驗(yàn)可以看得出，單加冰片、薄荷腦、樟腦均可增加小檗堿的透皮吸收率；而加入復(fù)合冰片和薄荷腦后其透皮吸收率明顯提高，并超過二者單加者，與對(duì)照組相比，1％冰片、1％薄荷腦、復(fù)合0.5％冰片和0.5％薄荷腦使復(fù)方黃柏液中小檗堿的滲透速率分別提高了0.36倍、0.29倍、0.74倍，可見冰片和薄荷腦同時(shí)作為復(fù)方黃柏液的促滲劑，產(chǎn)生了協(xié)同作用，效果顯著增強(qiáng)；與對(duì)照組相比，1％冰片、1％樟腦、復(fù)合0.5％冰片和0.5％樟腦使復(fù)方黃柏液中小檗堿的滲透速率分別提高了0.36倍、0.16倍、0.28倍；比較結(jié)果可以得出冰片和薄荷腦同時(shí)使用效果最優(yōu)；進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)冰片和樟腦在0.2％-1.2％的濃度范圍內(nèi)作用均較好。此外，冰片本身具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗細(xì)菌和抗真菌的藥理作用，因此我們認(rèn)為本發(fā)明對(duì)復(fù)方黃柏液的處方改進(jìn)，不僅能增加該制劑的有效成分的透皮吸收，而且將提高其臨床的清熱解毒，消腫祛腐功效。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，這些改進(jìn)和補(bǔ)充也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。