本發(fā)明屬于中藥配方顆粒技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種香附四物顆粒的制備方法及其質(zhì)量控制方法。

背景技術(shù)：

香附四物湯由香附、木香、延胡索、當(dāng)歸、川芎、熟地黃、白芍等七味藥組成，為行氣化瘀代表方之一，出自清代梁廉夫《不知醫(yī)必要》卷四，具有養(yǎng)血調(diào)血，行氣止痛之功效，主治氣滯血瘀所致痛經(jīng)、月經(jīng)不調(diào)等癥。

痛經(jīng)的發(fā)生主要與經(jīng)期子宮內(nèi)膜合成和釋放前列腺素增加有關(guān)，子宮肌反應(yīng)性過高，繼發(fā)子宮肌層缺血導(dǎo)致疼痛。中醫(yī)認(rèn)為，痛經(jīng)的主要病機(jī)是由情志所傷、起居不慎或六淫為害等病因造成的氣血運(yùn)行不暢、氣機(jī)阻滯，不通則痛。氣血運(yùn)行不暢是最主要的病理基礎(chǔ)，臨床上則以氣滯血瘀型的痛經(jīng)多見。

香附四物湯由四物湯加香附、木香、延胡索組成，具有養(yǎng)血調(diào)血行氣止痛的功效，主治氣滯血瘀所致痛經(jīng)、月經(jīng)不調(diào)等癥。是行氣化瘀代表方之一。香附味辛、甘、微苦，性平偏溫，主要?dú)w肝經(jīng)，辛散溫通，入肝，能通行氣血，善調(diào)理肝氣之郁，又能調(diào)暢經(jīng)血之滯，故有調(diào)肝理氣，調(diào)經(jīng)止痛之作用，李時珍稱贊其為“氣病之總司，女科之主帥”，說明對氣滯血瘀型婦科病有特殊療效。常與當(dāng)歸合用，一主氣分，一主血分，氣血并治，共奏理氣活血之功。木香，味辛、苦，性溫，主要?dú)w脾、胃、大腸、三焦經(jīng)，辛香行散，苦降溫通，能升可降，通理三焦，有行氣止痛，健脾消食之功效，常與香附、延胡索等合用，以疏肝活血調(diào)經(jīng)止痛。延胡索，味辛、苦性溫，主要?dú)w心、肝、脾、肺經(jīng)，辛散苦泄溫通，即入心肝經(jīng)走血分，又入脾肺經(jīng)走氣分，既能活血，又能行血中之氣，而且又能止痛，故為活血行氣止痛之要藥，凡一身上下諸通之屬與氣滯血瘀者，均可用之。常配以當(dāng)歸等，以通絡(luò)行滯祛痛。

生物效應(yīng)研究表明香附四物湯對整體小鼠痛經(jīng)模型具有顯著的抑制作用，能顯著抑制小鼠離體子宮的收縮頻率及收縮活動力，并對COX-2酶的抑制作用顯著增強(qiáng)；能夠明顯改善氣滯血瘀模型大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)，干預(yù)的血虛小鼠模型改善外周血象作用不明顯，在抑制痛經(jīng)作用中以鎮(zhèn)痛為主。臨床研究表明，該方治療氣滯血瘀型原發(fā)性痛經(jīng)的總有效率超過80％，較大品種月月舒痛經(jīng)寶顆粒、布洛芬緩釋膠囊更能夠改善患者痛經(jīng)癥狀。

中藥湯劑作為傳統(tǒng)的中醫(yī)臨床用藥的主要劑型，具有隨證加減、靈活組方、易于吸收、起效較快等優(yōu)點(diǎn)，深受廣大患者的信賴。卻因調(diào)配、攜帶、臨時煎煮、久置容易發(fā)生霉敗變質(zhì)、湯液味苦、量大等缺點(diǎn)不能適應(yīng)現(xiàn)代人的生活要求。中藥配方顆粒保持了單味藥的多藥效性，最大限度的保留了藥物的有效成分，但目前中藥配方顆粒都是單味中藥提取物，使用時“單味提取，混合沖服”，存在“共煎”和“分煎”的差異性問題。復(fù)方配方顆粒傳承了中藥單味配方顆粒的優(yōu)點(diǎn)，同時又考慮了飲片在煎煮過程中的相互作用，符合中醫(yī)傳統(tǒng)用藥理論，具有較大的價值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種香附四物顆粒的制備方法及其質(zhì)量控制方法。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種香附四物顆粒的制備方法，它是由重量比3:2:3:6:3:8:3的香附、木香、延胡索、當(dāng)歸、川芎、熟地和白芍制成，具體包括以下步驟：

a.按以上重量比稱取當(dāng)歸、川芎、香附和木香飲片，加入藥材總重量5-15倍重量的水，浸泡10-15小時后，然后水蒸氣蒸餾提取8-12小時，提取揮發(fā)油；

b.取揮發(fā)油加入β-環(huán)糊精和水充分研磨，冷凍干燥得揮發(fā)油包合物；

c.取揮發(fā)油提取后所得殘?jiān)尤肷鲜鲋亓勘鹊氖斓?、白芍和延胡索，加水煎?～3次，每次加水量為總藥材的6-14倍，煎煮1-3小時，合并藥液，濾過，減壓干燥至相對密度1.00-1.15的濃縮液，加入體積濃度95％乙醇至濃縮液中乙醇濃度為80～85％，靜置，抽濾，取濾液，減壓濃縮，干燥，得干膏粉；

d.取干膏粉按一定比例加入糊精、糖粉，混勻，制粒，干燥，整粒，最后加入步驟b制得的揮發(fā)油包合物，即得。

作為優(yōu)選方案，以上所述的香附四物顆粒的制備方法，具體包括以下步驟：

a.按以上重量比稱取當(dāng)歸、川芎、香附和木香飲片，加入藥材總重量8倍重量的水，浸泡12小時后，水蒸氣蒸餾提取10小時，提取揮發(fā)油；

b.取揮發(fā)油加入β-環(huán)糊精和水充分研磨，冷凍干燥得揮發(fā)油包合物；

c.揮發(fā)油提取后所得殘?jiān)?，加入上述重量比的熟地、白芍和延胡索，加水煎?次，每次加水量為總藥材的10倍，煎煮3小時，合并藥液，濾過，減壓干燥至相對密度1.05-1.08的濃縮液，加入體積濃度為95％乙醇至濃縮液中乙醇濃度為80％，靜置24小時后，抽濾，濾液減壓濃縮，干燥，得干膏粉；

d.取干膏粉加入糊精、糖粉，混勻，制粒，干燥，整粒，最后加入步驟b制備得到的揮發(fā)油包合物，即得。

本發(fā)明的當(dāng)歸、川芎、香附和木香含有揮發(fā)油，為最大限度的提取有效成分，本發(fā)明采用揮發(fā)油收集裝置，獲得揮發(fā)油，并對其進(jìn)行包合處理。優(yōu)選的步驟b中，所述β-環(huán)糊精的加入量為揮發(fā)油體積的5-20倍，特別優(yōu)選8-15倍；水的加入量為揮發(fā)油體積的10-50倍，特別優(yōu)選20-40倍。

優(yōu)選的步驟d中，糊精的加入量為干膏粉重量的0-2倍，特別優(yōu)選1～2倍，糖粉的加入量為干膏粉重量的0-2倍，特別優(yōu)選1～2倍。

本發(fā)明還提供了一種上述制備方法制備的香附四物顆粒的質(zhì)量控制方法，采用薄層色譜定性鑒別和高效液相色譜含量測定。

具體包括以下方法中的一種或幾種：

所述的香附四物顆粒的質(zhì)量控制方法，其特征在于，包括以下方法中的一種或幾種：

(1)采用薄層色譜定性鑒別

取香附四物顆粒，研細(xì)，加碳酸氫鈉溶液，超聲處理，離心，取上清液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2～3，用乙醚振搖提取2～3次，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，作為藁本?nèi)酯供試品溶液；

取香附四物顆粒，加乙醇超聲溶解，置水浴上濃縮，用乙醚振搖提取2～3次，合并乙醚提取液，再向上述乙醚溶液中加碳酸鈉溶液振搖提取，棄去乙醚液，提取液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2～3，再用乙醚振搖提取，合并乙醚提取液，揮干，殘?jiān)蛹状既芙?，作為阿魏酸供試品溶液?/p>

取當(dāng)歸、川芎對照藥材，加乙醇超聲處理，置水浴上濃縮，用乙醚振搖提取2～3次，合并乙醚提取液，再向上述乙醚溶液中加碳酸鈉溶液振搖提取，棄去乙醚液，提取液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2～3，再用乙醚振搖提取，合并乙醚提取液，揮干，殘?jiān)蛹状既芙猓瞥蓪φ账幉娜芤海?/p>

取香附、木香、延胡索、熟地和白芍，加乙醇超聲處理，置水浴上濃縮，用乙醚振搖提取2～3次，合并乙醚提取液，再向上述乙醚溶液中加碳酸鈉溶液振搖提取，棄去乙醚液，提取液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2～3，再用乙醚振搖提取，合并乙醚提取液，揮干，殘?jiān)蛹状既芙?，制成雙陰性對照溶液；

取阿魏酸和藁本內(nèi)酯對照品，加甲醇制成對照品溶液；

照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述5種溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為30:1:3的苯-冰醋酸-甲醇為展開劑，展開，取出，涼干，置紫外光燈下，365nm檢視，結(jié)果，供試品與對照品的相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對照品無干擾；

(2)采用薄層色譜定性鑒別

取香附四物顆粒，研細(xì)，加乙醚加熱回流，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ト芙猓鳛楣┰嚻啡芤海?/p>

取川芎藥材粉末，加乙醚加熱回流，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ト芙?，制成對照藥材溶液?/p>

取香附、木香、延胡索、熟地、當(dāng)歸和白芍，加乙醚加熱回流，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ト芙猓瞥申幮詫φ杖芤海?/p>

取歐當(dāng)歸內(nèi)酯A對照品，加乙酸乙酯制成對照品溶液；

照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述4種溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以體積比為3:1的正己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，涼干，置紫外光燈下254nm檢視，結(jié)果，供試品與對照品的相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對照品無干擾；

(3)采用薄層色譜定性鑒別

取香附四物顆粒，研細(xì)，加乙醚，放置1～2小時，時時振搖，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ナ谷芙?，作為供試品溶液?/p>

取香附對照藥材粉末，加乙醚，放置1～2小時，時時振搖，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ナ谷芙庵瞥蓪φ账幉娜芤海?/p>

取木香、延胡索、當(dāng)歸、川芎、熟地和白芍藥材，加乙醚，放置1～2小時，時時振搖，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ナ谷芙庵瞥申幮詫φ杖芤海?/p>

取α-香附酮對照品，加乙酸乙酯制成對照品溶液；

照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述4種溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，用體積比為80:1:1的二氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸為展開劑，展開，取出，涼干，置紫外光燈254nm下檢視，再噴以2,4-二硝基苯肼乙醇試液，可見光下檢視；結(jié)果，供試品與對照品的相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對照品無干擾；

(4)采用薄層色譜定性鑒別

取香附四物顆粒，研細(xì)，加石油醚，冷浸30～60分鐘，時時振搖，濾過，濾液揮干，殘?jiān)哟姿嵋阴ナ谷芙猓鳛楣┰嚻啡芤海?/p>

取木香對照藥材的粉末，加石油醚，冷浸30～60分鐘，時時振搖，濾過，濾液揮干，殘?jiān)哟姿嵋阴ナ谷芙庵瞥蓪φ账幉娜芤海?/p>

取香附、延胡索、當(dāng)歸、川芎、熟地和白芍，加石油醚，冷浸30～60分鐘，時時振搖，濾過，濾液揮干，殘?jiān)哟姿嵋阴ナ谷芙庵瞥申幮詫φ杖芤海?/p>

取去氫木香內(nèi)酯對照品和木香烴內(nèi)酯對照品，加甲醇制成對照品溶液；

照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述4種溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，用體積比15:5:1以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，涼干，噴以5％香草醛硫酸乙醇溶液，加熱，至斑點(diǎn)顯色清晰，日光檢視，結(jié)果，供試品與對照品的相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對照品無干擾；

(5)采用薄層色譜定性鑒別

取顆粒15g，研細(xì)，加水100mL，溫?zé)崾蛊涑浞秩苌ⅲ爬?，用脫脂棉濾過，濾液用乙醚振搖提取2次，每次25mL，棄去乙醚液，再用乙酸乙酯振搖提取2次，每次25mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。取1g熟地藥材的粉末，同法制成對照藥材溶液；取缺熟地樣品15g，同法制成陰性對照溶液。取5-羥甲基糠醛對照品，加甲醇制成每1mL含0.290mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn)，吸取上述4種溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二甲苯-乙酸乙酯(1:1)為展開劑，展開，取出，涼干，噴以2,4-二硝基苯肼乙醇溶液，日光檢視。結(jié)果，供試品與對照品的相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對照品無干擾。

(6)采用薄層色譜定性鑒別

取香附四物顆粒，研細(xì)，加水，加熱溶解，用水飽和正丁醇萃取2～3次，合并正丁醇液，以正丁醇飽和水洗滌，合并正丁醇液，水浴揮干，加甲醇溶解，采用硅膠柱，先以體積比為10:1的三氯甲烷和甲醇洗脫，再以體積比為9:1的三氯甲烷和甲醇洗脫，最好以體積比為8:1的三氯甲烷和甲醇洗脫，收集后續(xù)8:1洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓鳛楣┰嚻啡芤海?/p>

取白芍對照藥材粉末，加水，超聲處理，用水飽和正丁醇萃取2～3次，合并正丁醇液，以正丁醇飽和水洗滌，合并正丁醇液，水浴揮干，加甲醇溶解，采用硅膠柱，先以體積比為10:1的三氯甲烷和甲醇洗脫，再以體積比為9:1的三氯甲烷和甲醇洗脫，最好以體積比為8:1的三氯甲烷和甲醇洗脫，收集后續(xù)8:1洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，制成對照藥材溶液?/p>

取香附、木香、延胡索、當(dāng)歸、川芎和熟地藥材，加水，超聲處理，用水飽和正丁醇萃取2～3次，合并正丁醇液，以正丁醇飽和水洗滌，合并正丁醇液，水浴揮干，加甲醇溶解，采用硅膠柱，先以體積比為10:1的三氯甲烷和甲醇洗脫，再以體積比為9:1的三氯甲烷和甲醇洗脫，最好以體積比為8:1的三氯甲烷和甲醇洗脫，收集后續(xù)8:1洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，制成陰性對照溶液?/p>

精密稱取芍藥苷對照品，加甲醇制成對照品溶液；

照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述4種溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為40:5:10:0.2三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸為展開劑，展開，取出，涼干，噴以5％香草醛硫酸乙醇溶液，日光檢視，結(jié)果，供試品與對照品的相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對照品無干擾。

(7)采用薄層色譜定性鑒別

取香附四物顆粒，研細(xì)，加甲醇，超聲處理，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀芙?，加濃氨試液調(diào)至堿性，用乙醚振搖提取，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，作為供試品溶液?/p>

取延胡索對照藥材的粉末，加甲醇，超聲處理，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀芙?，加濃氨試液調(diào)至堿性，用乙醚振搖提取，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙庵瞥蓪φ账幉娜芤海?/p>

取香附、木香、當(dāng)歸、川芎、熟地和白芍，加甲醇，超聲處理，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀芙?，加濃氨試液調(diào)至堿性，用乙醚振搖提取，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙庵瞥申幮詫φ杖芤海?/p>

精密稱取延胡索乙素對照品，加甲醇制成對照品溶液；

照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述4種溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為9:2甲苯-丙酮為展開劑，展開，取出，涼干，噴以改良碘化鉍鉀溶液，日光檢視，結(jié)果，供試品與對照品的相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對照品無干擾。

本發(fā)明所述的香附四物顆粒的質(zhì)量控制方法，包括以下方法中的一種或幾種：

(1)香附四物顆粒的含量測定，采用高效液相色譜法，具體步驟如下：

色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測阿魏酸時以體積比20:80乙腈-1％冰乙酸溶液為流動相；檢測香草酸時以體積比12:88的乙腈-1％冰乙酸溶液為流動相；檢測波長分別為323nm和260nm；理論塔板數(shù)按阿魏酸和香草酸計(jì)算均不低于3000；

對照品溶液的制備取阿魏酸、香草酸對照品適量，精密稱定，分別加甲醇制成每1mL含0.0316mg、0.0295mg的對照品溶液；

供試品溶液的制備取香附四物顆粒，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇，稱重，放置過夜，超聲，再稱重，用甲醇補(bǔ)足損失的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液，水浴蒸干；殘?jiān)脷溲趸c溶液溶解，轉(zhuǎn)移入回流燒瓶中，水浴回流，放冷；移入分液漏斗中，用鹽酸調(diào)pH＝2，用乙醚萃取，合并乙醚液，回收乙醚，用甲醇溶解，搖勻，即得；

測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得；

本品每15g顆粒含當(dāng)歸和川芎以阿魏酸和香草酸計(jì)，不得少于0.714mg和0.439mg；

(2)香附四物顆粒的含量測定，采用高效液相色譜法，具體步驟如下：

色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比18:82乙腈-0.1％乙酸水為流動相；檢測波長為230nm，理論塔板數(shù)按芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷計(jì)算均不低于2000；

對照品溶液的制備取芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷對照品適量，精密稱定，分別加甲醇制成每1mL含0.300mg、0.200mg的對照品溶液。

供試品溶液的制備取香附四物顆粒，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇，精密稱定，超聲處理，放冷，再稱定，用甲醇補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；

測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

本品每15g含白芍以芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷計(jì)，不得少于52.5mg和17.9mg；

(3)香附四物顆粒的含量測定，采用高效液相色譜法，具體步驟如下：

色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為55:45乙腈-0.1％乙酸水，并用三乙胺調(diào)pH＝6.0作為為流動相；檢測波長為280nm；理論塔板數(shù)按延胡索乙素和鹽酸小檗堿計(jì)算均不低于3000；

對照品溶液的制備取延胡索乙素、鹽酸小檗堿對照品適量，精密稱定，分別加甲醇制成每1mL含0.246mg、0.297mg的對照品溶液；

供試品溶液的制備取香附四物顆粒15g，精密稱定，置平底燒瓶中，精密加入體積比為1:20的濃氨試液-甲醇混合溶液，稱定重量，冷浸，加熱回流，放冷，再稱定重量，用體積比為1:20濃氨試液-甲醇混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過；

精密量取續(xù)濾液75mL，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓D(zhuǎn)移至10mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；

測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得；

本品每15g顆粒含延胡索以延胡索乙素和鹽酸小檗堿計(jì)，不得少于2.67mg和1.22mg。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下有益效果：

(1)經(jīng)典名方香附四物湯按照傳統(tǒng)方法合煎制成復(fù)方配方顆粒，較目前單味配方顆粒服用時各藥味簡單相加，更能充分發(fā)揮中藥配伍的優(yōu)勢，體現(xiàn)了中醫(yī)藥整體的觀念，確保達(dá)到減毒增效的目的，為臨床用藥提供新的選擇。

(2)本發(fā)明在煎煮提取過程中收集揮發(fā)油有效部位，揮發(fā)油用β-環(huán)糊精包合后再制成顆粒，揮發(fā)性降低，利用率增加，可促進(jìn)非揮發(fā)性成分的吸收，提高藥物生物利用度。

(3)本發(fā)明采用色譜法，即薄層色譜法和高效液相色譜法，對有效成分進(jìn)行定性和定量分析，進(jìn)行質(zhì)量控制，可以很好的保證產(chǎn)品質(zhì)量。

(4)本發(fā)明對香附四物顆粒建立了利用高效液相色譜法同時測定顆粒中阿魏酸、香草酸、芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、延胡索乙素和鹽酸小檗堿六種主要指標(biāo)性成分含量的質(zhì)量控制方法，該質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)實(shí)現(xiàn)了對處方中白芍、當(dāng)歸、川芎、延胡索四味飲片含量同時進(jìn)行控制，具有較強(qiáng)的專屬性和良好的重現(xiàn)性，真正體現(xiàn)藥品安全有效、質(zhì)量可控。

附圖說明

圖1為實(shí)施例1的薄層色譜圖，其中1為缺當(dāng)歸、川芎雙陰性樣品，2-4為3批次供試品，5為當(dāng)歸對照藥材，6為川芎對照藥材，7為阿魏酸對照品；

圖2為實(shí)施例1的薄層色譜圖，其中1為缺當(dāng)歸、川芎雙陰性樣品，2-4為3批次供試品，5為當(dāng)歸對照藥材，6為川芎對照藥材，7為藁本內(nèi)酯對照品；

圖3為實(shí)施例2的薄層色譜圖，其中1為缺川芎陰性樣品，2-4為3批次供試品，5為川芎對照藥材，6為歐當(dāng)歸內(nèi)酯A對照品；

圖4為實(shí)施例3的薄層色譜圖，其中1為缺香附陰性樣品，2-4為3批次供試品，5為香附對照藥材，6為α-香附酮對照品；

圖5為實(shí)施例4的薄層色譜圖，其中1為缺木香陰性樣品，2-4為3批次供試品，5為木香對照藥材，6為去氫木香內(nèi)酯對照品，7為木香烴內(nèi)酯對照品；

圖6為實(shí)施例5的薄層色譜圖，其中1為缺熟地陰性樣品，2-4為3批次供試品，5為熟地對照藥材，6為5-羥甲基糠醛對照品；

圖7為實(shí)施例6的薄層色譜圖，其中1為缺白芍陰性樣品，2-4為3批次供試品，5為白芍對照藥材，6為芍藥苷對照品；

圖8為實(shí)施例7的薄層色譜圖，其中1為缺延胡索陰性樣品，2-4為3批次供試品，5為延胡索對照藥材，6為延胡索乙素對照品；

圖9為實(shí)施例8的高效液相色譜圖，其中A為阿魏酸對照品，B為供試品溶液，C為缺當(dāng)歸和川芎雙陰性樣品，1為阿魏酸；

圖10為實(shí)施例8的高效液相色譜圖，其中A為香草酸對照品，B為供試品溶液，C為缺當(dāng)歸和川芎雙陰性樣品，1為香草酸；

圖11為實(shí)施例8的高效液相色譜圖，其中A為芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷混合對照品，B為供試品溶液，C缺白芍陰性樣品，1為芍藥內(nèi)酯苷，2為芍藥苷；

圖12為實(shí)施例8的高效液相色譜圖，其中A為延胡索乙素和鹽酸小檗堿對照品，B為供試品，C為缺延胡索陰性樣品，1為鹽酸小檗堿，2為延胡索乙素。

具體實(shí)施方式

下面通過具體實(shí)施方式來進(jìn)一步說明本發(fā)明，以下實(shí)施例為本發(fā)明具體的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受下述實(shí)施例的限制。

實(shí)施例1：

一種香附四物顆粒的制備方法，包括如下步驟：

a.取香附300g、木香200g、當(dāng)歸600g、川芎300g，加入14kg的水，浸泡12小時后，水蒸氣蒸餾提取10小時，提取揮發(fā)油。

b.揮發(fā)油加入β-環(huán)糊精(加入量為揮發(fā)油體積量的10倍)和水(加入量為揮發(fā)油體積量的30倍)充分研磨2小時，冷凍干燥得揮發(fā)油包合物。

c.揮發(fā)油提取后所得殘?jiān)?，加相?yīng)比例的熟地800g、白芍300g和延胡索300g，加水煎煮2次，每次加水量30kg，煎煮2小時，抽出藥液，合并藥液，濾過，減壓干燥至相對密度1.05的濃縮液，加入95％乙醇至體系中乙醇濃度為80％(v/v)，靜置24小時后，抽濾，濾液減壓濃縮，干燥，得干膏粉。

d.干膏粉加入糊精(與干膏粉等量)和糖粉(與干膏粉等量)，混勻，制粒，干燥，整粒，最后加入揮發(fā)油包合物，即得香附四物顆粒。

對香附四物顆粒采用薄層色譜定性鑒別，具體方法如下：

1.樣品的制備

1.1對照品溶液的制備

取阿魏酸和藁本內(nèi)酯對照品，加甲醇制成每1mL含2.05mg和2.00mg的溶液，作為對照品溶液。

1.2對照藥材溶液的制備

取當(dāng)歸、川芎對照藥材粉末各3g，加1％碳酸氫鈉溶液150mL，超聲處理10min，離心，取上清液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2～3，用乙醚振搖提取2次，每次40mL，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為對照藥材溶液。

1.3供試品溶液的處理方法

供試品溶液1：取上述香附四物顆粒15g，加1％碳酸氫鈉溶液150mL，超聲處理10min，離心，取上清液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2～3，用乙醚振搖提取2次，每次40mL，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液1；

供試品溶液2：取上述香附四物顆粒15g至燒杯中，加80％乙醇150mL超聲溶解，置水浴上蒸去乙醇至約30mL，用乙醚振搖提取2次，每次40mL，合并乙醚提取液，再向上述乙醚溶液中加1％碳酸鈉溶液振搖提取2次，每次40mL，棄去乙醚液，提取液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2～3，再用乙醚振搖提取2次，每次60mL，合并乙醚提取液，揮干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作為供試品溶液2。

1.4陰性對照溶液的制備

按上述處方比例及制法，制成缺當(dāng)歸和川芎藥材的雙陰性對照樣品。按供試品溶液1和2的制備方法，制成雙陰性對照溶液。

2.展開劑的條件優(yōu)化

為優(yōu)化展開劑，吸取上述溶液分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，選用二種展開體系，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，結(jié)果顯示，阿魏酸和藁本內(nèi)酯在展開系統(tǒng)A中均有明顯斑點(diǎn)，在展開系統(tǒng)B中阿魏酸斑點(diǎn)不明顯且分離效果不好，故選擇苯-冰醋酸-甲醇(30:1:3)為阿魏酸和藁本內(nèi)酯的展開劑。

3.點(diǎn)樣量的確定

3.1對照品溶液點(diǎn)樣量的確定

分別吸取阿魏酸對照品溶液各1、2、4、6μL依次點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，分別吸取藁本內(nèi)酯對照品溶液1、2、3、4μL依次點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以確定好的TLC分析展開條件進(jìn)行分析，兩種對照品不同點(diǎn)樣量都有明顯斑點(diǎn)，阿魏酸在4μL時斑點(diǎn)最為清晰，藁本內(nèi)酯在2μL時即有較明亮的斑點(diǎn)。所以選擇4μL和2μL分別為阿魏酸和藁本內(nèi)酯的點(diǎn)樣量。

3.2供試品溶液點(diǎn)樣量的確定

分別吸取供試品溶液1各4、6、8、10μL，分別吸取供試品溶液2各2、4、6、8μL依次分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板，以確定的TLC條件進(jìn)行分析，供試品溶液1在4～10μL內(nèi)斑點(diǎn)皆清晰，點(diǎn)樣量可為4μL；供試品溶液2在8μL時斑點(diǎn)最明顯，點(diǎn)樣量可選8μL。

4.樣品檢驗(yàn)

根據(jù)確定的TLC鑒別條件，對3批次香附四物顆粒進(jìn)行阿魏酸和藁本內(nèi)酯的TLC鑒別，結(jié)果如圖1和2所示，供試品與對照品的相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對照品無干擾。

實(shí)施例2：

一種香附四物顆粒的制備方法，包括如下步驟：

a.取香附300g、木香200g、當(dāng)歸600g、川芎300g，加入16.8kg的水，浸泡15小時后，水蒸氣蒸餾提取8小時，提取揮發(fā)油。

b.揮發(fā)油加入β-環(huán)糊精(加入量為揮發(fā)油體積量的8倍)和水(加入量為揮發(fā)油體積量的20倍)充分研磨2小時，冷凍干燥得揮發(fā)油包合物。

c.揮發(fā)油提取后所得殘?jiān)?，加相?yīng)比例的熟地800g、白芍300g和延胡索300g，加水煎煮2次，每次加水量28kg，煎煮2小時，抽出藥液，合并藥液，濾過，減壓干燥至相對密度1.13的濃縮液，加入95％乙醇至體系中乙醇濃度為80％(v/v)，靜置24小時后，抽濾，濾液減壓濃縮，干燥，得干膏粉。

d.干膏粉加入糊精(與干膏粉等量)和糖粉(與干膏粉等量)，混勻，制粒，干燥，整粒，最后加入揮發(fā)油包合物，即得香附四物顆粒。

對香附四物顆粒采用薄層色譜定性鑒別，具體方法如下：

1.樣品的制備

1.1對照品溶液的制備

稱取歐當(dāng)歸內(nèi)酯A對照品適量，加乙酸乙酯制成每1mL含0.116mg的溶液(置棕色量瓶中)，作為對照品溶液。

1.2對照藥材溶液的制備

取川芎藥材粉末1g，加乙醚100mL，加熱回流l h，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?mL使溶解，作為對照藥材溶液。

1.3供試品溶液的處理方法

取上述香附四物顆粒15g，加乙醚100mL，加熱回流l h，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?mL使溶解，作為供試品溶液。

1.4陰性對照溶液的制備

按照上述處方的比例及制法，制備缺少川芎的陰性對照樣品，按1.3項(xiàng)下的供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。

2.展開劑的條件優(yōu)化

比較正己烷-乙酸乙酯(3:1)、正己烷-乙酸乙酯-甲酸(3:1:0.05)、正己烷-乙酸乙酯-甲酸(7:1:0.05)三種展開體系，選擇正己烷：乙酸乙酯(3:1)為歐當(dāng)歸內(nèi)酯A的展開劑。

3.點(diǎn)樣量的確定

3.1對照品溶液點(diǎn)樣量的確定

分別吸取歐當(dāng)歸內(nèi)酯A對照品溶液各1、2、4、5μL依次點(diǎn)于同一硅膠GF254板。對照品不同點(diǎn)樣量都有明顯斑點(diǎn)，在4μL是斑點(diǎn)已經(jīng)很清晰，選擇4μL為歐當(dāng)歸內(nèi)酯A的點(diǎn)樣量。

3.2供試品溶液點(diǎn)樣量的確定

分別吸取供試品溶液各2、4、8、10μL，以確定的TLC條件進(jìn)行分析，供試品溶液在8μL時斑點(diǎn)較為清晰規(guī)整，所以點(diǎn)樣量選擇為8μL。

4.樣品檢驗(yàn)

根據(jù)確定的TLC條件，對3批次香附四物顆粒進(jìn)行歐當(dāng)歸內(nèi)酯A的薄層鑒別，結(jié)果如圖3所示，供試品與對照品的相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對照品無干擾。

實(shí)施例3：

一種香附四物顆粒的制備方法，包括如下步驟：

a.取香附300g、木香200g、當(dāng)歸600g、川芎300g，加入16.8kg的水，浸泡15小時后，水蒸氣蒸餾提取8小時，提取揮發(fā)油。

b.揮發(fā)油加入β-環(huán)糊精(加入量為揮發(fā)油體積量的8倍)和水(加入量為揮發(fā)油體積量的20倍)充分研磨2小時，冷凍干燥得揮發(fā)油包合物。

c.揮發(fā)油提取后所得殘?jiān)?，加相?yīng)比例的熟地800g、白芍300g和延胡索300g，加水煎煮2次，每次加水量28kg，煎煮2小時，抽出藥液，合并藥液，濾過，減壓干燥至相對密度1.13的濃縮液，加入95％乙醇至體系中乙醇濃度為80％(v/v)，靜置24小時后，抽濾，濾液減壓濃縮，干燥，得干膏粉。

d.干膏粉加入糊精(與干膏粉等量)和糖粉(與干膏粉等量)，混勻，制粒，干燥，整粒，最后加入揮發(fā)油包合物，即得香附四物顆粒。

對香附四物顆粒采用薄層色譜定性鑒別，具體方法如下：

1.樣品的制備

1.1對照品溶液的制備

取α-香附酮對照品，加乙酸乙酯制成每1mL含2.2mg的溶液，作為對照品溶液。

1.2對照藥材溶液的制備

取香附對照藥材粉末1g，加乙醚75mL，放置1h，時時振搖，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?mL使溶解，作為對照藥材溶液。

1.3供試品溶液的處理方法

取上述香附四物顆粒15g，加乙醚75mL，放置1h，時時振搖，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?mL使溶解，作為供試品溶液。

1.4陰性對照溶液的制備

按照上述處方的比例及制法，制備缺少香附的陰性對照樣品，按供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。

2.展開劑和顯色條件的優(yōu)化

二氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸(80:1:1)為α-香附酮的最適展開劑。硅膠GF254板和硅膠G板所得斑點(diǎn)效果相當(dāng)，為求精準(zhǔn)，選擇硅膠GF254展開，紫外燈(254nm)檢視，再噴以2,4-二硝基苯肼乙醇試液觀看斑點(diǎn)顯色。

3.點(diǎn)樣量的確定

3.1對照品溶液點(diǎn)樣量的確定

分別吸取α-香附酮對照品溶液各1、2、4、5μL依次點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板，以確定好的TLC條件進(jìn)行分析，2μL時斑點(diǎn)最規(guī)整，選擇2μL為點(diǎn)樣量。

3.2供試品溶液點(diǎn)樣量的確定

分別吸取供試品溶液各4、6、8、10μL，以確定的TLC條件進(jìn)行分析，供試品溶液在10μL時斑點(diǎn)較為清晰規(guī)整，所以點(diǎn)樣量選擇為10μL。

4.樣品檢驗(yàn)

根據(jù)確定的TLC條件，對3批次香附四物顆粒進(jìn)行α-香附酮的薄層鑒別，結(jié)果如圖4所示，供試品與對照品的相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對照品無干擾。

實(shí)施例4：

一種香附四物顆粒的制備方法，包括如下步驟：

a.取香附300g、木香200g、當(dāng)歸600g、川芎300g，加入14kg的水，浸泡12小時后，水蒸氣蒸餾提取10小時，提取揮發(fā)油。

b.揮發(fā)油加入β-環(huán)糊精(加入量為揮發(fā)油體積量的10倍)和水(加入量為揮發(fā)油體積量的30倍)充分研磨2小時，冷凍干燥得揮發(fā)油包合物。

c.揮發(fā)油提取后所得殘?jiān)?，加相?yīng)比例的熟地800g、白芍300g和延胡索300g，加水煎煮2次，每次加水量30kg，煎煮2小時，抽出藥液，合并藥液，濾過，減壓干燥至相對密度1.05的濃縮液，加入95％乙醇至體系中乙醇濃度為80％(v/v)，靜置24小時后，抽濾，濾液減壓濃縮，干燥，得干膏粉。

d.干膏粉加入糊精(與干膏粉等量)和糖粉(與干膏粉等量)，混勻，制粒，干燥，整粒，最后加入揮發(fā)油包合物，即得香附四物顆粒。

對香附四物顆粒采用薄層色譜定性鑒別，具體方法如下：

1.樣品的制備

1.1對照品溶液的制備

取去氫木香內(nèi)酯對照品、木香烴內(nèi)酯對照品適量，加甲醇分別制成每1mL含2.28mg、1.85mg的溶液，作為對照品溶液。

1.2對照藥材溶液的制備

取0.5g木香對照藥材的粉末，加石油醚(30～60℃)75mL，冷浸30min，時時振搖，濾過，濾液揮干，殘?jiān)哟姿嵋阴?mL使溶解，取濾液作對照藥材溶液。

1.3供試品溶液的處理方法

取上述香附四物顆粒15g，加石油醚(30～60℃)75mL，冷浸30min，時時振搖，濾過，濾液揮干，殘?jiān)哟姿嵋阴?mL使溶解，作為供試品溶液。

1.4陰性對照溶液的制備

按上述處方比例及制法，制成缺木香藥材的陰性對照樣品。按供試品溶液的制備方法，制成雙陰性對照溶液。

2.展開劑的條件優(yōu)化

為優(yōu)化展開劑，吸取上述溶液分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，選用三種展開體系，展開，取出，晾干，展開劑B和C所得斑點(diǎn)較模糊，展距接近前沿，展開劑A所得斑點(diǎn)清晰規(guī)整，展距較為適宜，故選擇環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(15:5:1)為木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的展開劑。

3.點(diǎn)樣量的確定

3.1對照品溶液點(diǎn)樣量的確定

分別吸取去氫木香內(nèi)酯對照品溶液各1、2、3、4μL，木香烴內(nèi)酯對照品溶液各2、4、6、8μL，依次分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板，以確定好的TLC條件進(jìn)行分析，去氫木香內(nèi)酯對照品不同點(diǎn)樣量都有明顯斑點(diǎn)，在2μL時斑點(diǎn)最規(guī)整，所以選擇2μL為其點(diǎn)樣量。木香烴內(nèi)酯對照品在8μL是斑點(diǎn)最明顯，故選擇8μL為其點(diǎn)樣量。

3.2供試品溶液點(diǎn)樣量的確定

吸取供試品溶液各4、6、8、10μL，依次分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板，以確定的TLC條件進(jìn)行分析，結(jié)果供試品溶液在4～10μL時皆顯示斑點(diǎn)，其點(diǎn)樣量可為10μL。

4.樣品檢驗(yàn)

根據(jù)確定的TLC鑒別條件，對3批次香附四物顆粒進(jìn)行去氫木香內(nèi)酯和木香烴內(nèi)酯的薄層鑒別，結(jié)果如圖5所示，供試品與對照品的相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對照品無干擾。

實(shí)施例5：

一種香附四物顆粒的制備方法，包括如下步驟：

a.取香附300g、木香200g、當(dāng)歸600g、川芎300g，加入14kg的水，浸泡12小時后，水蒸氣蒸餾提取10小時，提取揮發(fā)油。

b.揮發(fā)油加入β-環(huán)糊精(加入量為揮發(fā)油體積量的10倍)和水(加入量為揮發(fā)油體積量的30倍)充分研磨2小時，冷凍干燥得揮發(fā)油包合物。

c.揮發(fā)油提取后所得殘?jiān)酉鄳?yīng)比例的熟地800g、白芍300g和延胡索300g，加水煎煮2次，每次加水量30kg，煎煮2小時，抽出藥液，合并藥液，濾過，減壓干燥至相對密度1.05的濃縮液，加入95％乙醇至體系中乙醇濃度為80％(v/v)，靜置24小時后，抽濾，濾液減壓濃縮，干燥，得干膏粉。

d.干膏粉加入糊精(與干膏粉等量)和糖粉(與干膏粉等量)，混勻，制粒，干燥，整粒，最后加入揮發(fā)油包合物，即得香附四物顆粒。

對香附四物顆粒采用薄層色譜定性鑒別，具體方法如下：

1.樣品的制備

1.1對照品溶液的制備

取5-羥甲基糠醛對照品，加甲醇制成每1mL含0.29mg的溶液，作為對照品溶液。

1.2對照藥材溶液的制備

取1g熟地藥材的粉末，加水100mL，溫?zé)崾蛊涑浞秩苌?，放冷，用脫脂棉濾過，濾液用乙醚振搖提取2次，每次25mL，棄去乙醚液，再用乙酸乙酯振搖提取2次，每次25mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為對照藥材溶液。

1.3供試品溶液的處理方法

取顆粒15g，加水100mL，溫?zé)崾蛊涑浞秩苌?，放冷，用脫脂棉濾過，濾液用乙醚振搖提取2次，每次25mL，棄去乙醚液，再用乙酸乙酯振搖提取2次，每次25mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。

1.4陰性對照溶液的制備

按處方比例及制法，制成缺熟地黃藥材的陰性對照樣品。按供試品溶液的制備方法，制成雙陰性對照溶液。

2.展開劑的條件優(yōu)化

不同優(yōu)化條件：GF254板與展開劑A，紫外(254nm)檢視；G板與展開劑B，噴顯色劑，日光觀察；G板與展開劑C，噴顯色劑，日光檢視。顯色劑：2,4-二硝基苯肼乙醇溶液。將這三種展開和顯色體系進(jìn)行比較。結(jié)果顯示，展開劑A的Rf較小，展開劑B的展距接近前沿，所以選擇展開劑C：二甲苯-乙酸乙酯(1:1)為5-羥甲基糠醛的展開劑，2,4-二硝基苯肼乙醇溶液為顯色劑。

3.點(diǎn)樣量的確定

3.1對照品溶液點(diǎn)樣量的確定

分別吸取5-羥甲基糠醛對照品溶液各6、8、10、12μL，依次點(diǎn)于同一硅膠G薄層板，以確定好的TLC條件分析，對照品不同點(diǎn)樣量都有明顯斑點(diǎn)，8μL時斑點(diǎn)較為規(guī)整，所以選擇8μL為點(diǎn)樣量。

3.2供試品溶液點(diǎn)樣量的確定

分別吸取供試品溶液2各1、2、3、4μL，依次點(diǎn)于同一硅膠G薄層板，以確定的TLC條件進(jìn)行分析，供試品溶液在1～4μL時皆顯示明顯斑點(diǎn)，點(diǎn)樣量可選2μL。

4.樣品檢驗(yàn)

根據(jù)確定的TLC鑒別條件，對3批次香附四物顆粒進(jìn)行5-羥甲基糠醛的薄層鑒別，結(jié)果如圖6所示，供試品與對照品的相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對照品無干擾。

實(shí)施例6：

一種香附四物顆粒的制備方法，包括如下步驟：

a.取香附300g、木香200g、當(dāng)歸600g、川芎300g，加入16.8kg的水，浸泡15小時后，水蒸氣蒸餾提取8小時，提取揮發(fā)油。

b.揮發(fā)油加入β-環(huán)糊精(加入量為揮發(fā)油體積量的8倍)和水(加入量為揮發(fā)油體積量的20倍)充分研磨2小時，冷凍干燥得揮發(fā)油包合物。

c.揮發(fā)油提取后所得殘?jiān)?，加相?yīng)比例的熟地800g、白芍300g和延胡索300g，加水煎煮2次，每次加水量28kg，煎煮2小時，抽出藥液，合并藥液，濾過，減壓干燥至相對密度1.13的濃縮液，加入95％乙醇至體系中乙醇濃度為80％(v/v)，靜置24小時后，抽濾，濾液減壓濃縮，干燥，得干膏粉。

d.干膏粉加入糊精(與干膏粉等量)和糖粉(與干膏粉等量)，混勻，制粒，干燥，整粒，最后加入揮發(fā)油包合物，即得香附四物顆粒。

對香附四物顆粒采用薄層色譜定性鑒別，具體方法如下：

1.樣品的制備

1.1對照品溶液的制備

稱取芍藥苷對照品適量，加甲醇制成每1mL含1.03mg的溶液，作為對照品溶液。

1.2對照藥材溶液的制備

取0.5g白芍對照藥材粉末，用1mL甲醇溶解，采用硅膠柱(300-400目，約20g，內(nèi)徑約2-2.5cm)，以三氯甲烷：甲醇(10:1，44mL；9:1，50mL；8:1，45mL)洗脫，棄去前15mL洗脫液，收集后續(xù)8:1洗脫液。蒸干，加1mL甲醇溶解殘?jiān)?，為對照藥材溶液?/p>

1.3供試品溶液的處理方法

取香附四物顆粒15g，加50mL水，加熱溶解，水飽和正丁醇萃取2次，每次25mL，合并正丁醇液，以正丁醇飽和水洗滌2次，每次25mL，合并正丁醇液，水浴揮干，得殘?jiān)堅(jiān)?mL甲醇溶解，采用硅膠柱(300-400目，約20g，內(nèi)徑約2-2.5cm)，以三氯甲烷：甲醇(10:1，44mL；9:1，50mL；8:1，45mL)洗脫，棄去前15mL洗脫液，收集后續(xù)8:1洗脫液，蒸干，殘?jiān)?mL甲醇使溶解，作為供試品溶液。

1.4陰性對照溶液的制備

按照處方的比例及制法，制備缺少白芍的陰性對照樣品，按供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。

2.點(diǎn)樣量的確定

2.1對照品溶液點(diǎn)樣量的確定

分別吸取芍藥苷對照品溶液各4、6、8、10μL，依次點(diǎn)于同一硅膠G板，以確定的TLC條件進(jìn)行分析，芍藥苷對照品不同點(diǎn)樣量都有明顯斑點(diǎn)，在10μL時斑點(diǎn)較為規(guī)整，顏色較為清晰，所以選擇10μL為芍藥苷的點(diǎn)樣量。

2.2供試品溶液點(diǎn)樣量的確定

分別吸取供試品溶液各2、4、8、10μL，以確定的TLC條件進(jìn)行分析，供試品溶液在8μL時斑點(diǎn)較為清晰規(guī)整，所以點(diǎn)樣量選擇為8μL。

3.樣品檢驗(yàn)

根據(jù)確定的TLC條件，對3批次香附四物顆粒進(jìn)行芍藥苷的薄層鑒別，結(jié)果如圖7所示，供試品與對照品的相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對照品無干擾。

實(shí)施例7：

一種香附四物顆粒的制備方法，包括如下步驟：

a.取香附300g、木香200g、當(dāng)歸600g、川芎300g，加入16.8kg的水，浸泡15小時后，水蒸氣蒸餾提取8小時，提取揮發(fā)油。

b.揮發(fā)油加入β-環(huán)糊精(加入量為揮發(fā)油體積量的8倍)和水(加入量為揮發(fā)油體積量的20倍)充分研磨2小時，冷凍干燥得揮發(fā)油包合物。

c.揮發(fā)油提取后所得殘?jiān)酉鄳?yīng)比例的熟地800g、白芍300g和延胡索300g，加水煎煮2次，每次加水量28kg，煎煮2小時，抽出藥液，合并藥液，濾過，減壓干燥至相對密度1.13的濃縮液，加入95％乙醇至體系中乙醇濃度為80％(v/v)，靜置24小時后，抽濾，濾液減壓濃縮，干燥，得干膏粉。

d.干膏粉加入糊精(與干膏粉等量)和糖粉(與干膏粉等量)，混勻，制粒，干燥，整粒，最后加入揮發(fā)油包合物，即得香附四物顆粒。

對香附四物顆粒采用薄層色譜定性鑒別，具體方法如下：

1.樣品的制備

1.1對照品溶液的制備

稱取延胡索乙素對照品適量，加甲醇制成每1mL含1.25mg的溶液，作為對照品溶液。

1.2對照藥材溶液的制備

取1g延胡索對照藥材的粉末，加甲醇100mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL使溶解，加濃氨試液調(diào)至堿性，用乙醚振搖提取3次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為對照藥材溶液。

1.3供試品溶液的處理方法

取顆粒15g，加甲醇100mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL使溶解，加濃氨試液調(diào)至堿性，用乙醚振搖提取3次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。

1.4陰性對照溶液的制備

按照處方比例及制法，制成缺少延胡索藥材的陰性對照樣品。然后按供試品溶液的制備方法，得到陰性對照溶液。

2.顯色方法的優(yōu)化

為優(yōu)化顯色方法，吸取上述溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，方法一：以甲苯-丙酮(9:2)為展開劑，噴以改良碘化鉍鉀溶液，日光檢視；方法二：以甲苯-丙酮(9:2)為展開劑，取出，揮干，置碘缸中約1min后取出，揮盡板上吸附的碘后，置紫外光燈(365nm)下檢視，噴以改良碘化鉍鉀溶液能得到明顯的斑點(diǎn)，而紫外燈檢視下，供試品溶液中延胡索乙素的斑點(diǎn)不易分辨，被別的斑點(diǎn)所覆蓋，所以選擇顯色劑顯色的方法進(jìn)行分析。

3.點(diǎn)樣量的確定

3.1對照品溶液點(diǎn)樣量的確定

分別吸取延胡索乙素對照品溶液各4、6、8、10μL，依次點(diǎn)于同一硅膠G板，以確定好的條件進(jìn)行分析，延胡索乙素對照品不同點(diǎn)樣量都有斑點(diǎn)，在8μL時斑點(diǎn)已經(jīng)較為規(guī)整，所以選擇8μL為延胡索乙素的點(diǎn)樣量。

3.2供試品溶液點(diǎn)樣量的確定

分別吸取供試品溶液各4、6、8、10μL，依次點(diǎn)于同一硅膠G板，以確定的條TLC件進(jìn)行分析。供試品溶液在4～10μL時皆有斑點(diǎn)，點(diǎn)樣量可選6μL。

4.樣品檢驗(yàn)

根據(jù)確定的TLC鑒別條件，對3批次香附四物顆粒進(jìn)行延胡索乙素的薄層鑒別，結(jié)果如圖8所示，供試品與對照品的相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對照品無干擾。

實(shí)施例8：

一種香附四物顆粒的制備方法，包括如下步驟：

a.取香附300g、木香200g、當(dāng)歸600g、川芎300g，加入16.8kg的水，浸泡15小時后，水蒸氣蒸餾提取8小時，提取揮發(fā)油。

b.揮發(fā)油加入β-環(huán)糊精(加入量為揮發(fā)油體積量的8倍)和水(加入量為揮發(fā)油體積量的20倍)充分研磨2小時，冷凍干燥得揮發(fā)油包合物。

c.揮發(fā)油提取后所得殘?jiān)酉鄳?yīng)比例的熟地800g、白芍300g和延胡索300g，加水煎煮2次，每次加水量28kg，煎煮2小時，抽出藥液，合并藥液，濾過，減壓干燥至相對密度1.13的濃縮液，加入95％乙醇至體系中乙醇濃度為80％(v/v)，靜置24小時后，抽濾，濾液減壓濃縮，干燥，得干膏粉。

d.干膏粉加入糊精(與干膏粉等量)和糖粉(與干膏粉等量)，混勻，制粒，干燥，整粒，最后加入揮發(fā)油包合物，即得香附四物顆粒。

對香附四物顆粒進(jìn)行含量測定，采用高效液相色譜法，具體方法如下：

1.阿魏酸和香草酸的含量測定

1.1儀器與試藥

WatersAlliance 2695高效液相色譜系統(tǒng)(四元梯度泵、自動進(jìn)樣器、柱溫系統(tǒng)、2998光電二極管陣列檢測器及Empower 2色譜工作站，美國Waters公司)；

KH-500型超聲波清洗機(jī)(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)；

HH-S型數(shù)顯恒溫水浴鍋(金壇市醫(yī)療儀器廠)；

MS105分析天平(Mettler-Toledo儀器有限公司)；

EPED超純水系統(tǒng)(南京易普易達(dá)科技發(fā)展有限公司)。

香附四物顆粒樣品(按本實(shí)施例上述方法自制樣品，批號：20151101、20151102、20151103)；

對照品阿魏酸(批號：110773-201313)、香草酸對照品(批號：110776-200402)，均購自中國食品藥品檢定研究院。其余試劑均為分析純。

1.2方法與結(jié)果

1.2.1色譜條件

Alltima^TM C₁₈色譜柱(250mm×4.6mm，5μm，GRACE)；

流動相：，阿魏酸(乙腈-1％冰乙酸溶液體積比為20:80)，香草酸(乙腈-1％冰乙酸溶液體積比為12:88)；

體積流量1.0mL/min；柱溫為30℃；進(jìn)樣量10μL；

檢測波長：阿魏酸為323nm，香草酸為260nm；

出峰時間：阿魏酸為16min，香草酸為18min。

1.2.2溶液的制備

對照品溶液的制備取阿魏酸、香草酸對照品適量，精密稱定，分別加甲醇制成每1mL含0.0316mg、0.0295mg的對照品溶液，逐級稀釋，配制成6個不同濃度的對照品溶液。

供試品溶液的制備取香附四物顆粒15g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇150mL，稱重，放置過夜，超聲1h，再稱重，用甲醇補(bǔ)足損失的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液50mL，水浴蒸干。殘?jiān)?.5mol/L氫氧化鈉溶液50mL分3次溶解，轉(zhuǎn)移入回流燒瓶中，水浴回流2h，放冷。移入分液漏斗中，用鹽酸調(diào)pH＝2，用乙醚萃取4次，每次25mL，合并乙醚液，回收乙醚，用甲醇溶解至10mL，搖勻，即得。

陰性對照品溶液的制備按香附四物顆粒的處方和制備工藝，制備缺當(dāng)歸和川芎陰性對照樣品。再按供試品溶液的處理方法制得雙陰性溶液。

1.3測定法

分別吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各10μL，按1.2.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，結(jié)果見圖9和圖10。從圖可知，樣品色譜圖中，在與阿魏酸對照品、香草酸對照品色譜相應(yīng)的位置上，有一相同保留時間的色譜峰，而陰性對照品溶液在此保留時間處無干擾。

1.4方法學(xué)考察

1.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍

分別精密吸取6個不同濃度的對照品各10μL，注入液相色譜儀，按1.2.1項(xiàng)下色譜條件測定。以對照品峰面積值Y(μV·s)為縱坐標(biāo)，以質(zhì)量濃度X(μg/mL)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得出回歸方程。

阿魏酸：Y＝5.04×10⁷X-5185.4，r＝0.9999，在6.32～47.4μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好；

香草酸：Y＝3.83×10⁴X+12993，r＝0.9999，在5.90～29.5μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

1.4.2精密度試驗(yàn)

取同一對照品溶液，按1.2.1項(xiàng)下色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μL，觀察其重復(fù)性。結(jié)果表明，阿魏酸和香草酸對照品峰面積的RSD分別為0.620％和0.560％，顯示儀器精密度好。結(jié)果見表1。

表1阿魏酸和香草酸的精密度試驗(yàn)結(jié)果

1.4.3重現(xiàn)性試驗(yàn)

取香附四物顆粒(批號20151101)6份，分別精密稱定，按供試品溶液的制備方法制成供試品溶液，精密吸取供試品溶液10μL注入液相色譜儀，按1.2.1項(xiàng)下色譜條件測定，計(jì)算供試品溶液中阿魏酸和香草酸的RSD分別為0.363％和0.844％，方法重現(xiàn)性良好。結(jié)果見表2。

表2阿魏酸和香草酸的重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果

1.4.4穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別于0、2、4、6、8、10、12、24h精密吸取阿魏酸、香草酸對照品溶液各10μL注入液相色譜儀測定，按1.2.1項(xiàng)下的條件測定。結(jié)果顯示，阿魏酸對照品溶液峰面積的RSD為1.27％，香草酸對照品溶液峰面積的RSD為2.66％，表明兩個對照品溶液在24h之內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果見表3。

表3阿魏酸和香草酸的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

1.4.5加樣回收率試驗(yàn)

精密稱定已測定的香附四物顆粒樣品(批號：20151101)6份，分別加入阿魏酸、香草酸對照品適量，按照供試品溶液的處理方法，制得供試品溶液，按1.2.1項(xiàng)下所述的條件測定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果表明，阿魏酸和香草酸的平均回收率分別為99.6％和101％，RSD分別為0.822％和1.07％，二者均有良好的回收率。結(jié)果見表4和表5。

表4阿魏酸的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表5 香草酸的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

1.5樣品測定

精密稱取3批香附四物顆粒樣品(批號：20151101、20151102、20151103)，按供試品溶液的制備方法制成供試品溶液，按1.2.1項(xiàng)下色譜條件測定，并計(jì)算含量，結(jié)果見表6。

表6阿魏酸和香草酸的含量測定結(jié)果

2.芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的含量測定

2.1儀器與試藥

2.1.1儀器

同1.1.1項(xiàng)所述。

2.1.2試藥

香附四物顆粒樣品(按本實(shí)施例上述方法自制樣品，批號：20151101、20151102、20151103)；

對照品芍藥苷(批號：110736-201438)，購自中國食品藥品檢定研究院；

對照品芍藥內(nèi)酯苷(批號：39011-90-0)，購自南京春秋生物工程有限公司。其余試劑均為分析純。

2.2方法與結(jié)果

2.2.1色譜條件

Alltima^TM C₁₈色譜柱(250mm×4.6mm，5μm，GRACE)；

流動相：乙腈-0.1％乙酸水(18:82)；

體積流量1.0mL/min；

柱溫為30℃；

檢測波長為230nm；

進(jìn)樣量10μL；

芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的出峰時間約為12min和10min。

2.2.2溶液的制備

對照品溶液的制備取芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷對照品適量，精密稱定，分別加甲醇制成每1mL含0.300mg、0.200mg的對照品溶液，逐級稀釋，配制成6個不同濃度的對照品溶液。

供試品溶液的制備取香附四物顆粒15g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇75mL，精密稱定。超聲處理25min，放冷，再稱定，用甲醇補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

陰性樣品溶液的制備按香附四物顆粒的處方和制備工藝，制備缺白芍的陰性制劑。再按供試品溶液的制備方法制得陰性溶液。

2.3測定法

分別吸取對照品溶液，供試品溶液和陰性對照品溶液各10μL，按2.2.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，結(jié)果見圖11。樣品色譜圖中，在與芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷對照品色譜相應(yīng)的位置上，有一相同保留時間的色譜峰。而陰性對照品溶液在此保留時間處無峰。

2.4方法學(xué)考察

2.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍

分別精密吸取6個不同濃度的對照品各10μL，注入液相色譜儀，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件測定。以對照品峰面積值Y(μV·s)為縱坐標(biāo)，以質(zhì)量濃度X(μg/mL)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得出回歸方程。

芍藥苷：Y＝1.39×10⁴X+98826，r＝0.9992，在150～750μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

芍藥內(nèi)酯苷：Y＝1.24×10⁴X+48408，r＝0.9996，在100～500μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.4.2精密度試驗(yàn)

取同一對照品溶液，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μL，觀察其重復(fù)性。結(jié)果表明，芍藥苷對照品和芍藥內(nèi)酯苷對照品峰面積的RSD分別為1.19％和0.820％，表明儀器精密度好。結(jié)果見表7。

表7芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.4.3重現(xiàn)性試驗(yàn)

取香附四物顆粒(批號：20151101)6份，分別精密稱定，按照供試品溶液的制備方法制成供試品溶液。精密吸取10μL供試品溶液注入液相色譜儀，按2.2.1項(xiàng)下的條件測定，得供試品溶液中芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的RSD分別為1.43％和1.24％，表明，方法重現(xiàn)性良好。結(jié)果見表8。

表8芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果

2.4.4穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別于0、2、4、6、8、10、12、24h精密吸取芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷對照品溶液各10μL注入液相色譜儀測定，按2.2.1項(xiàng)下的條件測定。結(jié)果顯示，芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷對照品溶液峰面積的RSD分為1.05％和1.48％，表明，兩種對照品溶液在24h之內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果見表9。

表9芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.4.5加樣回收率試驗(yàn)

取已測定的香附四物顆粒樣品(批號：20151101)6份，精密稱定，分別加入芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷對照品適量，按照供試品溶液的制備方法，制得供試品溶液。按2.2.1項(xiàng)下的條件進(jìn)行測定，計(jì)算回收率。結(jié)果表明，芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的回收率為101％和102％，RSD為1.74％和1.52％，二者均有良好的回收率。結(jié)果見表10和表11。

表10芍藥苷的加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表11芍藥內(nèi)酯苷的加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.5樣品測定

精密稱取3批香附四物顆粒樣品(批號：20151101、20151102、20151103)，按供試品溶液的制備方法制成供試品溶液，按2.2.1項(xiàng)下的色譜條件測定，并計(jì)算含量，結(jié)果見表12。

表12芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的含量測定結(jié)果

3.延胡索乙素和鹽酸小檗堿的含量測定

3.1儀器與試藥

3.1.1儀器

同1.1.1項(xiàng)所述。

3.1.2試藥

香附四物顆粒樣品(按本實(shí)施例上述方法自制樣品，批號：20151101、20151102、20151103)；

對照品延胡索乙素(批號：110726-201414)和對照品鹽酸小檗堿(批號：110713-201212)均購自中國食品藥品檢定研究院。其余試劑均為分析純。

3.2方法與結(jié)果

3.2.1色譜條件

Alltima^TM C₁₈色譜柱(250mm×4.6mm，5μm，GRACE)；

流動相為體積比為55:45乙腈-0.1％乙酸水，三乙胺調(diào)pH＝6.0；

體積流量1.0mL/min；

柱溫為30℃；檢測波長為280nm；進(jìn)樣量10μL；

延胡索乙素和鹽酸小檗堿的出峰時間約為11min和7min。

3.2.2溶液的制備

對照品溶液的制備：取延胡索乙素、鹽酸小檗堿對照品適量，精密稱定，分別加甲醇制成每1mL含0.246mg、0.297mg的對照品溶液，逐級稀釋，配制成6個不同濃度的對照品溶液。

供試品溶液的制備取香附四物顆粒15g，精密稱定，置平底燒瓶中，精密加入濃氨試液-甲醇(1:20)混合溶液150mL，稱定重量，冷浸1h后加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用濃氨試液-甲醇(1:20)混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液75mL，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

陰性樣品溶液的制備根據(jù)香附四物顆粒處方和制備工藝，制成缺延胡索藥材的陰性制劑。再按供試品溶液的制備方法制得陰性溶液。

3.3測定法

分別吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各10μL，按3.2.1項(xiàng)下的條件進(jìn)行分析，結(jié)果見圖12。在樣品色譜圖中，與延胡索乙素和鹽酸小檗堿對照品色譜相應(yīng)的位置上，有一相同保留時間的色譜峰。而陰性對照品溶液在此保留時間處無峰。

3.4方法學(xué)考察

3.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍

分別精密吸取6個不同濃度的對照品10μL，注入液相色譜儀，按3.2.1項(xiàng)下的條件測定。以對照品峰面積值Y(μV·s)為縱坐標(biāo)，以質(zhì)量濃度X(μg/mL)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得出回歸方程。

延胡索乙素：Y＝8.42×10³X-12481，r＝0.9999，在98.4～492μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

鹽酸小檗堿：Y＝3.08×10⁴X-134654，r＝0.9999，在59.4～446μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

3.4.2精密度試驗(yàn)

取同一對照品溶液，按3.2.1項(xiàng)下色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μL，觀察其重復(fù)性。結(jié)果表明，延胡索乙素對照品和鹽酸小檗堿對照品峰面積的RSD分別為1.52％和1.00％，表明儀器精密度好。結(jié)果見表13。

表13延胡索乙素和鹽酸小檗堿的精密度試驗(yàn)結(jié)果

3.4.3重現(xiàn)性試驗(yàn)

取香附四物顆粒(批號20151101)6份，分別精密稱定，按照供試品溶液的制備方法，制成供試品溶液。精密吸取10μL，按3.2.1項(xiàng)下的條件測定，計(jì)算出供試品溶液中延胡索乙素和鹽酸小檗堿的RSD分別為0.943％和1.14％，表明，方法重現(xiàn)性良好。結(jié)果見表14。

表14延胡索乙素和鹽酸小檗堿的重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果

3.4.4穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別于0、2、4、6、8、10、12、24h精密吸取延胡索乙素、鹽酸小檗堿對照品溶液各10μL按3.2.1項(xiàng)下條件測定。結(jié)果顯示，延胡索乙素和鹽酸小檗堿對照品溶液峰面積的RSD分別為0.830％和1.09％，表明，兩種對照品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果見表15。

表15延胡索乙素和鹽酸小檗堿的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

3.4.5加樣回收率試驗(yàn)

取已測定的香附四物顆粒樣品(批號：20151101)6份，精密稱定，分別加入延胡索乙素和鹽酸小檗堿對照品適量，按供試品溶液的制備方法，制成供試品溶液，按3.2.1項(xiàng)下的條件測定，計(jì)算回收率。結(jié)果表明，延胡索乙素和鹽酸小檗堿的平均回收率為99.8％和100％，RSD為0.454％和0.835％，二者均有良好的回收率。結(jié)果見表16和表17。

表16 延胡索乙素的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表17 鹽酸小檗堿的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

3.5樣品測定

精密稱取3批香附四物顆粒樣品(批號：20151101、20151102、20151103)，按供試品溶液的制備方法，制成供試品溶液，按3.2.1項(xiàng)下的色譜條件測定，并計(jì)算含量，結(jié)果見表18。

表18延胡索乙素和鹽酸小檗堿的含量測定結(jié)果

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。