相關(guān)申請(qǐng)

本國(guó)際申請(qǐng)要求2010年6月30日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)順序號(hào)US61/360,083的優(yōu)先權(quán)，將該文獻(xiàn)完整地引入本文參考。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明一般性地涉及改善人皮膚外觀美感和/或改善老化和/或光損傷皮膚外觀的方法，通過將化合物施用于皮膚來進(jìn)行，所述化合物刺激胞外基質(zhì)蛋白MAGP-1的表達(dá)并且對(duì)皮膚提供有益性。

背景技術(shù)：

在化妝品工業(yè)中對(duì)研發(fā)可以局部施用于皮膚以改善皮膚情況和外觀的產(chǎn)品的需求正在增加。消費(fèi)者關(guān)注的是減輕或延緩自然老化或激素老化皮膚和因環(huán)境應(yīng)激導(dǎo)致的皮膚老化的皮膚學(xué)征兆，例如細(xì)紋、皺紋、松垂的皮膚以及其他因表皮和真皮層中細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和功能性進(jìn)行性喪失導(dǎo)致的情況。在老化過程中，皮膚的表象，即皮膚的顏色和外觀因老化和/或暴露于環(huán)境應(yīng)激例如日光下而緩慢變差。

因此，在化妝品工業(yè)中仍然存在對(duì)延緩或?qū)蛊つw的老化效應(yīng)的產(chǎn)品的普遍需求，并且更具體地說是對(duì)產(chǎn)生這類效應(yīng)而無不需要的副作用的產(chǎn)品的普遍需求。特別地，對(duì)具有抗老化和皮膚肌理有益性的使用天然植物材料作為活性成分的局部施用的化妝品組合物仍然存在需求。

通常將衍生或提取自植物和植物種子的活性組分或成分用于各種藥用、治療和化妝品目的。這種活性成分可以獲自完整的植物或植物的不同部位，例如種子、針葉、葉、花、根、樹皮、球果、莖、根莖、愈傷組織細(xì)胞、原生質(zhì)體和分生組織。將活性組分或成分以不同形式摻入組合物。這種形式包括純或半純的成分、固體或液體的提取物或衍生物或固體天然植物材料?？梢詫⒅参锊牧弦愿鞣N亞形式摻入組合物，例如完整、切碎、磨碎或破碎的形式，否則就是為摻入組合物的改變的物理形式。

MAGP-1(微纖維締合性糖蛋白1)是胞外基質(zhì)(ECM)中小的富含甘氨酸的酸性蛋白。MAGP-1是微纖維締合性糖蛋白家族蛋白質(zhì)中的30-33kDa成員。發(fā)現(xiàn)它是皮膚中微纖維和彈性纖維的關(guān)鍵成分。MAGP-1與其他微纖維蛋白例如原纖蛋白(fibrillin)形成復(fù)合物?；趧?dòng)物研究，除為皮膚彈性纖維形成提供結(jié)構(gòu)支持外，MAGP-1還是血管完整性、傷口愈合和適合的身體脂肪沉積所必不可少的，可能通過調(diào)節(jié)TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)進(jìn)行。MAGP-1顯然介導(dǎo)Notch胞外域釋放并且還能夠結(jié)合IV型膠原蛋白且促使彈性纖維形成。

本發(fā)明鑒定了發(fā)現(xiàn)在胞外基質(zhì)蛋白MAGP-1模擬表達(dá)中具有活性的大量化合物和/或植物材料和提取物。在優(yōu)選是提取物形式的植物材料中有木田菁、五月茶、盒果藤、龍船花、尖齒臭茉莉、臭魔芋、Tiliacora triandra和桂葉山牽牛。適合的化合物是四肽賴氨酸-蘇氨酸-苯丙氨酸-賴氨酸(Lys-Thr-Phe-Lys)(本文的KTFK)、硫代二丙酸(TDPA)及其低級(jí)烷基一-和二酯類、具有如下結(jié)構(gòu)的取代的2-(2-芐基-1-苯并咪唑基)乙酰胺類似物：

和具有如下結(jié)構(gòu)的N-取代的磺酰氧基芐胺：

預(yù)先并不了解一些具有MAGP-1活性的植物種類即五月茶、盒果藤、龍船花和尖齒臭茉莉(包括這些植物種類的提取物)可局部施用于皮膚以改善皮膚外觀美感。類似地，預(yù)先并不了解上述公開的取代的2-(2-芐基-1-苯并咪唑基)乙酰胺類似物和如上述所公開的N-取代的磺酰氧基芐胺可局部施用于皮膚以改善皮膚外觀美感。

五月茶(Antidesma bunius)是大戟科中的果樹種類。它天然產(chǎn)自東南亞、菲律賓和北澳大利亞。其常見的菲律賓名稱和其他名稱包括bignay、bugnay或bignai和無核小葡萄干樹。這是可變植物，其可以是矮和灌木狀或高和豎直的，接近30米高。它具有約達(dá)20厘米長(zhǎng)和7厘米寬的大卵形皮質(zhì)常綠葉。在亞洲，其葉可促使發(fā)汗并且用于治療蛇咬傷(Morton,J.1987.Bignay.p.210–212.:Fruits of warm climates.Julia F.Morton,Miami,FL.)。

盒果藤(Operculina turpethum)是牽?？浦械闹参?同義詞印度牽牛子，Ipomoea turpethum)且通常稱作印度牽牛、fue vao和St.Thomas lidpod。它是文獻(xiàn)中舉出的具有抗肝病活性的主張的許多植物之一。Vasudesan,N,V.,Indian Medicinal Plants,Vol.IV,Orient Longman Ltd,Chennai,1995,172。它還具有驅(qū)腸蟲、祛痰、解熱、抗炎和催瀉特性。文獻(xiàn)同上。

龍船花(Ixora chinensis)是相當(dāng)小的茂密灌木，通常僅5-10英尺高。存在非常小的矮小的植物變種。僅當(dāng)幾英寸高時(shí)龍船花就開花。通常用作樹籬或小花園植物。該植物主要作為觀賞植物生長(zhǎng)，而認(rèn)為其花具有一些藥物用途，包括治療高血壓和治療風(fēng)濕病、膿腫、挫傷和傷口。該植物天然生長(zhǎng)在印度和斯里蘭卡。

尖齒臭茉莉(Clerodendron lindleyi)是灌木、藤本植物和小樹，通常生長(zhǎng)至1-12m高，其具有對(duì)生或輪生葉。該屬天然生長(zhǎng)在世界熱帶和溫帶地區(qū)，其中大部分種類出現(xiàn)在熱帶非洲和南亞，但少量出現(xiàn)在熱帶美洲和北大洋洲，且少量從北部擴(kuò)展至東亞的溫帶區(qū)域。Clerodendrum來自希臘，含義是"運(yùn)氣樹"。Dendros含義是樹。運(yùn)氣是指來自該屬的一些植物的藥用價(jià)值存在未知的可能性。

木田菁(Sesbania grandiflora)(也稱作agati，同義詞大花田菁，Aeschynomene grandiflora)或巨峰鳥樹/scarlet wisteria是田菁屬中的小樹。它是具有3－5m典型成年高度的正在快速生長(zhǎng)的樹。葉是規(guī)則和圓形的，并且花是白色和大的，極具特征性。果實(shí)看起來是扁平、長(zhǎng)和薄綠色的豆。樹木在完全接觸日光下茂盛并且極具霜凍敏感性。認(rèn)為它來源于印度或東南亞并且主要生長(zhǎng)在世界的熱和潮濕的熱帶區(qū)域。認(rèn)為樹皮、葉、樹膠和花具有藥用。收斂性的樹皮用于治療天花和其他發(fā)疹熱(James A.Duke.1983.Handbook of Energy Crops.未發(fā)表)。木田菁先前公開在美國(guó)專利US7,618,662中，將該文獻(xiàn)的公開內(nèi)容引入本文參考。

桂葉山牽牛(Thunbergia laurifolia)或藍(lán)色喇叭形攀爬植物是侵襲性種類，它當(dāng)作觀賞植物使用。這種植物在巴西的Cerrado植物中發(fā)現(xiàn)。在馬來西亞，取來自桂葉山牽牛的碎葉的汁液用于月經(jīng)過多，將其放入耳用于耳聾并且用于泥敷傷口和癤(Burkill,I.H.(1966).“A Dictionary of the Economic Products of the Malay Peninsula.Volume II(I–Z)”.Ministry of Agriculture and Cooperatives,Kuala Lumpur.)。在泰國(guó)，葉用作解熱藥和去毒的解毒藥(Kanchanapoom,T.等人(2002).“Iridoid glucosides from Thunbergia laurifolia”.Phytochemistry 60:769–771)。

KTFK是合成的四肽賴氨酸-蘇氨酸-苯丙氨酸-賴氨酸(Lys-Thr-Phe-Lys)，已知它在膠原蛋白和纖連蛋白合成中具有活性。KTFK預(yù)先公開在美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)US2004/0126344中，將該文獻(xiàn)的公開內(nèi)容引入本文參考。

臭魔芋在馬達(dá)加斯加到亞洲、波利尼西亞和北澳大利亞的熱帶地區(qū)發(fā)現(xiàn)。根是驅(qū)風(fēng)藥、補(bǔ)品、健胃藥和強(qiáng)壯劑。Chopra.R.N.,Nayar.S.L.和Chopra.I.C.Glossary of Indian Medicinal Plants(包括增刊).Council of Scientific and Industrial Research,New Delhi.1986；Medicinal Plants of Nepal Dept.of Medicinal Plants.Nepal.1993。它是干燥的并且用于治療痔和痢疾。文獻(xiàn)同上。新鮮的根用作辛辣刺激劑和祛痰藥，它大多在印度用于治療急性風(fēng)濕，文獻(xiàn)同上。臭魔芋先前公開在美國(guó)專利US7,618,862中，將該文獻(xiàn)的公開內(nèi)容引入本文參考。

硫代二丙酸(TDPA)是白色結(jié)晶固體，其具有輕度的特異氣味并且顯示一些抗微生物和抗氧化劑活性(WHO/Food Add./24.65FAO Nutrition Meetings Report Series No.38A)。硫代二丙酸及其酯類先前公開在美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)US2004/0126344中，將該文獻(xiàn)的公開內(nèi)容引入本文參考。

毛瓣無患子(Sapindus rarak)是無患子屬的組成部分，其包含荔枝科無患子屬中約5－12個(gè)灌木和小樹的種類，天然生長(zhǎng)在舊大陸和新大陸中適中的溫帶至熱帶區(qū)域。毛瓣無患子提取物顯示止痛作用。毛瓣無患子先前公開在美國(guó)專利US 7,514,092中，將該文獻(xiàn)的公開內(nèi)容引入本文參考。

Tiliacora科的Tiliacora triandra Diels，也稱作Yanang，是天然生長(zhǎng)在東南亞大陸的有花植物種類，且特別在泰國(guó)東北部和老撾用于烹飪。它是攀緣植物，具有大多單一、平滑、橢圓形、深綠色葉和淡黃色花。在傳統(tǒng)的東南亞藥物中，Tiliacora triandra已經(jīng)用作退熱、酒精中毒、炎癥和細(xì)菌/真菌感染的草藥。例如，Tiliacora triandra Diels抗惡性瘧原蟲(導(dǎo)致人類瘧疾)的應(yīng)用公開在Pavanand等人的Phytother.Res.,3,215-217(1989)中。Tiliacora triandra是與本申請(qǐng)同時(shí)提交的單獨(dú)申請(qǐng)的主題。

用于治療、預(yù)防、減輕、抑制和/或改善因表皮和真皮皮膚層進(jìn)行性退化導(dǎo)致的老化皮膚病征兆(包括環(huán)境應(yīng)激)的安全、有效和新的組合物成分可以有利地用于治療制劑和皮膚產(chǎn)品。如本文所述，本文提供了用于處理皺紋等以及用于個(gè)人皮膚護(hù)理產(chǎn)品的新的和有益方法和組合物及其作用方式。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供具有化合物、特別是天然植物材料、其摻合物或來源于其中的成分的局部用組合物，其用量足以改善人皮膚外觀美感和預(yù)防、改善和/或減輕自然老化或激素老化或光老化皮膚的皮膚學(xué)征兆，例如細(xì)線、皺紋、松垂皮膚和其他因表皮和真皮層中細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和功能性的進(jìn)行性退化導(dǎo)致的情況，其中植物材料、其摻合物或來源于其中的成分在化妝品、皮膚學(xué)可接受的媒介物、載體或稀釋劑中。

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供適合于局部施用于人皮膚的組合物，其具有一種或多種刺激MAGP-1表達(dá)的MAGP-1活性劑，包含：(i)植物材料，尤其是其提取物，該植物材料選自五月茶、盒果藤、龍船花和尖齒臭茉莉及其混合物；和(ii)選自2-(2-芐基-1-苯并咪唑基)乙酰胺類似物和N-取代的磺酰氧基芐胺的化合物及其組合/混合物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供將組合物局部施用于人皮膚的方法，該組合物具有化合物，特別是天然植物材料，其摻合物，或來源于其中的成分，并且刺激MAGP-1表達(dá)。

本說明書的另一個(gè)目的在于提供局部用組合物，其包含兩種或多種成分，其中至少一個(gè)第一種成分選自五月茶、盒果藤、龍船花、尖齒臭茉莉和N-取代的磺酰氧基芐胺，且至少一個(gè)第二種成分選自木田菁、臭魔芋、毛瓣無患子、Tiliacora triandra、桂葉山牽牛、四肽賴氨酸-蘇氨酸-苯丙氨酸-賴氨酸(KTFK)和硫代二丙酸(TDPA)及其酯類，其用量有效地治療、預(yù)防、控制、改善、抑制和/或減輕自然老化或激素老化或光老化皮膚的皮膚學(xué)征兆，例如細(xì)紋、皺紋、松垂的皮膚以及其他因表皮和真皮層中細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和功能性的進(jìn)行性退化導(dǎo)致的情況。

本說明書的另一個(gè)目的在于提供改善皮膚外觀美感的方法，包括處理皮膚中的老化效應(yīng)，通過將本說明書的組合物局部施用于皮膚來進(jìn)行。

本說明書另外的目的在于提供用于鑒定刺激MAGP-1蛋白質(zhì)表達(dá)的化合物的篩選方法和提供使用這種篩選方法鑒定的活性成分的組合物。

本發(fā)明的其他目的、特征和優(yōu)點(diǎn)在閱讀詳細(xì)描述時(shí)將會(huì)得到更好的理解。

根據(jù)本發(fā)明的上述和其他目的，令人意外地發(fā)現(xiàn)皮膚中MAGP-1的表達(dá)通過增加彈性、繃緊毛孔、改善血管完整性和減少眼下部的暗圈和減少整體的細(xì)線、皺紋和下垂改善了老化或光損傷皮膚的外觀。

附圖說明

圖1示例避光的和光暴露的年輕受試者(18-25歲)和老年受試者(40-65歲)真皮中的MAGP-1蛋白質(zhì)表達(dá)。

圖2示例避光的和光暴露的年輕受試者(18-25歲)和老年受試者(40-65歲)毛囊和毛孔周圍的MAGP-1表達(dá)。

發(fā)明詳述

除非另有指定，否則本文所用的術(shù)語欲以具有其通常的含義。

本說明書提供了改善人皮膚外觀美感的新的活性劑和新的方法，通過局部施用新近發(fā)現(xiàn)的有效處理老化征兆和與皮膚的皮膚學(xué)老化相關(guān)的后果的組合物來進(jìn)行，所述的老化征兆和與皮膚的皮膚學(xué)老化相關(guān)的后果例如細(xì)紋、皺紋、松垂的皮膚以及其他因老化(包括自然老化或激素老化和/或光老化)導(dǎo)致的情況，以改善皮膚的外觀美感。應(yīng)理解，自然老化代表皮膚中與老化和其他身體器官中的退化性改變平行發(fā)生的結(jié)構(gòu)、功能和代謝改變，而光老化是單獨(dú)的過程且主要涉及因暴露于環(huán)境(例如日光)中導(dǎo)致的對(duì)皮膚中膠原蛋白和彈性纖維的損害。可以通過將這些組合物局部地、基于規(guī)律性地和持續(xù)性地(例如基于每日)施用于皮膚上改善皮膚外觀美感。

正如圖1和2中所示和實(shí)施例中更詳細(xì)描述的，發(fā)現(xiàn)皮膚組織中的MAGP-1隨年齡和光暴露而改變。因此，老化皮膚顯示與原纖蛋白和其他微纖維蛋白形成的MAGP-1復(fù)合物的數(shù)量減少，同時(shí)伴有皮膚彈性和健康皮膚的大量其他特性缺失。提供了包含用于增加MAGP-1表達(dá)的一種或多種活性劑的本發(fā)明組合物，其用于減少、減輕、改善皮膚老化的有害作用，并且有助于恢復(fù)皮膚的更年輕外觀。

不希望受到理論約束，本文所述的化合物和天然植物材料和提取物(下文稱作MAGP-1活性劑)刺激皮膚中MAGP-1表達(dá)并且改善老化或光損傷皮膚的外觀，通過增加彈性、緊固毛孔、改善血管完整性、減少眼部下暗圈和減少整體的細(xì)線、皺紋和皮膚松垂來實(shí)現(xiàn)。認(rèn)為MAGP-1表達(dá)與微纖維蛋白(例如原纖蛋白)形成復(fù)合物。原纖蛋白是糖蛋白，其是形成在結(jié)締組織中發(fā)現(xiàn)的彈性纖維所必不可少的。原纖蛋白由成纖維細(xì)胞分泌入胞外基質(zhì)并且摻入不溶性微纖維蛋白，它們顯然提供了彈性蛋白的沉積平臺(tái)，彈性蛋白是結(jié)締組織中的蛋白質(zhì)，它是彈性的并且使得身體內(nèi)的許多組織在拉張或收縮后恢復(fù)其形狀。

本說明書提供了新的組合物及其使用方法，新近發(fā)現(xiàn)它們有效地處理皮膚老化征兆和與皮膚的皮膚學(xué)老化(包括自然老化或激素老化和/或光老化)相關(guān)的后果，通過影響一種或多種如下情況進(jìn)行：增加彈性、減少細(xì)紋、皺紋、松垂的皮膚、減少眼部下暗黑/擦傷和脂肪袋、修整/減少脂肪墊效應(yīng)和改善膚色、提供改善的光澤和健康光澤和其他情況。

因MAGP-1刺激增加形成微纖維蛋白例如原纖蛋白，其由成纖維細(xì)胞分泌入胞外基質(zhì)，所以本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案提供了包含本發(fā)明MAGP-1活性劑與植物或化合物這樣對(duì)增加成纖維細(xì)胞增殖具有活性的材料的組合物。這種組合增加了膠原蛋白產(chǎn)生；提供了角化細(xì)胞之間的錨定和粘著增加；促進(jìn)了表皮和真皮中的細(xì)胞-細(xì)胞粘著；并且強(qiáng)化了真皮表皮接合部。伴隨地，本文通過一種或多種皮膚堅(jiān)韌度、皮膚澄清度、皮膚柔軟度或皮膚厚度的增加改善了老化皮膚的外觀美感。

本發(fā)明還提供了將組合物局部施用于皮膚的方法，其通過刺激胞外蛋白MAGP-1表達(dá)改善了皮膚情況和外觀。

本發(fā)明的方法摻入了一種MAGP-1活性劑或其組合，其包含選自如下的化合物和/或植物提取物：木田菁、五月茶、盒果藤、龍船花、尖齒臭茉莉、四肽賴氨酸-蘇氨酸-苯丙氨酸-賴氨酸(KTFK)、臭魔芋、硫代二丙酸(TDPA)及其1－6個(gè)碳的一酯類和二酯類、毛瓣無患子、Tiliacora triandra、桂葉山牽牛、N-取代的磺酰氧基芐胺，所述的N-取代的磺酰氧基芐胺具有結(jié)構(gòu)式I，即甲磺酸4-((N-異丁基苯基磺酰氨基)甲基)苯酯(CAS 853758-16-4)：

和具有結(jié)構(gòu)式II的取代的2-(2-芐基-1-苯并咪唑基)乙酰胺類似物，即2-{2-[(3-甲基苯基)甲基]-1H-1,3-苯并二唑-1-基}1-(嗎啉-4-基)乙-1-酮(CAS 1043743-29-8)：

化合物I和II購(gòu)自AMRI Hungary,Zahony u 7,H-1031Budapest,Hungary。

應(yīng)理解，本文所用的術(shù)語“處理”包括減少、改善、改進(jìn)、緩解和/或消除老化和/或環(huán)境應(yīng)激的皮膚學(xué)效應(yīng)。本發(fā)明的組合物和方法適用于處理身體大量區(qū)域中的皮膚美容和皮膚學(xué)情況，包括、但不限于面部、前額、唇、頸部、臂、手、腿、膝、腳、胸、背部、腹股溝、臀部等。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，將所述組合物施用于面部。

本說明書的一個(gè)實(shí)施方案涉及包含一種新的MAGP-1活性劑或其組合的新的組合物，所述的活性劑選自五月茶、結(jié)構(gòu)I的N-取代的磺酰氧基芐胺(上文)、結(jié)構(gòu)II的取代的2-(2-芐基-1-苯并咪唑基)乙酰胺類似物(上文)、盒果藤、龍船花和尖齒臭茉莉，且該組合物還包含化妝品、皮膚學(xué)或藥理學(xué)可接受的媒介物；本說明書還涉及通過對(duì)有處理需要的皮膚局部施用所述新的局部用組合物改善皮膚的方法。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物聯(lián)合包含一種或多種新的上文舉出的MAGP-1活性劑與一種或多種其他MAGP-1活性劑，以及化妝品、皮膚學(xué)或藥理學(xué)可接受的媒介物；還涉及通過對(duì)有處理需要的皮膚局部施用所述新的局部用組合物改善皮膚的方法。在所述的一種或多種其他MAGP-1活性劑中，可以列舉出木田菁、KTFK、臭魔芋、硫代二丙酸(TDPA)及其C₁－C₆烷基一-和二酯類、Tiliacora triandra和桂葉山牽牛。

皮膚的組織學(xué)研究顯示當(dāng)老化發(fā)生時(shí)，皮膚經(jīng)歷與其他身體器官中的老化和退化性改變平行發(fā)生的結(jié)構(gòu)、功能和代謝改變。盡管實(shí)序年齡和/或激素老化起顯著作用，但是存在的大量皺紋也高度依賴于個(gè)體生活過程中暴露于環(huán)境應(yīng)激中的量，例如在來自過度暴露紫外線(UV)日光的氧化性損傷的個(gè)人生活機(jī)會(huì)的反復(fù)暴露于日光中超過10、20、30或更多年。盡管存在每年遞增約1％老化的男性皮膚逐步變薄，但是大部分女性皮膚的厚度仍然令人意外地保持恒定，直到絕經(jīng)為止，此后，隨年齡的遞增顯著且有時(shí)引人注目地變薄，在老齡女性中促使了對(duì)處理的需求，這種處理增加皮膚膠原蛋白的含量且由此改善皮膚的堅(jiān)韌度、厚度和清楚度。

因此，從這一觀點(diǎn)來看，年輕皮膚的成功恢復(fù)必須解決各種關(guān)鍵問題，包括：成纖維細(xì)胞和角化細(xì)胞的活力、表皮和真皮中細(xì)胞-細(xì)胞粘著、細(xì)胞對(duì)表皮的滋養(yǎng)、角化細(xì)胞之間的細(xì)胞-細(xì)胞錨定和粘著、真皮與表皮之間的溝通、膠原酶過度產(chǎn)生、膠原蛋白替代和皮膚的機(jī)械性能。解決這些關(guān)鍵問題的化妝品成分用于本說明書的局部用組合物。

局部用組合物

天然植物材料可以是任意的形式，包括、但不限于完整植物、干燥植物、磨碎的植物或其部位，包括、但不限于種子、針葉、葉、根、樹皮、球果、莖、根莖、愈合組織細(xì)胞、原生質(zhì)體、花和分生組織或在天然植物材料和/或植物的部分中發(fā)現(xiàn)或分離自它們的成分和/或組分或其任意的組合。在一個(gè)實(shí)施方案中，天然植物材料是來源于天然植物材料的選擇部分的提取物形式。典型地，植物材料獲自完整植物或植物葉。應(yīng)理解"天然植物材料"還包括來源于天然植物材料的組分、成分、組成成分或提取物。

就Tiliacora triandra而言，植物提取物優(yōu)選獲自植物的藤。就龍船花和木田菁而言，提取物優(yōu)選獲自植物的花。就五月茶、桂葉山牽牛和尖齒臭茉莉而言，提取物優(yōu)選獲自葉。就盒果藤而言，提取物優(yōu)選獲自植物的地上部分，即不包括根的完整植物。

就本發(fā)明關(guān)注的Tiliacora trianda組合物而言，本發(fā)明關(guān)注這樣的實(shí)施方案，其不包括過氧化氫、碘、tarrow根和tarrow根與碘的混合物。

當(dāng)局部施用，優(yōu)選以每日的方式施用時(shí)，包含這些植物的組合物是有效的。

所述組合物具有的MAGP-1活性劑濃度占該組合物總重的約0.0001wt％－約90wt％、約0.001wt％－約25wt％、約0.01wt％－約10wt％、約0.05wt％－約1wt％。就植物提取物而言，上述量是指植物提取物的“活性量”。術(shù)語“活性量”或“干重”以同義詞方式使用并且指除去溶劑和/或其他稀釋劑后的植物/提取物的量。普通的本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠根據(jù)期望的具體應(yīng)用或效應(yīng)調(diào)整所用的提取物的量。

本說明書的MAGP-1活性劑優(yōu)選包含在化妝品或皮膚學(xué)可接受的媒介物、介質(zhì)、稀釋劑或載體中。在一個(gè)包括局部應(yīng)用的實(shí)施方案中，本說明書的組合物包含與人皮膚相容的介質(zhì)(媒介物、稀釋劑或載體)?？梢詫⑦@些組合物配制成基于水、醇或水/醇的溶液、軟膏、化妝水、凝膠、油包水型、水包油型、具有霜?jiǎng)┗蚰z外觀的水-油-水三重乳劑、微乳或氣霧劑。此外，這些組合物可以是包含如上所述的離子和/或非離子型脂質(zhì)的囊泡分散體形式。根據(jù)本領(lǐng)域使用的常規(guī)知識(shí)和技術(shù)配制適合于這種組合物的劑型。

MAGP-1活性劑的使用方法

正如從業(yè)者所理解的，例如，可以通過局部施用如本文所述的化妝品組合物，根據(jù)給予這種組合物的方案進(jìn)行美容處理，這種處理包括含有天然植物材料(包括本發(fā)明的提取物、成分和/或組分)的組合物。優(yōu)選將局部化妝品組合物每日施用一次或兩次(例如早晨和晚間)，持續(xù)至少1周期限，但可以包括約2、4、8或12周期限。消費(fèi)者希望在延長(zhǎng)的時(shí)間階段持續(xù)使用該組合物。優(yōu)選將化妝品組合物施用于面部和頸部，但可以施用于有美容改善需要的皮膚的任何區(qū)域，其中化妝品組合物保留在受侵害的皮膚區(qū)域，優(yōu)選不除去或從皮膚上沖洗掉。該方法將霜?jiǎng)⒒瘖y水、凝膠、面膜、漿液、軟膏、貼劑、粉底、粉底除去乳、防曬霜組合物等形式的組合物/產(chǎn)品施用于皮膚。優(yōu)選化妝品組合物是局部保留制劑，其中還關(guān)注自我施用形式的噴霧劑。

在本發(fā)明的一個(gè)具體的實(shí)施方案中，具有本發(fā)明MAGP-1活性劑的局部用組合物，包括包含兩種或多種這種活性劑的組合物和包含一種或多種如上述所定義的新活性劑的組合物，單獨(dú)地或與一種或多種其他活性劑(包括來源于其中的成分或提取物)的組合用于改善老化、特別是發(fā)育成熟或成熟皮膚影響的皮膚情況和外觀美感，通過下列方法的任意一種進(jìn)行：減輕自然老化、光老化、激素老化和/或光化性老化的皮膚學(xué)征兆；預(yù)防和/或減輕細(xì)紋和/或皺紋的外觀；減輕面部細(xì)紋和皺紋、面頰、前額上的面部皺紋、兩眼之間的垂直皺紋、眼上方的水平皺紋和口周圍的皺紋、木偶線且特別是深度皺紋或皺褶的引人注目性；預(yù)防、減輕和/或減少細(xì)紋和/或皺紋的外觀和/或深度；改善眼眶下細(xì)紋和/或眼眶周圍細(xì)紋的外觀；減輕魚尾紋外觀；使皮膚，特別是老化皮膚恢復(fù)年輕和/或恢復(fù)活力；減輕皮膚脆性；預(yù)防和/或逆轉(zhuǎn)糖胺聚糖類和/或膠原蛋白喪失；減輕皮膚脆弱性；改善雌激素失衡效應(yīng)；預(yù)防和/或皮膚萎縮；預(yù)防、減輕和/或處理色素沉著過度；將皮膚變色減輕到最低限度；改善膚色、光亮度、透明度和/或緊繃度；預(yù)防、減輕和/或改善皮膚松垂；改善皮膚堅(jiān)韌度、豐滿度、柔韌性和/或柔軟性；改善前膠原蛋白和/或膠原蛋白產(chǎn)生；改善皮膚肌理和/或促進(jìn)皮膚肌理恢復(fù)原狀；改善皮膚屏障修復(fù)和/或功能；改善皮膚輪廓的外觀；恢復(fù)皮膚光澤和/或亮度；將疲勞和/或緊張狀態(tài)的皮膚學(xué)征兆減輕到最低限度；抵抗環(huán)境應(yīng)激；補(bǔ)充因老化和/或絕經(jīng)而減少的皮膚中的組分；改善皮膚細(xì)胞間溝通；增加細(xì)胞增殖和/或繁殖；增加因老化和/或絕經(jīng)而減少的皮膚細(xì)胞代謝；延緩細(xì)胞老化；改善給皮膚上增加濕度；強(qiáng)化皮膚厚度；增加皮膚的彈性和/或回彈力；促進(jìn)表皮剝脫；改善微循環(huán)；減少和/或防止脂肪團(tuán)形成；及其任意的組合。

所公開的局部用組合物的活性成分還用于處理、預(yù)防、阻止、改善、減輕或減少老化侵害的皮膚醫(yī)學(xué)和/或皮膚學(xué)情況。本文所用的這類情況通常包括，但不限于皮膚學(xué)老化(自然老化、激素老化和/或光化性老化)、皮炎、皮膚和毛發(fā)脆性、多毛癥、酒渣鼻、皮膚瑕疵、敏感性皮膚、色素沉著過度或色素沉著不足、皮膚變薄、粗糙、角化病、皮膚萎縮、皺紋、細(xì)紋、超常增生、纖維化及其任意的組合。該局部用組合物的活性成分還可以用于增強(qiáng)皮膚的一般健康狀態(tài)、活力、情況和外觀。

可以通過例如使用例如Northern印跡技術(shù)和聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)這樣的技術(shù)例如本領(lǐng)域?qū)嵤┑?實(shí)時(shí)"PCR和逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT PCR)測(cè)定培養(yǎng)細(xì)胞中的RNA水平測(cè)定基因表達(dá)(例如，參見Sambrook等人,1989,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,New York；R.Higuchi等人,1992,Biotechnology,10:413-417；R.Higuchi等人,1993,Biotechnology,11:1026-1030；E.S.Kawasaki,1990,"Amplification of RNA",:RNA Protocols:A Guide to Methods&Applications,M.A.Innis等人,Academic Press,San Diego,CA,pp.21-27；將全部文獻(xiàn)引入本文參考)。此外，可以使用基因(cDNA)陣列(包含膜、玻璃、塑料或硅支持物材料等的微陣列或核酸基因芯片陣列)、基因表達(dá)的系列分析(SAGE)(例如V.E.Velculescu等人,Science,270(5235):484-487,1995；A.La等人,Cancer Res.,59(21):5403-5407,1999所述；將兩篇文獻(xiàn)引入本文參考)或差異顯示技術(shù)評(píng)價(jià)皮膚、皮膚替代物或培養(yǎng)細(xì)胞中的基因表達(dá)，所述的技術(shù)均是本領(lǐng)域公知和使用的。

局部用組合物使用與皮膚學(xué)老化征兆(例如細(xì)紋、皺紋和松垂的皮膚)相關(guān)的基因影響的植物材料/活性成分作為可以改善受侵害皮膚的情況和外觀的化合物的生物標(biāo)記。如果這種核酸/蛋白質(zhì)生物標(biāo)記的表達(dá)水平在有天然植物材料或來源于其中的活性成分存在下改變或升高，則該天然植物材料可以用于改善皮膚的情況和外觀的本發(fā)明局部用組合物。這種表達(dá)水平測(cè)定法包括各種測(cè)定已經(jīng)接觸一種或多種測(cè)試物質(zhì)的細(xì)胞中的核酸水平的方法。適合的方法包括檢測(cè)和評(píng)價(jià)例如DNA、RNA或mRNA的基因活化或表達(dá)。作為非限制性實(shí)例，聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)測(cè)定法(例如RT-PCR)、Northern印跡、原位雜交和本領(lǐng)域中已知并實(shí)施的其他測(cè)定法可以用于對(duì)檢測(cè)耐受特定處理的細(xì)胞中的RNA定量(例如，參見J.O'Connell,2002,RT-PCR Protocols,Humana Press,Totowa,NJ；R.Rapley and D.L.Manning,1998,RNA Isolation and Characterization Protocols,Humana Press；R.Rapley,2000,Nucleic Acid Protocols Handbook,Humana Press；將所有這些文獻(xiàn)引入本文參考)。根據(jù)這種測(cè)定法，如果在有一種或多種測(cè)試物質(zhì)存在下至少一種核酸生物標(biāo)記的水平升高，則它可以預(yù)示所述的物質(zhì)可以改善皮膚學(xué)老化征兆。然后這些物質(zhì)或天然植物材料可以用于局部用組合物，優(yōu)選將其每日施用于皮膚，以便處理、預(yù)防、改善和/或減少皮膚學(xué)老化征兆，尤其是細(xì)紋、皺紋和松垂的皮膚，由此改善皮膚的情況和外觀美感。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文所用的植物材料還包括“合成”提取物，即組合在一起以便基本上模擬天然來源的植物提取物的組成和/或活性的已知植物材料成分和/或組分的各種組合。這種合成提取物包括在術(shù)語“植物提取物”中。合成提取物具有與植物共同的兩種或多種、三種或多種、或四種或多種活性成分。最優(yōu)選合成提取物具有基本上與天然提取物相同數(shù)量的活性成分。合成提取物與植物或天然提取物之間的活性成分的數(shù)量關(guān)聯(lián)的對(duì)應(yīng)性也可以描述為“共同性百分比”。優(yōu)選合成提取物具有與植物或天然提取物化學(xué)組成約50％或50％以上的共同性。換句話說，合成提取物具有約50％或50％以上的在植物或天然提取物中發(fā)現(xiàn)的活性成分。更優(yōu)選合成提取物的化學(xué)組成可以與植物或天然提取物的化學(xué)組成具有約70％或70％以上的共同性。最佳地，合成提取物具有與植物或天然提取物的化學(xué)組成約90％或90％以上的共同性。

就用于本說明書的組合物而言，植物提取物或成分和/或活性成分優(yōu)選直接來源于植物。所述的成分可以為純的形式、半純的形式或不純的形式。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的成分可以是使用有機(jī)溶劑提取得到的提取物形式。

使用有機(jī)溶劑提取的方法是本領(lǐng)域公知的并且可以根據(jù)本發(fā)明使用。簡(jiǎn)單地說，一種有機(jī)溶劑提取方法包括使用有機(jī)溶劑洗滌和提取植物材料。有機(jī)溶劑的非限制性實(shí)例包括甲醇、乙醇、異丙醇、二氯甲烷、氯仿、己烷、二甲苯和石油醚。本領(lǐng)域眾所周知的方法可以用于有機(jī)溶劑提取。

有機(jī)溶劑提取包括從含有所需成分的植物中采集原料，例如種子、針葉、葉、根、樹皮、球果、莖、根莖、愈傷組織細(xì)胞、原生質(zhì)體、器官和器官系統(tǒng)以及分生組織。將這些植物材料研磨成小顆粒大小且然后用可測(cè)量的裝料機(jī)通過原料入口放入提取器。用推進(jìn)器將植物原料推入提取器并且使植物原料緩慢向前運(yùn)動(dòng)?？梢詫⒂袡C(jī)溶劑(例如乙醇)通過廢物排出口上部的溶劑入口加入到提取器中。由于重力和平衡的差異，溶劑流向原料入口，浸透原料并且從溶劑入口對(duì)側(cè)流出。由于植物材料和溶劑彼此沿相反方向運(yùn)動(dòng)，所以植物材料被恒定浸入含有低濃度提取物的溶液中。作為平衡的結(jié)果，可以通過對(duì)低濃度溶液連續(xù)提取植物材料獲得高收率的植物成分。

采用約1-8小時(shí)作為典型的用于取出植物成分的提取時(shí)間是合適的，更優(yōu)選為約2-6小時(shí)，最優(yōu)選約3-5小時(shí)。提取溫度約為30℃-90℃，約40℃-70℃，約50℃-60℃。然后精細(xì)過濾收集的提取物以除去碎片并且可以將其直接使用或例如通過蒸餾溶劑或通過其它常規(guī)加工進(jìn)行濃縮，還可以將所述的提取物制成干粉。

類似地，水-有機(jī)溶劑提取包括最初從含有所需生物堿的植物中采集原料，例如植物的種子、針葉、葉、根、樹皮、球果、莖、根莖、愈傷組織細(xì)胞、原生質(zhì)體、器官和器官系統(tǒng)以及分生組織，將它們研磨成小顆粒大小。將研磨的植物材料浸入酸性或堿性的水溶液中，這取決于所需提取物在酸性或堿性條件下的溶解度和穩(wěn)定性。就在酸性條件下提取而言，將例如鹽酸或硫酸這類酸加入到水中，例如濃度約3％(w/v)。就在堿性條件下提取而言，將例如氫氧化鈉或碳酸鈉這類堿加入到水中。提取時(shí)間和提取溫度典型地與上述有機(jī)溶劑提取方法中使用的提取時(shí)間和提取溫度類似。

然后收集提取物并且進(jìn)行精細(xì)過濾以便除去碎片。根據(jù)收集的提取物的酸度或堿度的不同，可以將堿性劑(例如氨)或酸化劑(例如硫酸)加入到提取物中以便通過調(diào)節(jié)pH中和溶液?？梢灾苯邮褂谩饪s或干燥含水提取物?；蛘?，然后可以將有機(jī)溶劑加入到中和的溶液中以便將提取物活性成分從水相轉(zhuǎn)移到有機(jī)相中。這種有機(jī)溶劑的非限制性實(shí)例包括，但不限于乙醇、異丙醇、丁醇、戊醇、己醇和二甲苯?？梢灾苯邮褂?、作為濃縮物使用或干燥包含溶于有機(jī)溶劑的轉(zhuǎn)移的提取物活性成分的提取物。

還可以通過用水、乙醇或其混合物提取植物材料得到提取物。水醇溶劑系統(tǒng)可以包含約10％體積－約90％體積的乙醇和約10％體積－約90％體積的水。更典型地，該溶劑系統(tǒng)包含約40％體積－約90％體積的乙醇和約10％體積－約60％體積的水。

可以共同混合和提取含有不同成分的不同植物。這種混合提取方法可以優(yōu)選用于提取那些含有在用于提取的溶劑(例如乙醇)中具有相似溶解度的成分的植物?？梢詽饪s提取物的混合物并且將其貯存在適合的溶劑中。

可以將提取物與生理學(xué)可接受的溶劑混合作為濃縮物使用，其中通過蒸發(fā)或其他適合的物理方法除去部分溶劑或其他稀釋劑，或優(yōu)選可以除去溶劑以提供干燥的提取物。優(yōu)選通過過濾、離心或其他適合的方法從提取物中取出固體。可以通過凍干、噴霧干燥、顆?；蚱渌m合的方法進(jìn)行干燥。噴霧干燥可以通過合并提取液與填充劑(例如麥芽糖糊精)、然后進(jìn)行噴霧干燥進(jìn)行。

適合的提取方法公開在PCT公開號(hào)WO03/079816(描述具有高含量番茄紅素的番茄提取物的制備方法)、WO04/014404(描述狹葉紫錐花提取物的制備方法)和WO04/014958(描述提取狹葉紫錐花根的多糖)中，將全部文獻(xiàn)完整地引入本文參考。

媒介物和組合物

根據(jù)本說明書，包含MAGP-1活性成分的組合物還可以包含抗氧化劑、消炎劑、防曬劑、美容劑，包括化妝品、抗老化制劑，例如用于細(xì)線和/或皺紋的霜?jiǎng)⒕植坑弥苿?、皮膚滲透增強(qiáng)劑、噴霧劑等。根據(jù)本說明書，還可以將包含植物成分和另外的成分的這種組合物配制成各種產(chǎn)品形式。優(yōu)選可以將組合物制備成特別用于局部給藥的靶向遞送系統(tǒng)，例如霜?jiǎng)?、化妝水、凝膠、漿液、透皮貼劑等。還可以通過離子電滲療法實(shí)現(xiàn)靶向遞送和/或滲透增強(qiáng)。

本說明書進(jìn)一步提供了包含植物成分的優(yōu)選用于局部給藥或用于靶向遞送而不誘發(fā)明顯刺激的組合物。因此，本發(fā)明的組合物尤其適合于敏感性皮膚。將所述組合物施用于皮膚足以改善皮膚外觀美感的一段時(shí)間。優(yōu)選將組合物每日局部施用1次、2次或2次以上，優(yōu)選每日1次或2次。優(yōu)選將每日局部施用進(jìn)行1周、2周、4周或4周以上的期限?？梢詫⒔M合物配入脂質(zhì)體或其他包囊物或遞送媒介物，它們可以包含其他添加劑或物質(zhì)和/或可以改進(jìn)以便在給藥后更特異性地達(dá)到或保留在部位上。

本發(fā)明說明書還包括包含化妝品或皮膚學(xué)可接受制劑的組合物，所述的制劑適合于接觸活的動(dòng)物組織，包括人體組織，而實(shí)際上對(duì)使用者無不良生理效應(yīng)?？梢詫⒈菊f明書包括的組合物制成任何化妝品和/或皮膚學(xué)適合的形式，優(yōu)選制成化妝水或霜?jiǎng)?，而且還可以制成無水或含水基料形式和可噴霧液體形式。用于本說明書組合物的其他合適的化妝品形式包括：例如乳液、唇膏、保濕唇膏、化妝水、面膜、軟膏、摩絲、貼劑、潤(rùn)發(fā)油、溶液、噴霧劑、蠟基棒狀物或濕紙巾。此外，本說明書關(guān)注的組合物可以包括一種或多種本領(lǐng)域技術(shù)人員常用和已知的相容性化妝品可接受的輔助劑，例如著色劑、香料、潤(rùn)膚劑、保濕劑、防腐劑、維生素、螯合劑、增稠劑、麻醉劑、抗過敏反應(yīng)劑、抗真菌劑、抗微生物劑、其他抗炎劑、抗氧化劑、抗菌藥、脫色劑、成膜劑、驅(qū)蟲藥、藥物活性劑、光穩(wěn)定劑、遮光劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑、增稠劑、粘度調(diào)節(jié)劑等以及其他植物藥(例如蘆薈、黃春菊等)且進(jìn)一步如下所述。

可以用于本發(fā)明局部用組合物的化妝品或皮膚學(xué)可接受的媒介物包括、但不限于一種或多種水性系統(tǒng)、甘油C1-4醇類、脂肪醇類、脂肪醚類、脂肪酯類、多元醇類、二醇類、植物油、礦物油、脂質(zhì)體、層狀脂質(zhì)材料、硅油、水或其任意的組合。

在本說明書中，所述的媒介物可以是水相、油相、凝膠、水包蠟型乳劑、水包硅氧烷型乳劑、硅氧烷包水型乳劑、水包油型乳劑或油包水型乳劑的形式。水相是一種或多種水可溶性或水可分散性成分的混合物，它們?cè)谑覝?25℃)下可以是液體、半固體或固體。所述媒介物包含或可以是水或水-醇媒介物的混懸液、分散液或溶液形式，其可以包含增稠劑或膠凝劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以基于本領(lǐng)域技術(shù)人員所擁有的知識(shí)選擇適合的產(chǎn)品形式、其中包含的成分及其制備方法。

組合物可包括水相，其可以包含水或水與至少一種親水性有機(jī)溶劑的混合物，所述的親水性有機(jī)溶劑包含醇，尤其是含2－5個(gè)碳原子的直鏈或支鏈低級(jí)一元醇，例如乙醇或丙醇；多元醇，例如丙二醇、山梨醇、甘油、二甘油、泛醇或聚乙二醇及其混合物。這種水相可以占組合物重量的約0.5－約99.99wt％。

當(dāng)本說明書的組合物是乳劑形式時(shí)，它還可以任選包含表面活性劑，優(yōu)選其用量占組合物重量的0.1－30％且特別是約1－約20wt％。

組合物還可以包含增稠聚合物，例如兩親聚氨基甲酸酯、聚丙烯酸均聚物或共聚物、聚酯和/或基于烴的樹脂?？梢詫⒕酆衔锶苡诨蚍稚⒂诨瘖y品可接受的媒介物且任選與增塑劑合并。

本說明書的組合物還可以包含油相，其包含在室溫(25℃)下為液體的油可溶性或油可分散性組分和/或在室溫下為固體的油狀或蠟狀物質(zhì)，例如蠟、半固體、樹膠及其混合物。該油相還可以包含有機(jī)溶劑。

在室溫下為液體、通常稱作油的適合的油性物質(zhì)包括：基于烴的來源于動(dòng)物的油，例如全氫化角鯊烯；基于烴的植物油，例如液態(tài)的4-10個(gè)碳原子的脂肪酸的甘油三酯類，例如庚酸或辛酸甘油三酯類，或油，例如向日葵油、玉米油、大豆油、葡萄子油、蓖麻油、鱷梨油、辛酸/癸酸甘油三酯類、霍霍巴油；礦物或合成來源的直鏈或支鏈烴類，例如液體石蠟及其衍生物、凡士林；合成酯類和醚類，特別是脂肪醇的酯類，例如肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸2-乙基己酯、硬脂酸2-辛基十二烷基酯、異硬脂酸異硬脂醇酯；羥基化酯類，例如乳酸異硬脂醇酯、羥基硬脂酸辛酯、羥基硬脂酸辛基十二烷基酯，脂肪醇的庚酸酯類、辛酸酯類和癸酸酯類；多元醇酯類，例如丙二醇二辛酸酯、新戊二醇二庚酸酯、二甘醇二異壬酸酯和季戊四醇酯類；含有12-26個(gè)碳原子的脂肪醇類，例如辛基十二烷醇、2-丁基辛醇、2-己基癸醇、2-十一基十五烷醇、油醇；部分基于烴的氟油和/或氟硅油；硅油，例如在室溫下為液體或半固體的揮發(fā)性或非揮發(fā)性的直鏈或環(huán)狀聚甲基硅氧烷(PDMS)，例如環(huán)狀聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷，其任選包含苯基，例如苯基三甲基硅氧烷、硅氧烷及其混合物。這些油通常以占油相重量約0wt％-約90wt％，優(yōu)選約1wt％-約80wt％的量存在。

本說明書組合物的油相還可以包含一種或多種化妝品可接受的有機(jī)溶劑。這些溶劑的存在量占組合物總重的約0wt％-約60wt％，優(yōu)選約1wt％-約30wt％，并且可以選自親脂性有機(jī)溶劑、兩親性有機(jī)溶劑及其混合物?？梢杂糜诒景l(fā)明組合物的合適的溶劑包括：乙酸酯類，例如乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸戊酯或乙酸2-甲氧基乙酯；乙酸異丙酯；烴類，例如甲苯、二甲苯、對(duì)-二甲苯、己烷或庚烷；含有至少3個(gè)碳原子的醚類及其混合物。

本說明書的組合物可以進(jìn)一步包含常用于化妝品領(lǐng)域中的任何組分。這些組分包括防腐劑、水相增稠劑(多糖生物聚合物、合成聚合物)和脂肪相增稠劑、芳香劑、親水性和親脂性活性劑及其混合物。這些不同組分的量為常用于化妝品領(lǐng)域以便實(shí)現(xiàn)其預(yù)期目的的量，并且范圍一般為占組合物總重的約0.01重量％-約20重量％。這些組分的性質(zhì)及其用量必須與本說明書組合物的生產(chǎn)方法相容。

本發(fā)明的組合物還可以包含另外的顆粒相，其一般的存在量占組合物總重的約0wt％－約30wt％，優(yōu)選約0.05wt％－約20wt％，并且可以包含化妝品組合物中使用的顏料和/或珠光劑和/或填充劑。合適的無機(jī)顏料包括氧化鈦和氧化鐵；適合的填充劑包括滑石粉、云母、聚乙烯粉末、一氮化硼、共聚物微球和硅氧烷樹脂微珠(來自Toshiba的Tospearl)。

本說明書組合物的油相可以包含一種或多種蠟、樹膠或其混合物。蠟包括基于烴的蠟、氟蠟和/或硅氧烷蠟并且可以為植物、礦物、動(dòng)物和/或合成來源的。特別地，所述的蠟具有高于25℃，優(yōu)選高于45℃的熔點(diǎn)。本說明書的組合物可以包含占組合物總重0－約20wt％的蠟。樹膠一般為高分子量PDMS或纖維素樹膠或多糖類，并且半固體物質(zhì)一般為基于烴的化合物，例如，但不限于羊毛脂及其衍生物，或者可以為PDMS。本說明書的組合物可以包含占組合物總重0－約20wt％，典型地約0.1％wt－約10wt％的樹膠。

在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的局部用組合物還可以包括至少一種下列成分：皮膚滲透增強(qiáng)劑、表面光滑劑、皮膚豐滿劑、光學(xué)擴(kuò)散劑、防曬劑、表皮脫落促進(jìn)劑和抗氧化劑。有關(guān)這些和其他適合的化妝品組分的詳細(xì)描述可以在如下出版物中找到：“International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook,”第10版(2004),Cosmetic,Toiletry,and Fragrance Association(CTFA)出版，pp.2177-2299，將該文獻(xiàn)完整地引入本文參考。

在可以用于本發(fā)明組合物的遮光劑中有阿伏苯宗、肉桂酸衍生物(例如肉桂酸辛基甲氧基酯)、水楊酸辛酯、羥苯甲酮、二氧化鈦、氧化鋅或其任意的混合物。遮光劑的存在量占組合物總重的約1wt％－約30wt％。添加遮光劑可以防止/減少在包裝的同時(shí)組合物的光降解，還可以用于防止皮膚受到紫外線照射。

除了以上所述的以外，抗氧化劑起從皮膚中清除自由基的作用以便防止皮膚受到環(huán)境攻擊因素的損害。可以用于本發(fā)明組合物的抗氧化劑的實(shí)例包括、但不限于α羥基酸(AHA)；過氧化苯甲酰；β羥基酸；酮酸，例如丙酮酸、2-氧代丙酸、2-氧代丁酸和2-氧代戊酸；美國(guó)專利US5,847,003和US5,834,513中披露的含氧酸(將其披露的內(nèi)容引入本文作為參考)；水楊酸；脲；或其任意的混合物。優(yōu)選的抗氧化劑是3,6,9-三氧雜十一烷二酸、羥基乙酸、乳酸或其任意的混合物；帶有酚羥基官能團(tuán)的化合物，例如抗壞血酸及其衍生物/酯類；β-胡蘿卜素；兒茶素；姜黃素；四氫姜黃素；生育酚及其衍生物；或其任意的混合物。本說明書的組合物可以具有抗氧化劑，其占組合物總重優(yōu)選約0.001wt％－約10wt％且更優(yōu)選約0.001wt％－約5wt％。

在本發(fā)明的組合物還可以具有一種或多種下列活性劑、組分或輔料：麻醉劑；抗過敏反應(yīng)劑；抗真菌劑；抗菌藥；螯合劑；著色劑；緩和劑；潤(rùn)膚劑；乳化劑；芳香劑；保濕劑；潤(rùn)滑劑；增濕劑；pH調(diào)節(jié)劑；色素改變劑；防腐劑；穩(wěn)定劑；表面活性劑；增稠劑；粘度調(diào)節(jié)劑；維生素；或其任意的混合物。這些不同物質(zhì)的量為常用于化妝品或藥物領(lǐng)域的量，例如它們可以占組合物總重的約0.01％－約20％。

用于配制成本說明書組合物的活性劑的非限制性實(shí)例除了所述的天然植物活性成分外還包括那些具有對(duì)處理皺紋和/或細(xì)紋具有作用的試劑，例如角質(zhì)層分離劑，即具有脫屑、表皮脫落或擦洗性能的活性劑或能夠軟化皮膚角質(zhì)層的活性劑。抗皺紋或抗細(xì)紋活性劑的其他實(shí)例包括羥基酸和類視黃醇。例如，可以以相對(duì)于組合物總重約0.0001％－約5％(重量)的量配制這些活性劑。

合適的羥基酸包括：例如羥基乙酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、2-羥基鏈烷酸、扁桃酸、水楊酸及其烷基衍生物，包括5-正-辛酰基水楊酸、5-正-十二烷?；畻钏?、5-正-癸酰基水楊酸、5-正-辛基水楊酸、5-正-庚氧基水楊酸、4-正-庚氧基水楊酸和2-羥基-3-甲基苯甲酸或其烷氧基衍生物，例如2-羥基-3-甲氧基苯甲酸。

典型的類視黃醇包括，但不限于視黃酸(例如全反式或13-順式)及其衍生物、視黃醇(維生素A)及其酯類，例如棕櫚酸視黃醇酯、乙酸視黃醇酯和丙酸視黃醇酯及其鹽。

更具體地，局部施用的組合物可以是對(duì)皮膚保護(hù)性護(hù)理的組合物，優(yōu)選用于面部、頸部、手、足或身體其他區(qū)域。非限制性實(shí)例包括日霜或化妝水、晚霜或化妝品、防曬霜、化妝水或油、體乳、化妝品(粉底)、人工曬黑組合物、脫毛劑和貼劑。

乳化劑的用量典型地在本說明書的乳劑組合物中相對(duì)于總重占約0.1％－約30％重量且優(yōu)選約0.5％－約30％重量。

在基于水的制劑中，可以在pH 1－8范圍配制活性化合物，其中優(yōu)選pH＝2-7，最優(yōu)選pH 3.5-5.5。

在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，使用測(cè)定法或篩選方法篩選用于刺激MAGP-1蛋白質(zhì)表達(dá)的化合物的活性，所述測(cè)定法或篩選方法包括在具有DMEMD與10％血清的培養(yǎng)板中培養(yǎng)正常人體表皮成纖維細(xì)胞，然后在37℃和10％CO₂溫育24小時(shí)。24小時(shí)后，用適合的溶劑(例如DMSO)制備作為測(cè)試物質(zhì)的本發(fā)明化合物的儲(chǔ)備溶液。然后在具有10％CO₂的加濕37℃溫育器中用生長(zhǎng)培養(yǎng)基稀釋的測(cè)試物質(zhì)或相應(yīng)的媒介物對(duì)照品處理細(xì)胞48小時(shí)。溫育后，典型地取出生長(zhǎng)培養(yǎng)基并且將TRIzol試劑加入到培養(yǎng)板中。采集得到的細(xì)胞裂解液，放入冷藏箱直至RNA分離和分析?？梢允褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員公知的任意方法進(jìn)行RNA分離。分離之后，通過Nanodrop(Thermo Scientific,DE)或任意其他公知方法測(cè)定總RNA濃度。然后使分離的RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄(RT)和定量聚合酶鏈反應(yīng)(qPCR)以擴(kuò)增RNA，然后根據(jù)公知方法測(cè)定和計(jì)算，以測(cè)定每種化合物的MAGP-1刺激活性水平。

本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案在于制備包含根據(jù)上述篩選方法鑒定的MAGP-1活性成分的組合物。

下列實(shí)施例的含義在于以非限制性方式顯示本發(fā)明的一些方面。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1–提取物的制備

龍船花–通過使用乙醇提取、然后進(jìn)一步用己烷提取干燥切碎的龍船花植物得到提取物。簡(jiǎn)言之，首先手工將龍船花的切碎植物研磨成小顆粒，得到約250克粉末。然后用50％乙醇提取研磨的粉末。過濾和真空蒸發(fā)后，用水稀釋總的濃縮提取物，離心，過濾。然后用己烷將液體提取三次，棄去己烷上層，凍干水層，得到約90克的提取物。

尖齒臭茉莉–通過使用乙醇提取方案提取尖齒臭茉莉植物葉得到提取物。首先手工將尖齒臭茉莉龍的葉研磨成小顆粒，得到約250克粉末/燒瓶(2個(gè)燒瓶)。然后用80vol％乙醇提取研磨的粉末(2X2,000ml/燒瓶)。過濾和真空蒸發(fā)后，凍干總的濃縮提取物，得到30.77克的乙醇提取物。

五月茶–提取物獲自用4450ml的1:1乙醇-水溶液、體積分三部分提取的400克研磨植物葉。過濾提取物，真空濃縮，以除去乙醇，用水稀釋至1300ml，然后離心。用500ml二氯甲烷洗滌得到的上清液，用10g活性炭脫色，過濾。然后濃縮，得到57.7g提取物，干燥至得到粉末。

盒果藤(Operculina turphetum)–通過使用乙醇提取方案提取Operculina turphetum植物的地上部分得到提取物。首先手工將Operculina turphetum研磨成小顆粒，得到約250克粉末。然后用水-乙醇混合物(50-50)提取研磨的粉末。過濾和真空蒸發(fā)后，用二氯甲烷洗滌水溶液，真空濃縮，干燥。

Tiliacora triandra-通過使用乙醇提取方案提取Tiliacora triandra植物的藤得到提取物。簡(jiǎn)言之，首先手工將Tiliacora triandra Diels的藤研磨成小顆粒，得到約250克粉末/燒瓶(2個(gè)燒瓶)。然后用80％乙醇提取研磨的粉末(2X2,000ml/燒瓶)。過濾和真空蒸發(fā)后，凍干總的濃縮提取物，得到50克的乙醇提取物。

實(shí)施例2–真皮中的MAGP-1表達(dá)

材料和方法

皮膚活檢組織獲自15位年輕受試者(18-25年齡)和15位年老受試者(40-65年齡)的光暴露和避光的區(qū)域。將組織固定在福爾馬林中并且進(jìn)行免疫組織化學(xué)研究。由此施用將抗-MAGP-1和堿性磷酸酶-綴合的二次抗體以顯示皮膚中蛋白質(zhì)固定。用Zeiss Axionskop2縮微成像系統(tǒng)取影像。

結(jié)果

光老化在結(jié)構(gòu)上降解MAGP-1蛋白(圖1)。圖1中的箭頭指示在乳頭狀真皮中不存在MAGP-1原纖維。星號(hào)指示真皮中MAGP-1結(jié)構(gòu)降解。

實(shí)施例3–毛孔和毛囊周圍的MAGP-1表達(dá)

使用與實(shí)施例2中舉出類似的材料和方法，此處的結(jié)果顯示MAGP-1蛋白質(zhì)水平在毛囊/毛孔周圍因光老化而顯著降低(圖2)。圖2中的箭頭指示來自年輕受試者的毛囊/毛孔周圍高水平的MAGP-1原纖維結(jié)構(gòu)；且箭頭指示在來自老齡受試者的光暴露的皮膚中毛囊/毛孔周圍不存在MAGP-1。

實(shí)施例4–篩選方法

細(xì)胞處理

將正常人表皮成纖維細(xì)胞(Cascade Biologics)在具有10ml DMEM與10％血清的100mm培養(yǎng)板中培養(yǎng)并且在37℃和10％CO₂條件下溫育24小時(shí)。24小時(shí)后，用適合的溶劑(例如DMSO)制備測(cè)試化合物/植物提取物的儲(chǔ)備溶液。在具有10％CO₂的加濕37℃溫育器中用生長(zhǎng)培養(yǎng)基稀釋的測(cè)試物質(zhì)或相應(yīng)的媒介物對(duì)照品處理細(xì)胞48小時(shí)。溫育后，從每一培養(yǎng)板中取出生長(zhǎng)培養(yǎng)基并且將800ul TRIzol試劑(Invitrogen)加入到培養(yǎng)板中。采集得到的細(xì)胞裂解液，放入–80℃冷藏箱直至RNA分離和分析。

RNA分離

按照制造商的方法分離RNA。簡(jiǎn)言之，使細(xì)胞裂解液達(dá)到室溫，加入0.2ml氯仿/1ml試劑。劇烈振搖試管15秒，在環(huán)境溫度溫育2－3分鐘。在2－8℃以12,000×g將樣品離心15分鐘。離心后，該混合物分離成多相，僅RNA保留在上層水相中。

然后將水相轉(zhuǎn)入新試管。通過與用于最初的勻化的0.5ml異丙醇/1ml試劑混合使RNA從水相中沉淀。將樣品在15－30℃溫育10分鐘，在2－8℃以12,000×g將樣品離心10分鐘。除去上清液，通過添加用于細(xì)胞裂解液的至少1ml 75％乙醇/1ml試劑用75％乙醇將RNA沉淀洗滌1次。通過渦旋和在2－8℃以7,500×g離心5分鐘混合樣品。簡(jiǎn)單地風(fēng)干RNA沉淀。將RNA溶于不含RNase(核糖核酸酶)的水中，通過使用Nanodrop(Thermo Scientific,DE)測(cè)定總RNA濃度。

逆轉(zhuǎn)錄酶和qPCR

逆轉(zhuǎn)錄(RT)反應(yīng)在20μl總體積中進(jìn)行。制備包含20μl 10X TaqMan RT緩沖液、4.4μl 25mM MgCl2、4.0μl dNTP混合物、1.0μl隨機(jī)六聚物、0.4μl RNase抑制劑、0.5μl MultiScribe逆轉(zhuǎn)錄酶(50U/ml)、2.0μg RNA和不含RNase的水以構(gòu)成終體積20μl的RT混合物。使用Stratagene Mx 3005P QPCR機(jī)將該反應(yīng)體系在25℃溫育10min，在48℃溫育30min，然后在95℃溫育5min。RT步驟后，將該反應(yīng)體系貯存在–20℃用于qPCR分析。

定量聚合酶鏈反應(yīng)(qPCR)在20μl總體積中進(jìn)行。使用Applied Biosystems(AB)Universal PCR主混合物。制備包含10μl Taqman Universal PCR混合物、1μl引物和探針混合物、2μl RT產(chǎn)物和7μl去離子水的混合物。MAGP-1和GAPDH引物和探針購(gòu)自Applied Biosystems，MAGP-1的ID是Hs00250064_ml，人GAPDH的編號(hào)是4352934E。

QPCR的溫度曲線圖是50℃ 2min和95℃ 10min，1個(gè)循環(huán)；然后是95℃ 15sec和60℃ 1min，40個(gè)循環(huán)。采集MAGP-1mRNA的值與參比基因GAPDH的值。將數(shù)值對(duì)GAPDH校準(zhǔn)以測(cè)定處理后MAGP-1mRNA的改變。通過將測(cè)試結(jié)果與媒介物對(duì)照品相比計(jì)算MAGP-1的mRNA百分比增加。

表1列出了所測(cè)定的在MAGP-1刺激表達(dá)下具有活性的成分。

表1–MAGP-1篩選數(shù)據(jù)

除非另有指示，否則所有百分比均基于組合物的總重按重量計(jì)。

將本文引述的全部參考文獻(xiàn)包括專利申請(qǐng)和公開文獻(xiàn)完整性地引入本文參考，且為了所有目的，其引用程度如同為所有目的而將每篇公開文獻(xiàn)或?qū)＠驅(qū)＠暾?qǐng)各自特別和單獨(dú)所示的完整地引入?yún)⒖?。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的，可以在不脫離本發(fā)明精神和范圍的情況下對(duì)本發(fā)明進(jìn)行許多變型和改變。本文所述的具體實(shí)施方案僅作為實(shí)施例提供，本發(fā)明僅受待批權(quán)利要求以及這些權(quán)利要求所賦予權(quán)力的等效方案的全部范圍的限制。