本發(fā)明涉及將九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物作為有效成分的、殘留在皮膚上的微塵吸附或去除用化妝品組合物。
背景技術(shù)：
：隨著工業(yè)化迅速發(fā)展、汽車(chē)尾氣排放、以及受中國(guó)大氣污染的影響，重金屬粉末及微塵等外部污染物污染人體皮膚，漸漸成為皮膚老化及過(guò)敏問(wèn)題的誘因。重金屬指的是鉛、汞、鎘、鋅、鎳等比重在4以上的重金屬元素，這些重金屬一旦在體內(nèi)堆積，哪怕只是很微小的量，也很難被排出，而且重金屬堆積在我們體內(nèi)的蛋白質(zhì)上，時(shí)間久了會(huì)出現(xiàn)各種各樣的副作用，因此對(duì)人體的危害極大。并且，在大氣中經(jīng)過(guò)化學(xué)反應(yīng)后產(chǎn)生的一氧化氮(no)等有害物質(zhì)更增加了皮膚炎癥、特應(yīng)性皮炎、皮膚過(guò)敏等發(fā)生的幾率。微塵是指直徑在10μm以下的看不到的細(xì)小的灰塵，并含有硫酸鹽、硝酸鹽等有毒物質(zhì)。這種微塵是由作為汽車(chē)尾氣和工廠(chǎng)煙囪中排出的有毒物質(zhì)的重金屬等在大氣中經(jīng)過(guò)光化學(xué)反應(yīng)形成，當(dāng)人體暴露在高濃度的微塵環(huán)境中時(shí)，會(huì)引發(fā)咳嗽、眼球刺激、皮膚過(guò)敏、由肺部和呼吸道細(xì)胞引起的炎癥等。作為預(yù)防重金屬及微塵引起的皮膚過(guò)敏的方法，最有效的方法為通過(guò)清潔面部直接從皮膚去除重金屬及微塵，但是，單純靠洗臉難以去除極具吸附力的重金屬及微塵。九節(jié)龍作為屬報(bào)春花目紫金?？频某＞G小灌木，是指廣泛分布在濟(jì)州島和日本的、傘形花序、花瓣呈白色的植物。并且，孟加拉榕樹(shù)作為屬蕁麻目?？葡饦?shù)屬的常綠喬木，是指被稱(chēng)為印度榕樹(shù)或菩提樹(shù)的、樹(shù)冠龐大、呈廣卵形或傘狀、葉先端鈍尖、基部近圓形、枝條上生有氣根、垂入土中即變成新樹(shù)干而不斷擴(kuò)展的植物。九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)對(duì)空氣中微塵的卓越去除效果已經(jīng)廣為人知，但作為潔面用品，對(duì)于去除吸附在皮膚上的重金屬及微塵的效果還沒(méi)有比較具體的說(shuō)明。因此，、在本發(fā)明中，考慮到以上問(wèn)題的必要性，需要對(duì)新的天然提取物進(jìn)行開(kāi)發(fā)?，F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專(zhuān)利文獻(xiàn)專(zhuān)利文獻(xiàn)1：韓國(guó)公開(kāi)專(zhuān)利第10-2010-0056239號(hào)專(zhuān)利文獻(xiàn)2：韓國(guó)公開(kāi)專(zhuān)利第10-2016-0000959號(hào)技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：技術(shù)問(wèn)題本發(fā)明涉及包含九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物作為有效成分的化妝品組合物，本發(fā)明提供不僅有效去除皮膚的重金屬及微塵，而且還具有優(yōu)秀的改善角質(zhì)及保護(hù)皮膚的效果的化妝品組合物。解決問(wèn)題的方案本發(fā)明的一實(shí)施例提供包含九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物作為有效成分的重金屬及微塵去除用化妝品組合物。本發(fā)明中使用的九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物可根據(jù)本領(lǐng)域公知的提取方法，將粉碎的九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)葉與提取溶劑相混合后進(jìn)行提取并干燥后，在溶劑中進(jìn)行稀釋來(lái)制備。上述提取過(guò)程中使用的提取溶劑可以為選自由石油醚、乙酸丁酯、乙酸乙酯、三氯甲烷、二氯甲烷、氯仿及己烷組成的組中的一種以上的溶劑，優(yōu)選地，上述提取溶劑為己烷、乙酸乙酯或石油醚，但不限于此。并且，可混合上述溶劑中的兩種以上的不同的溶劑來(lái)使用，或者可依次使用上述溶劑。上述干燥可以為自然干燥，或者可使用裝置來(lái)進(jìn)行干燥，具體可使用旋轉(zhuǎn)減壓濃縮機(jī)及凍結(jié)干燥機(jī)來(lái)進(jìn)行干燥。優(yōu)選地，可利用溶劑來(lái)稀釋上述提取干燥物，優(yōu)選地，可利用辛酸/癸酸甘油三酯(caprylic/caprictriglyceride)(中鏈甘油三酯，mct)或芝麻油來(lái)稀釋規(guī)定濃度的上述干燥物，優(yōu)選地，稀釋至0.1重量百分比至20重量百分比。根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)施例，相對(duì)于重金屬或微塵去除用化妝品組合物的總重量，可包含0.01重量百分比至20重量百分比的上述樹(shù)脂提取物，優(yōu)選地，可包含0.1重量百分比至20重量百分比的上述樹(shù)脂提取物，更優(yōu)選地，可包含2重量百分比至10重量百分比的上述樹(shù)脂提取物，最優(yōu)選地，可包含5重量百分比的上述樹(shù)脂提取物。根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)施例，可通過(guò)吸附重金屬或溶解微塵來(lái)去除上述重金屬或微塵。上述組合物不僅可有效抑制有害重金屬和/或包含上述有害重金屬的微塵引起的皮膚損傷，而且還能夠具有去除附著在皮膚上的有害重金屬和/或包含上述有害重金屬的微塵、改善皮膚的效果。上述皮膚改善可以為選自由抗氧化、抑制炎癥、調(diào)節(jié)皮膚水油平衡、改善皮膚彈性、修復(fù)皮膚屏障、改善皮膚紋理及減少皮膚紅斑組成的組中的一種以上。本發(fā)明的另一實(shí)施例提供包含上述微塵去除用化妝品組合物的化妝品。上述化妝品可以為軟膏、溶液、懸濁液、乳濁液、漿液、凝膠、霜、乳液、精華、香皂、含表面活性劑的清潔劑、精油及貼布等劑型，優(yōu)選地，上述化妝品為乳液或面膜，但不限于此。發(fā)明的效果本發(fā)明提供與包含九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物作為有效成分的組合物的去除有害重金屬和/或包含上述有害重金屬的微塵的化妝品組合物有關(guān)的新的用途。本發(fā)明的樹(shù)脂提取物具有吸附及去除有害重金屬及包含上述有害重金屬的微塵、改善角質(zhì)、抗氧化、抑制炎癥、調(diào)節(jié)皮膚水油平衡、改善皮膚彈性、修復(fù)皮膚屏障、改善皮膚紋理及減少皮膚紅斑等皮膚改善效果。附圖說(shuō)明圖1示出不同濃度的本發(fā)明的九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)重金屬(鉛和鎘)的去除效果。圖2示出利用本發(fā)明的九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物進(jìn)行不同時(shí)長(zhǎng)的處理后的微塵分解效果。圖3示出本發(fā)明的九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物、α-生育酚及2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚(bht)的活性氧分解效果。圖4示出不同濃度的本發(fā)明的九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物作用下，小鼠巨噬細(xì)胞(mousemacrophage，raw264.7)的細(xì)胞活度。圖5示出不同濃度的本發(fā)明的九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物作用下，免疫細(xì)胞內(nèi)熒光素酶(luciferase)的活度。圖6及圖7示出不同濃度的本發(fā)明的九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物作用下，白介素-1β(il-1β)和腫瘤壞死因子-α(tnf-α)基因表達(dá)的變化。圖8示出含有本發(fā)明的九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物的面膜對(duì)重金屬的去除效果。圖9至圖14分別示出使用含有本發(fā)明的九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物的面膜的時(shí)間不同，受試者的皮膚水分含量、皮膚油脂量、皮膚彈性、經(jīng)皮水分丟失量、皮膚紋理改善度及皮膚紅斑的變化。具體實(shí)施方式通過(guò)以下一個(gè)以上的實(shí)施例進(jìn)行更詳細(xì)的說(shuō)明。但這些實(shí)施例僅用于例示性地說(shuō)明一個(gè)以上的實(shí)施例，而本發(fā)明的范圍并不限定于這些實(shí)施例。1.試樣的制備1.1.九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物的制備使用本領(lǐng)域中通用的索格利特提取法來(lái)獲取九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物。具體地，首先將粉碎的九節(jié)龍或孟加拉榕樹(shù)的葉以己烷或乙醇醚的20體積百分比填入套管(thimble)中，在120℃的溫度下進(jìn)行加熱，并回流提取。對(duì)加熱的溶劑進(jìn)行3～10次回流，來(lái)提取破碎的九節(jié)龍或孟加拉榕樹(shù)葉的樹(shù)脂，使用250mesh及0.5μm的過(guò)濾紙進(jìn)行過(guò)濾，來(lái)獲取液相提取物。利用旋轉(zhuǎn)減壓濃縮機(jī)及凍結(jié)干燥機(jī)從過(guò)濾出的上述液相提取物獲取提取干燥物。利用中鏈甘油三酯將上述提取干燥物稀釋至10重量百分比后，使用250mesh及0.2μm的過(guò)濾紙進(jìn)行過(guò)濾，來(lái)獲取液相樹(shù)脂提取物。通過(guò)實(shí)施對(duì)以如上所述的方法來(lái)制備的本發(fā)明的組合物的相關(guān)試驗(yàn)例的結(jié)果確認(rèn)，在皮膚穩(wěn)定性層面上不會(huì)引起異常反應(yīng)。1.2.面膜的制備用于制備包含發(fā)明的組合物的面膜的成分比例如表1所示，制備過(guò)程如下。使用加熱器對(duì)a相進(jìn)行加熱至70℃完全溶解后，將a相與b相混合。使用加熱器對(duì)c相加熱至70℃后與a相和b相混合，冷卻并攪拌。將e相加熱至40℃與d相混合。將a相、b相及c相混合液與d相及e相混合液混合攪拌至溫度降至35℃?；旌蟜相來(lái)校對(duì)重量，經(jīng)過(guò)攪拌混合過(guò)程冷卻并過(guò)濾來(lái)完成面膜。九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物添加量為5重量百分比。表12.試驗(yàn)方法及結(jié)果實(shí)施例1：確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)重金屬的去除效果為了確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)重金屬去除效果，將等量的鉛(60ppm)及鎘(30ppm)溶液和上述樹(shù)脂提取物放入分液漏斗中混合并反應(yīng)三次。反應(yīng)三次后僅將鉛和鎘溶液分離，并利用電感耦合等離子體質(zhì)譜(icp-ms)對(duì)分離液的殘留重金屬含量進(jìn)行測(cè)量。此時(shí)，作為對(duì)照組，使用與中鏈甘油三酯反應(yīng)的組。吸附率為吸附重金屬后試樣的濃度除以對(duì)照組試樣的濃度，吸附率越高代表對(duì)重金屬的吸附能力越強(qiáng)。上述重金屬去除率為(1-吸附率)×100。分析結(jié)果顯示，本發(fā)明的九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物隨著濃度的增加，對(duì)重金屬的去除率越高(參照下列表2及圖1)。因此，可以確認(rèn)，九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)重金屬具有去除效果。表2樹(shù)脂濃度(％)鉛的去除率(％)鎘的去除率(％)0--217.69.0532.817.71045.524.8實(shí)施例2：確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)微塵的分解效果為了確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)微塵的分解效果，將利用高效微?？諝?hepa)過(guò)濾器捕集的1％的微塵(pm10)與上述提取物混合，利用紫外-可見(jiàn)光(uv/vis)分光光度計(jì)，在550nm下對(duì)不同時(shí)間段的透過(guò)度進(jìn)行測(cè)定。此時(shí)，作為對(duì)照組，使用僅包含中鏈甘油三酯的組。微塵的透過(guò)率為包含微塵的試樣的透過(guò)度除以對(duì)照組試樣的透過(guò)度，透過(guò)率越高代表對(duì)微塵分解能力越強(qiáng)。上述微塵分解率為(1-透過(guò)率)×100。分析結(jié)果顯示，本發(fā)明的九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物處理時(shí)長(zhǎng)越長(zhǎng)，對(duì)微塵的分解率越高(參照下列表3及圖2)。所以可以得出結(jié)論：九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)微塵具有分解效果。表3實(shí)施例3：確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)活性氧的分解效果為了確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)皮膚美容的改善效果，對(duì)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物是否能夠去除在皮膚老化過(guò)程中起主要作用的活性氧進(jìn)行調(diào)查。為了確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)活性氧的分解效果，采用利用作為自由基的1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，dpph)的自由基去除活性測(cè)定方法。在試管里放入4ml的甲醇，并分別加入不同濃度的九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物后，加入1ml的0.15mm的1，1-二苯基-2-三硝基苯肼溶液，在室溫條件下使其反應(yīng)30分鐘后，在520nm下進(jìn)行吸光度測(cè)定，此時(shí)測(cè)定的是沒(méi)有基質(zhì)和1，1-二苯基-2-三硝基苯肼的initial(ai)和blank(ab)，并與陽(yáng)性對(duì)照組的α-生育酚和2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚進(jìn)行比較。分析結(jié)果顯示，本發(fā)明的九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物在大于作為陽(yáng)性對(duì)照組的α-生育酚且小于2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚的濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)卓越的活性氧分解能力(參照下列表4及圖3)。因此，可以確認(rèn)，九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物具有促進(jìn)分解活性氧的效果。表4實(shí)施例4：確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)免疫細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制效果為了確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)免疫細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制效果，利用作用于皮膚炎癥和紅斑的小鼠免疫細(xì)胞進(jìn)行九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)小鼠免疫細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用的實(shí)驗(yàn)。小鼠免疫細(xì)胞購(gòu)于韓國(guó)細(xì)胞株銀行(kctc)來(lái)使用，細(xì)胞培養(yǎng)液通過(guò)向達(dá)爾伯克氏改良伊格爾培養(yǎng)(dmem，gibco)中添加10％的胎牛血清(fbs，gibco)、10％(100unit/ml)的青霉素及10％(100g/ml)的鏈霉素來(lái)使用。在溫度37℃、濕度95％、co2含量在5％的條件下的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)中使用的細(xì)胞均為3～10代之間的細(xì)胞。當(dāng)利用九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物處理作為小鼠免疫細(xì)胞的raw264.7時(shí)，為了確認(rèn)細(xì)胞毒性程度，使用多種濃度的九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物進(jìn)行處理24小時(shí)后，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，之后對(duì)細(xì)胞的活度進(jìn)行測(cè)定。分析結(jié)果顯示，與對(duì)照組(未處理組)相比，細(xì)胞的生長(zhǎng)在使用九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物處理后沒(méi)有引起很大的變化(參照下列表5及圖4)。因此，可以確認(rèn)，上述九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)免疫細(xì)胞未呈現(xiàn)毒性反應(yīng)。表5實(shí)施例5：確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)nf-κb轉(zhuǎn)錄的抑制效果為了確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)nf-κb轉(zhuǎn)錄的抑制效果，進(jìn)行作為在免疫反應(yīng)中起重要作用的炎性細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄因素的nf-κb的轉(zhuǎn)錄能力是否由九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物被抑制的實(shí)驗(yàn)。為了確認(rèn)當(dāng)利用九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物處理時(shí)，nf-κb轉(zhuǎn)錄能力被抑制的程度，對(duì)nf-κb報(bào)告基因(reporter)進(jìn)行分析。將公知為由nf-κb進(jìn)行轉(zhuǎn)錄的基因的啟動(dòng)子區(qū)域克隆到包含熒光素酶基因的載體上并轉(zhuǎn)染到免疫細(xì)胞。對(duì)誘導(dǎo)nf-κb轉(zhuǎn)錄的lps進(jìn)行處理，來(lái)激活nf-κb轉(zhuǎn)錄能力后，使用各種濃度的九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物進(jìn)行處理，測(cè)定熒光素酶的活性。熒光素酶的活性是利用使作為iggκ鏈基因的nf-κb結(jié)合部位的iggκ-nf-κb部位(序列5-ggggactttcc-3)寡核苷酸位于(oligonucleotide)最小(minimal)il-8啟動(dòng)子(位置在67到+44)的上游(upstream)而建立的熒光素酶報(bào)告基因構(gòu)造(construct)，根據(jù)試劑指南，利用脂質(zhì)體plus(lipofectamineplus，gibco-brl)將基因轉(zhuǎn)染到免疫細(xì)胞。使用lps對(duì)被基因轉(zhuǎn)染的免疫細(xì)胞進(jìn)行處理，來(lái)激活nf-κb的轉(zhuǎn)錄能力后，用濃度分別為0mg/l、1mg/l、10mg/l及100mg/l的九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物進(jìn)行處理，并培養(yǎng)24小時(shí)。在采集時(shí)點(diǎn)將經(jīng)培養(yǎng)的免疫細(xì)胞中直接添加到0.1ml溶解緩沖劑(0.1m的4-羥乙基哌嗪乙磺酸(hepes)，ph7.6，1％的曲拉通x(triton-x)，1mm的二硫蘇糖醇(dtt)及2mm的乙二胺四乙酸(edta))中來(lái)采集細(xì)胞溶解物后，在4℃的溫度下，以14000rpm離心分離10分鐘，獲取細(xì)胞蛋白。利用bradford分析法(bradfordassay；bio-radlaboratories)測(cè)定蛋白濃度后，將20μg蛋白質(zhì)添加到熒光素酶分析混合物(25mm的雙甘氨肽(glycylglycine)，15mm的mgso4，1mg/ml的牛血清白蛋白(bsa)，5mm的腺嘌呤核苷三磷酸(atp)及1mm的d-螢光素(luciferin；analyticalluminescencelaboratory))中，利用monolight2010(analyticalluminescencelaboratory)測(cè)定發(fā)光度，測(cè)定進(jìn)行三次，結(jié)果取平均值。分析結(jié)果顯示，與lps處理組相比，經(jīng)過(guò)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物處理后，由lps引起的nf-κb的參與性(transactivity)隨濃度的增加而減少(參照表6、圖5)。表6提取物濃度(mg/l)00110100lps-++++熒光素酶活度(倍數(shù))14.293.862.671.89實(shí)施例6：確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)炎性細(xì)胞因子合成的抑制效果為了確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)皮膚美容的改善效果，確認(rèn)了九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物是否抑制誘發(fā)炎癥反應(yīng)的炎性細(xì)胞因子合成。為了確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)炎性細(xì)胞因子的表達(dá)變化程度，利用不同濃度的九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)使用lps處理過(guò)的免疫細(xì)胞進(jìn)行處理后，培養(yǎng)24小時(shí)。然后，利用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qrt-pcr)對(duì)基因表達(dá)的變化進(jìn)行測(cè)定。為了定量性確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)白介素-1β和腫瘤壞死因子-α表達(dá)，以通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物發(fā)散的熒光值來(lái)確認(rèn)結(jié)果的方式，使用sybrgreenⅰ(invitrogen)進(jìn)行測(cè)定。在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)試管(tube)中混合0.2μm的引物(primer)、50mm的kcl、20mm的三(羥甲基)氨基甲烷(tris/hcl)，ph8.4、0.8mm的脫氧核糖核苷三磷酸(dntp)、0.5uextaqdna聚合酶(polymerase)、3mm的mgcl2，1×sybrgreen來(lái)制備反應(yīng)液。制備反應(yīng)液后，利用linegenek(bioer)在94℃的溫度下進(jìn)行第一輪變性反應(yīng)時(shí)3分鐘后，分別在94℃、60℃、72℃的溫度下進(jìn)行變性、退火(annealing)、聚合各30秒鐘，共進(jìn)行40輪。每輪結(jié)束后對(duì)熒光強(qiáng)度進(jìn)行測(cè)定。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)結(jié)果利用各個(gè)結(jié)果形成的熔融曲線(xiàn)進(jìn)行檢驗(yàn)。各個(gè)基因的循環(huán)閾值(cyclethreshold，ct)用肌動(dòng)蛋白(β-actin)的ct值標(biāo)準(zhǔn)化后，與ct的變化量進(jìn)行比較分析。當(dāng)ct值出現(xiàn)由聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物產(chǎn)生的熒光量(擴(kuò)大的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物數(shù))達(dá)到基本值以上的規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)值時(shí)，可以利用周期數(shù)并通過(guò)ct值確認(rèn)基因的表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)中使用的各個(gè)基因的引物如表7所示。陽(yáng)性對(duì)照組為l-ng-單甲基精氨酸及醋酸鹽(l-ng-monomethylarginine，acetatesalt；l-nmma)。表7分析結(jié)果顯示，與lps處理組相比，經(jīng)過(guò)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物處理后，由lps引起的白介素-1βmrna的表達(dá)隨著濃度的增加而減少(參照下列表8及圖6)。并且，與lps處理組相比，經(jīng)過(guò)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物處理后，由lps引起的腫瘤壞死因子-αmrna的表達(dá)隨著濃度的增加而減少(參照下列表9及圖7)。表8表9實(shí)施例7：確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)皮膚重金屬的去除效果為了確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)皮膚重金屬的去除效果，將豬皮(1cm×1cm)放入600ppm的鉛溶液中浸泡1小時(shí)后，在常溫下進(jìn)行干燥后，將等量的本發(fā)明中制備的面膜和市面上銷(xiāo)售的普通面膜(不含有九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物的面膜)分別涂抹15分鐘后，用普通卸妝濕巾擦凈來(lái)確認(rèn)鉛的去除程度。作為對(duì)照組，使用不涂抹面而僅用卸妝濕巾擦拭的組。對(duì)于鉛的的去除程度，使用20ml的5％的硝酸水溶液處理擦凈后的豬皮30分鐘后，利用電感耦合等離子體質(zhì)譜對(duì)皮膚上的鉛的殘留量進(jìn)行測(cè)定，然后根據(jù)以下式對(duì)重金屬去除率進(jìn)行計(jì)算。金屬去除率(％)＝[1-(使用化妝品處理后皮膚重金屬含量/鉛溶液浸泡后皮膚重金屬含量)]×100分析結(jié)果顯示，包含本發(fā)明的九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物的面膜比普通面膜具有更高的重金屬去除率(參照下列表10及圖8)。并且，普通的消費(fèi)者覺(jué)得只用卸妝濕巾就可以把皮膚上附著的重金屬和/或微塵完全去除，但實(shí)際上通過(guò)本發(fā)明的一實(shí)施例的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，只使用卸妝濕巾的話(huà)對(duì)鉛的去除率很低。表10鉛去除率(％)對(duì)照組3.2九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物面膜14.3普通面膜4.6實(shí)施例8：確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)皮膚油水指數(shù)的變化為了確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)皮膚美容的改善效果，利用水分測(cè)定儀(corneometer)及皮脂測(cè)定儀(sebumeter)對(duì)皮膚油水指數(shù)進(jìn)行分析。首先為了確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)皮膚油水指數(shù)改善的影像，選擇30名30歲以上的成人女性，使用上述所制備的面膜。給對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組各使用面膜2周及4周后，根據(jù)儀器指南，使用水分測(cè)定儀(mpa5，courage-khazakaelectronicgmbh)對(duì)皮膚油水指數(shù)進(jìn)行測(cè)定。由同一位試驗(yàn)負(fù)責(zé)人利用水分測(cè)定儀對(duì)受試者的作為測(cè)定部位的右側(cè)臉頰連續(xù)測(cè)定3次。根據(jù)儀器指南，利用皮脂測(cè)定儀(mpa5，courage-khazakaelectronicgmbh)對(duì)皮膚油水指數(shù)進(jìn)行測(cè)定。由同一位試驗(yàn)負(fù)責(zé)人利用皮脂測(cè)定儀對(duì)受試者的作為測(cè)定部位的額頭部位進(jìn)行測(cè)定。分析結(jié)果顯示，與對(duì)照組(未處理組)相比，用九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物處理后皮膚水分隨著使用時(shí)間的增加而增加(參照下列表11及圖9)。并且，皮膚的油分與水分相同地，與對(duì)照組(未處理組)相比，用九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物處理后皮膚水分隨著使用時(shí)間的增加而增加(參照下列表12及圖10)。表11實(shí)驗(yàn)前2周后4周后對(duì)照組252241218陽(yáng)性對(duì)照組248256272實(shí)驗(yàn)組256284323表12實(shí)驗(yàn)前2周后4周后對(duì)照組328322316陽(yáng)性對(duì)照組331344359實(shí)驗(yàn)組325364386實(shí)施例9：確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)皮膚彈性的改善效果為了確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)皮膚美容的改善效果，確認(rèn)了對(duì)皮膚彈性的改善效果。為了確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)皮膚厚度的影響，選擇30名30歲以上的成人女性，使用上述所制備的面膜。給對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組各使用面膜2周及4周后，使用dermalabusb彈性測(cè)試探頭(dermalabusbelasticityprobe)對(duì)皮膚彈性的變化程度進(jìn)行測(cè)定。dermalabusb彈性測(cè)試探頭能夠以數(shù)值來(lái)表示根據(jù)測(cè)試部位吸收和吸收持續(xù)時(shí)間的皮膚變化和皮膚恢復(fù)力，由同一位試驗(yàn)負(fù)責(zé)人使用彈性測(cè)試探頭對(duì)受試者左側(cè)臉頰部位進(jìn)行固定后反復(fù)進(jìn)行3次測(cè)定。分析結(jié)果顯示，與對(duì)照組(未處理組)相比，用九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物處理后隨著使用時(shí)間的延長(zhǎng)而增加(參照下列表13及圖11)。表13實(shí)驗(yàn)前2周后4周后對(duì)照組10.9411.0511.09陽(yáng)性對(duì)照組11.0511.5211.87實(shí)驗(yàn)組10.9911.6412.69實(shí)施例10：確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)皮膚屏障的改善效果為了確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)皮膚美容的改善效果，確認(rèn)了對(duì)皮膚屏障的改善效果。首先，為了確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)皮膚屏障改善的影像，選擇30名30歲以上的成人女性，使用上述所制備的面膜。給對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組各使用乳霜及爽膚水2周及4周后，根據(jù)儀器指南，利用水分丟失測(cè)定儀dermalabusbtewl探頭(cortextechnology，inc.)對(duì)表皮水分丟失量(tewl：transepidermalwaterloss)進(jìn)行測(cè)定。分析結(jié)果顯示，與對(duì)照組(未處理組)相比，用九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物處理后經(jīng)皮水分丟失量隨著使用時(shí)間的延長(zhǎng)而減少(參照下列表14及圖12)。表14實(shí)驗(yàn)前2周后4周后對(duì)照組33.1232.5433.48陽(yáng)性對(duì)照組33.4831.5829.46實(shí)驗(yàn)組33.3130.1627.56實(shí)施例11：確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)皮膚紋理的改善效果為了確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)皮膚美容的改善效果，確認(rèn)了對(duì)皮膚紋理的改善效果。首先，為了確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)皮膚紋理改善的影像，選擇30名30歲以上的成人女性，使用上述所制備的面膜。給對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組各使用面膜2周及4周后，根據(jù)儀器指南，利用primoslight(fieldofview45×30-simple，flexible3dmeasuring，gfmesstechnikgmbh)對(duì)皮膚紋理程度進(jìn)行測(cè)定。由同一位試驗(yàn)負(fù)責(zé)人使用primoslight對(duì)受試者的額頭同一部位連續(xù)進(jìn)行3次測(cè)定。分析結(jié)果顯示，與對(duì)照組(未處理組)相比，用九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物處理后決定皮膚紋理的皮膚上所生成的皺紋深度隨著使用時(shí)間的延長(zhǎng)而減少(參照下列表15及圖13)。表15實(shí)驗(yàn)前2周后4周后對(duì)照組15.4515.3815.15陽(yáng)性對(duì)照組15.3514.1913.59實(shí)驗(yàn)組15.1813.4812.31實(shí)施例12：確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)紅斑的改善效果通過(guò)上述實(shí)施例4、5和6，可以確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)脂提取物可以有效抑制免疫細(xì)胞的增殖及減少炎性細(xì)胞因子的表達(dá)。因此，對(duì)紅斑是否隨著炎性細(xì)胞因子的減少而減少進(jìn)行分析，來(lái)確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)紅斑的改善效果。首先，為了確認(rèn)九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物對(duì)紅斑改善的影像，選擇30名30歲以上的成人女性，使用上述所制備的面膜。給對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組各使用面膜2周及4周后，根據(jù)儀器指南，利用分光光度計(jì)(spectrophotometercr-2600d，konicaminolta)進(jìn)行測(cè)定。由同一位試驗(yàn)負(fù)責(zé)人對(duì)受試者右側(cè)臉頰部位連續(xù)進(jìn)行3次測(cè)定，并求平均值，該平均值使用于分析。分光光度計(jì)測(cè)定所得測(cè)定值為l*、a*及b*，a*值是表現(xiàn)紅斑的數(shù)值，數(shù)值越大，面部越紅。分析結(jié)果顯示，與對(duì)照組(未處理組)相比，用九節(jié)龍及孟加拉榕樹(shù)的樹(shù)脂提取物處理后皮膚紅斑隨著使用時(shí)間的延長(zhǎng)而減少(參照下列表16及圖14)。表16實(shí)驗(yàn)前2周后4周后對(duì)照組12.5712.6512.54陽(yáng)性對(duì)照組12.2912.1811.94實(shí)驗(yàn)組12.4811.9411.21上文中以本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例為中心對(duì)本發(fā)明進(jìn)行觀(guān)察，本發(fā)明所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員可以理解為在不脫離本發(fā)明的本質(zhì)特性的范圍之內(nèi)可對(duì)本發(fā)明進(jìn)行變形。因此，所揭示的實(shí)施例并不用于限定本發(fā)明的范圍，而是用于說(shuō)明本發(fā)明。本發(fā)明的范圍通過(guò)發(fā)明要求保護(hù)范圍來(lái)體現(xiàn)，而不是通過(guò)上述的詳細(xì)的說(shuō)明來(lái)體現(xiàn)，并且應(yīng)解釋為，發(fā)明要求保護(hù)范圍的意義和范圍以及從其等同的概念突出的所有變更或變形的形式包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)12