本發(fā)明涉及腦心通中藥組合物的新應(yīng)用。

背景技術(shù)：

我國(guó)心血管病患病率及死亡率逐年上升，占居民疾病死亡構(gòu)成的40％以上，成為我國(guó)居民的首位死因。心血管疾病的防治方案中，多采用抗血小板治療。血小板功能改變與血栓形成有著密切的關(guān)系，腦血管動(dòng)脈出現(xiàn)閉塞，會(huì)導(dǎo)致腦部血液供應(yīng)障礙，造成局部腦組織缺血缺氧性壞死。目前抗血栓形成的藥物包括抗血小板聚集藥物、抗凝藥物以及溶栓藥物。其中，抗血小板聚集藥物包括環(huán)氧酶抑制劑、P₂Y₁₂受體拮抗劑及其他作用靶點(diǎn)的藥物。環(huán)氧酶抑制劑如阿司匹林，通過(guò)失活細(xì)胞內(nèi)的環(huán)氧化酶，阻斷血栓烷A₂的轉(zhuǎn)化途徑，達(dá)到抑制血小板聚集的目的。以氯吡格雷為代表的噻吩吡啶類藥物，不可逆地抑制ADP與血小板膜P₂Y₁₂受體結(jié)合，使偶聯(lián)的糖蛋白IIb/IIIa受體構(gòu)象改變，抑制血小板聚集。

幾十年來(lái)，阿司匹林以及噻吩吡啶類的抗血小板藥物能夠有效減少動(dòng)脈閉塞事件的風(fēng)險(xiǎn)，成為預(yù)防、治療心腦血管疾病的主要手段之一。然而，最初人們只關(guān)注抗血小板藥物能降低血栓事件的發(fā)生，但是隨著時(shí)間的推移，這些藥物的不良反應(yīng)逐漸引起人們的重視。以阿司匹林為例，研究表明服用阿司匹林的患者總體上較其發(fā)生非致死性嚴(yán)重顱外出血的風(fēng)險(xiǎn)增加了50％，發(fā)生腦出血的風(fēng)險(xiǎn)增加了四分之一。該種藥物導(dǎo)致的出血在臨床上屬繼發(fā)性出血。因此臨床用藥應(yīng)謹(jǐn)慎使用抗血小板聚集藥物，以減少缺血性事件發(fā)生，同時(shí)避免增加腦出血風(fēng)險(xiǎn)。

腦心通膠囊源于清代·王清任《醫(yī)林改錯(cuò)·卷下·癱痿倫》的補(bǔ)陽(yáng)還五湯，系根據(jù)現(xiàn)代人體質(zhì)及發(fā)病特點(diǎn)在“補(bǔ)陽(yáng)還五湯”的基礎(chǔ)上加入蟲(chóng)類藥和活血化瘀藥等16味中藥組成的現(xiàn)代中藥方劑。腦心通膠囊由黃芪66份、赤芍27份、丹參27份、當(dāng)歸27份、川芎27份、桃仁27份、紅花13份、制乳香13份、制沒(méi)藥13份、雞血藤20份、牛膝27份、桂枝20份、桑枝27份、地龍27份、全蝎13份、水蛭27份組成。具有益氣活血，化瘀通絡(luò)的功效，主要適應(yīng)癥為氣虛血滯、脈絡(luò)瘀阻證。臨床上，主要用于各種心腦血管疾病，通過(guò)保護(hù)血管內(nèi)皮、抗凝溶栓、穩(wěn)定和消退動(dòng)脈粥樣硬化、保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞、防止缺血再灌注損傷等方面起到治療作用。

但目前沒(méi)有任何文獻(xiàn)公開(kāi)腦心通膠囊具有降低腦出血危險(xiǎn)性方面的作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明采用雙光子熒光成像技術(shù)，活體觀測(cè)服用抗血小板藥物的小鼠腦動(dòng)脈出血狀況，發(fā)現(xiàn)腦心通膠囊與抗血小板藥物聯(lián)用后可降低腦動(dòng)脈繼發(fā)性出血，促進(jìn)腦出血的清除，以達(dá)到降低腦出血危險(xiǎn)性的作用。

由此，本發(fā)明首次公開(kāi)了：腦心通中藥組合物在制備治療腦出血或促進(jìn)腦出血淤血清除藥物中的新應(yīng)用。

并進(jìn)一步公開(kāi)：腦心通中藥組合物在制備治療抗血小板聚集藥物導(dǎo)致繼發(fā)性腦出血或繼發(fā)性腦出血淤血清除藥物中的新應(yīng)用。

尤其是腦心通中藥組合物與抗血小板聚集藥物聯(lián)用可降低腦動(dòng)脈繼發(fā)性出血，促進(jìn)腦出血的清除，以達(dá)到降低腦出血危險(xiǎn)性方面的應(yīng)用。

所述的抗血小板聚集藥物包括環(huán)氧酶抑制劑藥物或P₂Y₁₂受體拮抗劑藥物。

所述環(huán)氧酶抑制劑藥物包括阿司匹林；所述的P₂Y₁₂受體拮抗劑藥物包括氯吡格雷、普拉格雷或替格瑞洛。

本發(fā)明首次公開(kāi)腦心通中藥組合物治療腦出血或促進(jìn)腦出血淤血清除的作用，尤其是與抗血小板藥物聯(lián)用后可降低腦動(dòng)脈繼發(fā)性出血，促進(jìn)腦出血的清除，以達(dá)到降低腦出血危險(xiǎn)性的作用。腦心通中藥組合物為純中藥制劑無(wú)副作用，為降低抗血小板藥物治療心血管病導(dǎo)致腦出血副作用提供了安全可靠的新途徑。

本發(fā)明所述的腦心通中藥組合物是指以中藥制劑腦心通膠囊的配方為基礎(chǔ)，按中醫(yī)用藥原理通過(guò)組分加減或配比變化所得的配方組合物及其臨床上適用的制劑。

附圖說(shuō)明

圖1是阿司匹林與腦心通膠囊聯(lián)用前后，出血量的熒光灰度值折線圖。

圖2是氯吡格雷與腦心通膠囊聯(lián)用前后，出血量的熒光灰度值折線圖。

圖3是阿司匹林與腦心通膠囊聯(lián)用前后，腦動(dòng)脈壁損傷后30min內(nèi)出血

情況(方框區(qū)域即為灰度值取樣點(diǎn))。

圖4是氯吡格雷與腦心通膠囊聯(lián)用前后，腦動(dòng)脈壁損傷后30min內(nèi)出血情況(方框區(qū)域即為灰度值取樣點(diǎn))。

圖5是替格瑞洛與腦心通膠囊聯(lián)用前后，出血量的熒光灰度值折線圖。

圖6是普拉格雷與腦心通膠囊聯(lián)用前后，出血量的熒光灰度值折線圖。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明。

實(shí)施例一：腦心通膠囊與傳統(tǒng)抗血小板藥物聯(lián)用后的抗腦動(dòng)脈出血作用

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：

C57雄性小鼠，SPF級(jí)，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(粵)2013-0002。

2.藥品分組與處理

模型對(duì)照組：通過(guò)激光損傷腦微動(dòng)脈壁建立出血模型，腹腔注射生理鹽水0.1mL/10g。

阿司匹林組：實(shí)驗(yàn)前提前6天進(jìn)行阿司匹林灌胃給藥，給藥劑量13.0mg/kg。

阿司匹林與腦心通膠囊聯(lián)用組：實(shí)驗(yàn)前提前6天進(jìn)行灌胃給藥，取腦心通膠囊粉末和阿司匹林加注射用生理鹽水配置成懸濁液，腦心通膠囊給藥劑量1.25g/kg，阿司匹林13.0mg/kg。

氯吡格雷組：實(shí)驗(yàn)前提前6天進(jìn)行氯吡格雷灌胃給藥，給藥劑量9.75mg/kg。

氯吡格雷與腦心通膠囊聯(lián)用組：實(shí)驗(yàn)前提前6天進(jìn)行灌胃給藥，取腦心通膠囊粉末和氯吡格雷加注射用生理鹽水配置成懸濁液，腦心通膠囊給藥劑量1.25g/kg，氯吡格雷9.75mg/kg。

3.實(shí)驗(yàn)方法：

取C57小鼠隨機(jī)分為5組，即模型對(duì)照組、阿司匹林組、阿司匹林-腦心通膠囊聯(lián)用組、氯吡格雷組、氯吡格雷-腦心通膠囊聯(lián)用組，每組3只小鼠，各組小鼠分別提前6天給藥。各組小鼠按10ml/kg的劑量腹腔注射濃度為4.2％的水合氯醛溶液進(jìn)行麻醉，剪開(kāi)頭皮，剔除覆蓋在頭骨上的筋膜，暴露頭骨，選取合適區(qū)域，用牙科打磨機(jī)小心按圓形輪廓打磨待觀察區(qū)域頭骨。待頭骨邊緣呈半透明狀態(tài)后輕輕按壓頭骨，觀察到其邊緣軟化即可，隨后將定制鋁合金頭板(中間暴露待觀察區(qū)域頭骨)粘于骨窗上方，以10mL/kg劑量尾靜脈注射濃度為1.5％的FITC熒光劑后，置于雙光子顯微鏡下，800nm激發(fā)波長(zhǎng)進(jìn)行熒光成像。選擇直徑30μm左右的動(dòng)脈血管，提高激光透過(guò)率，對(duì)選定血管的內(nèi)皮聚焦5-15s，造成血管壁破裂出血，建立腦動(dòng)脈出血模型。于出血部位周圍選取4個(gè)取樣點(diǎn)計(jì)算血漿熒光灰度變化率，評(píng)估出血程度：

灰度變化率＝即時(shí)灰度值/初始(造模前)灰度值

隨后以計(jì)算得到的灰度變化率為縱坐標(biāo)，以觀測(cè)時(shí)間點(diǎn)為橫坐標(biāo)繪制折線圖。折線圖中0min時(shí)為初始正常值(均為1)，5min開(kāi)始造模出血。熒光灰度值反映了血漿在血管壁外的分布情況，灰度變化率反映了即時(shí)出血量，灰度值下降的越慢，說(shuō)明動(dòng)脈出血的越嚴(yán)重。

4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

表1.各組小鼠出血模型下出血量灰度變化率(X±SD)

如表1可知，阿司匹林和氯吡格雷組小鼠整體灰度值較模型對(duì)照組下降得慢，至30min仍處于較高水平。

如圖1和圖3可見(jiàn)，5min時(shí)阿司匹林組在所有實(shí)驗(yàn)組中灰度變化率最大，代表較大的出血量，反映了阿司匹林的抗血小板聚集作用，抑制初級(jí)凝血。

如圖2和圖4可見(jiàn)，氯吡格雷組10-30min內(nèi)灰度變化率處于較高水平，下降緩慢。因氯吡格雷不可逆地抑制纖維蛋白與血小板結(jié)合，影響二級(jí)凝血功能，提示其可能增加出血風(fēng)險(xiǎn)。兩種藥物均具有抗血小板作用，使動(dòng)脈破裂后血液持續(xù)外流、出血量增加，導(dǎo)致灰度值高于模型對(duì)照組。

阿司匹林、氯吡格雷與腦心通膠囊聯(lián)用后，灰度變化趨勢(shì)接近模型對(duì)照組，說(shuō)明聯(lián)用給藥后的小鼠出血狀況更接近模型小鼠。5-10min內(nèi)灰度下降明顯快于單個(gè)給藥組，提示腦心通膠囊具有一定抗腦出血作用，可降低造模后的出血量；10-30min內(nèi)，灰度值趨于平穩(wěn)且處于較低水平，說(shuō)明血漿清除快于單個(gè)給藥組，提示腦心通膠囊可加速出血后淤血的清除，在腦動(dòng)脈出血后對(duì)腦組織具有一定保護(hù)作用。

實(shí)施例二：腦心通膠囊與新型抗血小板藥物聯(lián)用后的抗腦動(dòng)脈出血作用

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：

C57雄性小鼠，SPF級(jí)，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(粵)2013-0002。

2.藥品分組與處理

模型對(duì)照組：通過(guò)激光損傷腦微動(dòng)脈壁建立出血模型，腹腔注射生理鹽水0.1mL/10g。

替格瑞洛組：實(shí)驗(yàn)前提前6天進(jìn)行替格瑞洛灌胃給藥，給藥劑量11.7mg/kg。

替格瑞洛與腦心通膠囊聯(lián)用組：實(shí)驗(yàn)前提前6天進(jìn)行灌胃給藥，取腦心通膠囊粉末和替格瑞洛加注射用生理鹽水配置成懸濁液，腦心通膠囊給藥劑量1.25g/kg，替格瑞洛11.7mg/kg。

普拉格雷組：實(shí)驗(yàn)前提前6天進(jìn)行普拉格雷灌胃給藥，給藥劑量13.0mg/kg

普拉格雷與腦心通膠囊聯(lián)用組：實(shí)驗(yàn)前提前6天進(jìn)行灌胃給藥，取腦心通膠囊粉末和普拉格雷加注射用生理鹽水配置成懸濁液，腦心通膠囊給藥劑量1.25g/kg，普拉格雷13.0mg/kg。

3.實(shí)驗(yàn)方法：

取C57小鼠隨機(jī)分為3組，即模型對(duì)照組、替格瑞洛組、替格瑞洛-腦心通膠囊聯(lián)用組、普拉格雷組和普拉格雷-腦心通膠囊聯(lián)用組，每組3只小鼠，各組小鼠分別提前6天給藥。各組小鼠按10ml/kg的劑量腹腔注射濃度為4.2％的水合氯醛溶液進(jìn)行麻醉，剪開(kāi)頭皮，剔除覆蓋在頭骨上的筋膜，暴露頭骨，選取合適區(qū)域，用牙科打磨機(jī)小心按圓形輪廓打磨待觀察區(qū)域頭骨。待頭骨邊緣呈半透明狀態(tài)后輕輕按壓頭骨，觀察到其邊緣軟化即可，隨后將定制鋁合金頭板(中間暴露待觀察區(qū)域頭骨)粘于骨窗上方，以10mL/kg劑量尾靜脈注射濃度為1.5％的FITC熒光劑后，置于雙光子顯微鏡下，800nm激發(fā)波長(zhǎng)進(jìn)行熒光成像。選擇直徑30μm左右的動(dòng)脈血管，提高激光透過(guò)率，對(duì)選定血管的內(nèi)皮聚焦5-15s，造成血管壁破裂出血，建立腦動(dòng)脈出血模型。于出血部位周圍選取4個(gè)取樣點(diǎn)計(jì)算血漿熒光灰度變化率，評(píng)估出血程度：

灰度變化率＝即時(shí)灰度值/初始(造模前)灰度值

隨后以計(jì)算得到的灰度變化率為縱坐標(biāo)，以觀測(cè)時(shí)間點(diǎn)為橫坐標(biāo)繪制折線圖。折線圖中0min時(shí)為初始正常值(均為1)，5min開(kāi)始造模出血。熒光灰度值反映了血漿在血管壁外的分布情況，灰度變化率反映了即時(shí)出血量，灰度值下降的越慢，說(shuō)明動(dòng)脈出血的越嚴(yán)重。

4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2.各組小鼠出血模型下出血量灰度變化率

替格瑞洛與普拉格雷同樣作用于P₂Y₁₂受體，以抑制ADP介導(dǎo)的血小板活化和聚集，但替格瑞洛的作用是可逆的。臨床研究表明，替格瑞洛組和氯吡格雷組的主要出血發(fā)生率相似。而普拉給雷具有更高的前體藥物至活性代謝物轉(zhuǎn)化率以及更高的生物利用度，帶來(lái)的出血事件風(fēng)險(xiǎn)也相對(duì)較大。表2顯示，替格瑞洛與普拉格雷組小鼠整體灰度值較模型對(duì)照組下降得慢，至15min仍處于較高水平，下降緩慢，說(shuō)明其相對(duì)模型組有較高的出血量。

從圖5和圖6可見(jiàn)，替格瑞洛、普拉格雷與腦心通膠囊聯(lián)用后，灰度變化趨勢(shì)接近模型對(duì)照組，說(shuō)明聯(lián)用給藥后的小鼠出血狀況更接近模型小鼠。5-10min內(nèi)灰度下降明顯快于單個(gè)給藥組，提示腦心通膠囊具有一定抗腦出血作用，可降低造模后的出血量；10-30min內(nèi)，灰度值趨于平穩(wěn)且處于較低水平，說(shuō)明血漿清除快于單個(gè)給藥組，提示腦心通膠囊可加速出血后淤血的清除，在腦動(dòng)脈出血后對(duì)腦組織具有一定保護(hù)作用。