本發(fā)明屬于中藥活性成分和藥物技術領域，更具體地，涉及一種毛白飯樹提取物及其制備方法在制備防治細菌感染藥物中的應用。
背景技術：
自1928年佛萊明發(fā)現青霉素后，抗生素成為臨床主要用藥，但是，也帶來了細菌耐藥性的問題。2014年醫(yī)院統計發(fā)現，感染耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的患者比不感染不耐藥金黃色葡萄球菌的患者死亡率要高64％。耐藥性已成為嚴重危害人類健康的重大問題。
毛白飯樹(Flueggea acicularis)為大戟科白飯樹屬植物，為中國的特有植物。在我國主要分布于湖北、四川、云南等省。從該屬其他植物主要發(fā)現的化合物包括二萜、生物堿等。其活性主要見于抗癌和抗病毒兩方面的報道。
現有的技術中未見其二萜化合物抗耐藥菌的報道。
技術實現要素：
本發(fā)明的目的在于根據現有技術中的不足，提供了一種毛白飯樹提取物。
本發(fā)明的另一目的在于提供毛白飯樹提取物的制備方法。
本發(fā)明的再一目的在于提供毛白飯樹提取物在制備防治細菌感染藥物中的應用。
本發(fā)明的目的通過以下技術方案實現：
本發(fā)明提供了一種毛白飯樹提取物在制備防治細菌感染藥物中的應用，所述毛白飯樹提取物為如下化學式中的一種：
其中，化合物1是新化合物，化合物2和3是已知結構的化合物。
優(yōu)選地，所述毛白飯樹提取物是在制備防治耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和/或金黃色葡萄球菌感染藥物中的應用。
更優(yōu)選地，具有抑制耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的毛白飯樹提取物為：
更優(yōu)選地，具有抑制金黃色葡萄球菌的毛白飯樹提取物為：
優(yōu)選地，所述藥物包括藥學上可接受的載體或輔料。
本發(fā)明同時提供一種新的化合物，所述新的化合物為從毛白飯樹中提取得到，上述化合物的結構式如下所示：
本發(fā)明還提供一種新的毛白飯樹提取物的制備方法，所述制備方法為將毛白飯樹(Flueggea acicularis)全株，曬干，粉碎，用95％乙醇室溫浸提三次，每次24小時，合并濃縮液，分別用乙酸乙酯，正丁醇萃取，得到乙酸乙酯部分和正丁醇部分，然后將乙酸乙酯部分經過硅膠柱層析，二氯甲烷：甲醇分別按照百分比為200:1、100:1、50:1、20:1和10:1梯度洗脫得到六個餾分，餾分再經過反復分離得到，所述毛白飯樹提取物為如下化學式中的一種：
更進一步地，是將二氯甲烷：甲醇按照分別按照百分比為200:1、100:1、50:1、20:1進行梯度洗脫后得到餾分D，將餾分D反復分離得到所述毛白飯樹提取物。
在基于肉湯稀釋法抗菌活性結果顯示，提取得到的化合物1對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度(MIC值)為62.5μM，化合物2和3對金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度(MIC值)為62.5μM。這表明，毛白飯樹提取物1-3可用于制備防治細菌感染的藥物。
與現有技術相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點及有益效果：
本發(fā)明公開了一種毛白飯樹提取物在制備防治細菌感染藥物中的應用，同時公開了一種新穎結構的毛白飯?zhí)崛∥?，本發(fā)明是首次從植物毛白飯樹中提取得到所述毛白飯樹提取物，本發(fā)明提供的毛白飯樹提取物對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和/或金黃色葡萄球菌具有一定抑制效果，可應用于制備防治細菌感染的藥物。
具體實施方式
以下結合具體實施例來進一步說明本發(fā)明，但實施例并不對本發(fā)明做任何形式的限定。除非特別說明，本發(fā)明采用的試劑、方法和設備為本技術領域常規(guī)試劑、方法和設備。
除非特別說明，本發(fā)明所用試劑和材料均為市購。
實施例1
從毛白飯樹(Flueggea acicularis)中制備化合物1-3的方法：
毛白飯樹(Flueggea acicularis)全株，曬干，粉碎，用95％乙醇室溫浸提三次，每次24小時，合并濃縮液，分別用乙酸乙酯，正丁醇萃取，得到乙酸乙酯，正丁醇部分，乙酸乙酯部分76g用丙酮等溶劑溶解后吸附于硅膠，室溫干燥后硅膠柱層析(600g，200-300目)，以純二氯甲烷、二氯甲烷：甲醇(200:1、100:1、50:1、20:1和10:1)梯度洗脫得到六個餾分(A-F)。D餾分(8.5g)經MCI柱(甲醇：水＝85:15)，出去大部分的色素，然后水浴減壓濃縮，再經反復硅膠柱層析(先采用純二氯甲烷洗脫，然后再采用二氯甲烷：甲醇＝100:1進行洗脫，得到D1-D3三個餾分)。D1經制備HPLC(乙腈：水＝85:15)得到化合物1。E餾分經反向C18除色素后的餾分(甲醇：水＝60:40洗脫部分)，水浴減壓濃縮。經硅膠柱層析(二氯甲烷：甲醇50:1)得到的餾分E5經反復硅膠柱層析(二氯甲烷：甲醇＝50:1)，再經制備HPLC(乙腈：水＝70:30)得到化合物2。F餾分經硅膠柱層析(二氯甲烷：甲醇＝20:1)得到五個餾分。F3再反復經硅膠柱層析(二氯甲烷：甲醇＝50:1)，再經制備HPLC(乙腈：水＝65:35)得到化合物3。
化合物1(新化合物，其核磁數據見表1)：
1：白色固體；[α]20D+53.2(c 0.22,MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)236(4.51),272(3.19)nm；ECD(MeOH)λmax(Δε)206(-3.09),217(-2.05),231(-3.35),248(+0.48),261(-0.60),345(+2.98)；IR(KBr)νmax3410,3280,3060,2964,2924,2097,1705,1607,1591,1509,1404,1320,1223,1177,999,971,870,818,777,601cm-1,1H NMR(CDCl3,400MHz)and 13C NMR(CDCl3,100MHz)data,見表1；HRESIMS m/z 309.1495[M-H]-(calcd for C20H21O3,309.1496)，絕對構型為2R,3S。
表1化合物1的核磁數據
實施實例2實施例1所得的化合物的藥效相關實驗
本發(fā)明利用肉湯稀釋法用于化合物1～3的抗菌活性測試篩選，即通過對測試化合物的最低抑菌濃度(MIC值)來對其抗菌活性定量測定，結果見表2所示。具體實驗步驟如下：
(1)MH培養(yǎng)基制備
取MH(Mueller-Hinton broth,OXOID)培養(yǎng)基粉末一定量，加入一定量的純凈水，混勻，于121℃高壓滅菌20min，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
(2)胰蛋白胨大豆肉湯制備
取胰蛋白胨大豆肉湯(Tryptic broth，OXOID)培養(yǎng)基粉末一定量，加入一定量的純凈水，混勻，于121℃高壓滅菌20min，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
(3)0.9％生理鹽水制備
稱取氯化鈉一定量，按照比例加入一定量的純凈水，混勻，于121℃高壓滅菌20min，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
(4)肉湯稀釋法抗菌活性測定
a)陽性藥與待測化合物的配制：稱取一定量的陽性藥物(萬古霉素鈉和安眠西林鈉)及待測化合物，一般選用二甲亞砜溶解并配制濃度為5120μg/mL的待測溶液。
b)測試用96孔板制備：將無菌96孔板及培養(yǎng)基和待測化合物等置于無菌操作臺中，其中第1列加入90μL培養(yǎng)基，第2～11列加入50μL培養(yǎng)基，第12列作為空白對照，其前四孔加入100μLMH培養(yǎng)基；后四孔加入100μL菌液；最后兩排為陽性對照；
c)待測化合物的加入：將制備好的待測化合物溶液，一次加入10μL到96孔板的第1列中，然后在第1列中吸取50μL加入到第2列中混勻，以此類推，至第11列，將最后槍頭中的50μL混合液丟棄；
d)菌液的制備：挑取單菌落菌株，利用生理鹽水制備相當于0.5麥氏比濁標準的菌懸液(1～2×108CFU/mL),用培養(yǎng)基1:1000稀釋懸濁液，向每孔中加入50μL稀釋菌液后，將96孔板置于35℃±2℃二氧化碳培養(yǎng)箱中，孵育24h觀察并記錄結果；
e)結果判斷：當陽性對照孔及空白對照菌落生長情況正常條件下試驗才有意義。使用全波長酶標儀在OD600測定每孔中的吸光度值，然后根據吸光度換算為化合物的MIC值。
f)出結果前，每個化合物均重復測試三次。
表2化合物1-3對不同菌種的抗菌活性(μM)
從表2中可以看到，化合物1對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度(MIC值)為62.5μM，化合物2和3對金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度(MIC值)為62.5μM。這表明化合物1-3可用于制備防治細菌感染的藥物。
上述實施例只為說明本發(fā)明的技術構思及特點，其目的在于讓熟悉此項技術的人士能夠了解本發(fā)明的內容并據以實施，并不能以此限制本發(fā)明的保護范圍，凡根據本發(fā)明精神實質所作的等效變化或修飾，都應涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內。