本發(fā)明涉及青蒿琥酯衍生物
技術領域：
，尤其涉及一種聚乙二醇青蒿琥酯在制備抗肺纖維化藥物中的應用。
背景技術：
：肺纖維化(Pulmonaryfibrosis，PF)是以大量的成纖維細胞聚集、細胞外基質(EMC)沉積并伴有炎性病變和損傷所致肺泡結構破壞為特征的疾病，進行性呼吸困難是其主要臨床癥狀，終末期出現呼吸衰竭是其主要的死亡原因。肺纖維化病因復雜，粉塵、輻射、過敏、病毒、藥物等都可引起，很多患者因此出現彌漫性肺纖維化，嚴重影響生存時間及生活質量。目前對于肺纖維化，還缺乏有效的治療方法。傳統的治療藥物有糖皮質激素，可以抑制炎癥細胞的趨化和聚集作用，但臨床治療顯示僅對30％的患者有效。免疫抑制劑和細胞毒性藥物如環(huán)磷酰胺已經被應用到臨床試驗，但存在著嚴重的毒副反應。影響細胞因子藥物吡非尼酮、干擾素等近年也用于抗肺纖維化治療，但療效還不能最終確定。肺纖維化患者確診后存活期3-5年，死亡率超過50％。因此，尋找安全有效的治療藥物，以減少高的發(fā)病率和病死率。聚乙二醇青蒿琥酯為青蒿琥酯的聚乙二醇衍生物，是將青蒿琥酯和含有游離氨基的多價聚乙二醇修飾劑置于惰性溶劑中，在偶聯劑和有機堿催化作用下，青蒿琥酯的羧基和多價聚乙二醇修飾劑的氨基或羥基進行偶聯反應而得到。研究表明，聚乙二醇青蒿琥酯在抗瘧疾方面與青蒿琥酯相當，且具有更好的水溶性，半衰期也較青蒿琥酯延長了10倍左右。但是，目前尚未見聚乙二醇青蒿琥酯在抗肝纖維化方面的研究。技術實現要素：本發(fā)明的目的在于提供一種聚乙二醇青蒿琥酯在制備抗肺纖維化藥物中的應用，聚乙二醇青蒿琥酯可有效阻止肺纖維化的發(fā)展并促進肺纖維化的逆轉。本發(fā)明提供了式(I)所示的聚乙二醇青蒿琥酯在制備抗肺纖維化藥物中的應用：式(I)中，POLY為聚乙二醇殘基，數均分子量為200～100000Da；X選自-NH-、-O-或甲氧基；Y選自含有雙氨基和單羧基的氨基酸殘基，所述氨基酸的羧基與X成酰胺鍵或酯鍵，向遠端引出多氨基基團與青蒿琥酯的羧基成酰胺；m和n獨立地選自0、1或2；r和s代表與Y通過酰胺鍵相連的青蒿琥酯的數量；并且：當m和n均不為0時，r和s分別為n和m的2倍數，并且青蒿琥酯通過羧基與Y引出的多氨基成酰胺；當m為0且n不為0或者m不為0且n為0時，r和s分別為n和m的2倍數，并且青蒿琥酯通過羧基與Y引出的多氨基成酰胺，m為0或n為0的一端的X為甲氧基；或當m和n同時為0時，r和s均為1，青蒿琥酯通過羧基與X成酯或酰胺。在一個實施例中，所述聚乙二醇青蒿琥酯具有式(I-a)結構：式(I-a)中，POLY的數均分子量為10000～30000Da。在另外一個實施例中，所述聚乙二醇青蒿琥酯具有式1結構：式1中，PEG20k代表數均分子量為20000的PEG。聚乙二醇青蒿琥酯為青蒿琥酯的聚乙二醇衍生物，是將青蒿琥酯和含有游離氨基的多價聚乙二醇修飾劑置于惰性溶劑中，在偶聯劑和有機堿催化作用下，青蒿琥酯的羧基和多價聚乙二醇修飾劑的氨基或羥基進行偶聯反應而得到。本發(fā)明對所述據聚乙二醇青蒿琥酯的來源沒有特殊限制，可以按照中國專利CN103450468B公開的方法制備。與其他青蒿素類衍生物相比，式(I)所示的聚乙二醇青蒿琥酯聚乙二醇青蒿琥酯具有更好的水溶性和更長的半衰期。發(fā)明人研究發(fā)現，其可明顯降低博來霉素致肺纖維化小鼠的肺纖維化程度、肺指數、肺組織中羥脯氨酸和丙二醛的含量，提高肺纖維化小鼠的存活、脾臟指數和胸腺指數。且在同等劑量下，與青蒿琥酯相比具有顯著差異。另外，聚乙二醇青蒿琥酯的水溶性較好，生物利用度高；半衰期長，減少給藥次數。式(I)所示的聚乙二醇青蒿琥酯可被制成藥學上可接受的劑型。具體實施方式為了進一步說明本發(fā)明，下面結合實施例對本發(fā)明提供的聚乙二醇青蒿琥酯在制備抗肺纖維化藥物中的應用進行詳細地描述，但不能將它們理解為對本發(fā)明保護范圍的限定。實施例1聚乙二醇青蒿琥酯對小鼠肺纖維化的作用研究1.試驗材料聚乙二醇青蒿琥酯，昆藥集團藥物研究院根據中國專利CN103450468B實施例1公開的方法自制，具有式1結構；青蒿琥酯，昆藥集團藥物研究院自制；地塞米松磷酸鈉注射液，昆藥集團生產；博來霉素(簡稱BLM)，日本化藥株式會社；羥脯氨酸(HyP)試劑盒、HE染液，南京建成生物工程有限公司；精密電子天平，北京賽多利斯天平有限公司；TDL-5離心機，上海安亭科學儀器廠；光學顯微鏡和光學照相系統，日本OYLMPUS公司；倒置顯微鏡，美國Bio-Rad公司；ICR小鼠，105只，雌性，18～22g，昆藥集團實驗動物中心提供。2.動物分組及給藥將小鼠按體重隨機分為6組，每組15只，分別為正常對照組、模型對照組、聚乙二醇青蒿琥酯低劑量注射組、聚乙二醇青蒿琥酯中劑量注射組、聚乙二醇青蒿琥酯高劑量注射組、青蒿琥酯注射液組、地塞米松磷酸鈉注射液組。腹腔注射水合氯醛350mg/kg麻醉小鼠，正常對照組氣管滴注生理鹽水，其余6組氣管滴注博萊霉素(5mg/kg)，滴注后立即將小鼠直立旋轉2分鐘使藥液在肺內均勻分布，放回籠中正常飼養(yǎng)。聚乙二醇青蒿琥酯(用生理鹽水配制)、青蒿琥酯和地塞米松，自造模后第2天起，連續(xù)給藥，每日一次，正常組及模型組給予等容量的生理鹽水。各組分別給予下述藥物：正常對照組：腹腔注射等體積的生理鹽水；模型對照組：腹腔注射等體積的生理鹽水；聚乙二醇青蒿琥酯低劑量注射組：腹腔注射1mg/kg聚乙二醇青蒿琥酯；聚乙二醇青蒿琥酯中劑量注射組：腹腔注射3mg/kg聚乙二醇青蒿琥酯；聚乙二醇青蒿琥酯高劑量注射組：腹腔注射9mg/kg聚乙二醇青蒿琥酯；青蒿琥酯組：腹腔注射5mg/kg青蒿琥酯注射液；地塞米松組：腹腔注射5mg/kg地塞米松磷酸鈉注射液。3.實驗方法每日測量小鼠體重，記錄小鼠死亡時間。在造模后第28天，腹腔注射水合氯醛350mg/kg麻醉小鼠，腹主動脈放血處死，取小鼠脾臟、胸腺和肺，進行稱重。取各組小鼠左肺下葉，置于4％甲醛固定，其余肺組織置于-70℃冷凍保存。3.1小鼠存活率的統計統計小鼠造模后第28天的存活率。3.2小鼠脾臟、胸腺、肺指數的計算按以下公式計算各組別小鼠的脾臟、胸腺、肺指數。脾臟指數＝脾臟重量/體重×100％胸腺指數＝胸腺重量/體重×100％肺指數＝肺重量/體重×100％3.3肺纖維化評分標準(Ashcroft評分標準)0分：正常；1分：肺泡壁或支氣管壁輕度增厚；2分，3分：肺泡壁或支氣管壁中度增厚，但無肺結構損毀；4分，5分:纖維組織明顯增多，伴明顯肺結構損害，有纖維組織條索或小的纖維組織團塊形成；6分，7分:嚴重肺結構損毀，大片纖維化區(qū)域，蜂窩肺；8分:滿視野纖維組織。3.4肺纖維化小鼠肺組織中羥脯氨酸(HyP)含量測定肺纖維化的實質是由于膠原和其他細胞外基質(ECM)的合成與降解失衡，導致ECM在肺內過量沉積。正常生理情況下，ECM各種成分的合成與降解處于平衡狀態(tài)。各種原因引起的組織損傷均可以使ECM代謝失去平衡。羥脯氨酸(HyP)是脯氨酸羥化酶對前α-肽鏈中脯氨酸殘基的羥化作用而形成，約占膠原肽鏈氨基酸的10％。在ECM中除彈性蛋白含有少量HyP(約1％)外，均不含HyP。由于HyP主要存在于膠原，HyP含量的測定可以間接反映膠原含量，因此，測定HyP的含量常被用于肺纖維化的研究。肺組織HyP含量按HyP含量測定試劑盒說明書采用樣本酸水解法進行。3.5肺纖維化小鼠肺組織中丙二醛(MDA)含量測定氧自由基能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸，形成脂質過氧化物，主要是丙二醛(MDA)，其含量的高低可以反映機體內脂質過氧化的程度，間接反映出細胞損傷程度。因此，測定MDA來評價抗氧自由基的價值。肺組織MDA含量的測定按測定試劑盒進行測定。3.6數據統計與分析數據以表示,采用SPSS16.0軟件進行方差分析。4.結果與結論4.1聚乙二醇青蒿琥酯對肺纖維化小鼠存活率的影響聚乙二醇青蒿琥酯對博來霉素致肺纖維化小鼠存活率的影響試驗結果見表1。表1對博來霉素致肺纖維化小鼠存活率的影響組別存活數(只)存活率(％)正常對照組15100模型對照組853.3聚乙二醇青蒿琥酯低劑量注射組960.0聚乙二醇青蒿琥酯中劑量注射組1173.3聚乙二醇青蒿琥酯高劑量注射組1493.3青蒿琥酯組853.3地塞米松組853.3表1結果表明：造模后第30天，模型組小鼠存活率為53.3％，地塞米松組以及青蒿琥酯組存活率與模型組相近；聚乙二醇青蒿琥酯低、中、高劑量注射組小鼠存活率為60.0％、73.3％、93.3％，表明聚乙二醇青蒿琥酯可明顯提高肺纖維化小鼠的存活率且優(yōu)于青蒿琥酯組。4.2聚乙二醇青蒿琥酯對肺纖維化小鼠脾臟、胸腺、肺指數的影響聚乙二醇青蒿琥酯對博來霉素致肺纖維化小鼠脾臟、胸腺、肺指數的影響試驗結果見表2。表2對博來霉素致肺纖維化小鼠脾臟、胸腺、肺指數的影響注：與正常對照組相比，*P<0.05，**P<0.01；與模型對照組相比，表2結果表明，聚乙二醇青蒿琥酯能夠提高肺纖維化小鼠的脾臟指數和胸腺指數，降低肺纖維化小鼠的肺指數，效果明顯優(yōu)于地塞米松和青蒿琥酯。4.3聚乙二醇青蒿琥酯對肺纖維化小鼠肺組織病變的影響聚乙二醇青蒿琥酯對博來霉素致肺纖維化小鼠肺纖維化程度的影響試驗結果見表3。表3對博來霉素致肺纖維化小鼠肺纖維化程度的影響注：與正常對照組相比，*P<0.05，**P<0.01；與模型對照組相比，如表3所示，造模后第28天，模型組肺組織纖維化程度非常嚴重，聚乙二醇青蒿琥酯各組、青蒿琥酯組和地塞米松組能夠顯著減低肺纖維化程度，其中聚乙二醇青蒿琥酯中高劑量注射組降低肺纖維化程度的效果最好。4.4對肺纖維化小鼠肺組織中羥脯氨酸含量的影響聚乙二醇青蒿琥酯對博來霉素致肺纖維化小鼠肺組織中羥脯氨酸含量的影響試驗結果見表4。表4對肺纖維化小鼠肺組織中羥脯氨酸(HyP)含量的影響(n＝6)注：與正常對照組相比，*P<0.05，**P<0.01；與模型對照組相比，肺組織羥脯氨酸的量反映了肺組織膠原的含量，如表4所示，造模后第28天，和正常對照組相比，模型組肺組織羥脯氨酸含量顯著升高，聚乙二醇青蒿琥酯中高劑量組和地塞米松可顯著降低博萊霉素誘導的肺纖維化小鼠肺組織中羥脯氨酸含量，說明聚乙二醇青蒿琥酯可以劑量依賴性抑制膠原的合成，且聚乙二醇青蒿琥酯各劑量組明顯優(yōu)于青蒿琥酯組。4.5對肺纖維化小鼠肺組織中丙二醛(MDA)含量的影響聚乙二醇青蒿琥酯對博來霉素致肺纖維化小鼠肺組織中MDA含量的影響試驗結果見表5。表5對肺纖維化小鼠肺組織中丙二醛(MDA)含量的影響(n＝6)注：與正常對照組相比，*P<0.05，**P<0.01；與模型對照組相比，如表5所示，造模后第30天，和正常對照組相比，模型組肺組織MDA含量顯著升高，聚乙二醇青蒿琥酯中高劑量組和地塞米松可顯著降低博萊霉素誘導的肺纖維化小鼠肺組織中MDA含量，說明聚乙二醇青蒿琥酯可以劑量依賴性抑制MDA的合成，而青蒿琥酯組與模型組相比卻沒有顯著差異。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應當指出，對于本
技術領域：
的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發(fā)明的保護范圍。當前第1頁1 2 3