本發(fā)明尤其涉及一種從咖啡中高效提取防治高尿酸血癥及痛風(fēng)藥食單體的方法。

背景技術(shù)：

20世紀80年代以后，隨著經(jīng)濟生活水平的提高，飲食結(jié)構(gòu)與生活習(xí)慣發(fā)生了改變，使得高尿酸血癥與痛風(fēng)的發(fā)病率呈逐年遞增趨勢，國內(nèi)外學(xué)者對其進行了大量的研究，在流行病學(xué)方面，高尿酸血癥的發(fā)病率因種族和地區(qū)不同而有差異，各國報道不相一致，我國痛風(fēng)發(fā)病率達0.26％～0.34％，高尿酸血癥的發(fā)病率達5.78％～13.8％，痛風(fēng)所伴隨的高尿酸血癥也已經(jīng)成為冠心病、高血壓的重要危險因素之一。(Abbott RD,Brand FN,Kannel WB,Castelli WP.Gout coronary heart disease:the Framingham Study[J].J Clin Epidemiol,1988,41(3):237-242.Johan Sundstrom,Lisa Sullivan,Ralph B.D Agostino,et al.Re-lations of Sterum Uric to Longitudinal Blood pressure Tracking and Hypertension Incidence[J].Hypertension,2005,45:25.)

馬里誣那群島(Marian)血尿酸均值在434.35±101.15umol/L，患病率達6.2％。新西蘭不同種族的患病率為3.8％-5.9％，美國為0.5％-4.3％，南美為1.3％，整個歐美地區(qū)約2％-18％，痛風(fēng)發(fā)病率歐美約占總?cè)丝?.13％-0.31％，年發(fā)病率約為0.020％-0.035％。古萍隨機抽取2004年在廣東省人民醫(yī)院健康體檢人群26621例的資料進行高尿酸血癥患病率及相關(guān)疾病的發(fā)生率統(tǒng)計分析。高尿酸血癥的患病率為21.8％，男性患病率顯著高于女性。高尿酸血癥中高脂血癥、高血壓、高血糖、冠心病、脂肪肝等發(fā)生率顯著高于血尿酸正常組。(古萍.廣州市體檢人群高血尿酸癥患病情況及相關(guān)疾病分析[J].中國熱帶醫(yī)學(xué),2006,6(6):1082-1084.)朱文華等對體檢中心1249名體發(fā)現(xiàn)的高尿酸血癥與高血脂和肥胖進行了分析，其中血尿酸增高364例，占29.1％，高脂血癥325例，占89.2％，體重超標279例，占76.6％，明顯高于正常組，且有統(tǒng)計學(xué)差異。由此可見作為嘌呤代謝紊亂的原發(fā)性痛風(fēng)不僅與年齡，還與高血壓、高血脂、糖尿病、冠心病、肥胖等密切相關(guān)。(朱文華,陳蕾倩,方力爭等.高血尿酸癥與血脂、肥胖相關(guān)因素分析[J].浙江預(yù)防醫(yī)學(xué),2004,16(12):70-74.)

目前對高尿酸血癥和痛風(fēng)的預(yù)防主要是限制高嘌呤食物，控制飲酒，在治療上既要控制急性發(fā)作的關(guān)節(jié)炎，又要長期治療高尿酸血癥，預(yù)防痛風(fēng)石沉積。化學(xué)藥物分為治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎和糾正高尿酸血癥兩類。前者有秋水仙堿、非甾體類抗炎藥、糖皮質(zhì)激素，它們能快而有效地緩解疼痛，減輕炎癥；后者有丙磺舒、苯溴馬隆(促進尿酸的排泄)和別嘌呤醇(抑制尿酸的生成)。但這些藥物的不良反應(yīng)較多，苯溴馬隆可導(dǎo)致嚴重的肝損害及神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)。(張開達.痛風(fēng)利仙致神經(jīng)系統(tǒng)嚴重不良反應(yīng)l例.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2000,20:639.)別嘌呤醇是唯一在臨床上使用的黃嘌呤氧化酶抑制劑，能夠通過抑制黃嘌呤氧化酶抑制尿酸的生成，但其存在可致皮膚過敏、肝損傷、威脅生命的超敏變態(tài)反應(yīng)綜合癥等毒副作用。降尿酸西藥，由于品種單一，且存在不良反應(yīng)，限制了臨床應(yīng)用。(郭麗萍,王睿.高血尿酸癥的流行病學(xué)特點和藥物應(yīng)用[J].中國藥物應(yīng)用與監(jiān)測,2006,3(4):24-27.)

中醫(yī)藥治療高尿酸血癥和原發(fā)性痛風(fēng)的報道較多。在臨床實踐和日常生活中，人們發(fā)現(xiàn)一些能治療高尿酸血癥的行之有效的單味中藥，其中很多藥物的活性成分及藥理作用已經(jīng)被闡明。如萆薢、秦皮、白艾、朝鮮薊、威靈仙、車前子、黃柏、金錢草、秦艽等有一定的降尿酸作用。(林偉青,謝健,王海東.白艾提取液對高尿酸血癥大鼠的實驗研究[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志,2005,9(8):509-510.林鳳平,任開明,宋恩峰等.威靈仙對尿酸性腎病大鼠的實驗研究[J].中成藥,2006,28(6):842-845.)

研究顯示，淫羊藿、薏苡仁、澤瀉、車前子、秦艽能增加尿酸排泄，秦艽還可增加尿酸的溶解；澤蘭、當(dāng)歸可抑制尿酸合成。另有研究顯示，秦皮、車前草、大黃、蒼術(shù)可促尿酸從腎排除，大黃能促尿酸從大便排出體外；百合、山慈菇等具有類秋水仙堿樣作用，可抑制白細胞趨化性，從而減輕痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的炎癥反應(yīng)；冬瓜皮、大腹皮、桑白皮、陳皮、木香、茯苓皮等行氣利水藥可提高內(nèi)生肌酐清除率，增加尿量，排出尿酸，降低血尿酸。(李表,孫林.現(xiàn)代腎臟病治療學(xué)[M].南昌:江西科學(xué)技術(shù)出版社,2000,537-543.沈慶法.中醫(yī)臨床腎臟病學(xué)[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)文獻出版社,1998:206-211.)

咖啡豆為茜草科咖啡亞科咖啡屬植物種子，微苦，澀，平，具醒神、利尿、健胃功效。咖啡豆及咖啡產(chǎn)品的化學(xué)成分已超過1500個，主要化學(xué)成分為揮發(fā)性成分、生物堿、酚類、咖啡酸衍生物、脂肪等?？Х榷辜翱Х犬a(chǎn)品含有豐富的化學(xué)成分，咖啡因具有很強的中樞興奮作用，可減少睡意、減輕疲勞，保肝利膽，降血脂，抗氧化，清除體內(nèi)自由基，抑制突變，抗癌，抗菌，抗病毒，免疫調(diào)節(jié)，解痙，降壓等藥理作用。

中藥治療高尿酸血癥及痛風(fēng)的療效顯著，但中藥在使用過程中存在不足表現(xiàn)在幾個方面：1、常規(guī)制備及服用方法不方便，如煎煮法，耗時、服用時味道重，且因個人的煎煮時間和煎煮方法不同，療效不能完全保證；2、服用劑量大，煎煮或直接粉碎制備的劑型，組成成分包括了有效組分和無效組分，服用劑量大，不能達到專病專治的效果，且有可能產(chǎn)生毒副作用；3、運用現(xiàn)代分離純化技術(shù)獲取單體化合物產(chǎn)率低、成本高，不易實現(xiàn)規(guī)?；彤a(chǎn)業(yè)化；4、通過現(xiàn)代合成技術(shù)實現(xiàn)該單體化合物群尚有一定技術(shù)難度，且成本高。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

針對上述制備方法中化學(xué)藥物不良反應(yīng)多、使用不方便及服用劑量大的等問題，本發(fā)明提供一種從咖啡中高效提取用量小、使用方便、不良反應(yīng)少的防治高尿酸血癥及痛風(fēng)藥食單體的方法。

本發(fā)明的目的將通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：一種從咖啡中高效提取防治高尿酸血癥及痛風(fēng)藥食單體的方法，包括以下步驟：稱取一定質(zhì)量原料咖啡，敲破種皮，加10倍量水煮沸1h，放冷過濾，殘渣加20倍量50％乙醇加熱回流提取2次，每次2h，合并2次的提取液，減壓回收乙醇，加氨水調(diào)節(jié)提取液pH值為9，攪拌，放冷，經(jīng)過高速離心分離，取下層不溶物，加入少量乙醇溶解，上AB-8型大孔樹脂柱，靜態(tài)吸附2小時，用10BV水洗脫，棄去洗脫液，再用不同濃度乙醇由低至高依次洗脫，用薄層色譜法鑒別洗脫液中是否含有單體化合物群中某一單體及其相對含量，收集具有高占比目標化合物的洗脫液并合并，將所得洗脫液制備成產(chǎn)品。

優(yōu)選的，所述的一種從咖啡中高效提取防治高尿酸血癥及痛風(fēng)藥食單體的方法，所述的咖啡包括Mascaroside I、MascarosideⅡ、Aglycone E、Cofaryloside I、Villanovane I、Coffeaabpuer L中的一種或多種。

優(yōu)選的，所述的一種從咖啡中高效提取防治高尿酸血癥及痛風(fēng)藥食單體的方法，所述產(chǎn)品包括膠囊劑、片劑、合劑、食品添加劑和保健茶。

優(yōu)選的，所述的一種從咖啡中高效提取防治高尿酸血癥及痛風(fēng)藥食單體的方法，所述膠囊劑的制備方法為：所得洗脫液真空濃縮，真空干燥或噴霧干燥得細粉，加甘露糖20倍量、半乳糖、硬脂酸鎂等輔料，制粒裝膠囊。

優(yōu)選的，所述的一種從咖啡中高效提取防治高尿酸血癥及痛風(fēng)藥食單體的方法，所述片劑的制備方法為：所得洗脫液真空濃縮，真空干燥或噴霧干燥得細粉，加入淀粉20倍量、硫酸鈣、甘露糖等，10％PVP(聚維酮)乙醇液20倍量，制粒，烘干，壓片。

優(yōu)選的，所述的一種從咖啡中高效提取防治高尿酸血癥及痛風(fēng)藥食單體的方法，所述合劑的制備方法為：所得洗脫液真空濃縮至相對密度1.2的浸膏，裝瓶制作口服液。

優(yōu)選的，所述的一種從咖啡中高效提取防治高尿酸血癥及痛風(fēng)藥食單體的方法，所述食品添加劑的制備方法為：所得洗脫液真空濃縮，真空干燥或噴霧干燥得細粉，作為食品添加劑。

優(yōu)選的，所述的一種從咖啡中高效提取防治高尿酸血癥及痛風(fēng)藥食單體的方法，所述食品添加劑為保健食品添加劑，保健食品添加劑的制備方法為：所得洗脫液濃縮為相對密度1.2的浸膏，作為保健食品添加劑。

優(yōu)選的，所述的一種從咖啡中高效提取防治高尿酸血癥及痛風(fēng)藥食單體的方法，所述保健茶的制備方法為：所得洗脫液濃縮為相對密度1.2的浸膏，與鐵觀音茶葉按質(zhì)量比1:50混合，置于55℃條件下烘干8小時，再粉粹成20目，滅菌包裝入庫，制成6g一包的降尿酸保健茶。

本發(fā)明的有益效果是：本專利所述藥食單體為二萜與單糖連接而成的單糖苷類成分，為中等極性化合物，具有降低尿酸水平的作用，在臨床上具有治療高尿酸血癥和痛風(fēng)潛在應(yīng)用。本發(fā)明采用水煎煮，去除咖啡中的揮發(fā)性成分，再用50％乙醇回流提取，大孔樹脂純化，有目的的富集目標單體化合物群，成本低，收率高，容易實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化和規(guī)?；?。該發(fā)明制備的膠囊劑、片劑、合劑、食品添加劑以及保健茶等劑型，服用方便化，多元化。

具體實施方式

為更好地理解本發(fā)明，下面通過以下實施例對本發(fā)明作進一步具體的闡述，但不可理解為對本發(fā)明的限定，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)上述發(fā)明內(nèi)容所作的一些非本質(zhì)的改進與調(diào)整，也視為落在本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。

實施例1、本發(fā)明制備的膠囊劑

1)稱取原料咖啡豆，敲破種皮，3#空膠囊殼若干備用；

2)原料加10倍量水煮沸1h，放冷過濾，殘渣加20倍量50％乙醇加熱回流提取2次，每次2h，合并2次的提取液，減壓回收乙醇，加氨水調(diào)節(jié)提取液pH值為9，攪拌，放冷，經(jīng)過高速離心分離，取下層不溶物，加入少量乙醇溶解，上AB-8型大孔樹脂柱，靜態(tài)吸附2小時，用10BV水洗脫，棄去洗脫液，再用不同濃度乙醇由低至高依次洗脫，用薄層色譜法鑒別洗脫液中是否含有單體化合物群中某一單體及其相對含量，收集具有高占比目標化合物的洗脫液并合并，將所得洗脫液真空干燥或噴霧干燥得細粉，加甘露糖20倍量、半乳糖、硬脂酸鎂等輔料，制粒，烘干，裝入3#空膠囊殼，每?？漳z囊殼裝內(nèi)容物約0.32g，潔凈、選粒，制成適當(dāng)包裝規(guī)格的成品。

實施例2、本發(fā)明制備的片劑

1)稱取原料咖啡豆，敲破種皮；

2)原料加10倍量水煮沸1h，放冷過濾，殘渣加20倍量50％乙醇加熱回流提取2次，每次2h，合并2次的提取液，減壓回收乙醇，加氨水調(diào)節(jié)提取液pH值為9，攪拌，放冷，經(jīng)過高速離心分離，取下層不溶物，加入少量乙醇溶解，上AB-8型大孔樹脂柱，靜態(tài)吸附2小時，用10BV水洗脫，棄去洗脫液，再用不同濃度乙醇由低至高依次洗脫，用薄層色譜法鑒別洗脫液中是否含有單體化合物群中某一單體及其相對含量，收集具有高占比目標化合物的洗脫液并合并，將所得洗脫液真空濃縮，真空干燥或噴霧干燥得細粉，加入淀粉20倍量、硫酸鈣、甘露糖等，10％PVP(聚維酮)乙醇液20倍量，制粒，烘干，壓制成片重為約0.4g的原片，包糖衣，選片，制成適當(dāng)包裝規(guī)格的成品。

實施例3、本發(fā)明制備的合劑

1)稱取原料咖啡豆，敲破種皮，10ml/支的口服液小瓶備用；

2)原料加10倍量水煮沸1h，放冷過濾，殘渣加20倍量50％乙醇加熱回流提取2次，每次2h，合并2次的提取液，減壓回收乙醇，加氨水調(diào)節(jié)提取液pH值為9，攪拌，放冷，經(jīng)過高速離心分離，取下層不溶物，加入少量乙醇溶解，上AB-8型大孔樹脂柱，靜態(tài)吸附2小時，用10BV水洗脫，棄去洗脫液，再用不同濃度乙醇由低至高依次洗脫，用薄層色譜法鑒別洗脫液中是否含有單體化合物群中某一單體及其相對含量，收集具有高占比目標化合物的洗脫液并合并，將所得洗脫液濃縮至相對密度1.2，加入甜味劑、防腐劑、澄清劑、助溶劑等，放置，濾過，取濾液，滅菌，灌裝成10ml/支的口服液，軋蓋，制成適當(dāng)包裝規(guī)格的成品。

實施例4、本發(fā)明制備的食品添加劑

1)稱取原料咖啡豆，敲破種皮；

2)原料加10倍量水煮沸1h，放冷過濾，殘渣加20倍量50％乙醇加熱回流提取2次，每次2h，合并2次的提取液，減壓回收乙醇，加氨水調(diào)節(jié)提取液pH值為9，攪拌，放冷，經(jīng)過高速離心分離，取下層不溶物，加入少量乙醇溶解，上AB-8型大孔樹脂柱，靜態(tài)吸附2小時，用10BV水洗脫，棄去洗脫液，再用不同濃度乙醇由低至高依次洗脫，用薄層色譜法鑒別洗脫液中是否含有單體化合物群中某一單體及其相對含量，收集具有高占比目標化合物的洗脫液并合并，將所得洗脫液濃縮至相對密度1.2，滅菌，適當(dāng)容器密封，作為食品添加劑；或真空濃縮，真空干燥或噴霧干燥得細粉，適當(dāng)容器密封，作為食品添加劑。

實施例5、基于發(fā)明制備保健茶

1)稱取原料咖啡豆，敲破種皮，鐵觀音茶若干備用；

2)原料加10倍量水煮沸1h，放冷過濾，殘渣加20倍量50％乙醇加熱回流提取2次，每次2h，合并2次的提取液，減壓回收乙醇，加氨水調(diào)節(jié)提取液pH值為9，攪拌，放冷，經(jīng)過高速離心分離，取下層不溶物，加入少量乙醇溶解，上AB-8型大孔樹脂柱，靜態(tài)吸附2小時，用10BV水洗脫，棄去洗脫液，再用不同濃度乙醇由低至高依次洗脫，用薄層色譜法鑒別洗脫液中是否含有單體化合物群中某一單體及其相對含量，收集具有高占比目標化合物的洗脫液并合并，將所得洗脫液濃縮為相對密度1.2的浸膏，與鐵觀音茶葉按質(zhì)量比1:50混合，置于55℃條件下烘干8小時，再粉粹成20目，滅菌包裝入庫，制成6g一包的降尿酸保健茶。

實施例6、本發(fā)明對高尿酸血癥和痛風(fēng)性的作用

實驗動物：KM小鼠，SPF級，雄性，體重18-22g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。正常飼養(yǎng)3天后供試。

藥物與試劑：咖啡豆(市售)；腺嘌呤(批號：Z00070608)，廣州市齊云生物技術(shù)有限公司；氧嗪酸鉀(批號：T4514)，Adamas-beta(阿達瑪斯-貝塔公司)；別嘌呤醇(上海信誼萬象股份有限公司，批號：100583)；尿酸試劑盒(批號：20110314)南京建成生物工程研究所；尿素氮試劑盒(批號：20110225)南京建成生物工程研究所；肌酐試劑盒(批號：20110311)南京建成生物工程研究所。

本發(fā)明藥物制備：稱取原料咖啡豆，敲破種皮，原料加10倍量水煮沸1h，放冷過濾，殘渣加20倍量50％乙醇加熱回流提取2次，每次2h，合并2次的提取液，減壓回收乙醇，加氨水調(diào)節(jié)提取液pH值為9，攪拌，放冷，經(jīng)過高速離心分離，取下層不溶物，加入少量乙醇溶解，上AB-8型大孔樹脂柱，靜態(tài)吸附2小時，用10BV水洗脫，棄去洗脫液，再用不同濃度乙醇由低至高依次洗脫，用薄層色譜法鑒別洗脫液中是否含有單體化合物群中某一單體及其相對含量，收集具有高占比目標化合物的洗脫液并合并，將所得洗脫液真空干燥或噴霧干燥得細粉，臨用前用蒸餾水配制成所需濃度。

根據(jù)臨床成人每日劑量0.03g/60kg和動物公斤劑量折算系數(shù)法換算出本發(fā)明低、中、高劑量組的劑量，即低劑量按0.015g·kg^-1·d^-1給藥，中劑量組按0.030g·kg^-1·d^-1給藥，高劑量組按0.060g·kg^-1·d^-1給藥，別嘌呤醇0.04g·kg^-1·d^-1。采用腺嘌呤灌胃和氧嗪酸鉀腹腔注射聯(lián)合應(yīng)用，造成高尿酸血癥小鼠動物模型。

取SPF級昆明種雄性小鼠60只，重量18-22g，隨機分為6組，即本發(fā)明高、中、低劑量組、模型組、空白組和別嘌呤醇組。每組10只。空白組和模型組每天灌胃給予等量的蒸餾水。其余各組按照濃度灌胃給藥，共14天。除空白組外，于給藥后第10-14天灌胃給予腺嘌呤(50mg/kg)，于末次給藥后1h，腹腔注射氧嗪酸鉀(300mg/kg)。注射后2h眼眶取血分離血清，按照試劑盒說明進行操作，測定血清尿酸的含量。

表1中藥組方對高尿酸血癥小鼠血清尿酸含量的影響

表1結(jié)果顯示，與空白組相比，模型組小鼠血清尿酸含量顯著增高(P<0.05)，說明高尿酸血癥模型建立成功。與模型組相比較，本發(fā)明低、中、高各劑量，別嘌呤醇組均可顯著降低高尿酸癥小鼠血清尿酸含量(P<0.01)，本發(fā)明各劑量組與別嘌呤醇組比較，差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

實施例7、本發(fā)明亞慢毒性試驗

實驗動物：KM小鼠，SPF級，雄性，體重18-22g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。正常飼養(yǎng)3天后供試。

藥物與試劑：咖啡豆(市售)。

本發(fā)明藥物制備：稱取原料咖啡豆，敲破種皮，原料加10倍量水煮沸1h，放冷過濾，殘渣加20倍量50％乙醇加熱回流提取2次，每次2h，合并2次的提取液，減壓回收乙醇，加氨水調(diào)節(jié)提取液pH值為9，攪拌，放冷，經(jīng)過高速離心分離，取下層不溶物，加入少量乙醇溶解，上AB-8型大孔樹脂柱，靜態(tài)吸附2小時，用10BV水洗脫，棄去洗脫液，再用不同濃度乙醇由低至高依次洗脫，用薄層色譜法鑒別洗脫液中是否含有單體化合物群中某一單體及其相對含量，收集具有高占比目標化合物的洗脫液并合并，將所得洗脫液真空干燥或噴霧干燥得細粉，臨用前用蒸餾水配制成所需濃度。

取KM小鼠80只，平均分為四組，灌胃前禁食10h，禁水6h。每天灌胃兩次，每次0.6ml，連續(xù)14天，停藥后再觀察14天。本發(fā)明藥物低劑量組：劑量為0.15g/kg/d，相當(dāng)于人用量300倍；本發(fā)明藥物中劑量組：劑量為0.45g/kg/d，相當(dāng)于人用量的900倍；本發(fā)明藥物高劑量組：劑量為1.50g/kg/d，相當(dāng)于人用量的3000倍；對照組：給予等量蒸餾水。

試驗結(jié)果：各組小鼠動物給藥5h內(nèi)食量減少，興奮，藥物色溏便等，停藥后恢復(fù)正常。各試驗組在給藥14d和停藥后第14天時的平均體重與對照組相比無顯著差異(P>0.05)。試驗組小鼠的紅細胞總數(shù)、白細胞總數(shù)、血紅蛋白含量、血小板數(shù)在停藥后第1天及停藥后第14天與對照組相比無顯著差異(P>0·05)。各個試驗組小鼠的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶在停藥后第1天及停藥后第14天與對照組相比無顯著差異(P>0.05)。在停藥后第1天和第14天,剖檢見各組心、肝、脾、肺、腎、胃和腸的形態(tài)、顏色、質(zhì)地正常。病理組織學(xué)檢查,本發(fā)明的高、中、低劑量組和對照組小鼠均未見明顯病理變化。

經(jīng)過實驗，本發(fā)明的高、中、低劑量組均高于臨床治療劑量，在相應(yīng)療程內(nèi)未發(fā)現(xiàn)任何亞慢性毒性反應(yīng)。結(jié)合急性毒性試驗，其用量相當(dāng)于人用量的3000倍也未見任何毒副反應(yīng)，因此本發(fā)明可作為防治高尿酸血癥、痛風(fēng)藥用保健食品兩用配方及制劑。

試驗結(jié)論：本發(fā)明之亞慢性毒性試驗表明本發(fā)明安全無毒。

實施例8、本發(fā)明急性毒性試驗

實驗動物：KM小鼠，SPF級，雄性，體重18-22g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。正常飼養(yǎng)3天后供試。

藥物與試劑：咖啡豆(市售)。

本發(fā)明藥物制備：稱取原料咖啡豆，敲破種皮，原料加10倍量水煮沸1h，放冷過濾，殘渣加20倍量50％乙醇加熱回流提取2次，每次2h，合并2次的提取液，減壓回收乙醇，加氨水調(diào)節(jié)提取液pH值為9，攪拌，放冷，經(jīng)過高速離心分離，取下層不溶物，加入少量乙醇溶解，上AB-8型大孔樹脂柱，靜態(tài)吸附2小時，用10BV水洗脫，棄去洗脫液，再用不同濃度乙醇由低至高依次洗脫，用薄層色譜法鑒別洗脫液中是否含有單體化合物群中某一單體及其相對含量，收集具有高占比目標化合物的洗脫液并合并，將所得洗脫液真空干燥或噴霧干燥得細粉，臨用前用蒸餾水配制成所需濃度。

取KM小鼠80只，平均分為四組，灌胃前禁食10h，禁水6h。每天灌胃兩次，每次0.6ml，連續(xù)7天。本發(fā)明藥物低劑量組：劑量為0.15g/kg/d，相當(dāng)于人用量300倍；本發(fā)明藥物中劑量組：劑量為0.45g/kg/d，相當(dāng)于人用量的900倍；本發(fā)明藥物高劑量組：劑量為1.50g/kg/d，相當(dāng)于人用量的3000倍；對照組：給予等量蒸餾水。

試驗結(jié)果：實驗7天小鼠全部存活，僅見動物給藥5h內(nèi)食量減少，藥物色溏便等，停藥后恢復(fù)正常。4組動物在飲水、毛色、體重、糞便、及心、肝、脾、肺、腎、胸腺、腦、舌、胃、腸、膀胱、性腺(子宮、卵巢或睪丸和附睪)等主要臟器的形態(tài)、大小、光滑度等方面均無明顯差異。以上說明，本發(fā)明毒副作用小，而且因受藥物濃度和體積限制，找不出引起小鼠死亡的劑量，故無法測出本發(fā)明的LD50。小鼠最大給藥量為1.50/kg/d，相當(dāng)于人用量的3000倍。

實驗結(jié)論：本發(fā)明之急性毒性試驗表明本發(fā)明安全無毒。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。