本發(fā)明涉及化妝品領(lǐng)域，具體涉及竹蓀孢子粉及其提取物在化妝品中的應(yīng)用以及含有竹蓀孢子粉及其提取物的化妝品組合物。

背景技術(shù)：

皮膚生理上的表面狀態(tài)、血流、水分、色素等各種各樣的成分經(jīng)過錯(cuò)綜復(fù)雜的結(jié)合，決定了人體的膚色，在這一系列因素中最主要的是黑色素。黑色素的形成過程是：首先由酪氨酸作為底物在酪氨酸酶的作用下形成多巴，再轉(zhuǎn)化為多巴醌，這一最初的反應(yīng)被稱為黑色素合成的速率控制階段，其后多巴醌經(jīng)過一系列的氧化異構(gòu)及聚合反應(yīng)最終形成黑色素。黑色素的合成處是黑色素小體，成熟的黑色素小體會沿著黑色素細(xì)胞伸出的樹狀突起的末梢向周圍的角質(zhì)細(xì)胞移行，被角質(zhì)細(xì)胞獲取，黑色素從皮膚的基底層被轉(zhuǎn)移到角質(zhì)層，進(jìn)而使膚色變黑。

在美白類化妝品的開發(fā)中，為增白膚色或改善皮膚色素異常沉著，常添加各種美白活性原料。常用的有：酪氨酸酶抑制劑：①包括單酚與多酚類(氫醌、熊果苷、壬二酸)；②銅離子螯合劑(曲酸及其酯化物) ;③阻止酪氨酸酶向前黑素體轉(zhuǎn)移的物質(zhì)(葡萄糖胺類)；④改變前黑素體超微結(jié)構(gòu)的物質(zhì)(五癸酸)；⑤促進(jìn)酪氨酸酶蛋白降解的物質(zhì)(不飽和脂肪酸)；⑥競爭性酪氨酸酶抑制劑(氨甲環(huán)酸等) ;⑦其他類(甘草黃酮等)。非酪氨酸酶抑制劑，包括：①抗壞血酸及其衍生物；②角質(zhì)溶解劑(α-羥酸類、維A酸類、水楊酸等)；③抑制黑素細(xì)胞增殖的物質(zhì)(內(nèi)皮素受體阻斷劑)；④其他類(過氧化氫、山梨酸鉀等) 。

近年來隨著消費(fèi)者對自身健康和安全的日益關(guān)注,相對于許多生化合成的化妝品功效原料,來源于天然且功效顯著的原料則更受青睞。

竹蓀是一種大型名貴的食用菌，被歷代醫(yī)藥學(xué)家譽(yù)為“菌中皇后”，具有提高人體免疫力的功能。相關(guān)研究表明竹蓀含有豐富的氨基酸，其中包括人體必須的8種氨基酸及13種非必需氨基酸，是食用菌中含氨基酸種類最多的一種。此外，竹蓀中的有效成分，如竹蓀三萜、竹蓀多糖，有降低血壓和體內(nèi)膽固醇的作用，在抗腫瘤、抗凝血、抗炎癥、降血糖方面都有一定的療效。竹蓀孢子粘附于竹蓀菌蓋上，就整個(gè)竹蓀子實(shí)體而言，竹蓀孢子占干重的9~13 %，相當(dāng)于每生產(chǎn)3 Kg的商品干竹蓀就會產(chǎn)生1 Kg的干竹蓀孢子。根據(jù)相關(guān)報(bào)道，竹蓀孢子含有豐富的不飽和脂肪酸和維生素等營養(yǎng)成分，且相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)其提取物具有非常好的抗氧化和抗菌作用。但是，在竹蓀的采摘過過程中，竹蓀孢子一般都是和菌蓋一起被直接廢棄掉，造成巨大的資源浪費(fèi)。竹蓀孢子極為微小，約為2.5~4×0.5~2μm，孢子粉手感細(xì)膩，同時(shí)含有抗氧化活性成分。本發(fā)明提供一種竹蓀孢子在化妝品中的應(yīng)用，充分利用這部分未被開發(fā)的竹蓀資源。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

經(jīng)本發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn),竹蓀孢子及其提取物具有卓越的美膚功效，尤其是在肌膚增白方面，它能夠有效地抑制體外酪氨酸酶的活性、抑制多巴的自身身氧化和加深。同時(shí),它可以阻擊自由基對皮膚細(xì)胞的侵害；可以有效抑制透明質(zhì)酸酶的活性，以達(dá)到抗炎癥和協(xié)同保濕的雙重功效。

因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供竹蓀孢子粉及其提取物在化妝品中的應(yīng)用。

根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“竹蓀孢子粉”是指通過任何適當(dāng)方式從竹蓀菌蓋中分離獲得并經(jīng)離心干燥或噴霧干燥，超微粉碎，破壁率90% 以上，經(jīng)滅菌處理后獲得而得的竹蓀孢子粉；“竹蓀孢子提取物”是指從竹蓀孢子粉中提取出的含有有效成分的提取物。

根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式，所述化妝品可以選自美白化妝品、抗衰老化妝品、抗炎癥化妝品、保濕化妝品或其組合。

根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)目的，本發(fā)明提供一種化妝品組合物，所述組合物含有竹蓀孢子粉、竹蓀孢子粉提取物和化妝品領(lǐng)域可接受的輔料。

所述化妝品領(lǐng)域可按受的輔料可以選自：溶劑、增溶劑、防腐劑、抗氧劑、 pH調(diào)節(jié)劑、促滲劑、脂質(zhì)體、保濕劑、增調(diào)劑、螯合劑、膚感調(diào)節(jié)劑、表面活性劑、乳化劑、推進(jìn)/拋射劑、香精、色素，以及其他功效添加劑。

根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式，所述組合物為霜?jiǎng)?、乳液、膜劑、溶液劑、氣霧或噴霧形式。更具體地說，所述組合物可以為洗面奶、護(hù)膚啫喱、護(hù)膚乳液、護(hù)膚霜、眼霜、面膜、氣霧或噴霧形式。這些形式可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法制備。

根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式，所述竹蓀孢子粉占組合物總重量的 1%~50%，竹蓀孢子粉提取物占所述組合物總重量的 0.1%~20%。

本發(fā)明所述竹蓀孢子粉的制備方法：將竹蓀孢子從菌蓋洗脫后，制成孢子粉，超微粉碎使破壁率90% 以上，經(jīng)滅菌處理后，得到竹蓀孢子粉；

本發(fā)明所述竹蓀孢子粉提取物的制備方法：取竹蓀孢子粉適量，以適宜溶媒浸泡，以適宜的提取方法提取，離心或過濾得到澄清液體，任選經(jīng)過濃縮/干燥步驟，制成浸膏或干粉形式。

所述適宜溶媒主要為水（包括蒸餾水、去離子水等）或有機(jī)溶劑（優(yōu)選醇類和酯類溶劑，醇類溶劑包括乙醇和多元醇等，酯類溶劑包括乙酸乙酯等）；適宜的提取方法選自以下一種或幾種：浸提、煎煮、回流和超臨界。適宜的濃縮過程包括真空加熱蒸發(fā)（加熱溫度40~90℃）、真空冷凍干燥、噴霧干燥等。

本發(fā)明所述竹蓀孢子粉提取物的制備方法，優(yōu)選的：取超微粉碎的竹蓀孢子粉適量，加入提取罐內(nèi)，加入20~30倍(w/v)有機(jī)溶劑，充分?jǐn)嚢杌靹?，?5~60℃ 條件下保溫浸提2~3 h，間斷性超聲震蕩15 min，過濾，濾渣重復(fù)再提取1次，合并濾液，濾液50℃真空濃縮至適量為A；濾渣加入20~30倍(w/v)水，充分?jǐn)嚢杌靹?，?0~80℃ 條件下保溫浸提2 h，間斷性超聲震蕩15 min，過濾，濾渣重復(fù)再提取1次，合并濾液，棄去濾渣，濾液50℃真空濃縮至適量為B；合并AB組份即為所得竹蓀孢子粉提取物，提取物為浸膏或干粉形式。

本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)：竹蓀孢子及其提取物具有卓越的美膚功效，尤其是在肌膚增白方面，它能夠有效地抑制體外酪氨酸酶的活性、抑制多巴的自身身氧化和加深。同時(shí),它可以阻擊自由基對皮膚細(xì)胞的侵害；可以有效抑制透明質(zhì)酸酶的活性，以達(dá)到抗炎癥和協(xié)同保濕的雙重功效。

竹蓀孢子粉提取物對DPPH· 均有清除作用，隨著濃度的增加，清除率逐漸增高，表現(xiàn)出明顯的量效關(guān)系，當(dāng)濃度大于0.25 mg/mL時(shí)，清除率達(dá)到90% 以上。

竹蓀孢子粉提取物濃度在100 ug/ml、250 ug/ml、500 ug/ml時(shí)，對H₂O₂氧化損傷PC12細(xì)胞具有保護(hù)作用。

附圖說明

圖1為竹蓀孢子不同乙醇濃度提取物對DPPH·自由基的清除作用。

圖2為不同竹蓀孢子粉提取物濃度對PC12細(xì)胞的氧化損傷保護(hù)效果。

圖3為細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明用下列實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于下列實(shí)施例。

實(shí)施例1

取超微破碎的竹蓀孢子粉（破壁率90% 以上）適量，加入提取罐內(nèi)，加入30倍(w/v)水，充分?jǐn)嚢杌靹?，?5℃ 條件下保溫浸提3 h，間斷性超聲震蕩15 min，過濾，濾渣重復(fù)再提取1次；合并濾液，50℃真空濃縮至適量，即為所得竹蓀孢子提取物。

實(shí)施例2

取超微破碎的竹蓀孢子粉（破壁率90% 以上）適量，加入提取罐內(nèi)，加入30倍(w/v)水，充分?jǐn)嚢杌靹颍?0℃條件下保溫浸提2 ，間斷性超聲震蕩15 min，過濾，濾渣重復(fù)再提取1次；合并濾液，棄去濾渣，濾液50℃ 真空濃縮至適量，即為所得竹蓀孢子提取物。

實(shí)施例3

取超微粉碎的竹蓀孢子粉（破壁率90% 以上）適量，加入提取罐內(nèi)，加入20倍(w/v)無水乙醇，充分?jǐn)嚢杌靹颍?5℃ 條件下保溫浸提3 ，間斷性超聲震蕩15 min，過濾，濾渣重復(fù)再提取1次；合并濾液，濾液50℃真空濃縮至適量為A，濾渣加入20倍(w/v)水，充分?jǐn)嚢杌靹?，?0℃ 條件下保溫浸提2 ，間斷性超聲震蕩15 min，過濾，濾渣重復(fù)再提取1次；合并濾液，棄去濾渣，濾液50℃真空濃縮至適量為B；合并AB為即為所得竹蓀孢子提取物。

實(shí)施例4

取超微粉碎的竹蓀孢子粉（破壁率90% 以上）適量，加入提取罐內(nèi)，加入20倍(w/v)無水乙醇，充分?jǐn)嚢杌靹?，?0℃ 條件下保溫浸提2 ，間斷性超聲震蕩15 min，過濾，濾渣重復(fù)再提取1次；合并濾液，濾液50℃真空濃縮至適量為A，濾渣加入30倍(w/v)水，充分?jǐn)嚢杌靹?，?0℃ 條件下保溫浸提2 ，間斷性超聲震蕩15 min，過濾，濾渣重復(fù)再提取1次；合并濾液，棄去濾渣，濾液50℃真空濃縮至適量為B；合并AB為即為所得竹蓀孢子提取物。

實(shí)施例5

取超微粉碎的竹蓀孢子粉（破壁率90% 以上）適量，加入提取罐內(nèi)，加入30倍(w/v) 50%乙醇，充分?jǐn)嚢杌靹?，?0℃條件下保溫浸提2 h，間斷性超聲震蕩15 min，過濾，濾渣重復(fù)再提取1次；合并濾液，棄去濾渣，濾液50℃ 真空濃縮至適量，即為所得竹蓀孢子提取物。

以下實(shí)施例中所使用竹蓀孢子提取物均為實(shí)施例1中得到的竹蓀孢子提取物；所使用竹蓀孢子粉均為破壁率90% 以上、經(jīng)滅菌處理后的竹蓀孢子粉。實(shí)施例6-9中個(gè)組成單位均為重量百分比。

實(shí)施例6

面霜的制備

工藝：A相加熱到80℃, 均質(zhì)下慢慢加入到預(yù)先分散均勻并加熱至80℃的 E相中，加入 B相均質(zhì)3 min，加入 C相調(diào)節(jié) pH6~7，攪拌冷卻到50℃ 加入D相，攪拌、冷卻到35℃ 即得。

實(shí)施例7

眼霜的制備

工藝: 在30~50℃下將 A相攪拌直至清澈，在攪拌下緩慢加入 B相，邊攪拌邊加入C相。 將料體均質(zhì)攪拌均勻即得。

實(shí)施例8

面膜的制備

工藝：A相、 B相分別加熱到80℃ 攪拌溶解均勻，均質(zhì)下 B相加入到 A 相中，加完均質(zhì)3 min,加入預(yù)先分散均勻的C相，攪拌冷卻到50℃ 加入D相，攪拌、冷卻到35℃ 即得。

以上6-8實(shí)施例中所述的竹蓀孢子組合物均經(jīng)過①穩(wěn)定性測試：將料體分別在 -20℃、4℃、室溫、48℃、循環(huán)(連續(xù)變換四個(gè)溫度條件)、光照條件下放置12周，各料體的顏色和形態(tài)都保持穩(wěn)定；②皮膚安全性測試：證實(shí)對皮膚無刺激，不會引發(fā)紅斑、脫屑、剌痛及灼熱等不良反應(yīng)，可安心使用。

試驗(yàn)例1 DPPH白由基中和實(shí)驗(yàn)

一、實(shí)驗(yàn)原理

自由基是一類性質(zhì)活潑、具有極強(qiáng)氧化能力的化學(xué)物質(zhì)。機(jī)體中產(chǎn)生的大量自由基，也對皮膚造成損傷，加速衰老。DPPH·是一種穩(wěn)定的長壽命自由基，其乙醇溶液呈深紫色，在517 nm附近有強(qiáng)吸收。當(dāng)有自由基清除劑存在時(shí)，由于與其單電子配對而使 DPPH·光吸收減弱, DPPH·乙醇溶液退色程度與其接受的電子數(shù)呈定量關(guān)系，借此可評價(jià)物質(zhì)清除自由基的能力。

二、實(shí)驗(yàn)方法

在樣品管和樣品對照管中各加入2.0 m1對應(yīng)濃度的竹蓀孢子粉提取物樣品溶液(蒸餾水配制)，陰性對照管和空白對照管中以蒸餾水代替。樣品管和陰性對照管中加入DPPH· (購自 Sigma公司，批號：115K1319)乙醇溶液0.5 m1(20 mg/100 mL)。補(bǔ)充蒸餾水至各管終體積均為4 mL，混勻，靜置30 min后在517 nm處測定吸光值(Abs) 。

計(jì)算對DPPH白由基的清除率。

二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

不同溶劑的提取物對DPPH·的清除效果見圖1。各提取物對DPPH·均有清除作用，隨著樣品濃度的增加，清除率逐漸增高，表現(xiàn)出明顯的量效關(guān)系，當(dāng)濃度大于0.25 mg/mL時(shí)，清除率達(dá)到90% 以上。

試驗(yàn)例2 竹蓀孢子提取物對H₂O₂損傷PC12細(xì)胞的保護(hù)作用

一、實(shí)驗(yàn)原理

H₂O₂具有損傷PC12細(xì)胞的作用，使細(xì)胞凋亡。加入抗氧化劑后，可有效保護(hù)細(xì)胞。

二、實(shí)驗(yàn)方法

PC12細(xì)胞培養(yǎng)至70~80%，PBS清洗2~3遍，加胰酶1 ml，消化3 min，加培養(yǎng)基終止，1000 r/min離心3 min，去上清，加培養(yǎng)基，吹打均勻，置96孔板培養(yǎng)，10000 個(gè)/孔，24 h后，加入梯度濃度的竹蓀孢子粉提取物，受藥2 h后，加入750 uM（終濃度）H₂O₂ ，損毀細(xì)胞24 h后，MTT法檢測細(xì)胞存活率。

從圖2可以看出，添加竹蓀孢子粉提取物濃度在100 ug/ml、250 ug/ml、500 ug/ml時(shí)，PC12細(xì)胞存活量明顯提高，與對照比達(dá)差異極顯著水平。說明一定濃度的竹蓀孢子提取物對H₂O₂氧化損傷PC12細(xì)胞具有保護(hù)作用，具體效果見圖3。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡依本發(fā)明申請專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。