本發(fā)明屬于新型止血材料
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及一種止血?jiǎng)?，尤其涉及一種可防止傷口溫度上升的快速止血?jiǎng)?br>背景技術(shù)：
：目前，外科手術(shù)中常用的傳統(tǒng)止血材料有氧化纖維素、可吸收明膠海綿、膠原蛋白海綿和沸石等，雖然它們都可作為局部止血材料，但各自都有較大缺點(diǎn)并限制了其臨床應(yīng)用。例如沸石止血?jiǎng)┰趹?yīng)用過程中由于釋放大量熱能使局部溫度升高而產(chǎn)生組織熱灼傷的副作用，嚴(yán)重制約了它的應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，止血過程中，止血?jiǎng)┪昭褐写罅克?，若該過程瞬間完成，止血?jiǎng)┓艧岈F(xiàn)象嚴(yán)重，使得傷口溫度明顯增加，甚至對(duì)傷口組織產(chǎn)生灼傷，疼痛感倍增。因此，快速止血與傷口升溫本身為一對(duì)矛盾對(duì)映體。然而，現(xiàn)有的以微孔淀粉為主體的止血?jiǎng)谥寡^程中均會(huì)產(chǎn)生不同程度的升溫現(xiàn)象。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：針對(duì)上述問題，本發(fā)明的目的在于，提供一種可降低傷口溫度的快速止血?jiǎng)?，在具備現(xiàn)有止血?jiǎng)┝己玫南嗳菪浴⒖勺孕形?，抗感染、加快傷口愈合、迅速止血的?yōu)點(diǎn)的同時(shí)，更重要的是保證在使用本發(fā)明止血?jiǎng)r(shí)傷口溫度不會(huì)大幅升高。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取如下的技術(shù)方案：一種快速止血?jiǎng)苽湓习ㄎ⒖椎矸?、鈣離子或鋅離子，殼聚糖或甲殼素。每100g微孔淀粉中，殼聚糖或甲殼素加入量為1-50g，鈣離子加入量為10-500μmol或鋅離子的加入量為6-80μmol。優(yōu)選的，每100g微孔淀粉中，殼聚糖或甲殼素加入量為30g，鈣離子加入量為200μmol或鋅離子的加入量為20μmol。微孔淀粉孔徑＜2μm，采用玉米微孔淀粉?？焖僦寡?jiǎng)┑闹苽浞椒?，該方法采用在高濃度氮?dú)猸h(huán)境中依次加入微孔淀粉、鈣離子或鋅離子以及殼聚糖或甲殼素混合制成快速止血?jiǎng)?。本發(fā)明的有益效果在于：(1)本發(fā)明的快速止血?jiǎng)┰谑褂脮r(shí)不會(huì)使傷口處的皮膚溫度明顯上升，能夠有效防止止血時(shí)傷口處的溫度大幅上升，避免了現(xiàn)有止血?jiǎng)┦褂脮r(shí)傷口處溫度升高給患者帶來的痛苦。(2)本發(fā)明快速止血?jiǎng)┮坏﹪姙⒃趥谏?，就如同海綿一樣會(huì)迅速吸收血液中的水分而使血液中的血小板、紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血蛋白等得到迅速濃縮，從而觸發(fā)最初的凝血，然后在凝血過程完成后，由淀粉酶將其分解為人體所吸收。這種快速止血?jiǎng)┰谏矬w內(nèi)會(huì)自動(dòng)降解為生物體可以吸收的小分子，被周邊細(xì)胞吸收，無毒無副作用，不會(huì)引起體內(nèi)通常會(huì)有的排異反應(yīng)。因此在手術(shù)中和手術(shù)后無須將它移除，從而避免了傷口受到污染的可能，給其在無菌環(huán)境下進(jìn)行手術(shù)提供了必要條件。同時(shí)，由于甲殼素和殼聚糖都具有一定的殺菌和促進(jìn)傷口愈合作用，因此，它們的加入既可以防止止血?jiǎng)┍旧碓趦?chǔ)藏和運(yùn)輸過程中的細(xì)菌感染和變質(zhì)，又可以對(duì)受傷傷口進(jìn)行初步的抗感染和促進(jìn)傷口愈合。(3)本發(fā)明快速止血?jiǎng)┠軌蛴糜诟鞣N中小動(dòng)脈之下的內(nèi)外創(chuàng)傷止血。具體實(shí)施方式在人血液中，紅細(xì)胞是雙面凹的圓餅狀，邊緣較厚而中間較薄，就好像一個(gè)甜甜圈一樣，只是當(dāng)中沒有一個(gè)洞而已，紅細(xì)胞的直徑通常為6-9微米；白細(xì)胞則有5個(gè)類型：淋巴細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞，它們的直徑分別為：單核細(xì)胞14-25微米，大淋巴細(xì)胞13-20微米，中淋巴細(xì)胞9-12微米，小淋巴細(xì)胞5-8微米，嗜酸性粒細(xì)胞10-15微米，中性粒細(xì)胞10-12微米，嗜堿性粒細(xì)胞10-12微米；而血小板是體內(nèi)最小的血細(xì)胞，板直徑約為2-4微米，是有折光的扁圓形小體。正常時(shí)呈圓盤狀，有時(shí)可伸出偽足。本申請的發(fā)明人在前期制備的微孔淀粉表面的微孔直徑小于這些紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板的直徑(比如小于1微米)，當(dāng)血液與這種微孔淀粉接觸后，血液的絕對(duì)主要成分水分子能夠迅速進(jìn)入這些小孔，而這些紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板由于它們的直徑太大而不能進(jìn)入這些小孔，這樣瞬間血液中的紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板濃度就會(huì)增加好幾倍，更有利于止血。但是，在后期的研究發(fā)現(xiàn)，單純應(yīng)用微孔淀粉止血的最大缺點(diǎn)是，在止血時(shí)在傷口處會(huì)吸收大量的水分，從而導(dǎo)致傷口處溫度的升高。甲殼素[β-(1,4)-2-乙酰氨基-2-脫氧-D-葡萄糖]廣泛存在于甲殼綱動(dòng)物蝦蟹的甲殼、昆蟲的甲殼和真菌和植物的細(xì)胞壁中。甲殼素和殼聚糖都可以通過與血液中的血小板、紅細(xì)胞和白細(xì)胞的相互作用而具有凝血特性。鈣離子在血液凝固的多步反應(yīng)中起著重要的催化激活作用，對(duì)血液凝固有非常重要作用。而鋅離子對(duì)血小板具有重要的誘聚作用，它能夠誘導(dǎo)血小板的聚集與血小板膜糖蛋白功能有關(guān)且需要纖維蛋白原的介導(dǎo)，由此提示二價(jià)鋅離子在血栓形成與止血中發(fā)揮重要作用。60-800μmol/L二價(jià)鋅離子可誘導(dǎo)凝膠過濾后的血小板聚集，這一聚集過程不伴有ATP的釋放，并且不受環(huán)氧化酶抑制劑的影響?；谝陨系难芯堪l(fā)現(xiàn)和理論基礎(chǔ)，本發(fā)明提出了一種以微孔淀粉和甲殼素或殼聚糖為主要原料的能降低傷口溫度的快速止血?jiǎng)?。以下給出本發(fā)明的具體實(shí)施例，需要說明的是本發(fā)明并不局限于以下具體實(shí)施例，凡在本申請技術(shù)方案基礎(chǔ)上做的等同變換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。玉米微孔淀粉制備方法及性能測試結(jié)果如下所述：(1)玉米淀粉中蛋白和脂類雜質(zhì)的去除將適量玉米原淀粉(市售)用濃度0.2％的稀堿液浸泡后進(jìn)行膠體磨，然后過篩，離心，洗滌，干燥，然后進(jìn)行預(yù)處理；(2)玉米淀粉的預(yù)糊化和超聲波處理配制40％(W/V)處理過的淀粉乳濁液，65℃攪拌20min后離心，沉淀在40℃條件下常壓干燥后粉碎，然后進(jìn)行超聲波預(yù)處理。預(yù)糊化后的淀粉配制成乳濁液，用超聲波在室溫、25kHz、無攪拌情況下進(jìn)行約25min的超聲處理；(3)玉米淀粉的有限酸解稱取一定量超聲波處理后的淀粉于200mL燒杯中，用濃度15％的HCl溶液調(diào)成含淀粉30％的均勻淀粉乳，置于40℃的水浴鍋中加熱，同時(shí)用電動(dòng)攪拌機(jī)攪拌。6小時(shí)后停止反應(yīng)，用飽和碳酸鈉溶液中和鹽酸，然后抽濾洗滌。(4)初步酸解后玉米淀粉的雙酶解稱取適量上述初步酸解后的淀粉，用pH為5.2的緩沖液(弱酸及其鹽的混合溶液，如HAc與NaAc)配制成濃度為50％的淀粉乳，在50℃恒溫水浴鍋中預(yù)熱20min，同時(shí)用電動(dòng)攪拌機(jī)攪拌，往淀粉乳中加入按理論水解50％淀粉的配比為4：1的酶(α－淀粉酶與糖化酶)量，然后恒溫水浴振蕩36h，停止酶反應(yīng)。反復(fù)抽濾、水洗，得濕淀粉樣品，置烘箱內(nèi)于45℃烘干至恒重，用粉碎機(jī)粉碎，得到微孔淀粉。(5)孔密度以及吸水性和吸油性的測定上述經(jīng)過酸酶序解的微孔淀粉用掃描電鏡觀察表明，微孔淀粉呈蜂窩狀，顆粒表面分布的微孔約為0.48個(gè)/μm2，孔徑約為0.76μm，孔深不一且最深的可達(dá)顆粒中心。與僅僅用雙酶解法所制備的微孔玉米淀粉的孔密度0.3個(gè)/μm2相比較，孔密度提高了約60％；吸水性或吸油性是微孔淀粉所吸收的水或色拉油與微孔淀粉的質(zhì)量比。在恒溫下將一定質(zhì)量的微孔淀粉與水或色拉油混合攪拌30min，轉(zhuǎn)入砂芯漏斗后用真空泵抽濾，直至無水或油滴滴下，然后根據(jù)吸收前后的樣品質(zhì)量差計(jì)算其吸水性和吸油性。結(jié)果表明，用上述酸酶序解的方法制備的微孔玉米淀粉的吸水性率約為94％，吸油率約為74％，與僅僅用雙酶解法所制備的玉米微孔淀粉78％的吸水性率和56％的吸油率相比較，其吸水性率和吸油率分別增加20％和32％。本發(fā)明快速止血?jiǎng)┲屑尤氲募瓤梢允羌讱に睾蜌ぞ厶瞧渲兄?，也可以是它們按一定比例混合的混合物。本發(fā)明快速止血?jiǎng)┲屑尤氲募瓤梢允氢}離子和鋅離子其中之一，也可以是它們按一定比例混合的混合物。本發(fā)明制備的快速止血?jiǎng)瓤梢灾苯油磕ㄓ趥?，也可以將其放入一種充滿一定壓力氮?dú)獾男⌒蛢?chǔ)壓裝備中，使用時(shí)在壓力作用下直接噴于傷口。實(shí)施例1本實(shí)施例給出一種快速止血?jiǎng)?，其制備原料包括微孔淀粉、鈣離子和殼聚糖或甲殼素，每100g微孔淀粉中，殼聚糖或甲殼素加入量為30g，鈣離子加入量為20μmol，其中，殼聚糖或甲殼素可以單獨(dú)加入也可以混合加入。本實(shí)施例快速止血?jiǎng)┑闹苽浞椒椋?1)玉米微孔淀粉的活化稱取1.0千克玉米微孔淀粉，將其在室溫真空干燥器中留置24小時(shí)，然后依次用5倍體積的無水乙醇洗滌兩次和12倍體積的丙酮洗滌三次后，用G2砂心漏斗抽濾至干，于45℃真空干燥器中留置24小時(shí)后，轉(zhuǎn)入一事先充滿高純氮?dú)獾娜萜髦小?2)甲殼素和/或殼聚糖的加入在上述充滿高純氮?dú)獾娜萜髦?，加?00克甲殼素，或300克殼聚糖，或100克甲殼素和200克殼聚糖的混合物，然后攪拌混勻。(3)鈣離子和/或鋅離子的加入在上述已加入甲殼素和/或殼聚糖的充滿高純氮?dú)獾娜萜髦校尤?毫摩爾Ca(CH3COO)2·H2O，或200微摩爾Zn(CH3COO)2，或1.8毫摩爾Ca(CH3COO)2·H2O和200微摩爾Zn(CH3COO)2，然后攪拌混勻。對(duì)上述方法得到的快速止血?jiǎng)┻M(jìn)行快速止血?jiǎng)┑募?xì)胞毒性試、組織相容性試驗(yàn)、快速止血?jiǎng)?duì)兔耳創(chuàng)面的止血效果、快速止血?jiǎng)?duì)兔肝臟創(chuàng)面的止血效果、快速止血?jiǎng)?duì)不同動(dòng)物和人的止血試驗(yàn)，結(jié)果如下：1.止血?jiǎng)┑募?xì)胞毒性試驗(yàn)(1)材料干燥的快速止血?jiǎng)?，上述?shí)施例1方法制備的止血?jiǎng)蝗伺叻味扼w細(xì)胞(MRC-5)細(xì)胞系：本實(shí)驗(yàn)室保藏；新生胎牛血清：美國Gibco公司產(chǎn)品；DMEM培養(yǎng)基：購于美國Gibco公司產(chǎn)品；HEPES：美國Sigma公司產(chǎn)品；無水碳酸氫鈉：美國Sigma公司產(chǎn)品；二甲基亞砜：北京鼎國生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；噻唑藍(lán)：科昊生物工程有限公司產(chǎn)品；EDTA：北京鼎國生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；胰蛋白酶：美國Gibco公司產(chǎn)品。(2)方法稱取2g干燥的快速止血?jiǎng)┲劣?0mL已滅菌的血清瓶中，加入10mL全DMEM培養(yǎng)基，置于37℃恒溫水浴箱中浸提24h±2h，離心后取上清，即100％微孔淀粉全DMEM培養(yǎng)基浸提液，后用全DMEM培養(yǎng)基將其稀釋成50％浸提液和25％浸提液，4℃冷藏備用。將培養(yǎng)48h的人胚肺二倍體細(xì)胞棄去原培養(yǎng)基，加入1mL消化液洗滌一次，后加入2mL消化液，將細(xì)胞培養(yǎng)瓶置于二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)3min后取出，于倒置顯微鏡下觀察，若是胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間隙增大，細(xì)胞收縮變圓，則立即加入5mL全DMEM培養(yǎng)基，并用移液管吹打成單個(gè)細(xì)胞懸液，置于光學(xué)顯微鏡下計(jì)數(shù)，再加入適量的全DMEM培養(yǎng)基稀釋成1×107個(gè)/L的細(xì)胞懸液。將上述細(xì)胞懸液接種于96孔培養(yǎng)板上，每組6孔，共4組。置于二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h后取出，吸棄原培養(yǎng)基，分別加入100％、50％、25％馬鈴薯微孔淀粉止血?jiǎng)┙嵋汉腿獶MEM培養(yǎng)液，放入二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。分別與1、3、5、7d各取一塊96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，置于倒置顯微鏡下觀察并拍照后，加入20μLMTT溶液，在二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)4h后取出，小心吸去培養(yǎng)基并加入150μL二甲基亞砜，常溫下震蕩10min后用酶聯(lián)免疫測定儀于490nm下測吸光值。細(xì)胞相對(duì)增殖率用下式計(jì)算：細(xì)胞相對(duì)增值率RGR(％)＝[OD1/OD2]×100％式中，OD1：浸提液組的吸光度；OD2：陰性對(duì)照組的吸光度。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0分析軟件，組間差異采用單因素方差分析，P<0.01具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)細(xì)胞形態(tài)觀察由倒置相差顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)24h后，各組細(xì)胞生長基本正常，細(xì)胞呈梭形并貼壁生長，折光性好，胞漿內(nèi)有離散顆粒，無細(xì)胞溶解現(xiàn)象；經(jīng)72h培養(yǎng)后，細(xì)胞貼壁并呈梭形，折光性好，25％浸提液組和陰性對(duì)照組相比無明顯區(qū)別，而100％浸提液組合50％浸提液組與陰性對(duì)照組相比細(xì)胞密度明顯較低。經(jīng)120h培養(yǎng)后，陰性對(duì)照組和25％浸提液組細(xì)胞伸展并呈梭形，折光性好，二者細(xì)胞密度較大。100％浸提液組和50％浸提液組細(xì)胞密度相對(duì)較低。二者細(xì)胞中有少量收縮，折光性較差并有少量細(xì)胞破碎；經(jīng)168h培養(yǎng)后，25％浸提液組、50％浸提液組和陰性對(duì)照組細(xì)胞密度極高并已重疊生長，細(xì)胞伸展呈梭形。而100％浸提液組細(xì)胞密度相對(duì)較低，折光性差。其中100％浸提液組細(xì)胞密度更低并有部分細(xì)胞收縮，生長狀態(tài)較差，細(xì)胞溶出物較多。二者細(xì)胞中有少量收縮，折光性較差并有少量細(xì)胞破碎。(4)MTT比色測定1、3、5、7d的100％浸提液組、50％浸提液組、25％浸提液組和陰性對(duì)照組的MTT比色結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在加入浸提液培養(yǎng)1d后，各組細(xì)胞形態(tài)正常，貼壁生長良好，各組細(xì)胞毒性級(jí)別為0級(jí)，無細(xì)胞毒性。各浸提液組和陰性對(duì)照組OD值比較差異無顯著性意義(P>0.05)；在加入浸提液培養(yǎng)3d后，100％浸提液組、50％浸提液組和25％浸提液組的相對(duì)增值率分別為90.3％、91.5％和97.9％，級(jí)別為1級(jí)，細(xì)胞毒性極輕，其中100％、50％浸提液組和陰性對(duì)照組OD值比較差異有顯著性意義(P<0.05)。而各組細(xì)胞密度也與各組相對(duì)增值率相吻合，未見各組細(xì)胞溶解，由此可以推測馬鈴薯微孔淀粉止血?jiǎng)┲泻械奈镔|(zhì)可能對(duì)細(xì)胞繁殖有輕度的抑制；在加入浸提液培養(yǎng)5d后，100％浸提液組、50％浸提液組和25％浸提液組的相對(duì)增值率分別為78.7％、85.5％和89.7％，級(jí)別均為1級(jí)，細(xì)胞毒性極輕，各浸提液組和陰性對(duì)照組OD值比較差異有顯著性意義(P<0.05)。各組細(xì)胞密度和細(xì)胞生長狀況也與各組相對(duì)增值率相吻合。其中100％浸提液組細(xì)胞疏松貼壁，并有少量細(xì)胞收縮變圓，細(xì)胞密度較低，可見100％浸提液組對(duì)細(xì)胞的生長和繁殖都有輕微的影響；在加入浸提液培養(yǎng)7d后，100％浸提液組、50％浸提液組和25％浸提液組的相對(duì)增值率分別為77.27％、102.35％和109.57％，級(jí)別分別為1級(jí)、0級(jí)和0級(jí)，其中100％浸提液組和陰性對(duì)照組OD值相比差異具有顯著意義(P<0.05)。推測可能是因?yàn)樵谶B續(xù)培養(yǎng)168h后，由于細(xì)胞密度過大，對(duì)培養(yǎng)基中養(yǎng)分的競爭更為激烈，以及少量死亡細(xì)胞施放出的有害物質(zhì)對(duì)其他細(xì)胞的影響導(dǎo)致陰性對(duì)照組生長緩慢，而100％浸提液組、50％浸提液組和25％浸提液組由于繁殖較陰性對(duì)照組緩慢，同時(shí)各浸提液組培養(yǎng)基和陰性對(duì)照組培養(yǎng)基相比含有少量的淀粉水解產(chǎn)物，能為高密度生長狀態(tài)下細(xì)胞提供額外的養(yǎng)分，因此50％浸提液組和25％浸提液組的細(xì)胞增值率大于100％。綜合各方面原因，可以推測止血?jiǎng)┰谑┘拥絼?chuàng)傷表面后對(duì)創(chuàng)傷表面的細(xì)胞有極輕微的毒性，毒性級(jí)別為0～1級(jí)，止血?jiǎng)╇m對(duì)細(xì)胞的生長繁殖有極輕微的毒性，但其水解產(chǎn)物也能為細(xì)胞提供養(yǎng)分。2.止血?jiǎng)┑慕M織相容性試驗(yàn)(1)材料干燥的快速止血?jiǎng)?，上述?shí)施例1方法制備的快速止血?jiǎng)?；健康昆明小?4只(雌雄各半，體重20g±2g)，購自第四軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心；2.5％戊巴比妥那：西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院提供；一次性注射器：上海達(dá)華醫(yī)療器械有限公司產(chǎn)品；醫(yī)用酒精：寶雞市大明酒精有限責(zé)任公司產(chǎn)品；碘伏：陜西三木奇衛(wèi)生消毒用品有限公司產(chǎn)品。(2)方法將昆明小鼠隨機(jī)分成2組，每組12只。腹腔注射2.5％戊巴比妥那麻醉后剪去右股處絨毛，用碘伏進(jìn)行消毒，后用醫(yī)用酒精脫碘，在右股處劃出長約1cm，深約0.5cm的條形切口，實(shí)驗(yàn)組將0.2g無菌干燥的止血?jiǎng)┨钊肫渲校瑢?duì)照組不填塞。縫合切口。各組小鼠飼養(yǎng)在同樣條件下，分別于2d、6d、10d、14d各取3只小鼠，觀察一般狀況后斷頸處死，切取肝臟、腎臟和右股部肌肉的組織塊，組織塊的厚度以5mm左右為宜，并迅速投入10％的中性甲醛溶液中固定24h。固定后的組織塊先用自來水沖洗30min，后進(jìn)行脫水。脫水的具體方法是：將組織塊投入75％乙醇25min，85％乙醇30min，95％乙醇30min，95％乙醇30min，無水乙醇30min，無水乙醇25min，無水乙醇25min。撈出后將無水乙醇甩干，立即投入至二甲苯10min，二甲苯6min，務(wù)必使組織塊達(dá)到透明為止，透明后開始浸蠟，浸蠟過程務(wù)必保持溫度在58℃左右。具體方法是：將透明的組織塊從二甲苯中取出后浸入含有二甲苯的石蠟(二甲苯：石蠟為1：3)中30min，再浸入依次含有二甲苯的石蠟(二甲苯：石蠟為1：8)、純石蠟24h。浸蠟后取出組織塊用銅制包埋框進(jìn)行包埋。包埋后取出蠟塊用切片機(jī)切成4μm厚的組織，42℃條件下在攤片機(jī)上進(jìn)行攤片，用載玻片撈出后置于烘片機(jī)上60℃烘烤24h。染色的具體方法是：將烘烤過的載玻片投入二甲苯15min，二甲苯15min，無水乙醇5min，無水乙醇5min，95％乙醇5min，90％乙醇5min，85％乙醇5min，80％乙醇5min，自來水沖洗10min，蘇木精染色20min，自來水沖洗1min，含1％鹽酸的無水乙醇20s，自來水沖洗1min，1％氨水反藍(lán)30s，自來水沖洗1min，伊紅染色5min，自來水沖洗30s，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為85％的乙醇20s，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為90％的乙醇25s，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95％乙醇1min，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95％乙醇1min，無水乙醇2min，無水乙醇2min，二甲苯2min，二甲苯2min，二甲苯2min，后用中性樹膠封片，待樹膠干燥后顯微鏡下觀察。(3)小鼠一般觀察術(shù)后小鼠毛色光亮，飲食、活動(dòng)正常。右股部傷口沒有明顯溢膿、滲血、紅腫等炎癥反應(yīng)。手術(shù)切口處周圍組織無明顯化膿、積液、壞死等現(xiàn)象。肝臟、腎臟和未填塞組小鼠相比無明顯變化。結(jié)果表明，在植入馬鈴薯微孔淀粉止血?jiǎng)?d后，其中的微孔淀粉已基本被吸收，但伴有少量炎癥反應(yīng)。而在植入馬鈴薯微孔淀粉止血?jiǎng)?d后，其中的微孔淀粉已全部被吸收，無明顯炎癥反應(yīng)，手術(shù)切口處周圍組織愈合情況良好。(4)HE染色分析進(jìn)行植入止血?jiǎng)?d、6d、10d、14d后肝臟、腎臟和止血?jiǎng)┲踩胩幹車M織的HE染色。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，止血?jiǎng)┲踩?d后基本被完全吸收并開始降解，植入組織周圍有少量炎性細(xì)胞浸潤，止血?jiǎng)┲踩?d、10d、14d后被完全吸收，炎癥反應(yīng)消除，未見明顯纖維細(xì)胞包膜，肝、腎組織切片未見異常。通過以上細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)和股部植埋實(shí)驗(yàn)對(duì)止血?jiǎng)┻M(jìn)行了生物相容性評(píng)價(jià)研究，結(jié)果表明我們之輩的止血?jiǎng)┚哂辛己玫募?xì)胞相容性和組織相容性，可作為止血材料使用。3.止血?jiǎng)?duì)兔耳創(chuàng)面的止血效果(1)材料與方法成年健康的新西蘭大白兔12只(雌雄各半，體重2.0±0.2Kg)；干燥的快速止血?jiǎng)?，?shí)驗(yàn)室自制，其中每千克玉米微孔淀粉中加入100克甲殼素和200克殼聚糖以及1.8毫摩爾Ca(CH3COO)2·H2O和200微摩爾Zn(CH3COO)2；云南白藥；烏拉坦；一次性注射器；醫(yī)用酒精和碘伏。將新西蘭大白兔隨機(jī)分為3組(每組4只)，實(shí)驗(yàn)組(止血?jiǎng)┙M)，陽性對(duì)照組(云南白藥組)和陰性對(duì)照組。將新西蘭大白兔固定在解剖臺(tái)上，剪去耳部絨毛，耳緣靜脈消毒后緩慢注射10mL20％(w/v)烏拉坦溶液麻醉，后在大白兔耳部中央動(dòng)脈處用碘碘酒行消毒和醫(yī)用酒精進(jìn)行脫碘，后做一1cm2大小的創(chuàng)口，切斷中央動(dòng)脈并撕下表皮。動(dòng)脈血涌出后先用滅菌的醫(yī)用紗布吸收，然后將0.2g干燥的玉米微孔淀粉止血?jiǎng)┗蛟颇习姿幨┘佑趧?chuàng)面，施壓時(shí)用已滅菌的醫(yī)用紗布按壓止血，記錄完全止血時(shí)間。(2)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0分析軟件，組間差異采用單因素方差分析，P<0.01具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)結(jié)果我們制備的止血?jiǎng)┖驮颇习姿帉?duì)兔耳創(chuàng)面完全止血時(shí)間結(jié)果如表1所示。表1兔耳創(chuàng)面完全止血時(shí)間止血?jiǎng)?234平均時(shí)間/s自制止血?jiǎng)┙M9692869492±4云南白藥組222218212208215±6陰性對(duì)照組284304282294291±8SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析表明，在創(chuàng)傷處施加這種止血?jiǎng)┖笥冕t(yī)用紗布加壓的止血時(shí)間與單純用紗布加壓的止血時(shí)間相比具有顯著差異性(P<0.01)。在創(chuàng)傷處施加這種止血?jiǎng)┑闹寡獣r(shí)間和施加云南白藥的止血時(shí)間相比具有顯著差異性(P<0.01)。和目前市場上廣泛應(yīng)用的云南白藥相比，本申請的止血?jiǎng)┰谕枚鷦?chuàng)面的止血效果實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出更好的止血效果。在創(chuàng)面出血情況大致相同的情況下，這種止血?jiǎng)╊w粒間空隙和顆粒的多孔結(jié)構(gòu)能夠吸收大量血液，并且由于淀粉的凝膠作用，聚集的直鏈淀粉分子會(huì)把血液包含在部分締合的直鏈淀粉網(wǎng)中形成凝膠體，因而止血更加牢固。而云南白藥僅能依靠顆粒間的空隙吸收血液，因此止血效果不甚理想，并在血液凝固過程中時(shí)刻伴有小股滲血現(xiàn)象。4.止血?jiǎng)?duì)兔肝臟創(chuàng)面的止血效果(1)材料與方法成年健康的新西蘭大白兔12只(雌雄各半，體重2.0±0.2Kg)；干燥的快速止血?jiǎng)瑢?shí)驗(yàn)室自制，其中每千克玉米微孔淀粉中加入了100克甲殼素和200克殼聚糖以及1.8豪摩爾Ca(CH3COO)2·H2O和200微摩爾Zn(CH3COO)2；云南白藥；烏拉坦；一次性注射器；醫(yī)用酒精：寶雞市大明酒精有限責(zé)任公司；碘伏：陜西三木奇衛(wèi)生消毒用品有限公司。將新西蘭大白兔隨機(jī)分為3組(每組4只)，實(shí)驗(yàn)組(自制止血?jiǎng)?，陽性對(duì)照組(云南白藥組)和陰性對(duì)照組。首先將新西蘭大白兔固定在解剖臺(tái)上，耳緣靜脈消毒后緩慢注射10mL20％(w/v)烏拉坦溶液麻醉。剪去腹部絨毛，用碘酒進(jìn)行消毒，后用醫(yī)用酒精脫碘，逐層開腹并暴露肝臟。用手術(shù)刀在肝葉上做一1cm2創(chuàng)面，血液涌出后先用滅菌的醫(yī)用紗布吸收，然后將0.2g干燥的玉米微孔淀粉止血?jiǎng)┗蛟颇习姿幨┘佑趧?chuàng)面，施壓時(shí)用已滅菌的醫(yī)用紗布按壓止血，記錄完全止血時(shí)間。(2)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0分析軟件，組間差異采用單因素方差分析，P<0.01具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)結(jié)果自制止血?jiǎng)┖驮颇习姿帉?duì)兔耳創(chuàng)面完全止血時(shí)間結(jié)果如下表2所示。表2兔肝臟創(chuàng)面完全止血時(shí)間止血?jiǎng)?234平均時(shí)間/s自制止血?jiǎng)┙M4652544249±6云南白藥組132125134128130±8陰性對(duì)照組196216204208206±8SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析表明，自制止血?jiǎng)┑闹寡獣r(shí)間和用紗布加壓的止血時(shí)間相比具有顯著差異(P<0.01)。在創(chuàng)傷處施加自制止血?jiǎng)┑闹寡獣r(shí)間和施加云南白藥的止血時(shí)間相比具有顯著差異(P<0.01)。和目前市場上廣泛應(yīng)用的云南白藥相比，自制止血?jiǎng)┰谕酶蝿?chuàng)面的止血效果實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出更好的止血效果。止血時(shí)間表明，自制止血?jiǎng)?duì)實(shí)質(zhì)性臟器的止血效果更好。這是因?yàn)楹蛣?dòng)脈出血相比臟器出血多為隱蔽的毛細(xì)血管滲血，出血速度較慢，而玉米微孔淀粉止血?jiǎng)┲械奈⒖椎矸劭梢跃o密的粘附于創(chuàng)面并形成一層血痂，同時(shí)協(xié)助凝血因子發(fā)揮作用，最終達(dá)到快速止血的目的。同時(shí)結(jié)果表明，在兔肝創(chuàng)面的止血效果實(shí)驗(yàn)中，自制止血?jiǎng)┙M的肝臟表面干燥，這充分說明了自制止血?jiǎng)┚哂袠O強(qiáng)的吸水能力，玉米微孔淀粉在與血液接觸后能形成一層牢固的血痂而緊密粘附于創(chuàng)傷表面。而云南白藥組的肝臟表面時(shí)刻伴有滲血現(xiàn)象，止血效果并不理想。通過上述兔耳中央動(dòng)脈出血和肝臟創(chuàng)面出血兩個(gè)出血模型檢驗(yàn)自制止血?jiǎng)┑闹寡Ч?，表明這種止血?jiǎng)┑耐枚醒雱?dòng)脈的完全止血時(shí)間和兔肝臟創(chuàng)面的完全止血時(shí)間分別為92±4s和49±6s，均明顯優(yōu)于云南白藥組。5.止血?jiǎng)?duì)不同動(dòng)物的止血(1)小鼠和兔子用上述實(shí)施例2方法制備的止血?jiǎng)?，在小鼠和兔子的表淺皮膚割傷上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。在剃毛后的小鼠和兔子左前肢上制造出兩個(gè)一樣的割傷：長10毫米，深2毫米，相隔3厘米。吸去血液后，立即在一個(gè)傷口上噴灑本申請制備的止血?jiǎng)?，然后兩個(gè)傷口均加壓處理并記錄下每個(gè)傷口停止出血的時(shí)間，并分別在1天、3天、7天、15天、30天、45天和60天對(duì)傷口愈合情況進(jìn)行拍照。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，涂了這種止血?jiǎng)┑膫趲缀趿⒓淳湍軌蛑寡?，而未涂這種止血?jiǎng)┑膫诮?分鐘后才能止血；涂了這種止血?jiǎng)┑膫谠趦芍芫蛶缀跬耆掀秸?，而未涂這種止血?jiǎng)┑膫谠?-9周后才能完全愈合平整；(2)其它動(dòng)物用本發(fā)明制備的止血?jiǎng)┰谝幌盗胁溉閯?dòng)物身上進(jìn)行試驗(yàn)，其中包括豚鼠、雞、狗、豬、牛等，所試驗(yàn)的器官組織包括大腦、皮膚、肝臟、脊髓、腿骨小動(dòng)脈等部位。結(jié)果表明，采用這種止血?jiǎng)┋熜Х浅？欤軌蛟?00秒內(nèi)止住血液的流失。實(shí)施例2本實(shí)施例給出一種快速止血?jiǎng)?，其制備原料包括微孔淀粉、鈣離子和殼聚糖或甲殼素，每100g微孔淀粉中，殼聚糖或甲殼素加入量為1g，鈣離子加入量為10μmol，其中，殼聚糖或甲殼素可以單獨(dú)加入也可以混合加入。本實(shí)施例快速止血?jiǎng)┑臏y試方法同實(shí)施例1相同，所得結(jié)果如下：自制止血?jiǎng)┙M，云南白藥組和陰性對(duì)照組兔耳創(chuàng)面完全止血平均時(shí)間分別為(94±3)s，(217±4)s和(300±6)s，兔肝創(chuàng)面完全止血平均時(shí)間分別為(50±2)s，(131±3)s和(210±5)s。止血效果明顯優(yōu)于市售云南白藥，且對(duì)不同動(dòng)物傷口止血時(shí)間也均在100秒內(nèi)，止血效果明顯，且未引起傷口溫度升高。實(shí)施例3本實(shí)施例給出一種快速止血?jiǎng)?，其制備原料包括微孔淀粉、鈣離子和殼聚糖或甲殼素，每100g微孔淀粉中，殼聚糖或甲殼素加入量為50g，鈣離子加入量為500μmol，其中，殼聚糖或甲殼素可以單獨(dú)加入也可以混合加入。本實(shí)施例快速止血?jiǎng)┑臏y試方法同實(shí)施例1相同，所得結(jié)果如下：自制止血?jiǎng)┙M，云南白藥組和陰性對(duì)照組的兔耳創(chuàng)面與兔肝創(chuàng)面完全止血平均時(shí)間分別為(91±3)s和(51±1)s，(216±2)s和(133±4)s，(303±4)s和(213±4)s，止血效果明顯優(yōu)于市售云南白藥，對(duì)不同動(dòng)物傷口止血時(shí)間也均在100秒內(nèi)。此外，與實(shí)施例2相比，當(dāng)殼聚糖或甲殼素加入量增加至50g，鈣離子加入量增加至500μmol時(shí)，止血效果變化不明顯。實(shí)施例4本實(shí)施例給出一種快速止血?jiǎng)渲苽湓习ㄎ⒖椎矸?、鋅離子和殼聚糖或甲殼素，每100g微孔淀粉中，殼聚糖或甲殼素加入量為50g，鋅離子加入量為6μmol，其中，殼聚糖或甲殼素可以單獨(dú)加入也可以混合加入。本實(shí)施例快速止血?jiǎng)┑臏y試方法同實(shí)施例1相同，所得結(jié)果如下：自制止血?jiǎng)┙M，云南白藥組和陰性對(duì)照組兔耳創(chuàng)面完全止血平均時(shí)間分別為(90±2)s，(215±5)s和(298±3)s，兔肝創(chuàng)面完全止血平均時(shí)間分別為(48±2)s，(129±3)s和(208±5)s。止血效果明顯優(yōu)于市售云南白藥，且對(duì)不同動(dòng)物傷口止血時(shí)間也均在100秒內(nèi)，止血效果明顯，使傷口溫度能得到良好控制。實(shí)施例5本實(shí)施例給出一種快速止血?jiǎng)?，其制備原料包括微孔淀粉、鋅離子和殼聚糖或甲殼素，每100g微孔淀粉中，殼聚糖或甲殼素加入量為50g，鋅離子加入量為80μmol，其中，殼聚糖或甲殼素可以單獨(dú)加入也可以混合加入。本實(shí)施例快速止血?jiǎng)┑臏y試方法同實(shí)施例1相同，所得結(jié)果如下：自制止血?jiǎng)┙M，云南白藥組和陰性對(duì)照組的兔耳創(chuàng)面與兔肝創(chuàng)面完全止血平均時(shí)間分別為(89±3)s和(46±2)s，(213±4)s和(125±3)s，(296±6)s和(205±4)s，止血效果明顯優(yōu)于市售云南白藥，對(duì)不同動(dòng)物傷口止血時(shí)間也均在100秒內(nèi)。此外，與實(shí)施例2相比，當(dāng)鈣離子加入量從6μmol增加至500μmol時(shí)，止血效果未有明顯改善。對(duì)比例1按照實(shí)施例1中方法制備微孔淀粉止血?jiǎng)?，測定不含甲殼素或殼聚糖的微孔淀粉與含有不同劑量甲殼素、殼聚糖與鋅離子的微孔淀粉止血?jiǎng)┦褂们昂螅梭w皮膚表面?zhèn)跍囟茸兓?，結(jié)果如表3所示：表3微孔淀粉止血?jiǎng)┦褂们昂笕梭w皮膚傷口溫度變化情況微孔淀粉止血?jiǎng)┦褂们皞跍囟?℃)使用后傷口溫度(℃)(對(duì)比例)樣品124.3±0.338.2±0.6樣品224.6±0.227.1±0.3樣品325.1±0.426.8±0.4樣品424.5±0.526.3±0.6樣品525.2±0.626.5±0.5樣品625.4±0.326.2±0.3注：樣品1：不含任何添加劑的微孔淀粉；樣品2：每100g微孔淀粉含殼聚糖或甲殼素1g；樣品3：每100g微孔淀粉含殼聚糖或甲殼素1g，鈣離子10μmol；樣品4：每100g微孔淀粉含殼聚糖或甲殼素50g，鈣離子500μmol；樣品5：每100g微孔淀粉含殼聚糖或甲殼素50g，鋅離子6μmol；樣品6：每100g微孔淀粉含殼聚糖或甲殼素50g，鋅離子80μmol。由表3可得，止血?jiǎng)┦褂们?，人體皮膚溫度為24-26℃，當(dāng)使用不含添加劑的微孔淀粉進(jìn)行止血時(shí)，傷口溫度升高至38.2℃，高于人體正常體溫，雖然止血迅速，但產(chǎn)生疼痛感明顯增加；當(dāng)微孔淀粉中加入不同濃度殼聚糖、甲殼素、鈣離子和鋅離子時(shí)，傷口表面溫度基本不變，處于26.2-27.1℃范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3