本發(fā)明涉及一種中藥組合物，特別涉及一種制備預防小兒哮喘復發(fā)藥物的中藥組合物及應用。

(二)

背景技術：

支氣管哮喘是兒童常見慢性氣道變態(tài)反應性疾病，臨床主要表現為氣道高反應性、氣流受限、肺功能降低，病理特征為慢性氣道炎癥和氣道重塑，導致疾病遷延難愈且反復急性發(fā)作。盡管哮喘一直是呼吸道疾病研究熱點之一，但其治療效果一直不盡人意。中醫(yī)治療哮喘有悠久的歷史。中醫(yī)學認為小兒哮喘屬“哮病”、“喘證”范疇，肺、脾、腎三臟虧虛是哮喘發(fā)病的內因。針對小兒哮喘緩解期的治療多以扶正為主，涉及臟腑主要為肺、脾、腎三臟。《景岳全書·喘促》曾指出:“此等證候，當惓惓以元氣為念，必使元氣漸充，庶可望其漸愈?！奔粗挥型ㄟ^扶正固本，才能使“元氣漸充”，達到根治目的。

李香玉等運用王烈教授經驗方(防哮方)治療哮喘穩(wěn)定期患兒取得較好療效。中藥組方組成：黃芪20g、玉竹20g、太子參5g、女貞子20g、補骨脂20g、五味子5g、牡蠣20g、大棗20g、佛手10g、山藥20g，熟地黃20g、制何首烏20g、海螵蛸20g。吳疆運用參苓白術散加味方治療哮喘緩解期患兒取得較好療效。參苓白術散加味方組成：白術15g，茯苓15g，山藥10g，蓮子10g，薏苡仁10g，扁豆10g，砂仁8g，太子參20g，防風10g，桔梗10g，黃芪15g，炙甘草6g。朱永琴等運用冬令扶正膏治療哮喘緩解期患兒，結果顯示具有較好的抗復發(fā)作用。冬令扶正膏藥物組成：太子參、云茯苓、炒白術、姜半夏各100～200g，生甘草、廣陳皮、青防風、陽春砂各30～60g，生黃芪150～200g，當歸100～150g，淮山藥、津紅棗各200g，石菖蒲60～100g，陳阿膠、陳黃酒、晶冰糖250g，制成冬令膏方，服用一個月。蒲春陽等運用固本止喘膏治療支氣管哮喘緩解期患兒，結果顯示能有效改善臨床癥狀，有效降低總IgE及EOS水平，并能降低哮喘發(fā)作次數。目前，文獻報道的治療方法基本從“肺、脾、腎三臟虧虛”的角度考慮的治療方法，尚未有從“肺、肝、脾”角度考慮治療哮喘緩解期的報道。

秦妍濱等檢索了2004年1月至2013年12月公布在索中華人民共和國國家知識產權局網站(http://www.sipo.gov.cn)有關抗哮喘中藥專利的相關數據，檢索結果顯示：共有662項抗哮喘中藥專利，涉及5個國家，其中，中國有654項，占98.8％。韓國4項，日本2項，瑞典和新加坡各1項。在這662項抗哮喘中藥專利中，82.3％(545/662)為傳統(tǒng)中藥劑型，制成中藥丸占5.9％(39/662)，吸入劑占3.1％(20/662)，外用占4.7％(31/662)，食入占4.1％(27/622)。其中48項傳統(tǒng)中藥劑型在方劑中進行了辨證，主要為寒性哮喘、熱性哮喘和各種虛證哮喘。治療虛型哮喘的11個專利包括：腎陽虛哮喘、腎虛型哮喘、陽虛哮喘、陰虛哮喘、氣虛型哮喘5個證型，但是沒有治療“氣陰兩虛型”哮喘的專利。

結合小兒“陽常有余，陰常不足”、“肝常有余、肺常不足、脾常不足”的生理特征，浙江省名中醫(yī)、全國名老中醫(yī)藥專家學術經驗繼承指導老師宣桂琪教授從“肺、肝、脾”角度考慮，采用益氣養(yǎng)陰法擬定了具益氣養(yǎng)陰、補肺固表、平肝健脾之效的“宣氏防哮方”并在臨床治療氣陰不足型兒童緩解期哮喘中取得良好效果。

(三)

技術實現要素：

本發(fā)明目的是提供一種中藥組合物及其制備方法與應用。從“肺、肝、脾”角度考慮，為臨床治療氣陰不足型兒童緩解期哮喘提供了有效的治療方法。填補了目前臨床上治療氣陰兩虛型兒童哮喘有效治療手段的空白，解決了現有治療方法中：重視肺脾氣虛而忽略肝陰不足的問題，并創(chuàng)制了一種治療氣陰兩虛型兒童哮喘的有效膏方新制劑。

本發(fā)明采用的技術方案是：

本發(fā)明提供一種中藥組合物，所述中藥組合物由如下質量配比的原料制成：南沙參50～100份、北沙參50～100份、麥冬50～80份、地骨皮30～80份、生白芍50～90份、生石決明100～150份、太子參60～150份、白術60～90份、茯苓100～150份、陳皮50～90份、姜半夏60～80份、蟬衣30～60份和紫草30～60份。

進一步，優(yōu)選所述中藥組合物由如下質量配比的原料制成：南沙參60～100份、北沙參60～100份、麥冬60～80份、地骨皮50～80份、生白芍60～90份、生石決明100～150份、太子參90～150份、白術60～90份、茯苓100-150份、陳皮60～90份、姜半夏60～80份、蟬衣50～60份和紫草50～60份。

更進一步，優(yōu)選所述中藥組合物由如下質量配比的原料制成：南沙參60份、北沙參60份、麥冬60份、地骨皮50份、生白芍60份、生石決明100份、太子參150份、白術60份、茯苓100份、陳皮60份、姜半夏70份、蟬衣50份和紫草50份。

本發(fā)明所述中藥組合物是由配方量各原料加水煎煮后獲得的煎煮液經濃縮制成的浸膏。

進一步，所述中藥組合物為膏方，所述膏方由中藥組合物與藥用輔料制成，所述藥用輔料為阿膠、黃酒及冰糖中的一種或多種的混合。

進一步，所述膏方制備方法為：將中藥組合物與藥用輔料混合，煎成膏方；所述藥用輔料由阿膠、黃酒和冰糖以質量比1:1:1組成；所述中藥組合物用量以浸膏總量計，所述藥用輔料與浸膏質量比為2～3：1。

本發(fā)明還提供一種所述中藥組合物的制備方法，所述制備方法為：按配方量，將各原料加冷水浸泡12～24h后，水煎提取2～4次，每次先文火煎煮至藥充分膨脹、再煮沸，保持沸騰1～2h，合并煎汁，將殘渣壓榨、過濾得到壓榨液；將煎汁與壓榨液合并，靜置沉淀2h，過濾，取澄清液，濃縮物浸膏，即為中藥組合物(生藥量為4g/ml)。

此外，本發(fā)明還提供一種所述中藥組合物在制備預防小兒哮喘復方藥物中的應用。

根據小兒陰常不足，陽常有余的生理特點，臨床發(fā)現：哮喘反復發(fā)作的患兒，陰虛火旺的體質逐年增多。同時，“小兒肺常不足，肝常有余，脾常不足，腎常虛”的生理特點，哮喘反復發(fā)作患兒，氣陰兩虛型的比例逐年增高。本型患兒既有肺陰不足，陰虛火旺的表現(喉間少痰，咽紅不腫，五心煩熱，夜寐汗出，盜汗較多，大便偏干，舌紅苔薄光剝，脈弦數)，又有肺脾氣虛的表現(哮喘反復發(fā)作，納食欠佳，面色欠華，精神欠佳)，治療上以南北沙參、麥冬養(yǎng)陰潤肺；地骨皮清虛熱；白芍配石決明養(yǎng)肝陰平肝熱，以防肝火犯肺，木火刑金而致肺熱難清；太子參、白術、茯苓益氣健脾；陳皮、姜半夏健脾以祛“伏痰”；蟬衣、紫草祛風脫敏，上藥共湊益氣養(yǎng)陰、補肺固表、平肝健脾的作用。

與現有技術相比，本發(fā)明有益效果主要體現在：

傳統(tǒng)治療方法基本從“肺、脾、腎三臟虧虛”的角度考慮的治療方法，尚未有從“肺、肝、脾”角度考慮治療哮喘緩解期。本發(fā)明結合了小兒“陽常有余，陰常不足”、“肝常有余、肺常不足、脾常不足”的生理特征，從“肺、肝、脾”角度考慮，采用益氣養(yǎng)陰法擬定了具益氣養(yǎng)陰、補肺固表、平肝健脾之效的藥物組合，并在臨床運用，取得良好效果。本發(fā)明的藥物組合，除了常用的益氣、健脾、化痰藥物：太子參、白術、茯苓、陳皮、姜半夏外，加用養(yǎng)肝平肝的白芍、石決明。同時，根據哮喘的病機，加用了具有祛風脫敏，抗過敏作用的蟬衣、紫草。

(四)附圖說明

圖1肺組織病理學改變HE染色圖，光鏡×200，A為正常對照組，B為哮喘模型組，C為中藥組合物低劑量組，D為中藥組合物中劑量組，E為中藥組合物高劑量組，F為地塞米松組。

圖2氣道形態(tài)學參數的變化圖，a為肺組織切片平滑肌標化面積WAm/Pbm，b為肺組織切片內管壁標化面積WAi/Pbm；A為正常對照組，B為哮喘模型組，C為中藥組合物低劑量組，D為中藥組合物中劑量組，E為中藥組合物高劑量組，F為地塞米松組，與正常對照組比較，^*P<0.05；與哮喘模型組比較，^#P<0.05；與地塞米松組比較，^△P<0.05。

圖3大鼠肺組織中TGF-β₁(a)、Smad2(b)、Smad 3(c)mRNA的擴增曲線。

圖4大鼠肺組織中TGF-β₁(a)、Smad2(b)、Smad 3(c)mRNA的溶解曲線。

圖5大鼠肺組織中TGF-β₁(a)、Smad2(b)、Smad 3(c)mRNA表達水平，A為正常對照組，B為哮喘模型組，C為中藥組合物低劑量組，D為中藥組合物中劑量組，E為中藥組合物高劑量組，F為地塞米松組。

圖6各組大鼠肺組織中Smad2/3磷酸化水平，a為P-Smad2表達量，b為P-Smad3表達量；A為正常對照組，B為哮喘模型組，C為中藥組合物低劑量組，D為中藥組合物中劑量組，E為中藥組合物高劑量組，F為地塞米松組。

圖7肺組織P-Smad2/3蛋白表達圖，用Western-blot法檢測獲得的P-Smad2/3蛋白表達圖；A為正常對照組，B為哮喘模型組，C為中藥組合物低劑量組，D為中藥組合物中劑量組，E為中藥組合物高劑量組，F為地塞米松組。

(五)具體實施方式

下面結合具體實施例對本發(fā)明進行進一步描述，但本發(fā)明的保護范圍并不僅限于此：

本發(fā)明實施例所用藥物均按照《中國藥典》2015版采集制備。

實施例1

(1)中藥組合物配方：南沙參100克、北沙參100克、麥冬80克、地骨皮80克、生白芍80克、生石決明100克、太子參150克、白術70克、茯苓100克、陳皮60克、姜半夏80克、蟬衣60克，紫草50克。

(2)中藥組合物的制備：

按配方量，將各原料加水浸泡(冷水)，水埋過藥面10～20cm(即水面高出藥面10～20cm)，浸泡12～24h后，水煎提取2～4次，每次先文火煎煮至藥充分膨脹、再煮沸，保持沸騰1～2h，合并煎汁，將殘渣壓榨、過濾得到壓榨液；將煎汁與壓榨液合并，靜置沉淀2h，過濾，取澄清液555ml，生藥量為2g/ml；

(3)膏方

將步驟(2)制備的澄清液555ml煮沸、去浮沫，文火煎煮濃縮至浸膏250g，浸膏邊攪拌邊加入用250克黃酒洋化的阿膠250克，冰糖250克，不斷攪拌直至收膏，獲得膏方1000g。

(4)膏方服用方法

冬至前后起每日服用該膏方1～2次，每次10克，溫開水沖服，30～50天服完1料，為1療程，并隨訪12個月。中途哮喘發(fā)作者，停藥按發(fā)作期處理，待緩解后繼續(xù)服用膏方。

實施例2

配方：南沙參60g、北沙參70g、麥冬70g、地骨皮50g、生白芍70g、生石決明120g、太子參60g、白術60g、茯苓120g、陳皮70g、姜半夏60g、蟬衣40g、紫草40g。按實施例1方法制備，獲得澄清液445ml，生藥量為2g/ml。

實施例3

配方：南沙參50g、北沙參50g、麥冬50g、地骨皮30g、生白芍50g、生石決明150g、太子參105g、白術90g、茯苓150g、陳皮90g、姜半夏70g、蟬衣30g、紫草30g。按實施例1方法制備，獲得澄清液473ml，生藥量為2g/ml。

實施例4

1、實驗操作

1)實驗動物及分組

48只SD大鼠隨機分為正常對照組、哮喘模型組、中藥組合物低、中、高劑量組、地塞米松組，每組8只。以卵白蛋白(OVA)致敏及激發(fā)制備大鼠慢性哮喘模型，除正常對照組外各組分別于第1天、第8天分別在大鼠兩腹股溝、前后足趾皮下注射新鮮配制的OVA生理鹽水致敏液(1mL生理鹽水含OVA 10mg，氫氧化鋁200mg)0.2mL，同時腹腔注射0.2mL。正常對照組用等量生理鹽水致敏。第15天，將大鼠置于透明密閉容器中，以不同OVA質量濃度的OVA生理鹽水溶液進行霧化吸入激發(fā)(第1、2周用1％濃度，第3、4周用1.5％濃度，第5、6周用2％濃度，第7、8周用2.5％濃度)，每次霧化30min，隔天1次，連續(xù)8周。正常對照組用等量生理鹽水激發(fā)。第12周開始給藥。

2)給藥方法

實驗第12周開始灌胃給藥。給藥劑量根據體表面積法折算，大鼠等效給藥量(g/kg)＝6.25×成人給藥量(g/kg)。實施例1方法制備的中藥組合物低、中、高劑量組：以等效給藥量的0.5倍、1倍、2倍給藥，即中藥組合物低劑量組1.25g/(kg·d)(相當于生藥量1.39g/(kg·d))、中藥組合物中劑量組2.5g/(kg·d)(相當于生藥量2.78g/(kg·d))、中藥組合物高劑量組5g/(kg·d)(相當于生藥量5.55g/(kg·d))；地塞米松組：0.5mg/(kg·d)；正常對照組與哮喘模型組：生理鹽水10ml/(kg·d)。每天灌胃給藥1次，連續(xù)14天。

3)觀察指標

觀察各組大鼠一般情況，HE染色光鏡下觀察肺組織形態(tài)學變化，德國Leica公司的病理圖像分析系統(tǒng)檢測氣道形態(tài)學參數，實時熒光定量PCR法(Real-Time PCR)檢測肺組織TGF-β1、Smad2/3 mRNA的表達水平，蛋白質印跡法(Western-blot)檢測肺組織P-Smad2/3蛋白表達量。

表1、RT-PCR法檢測TGF-β₁、Smad2/3 mRNA的表達水平所用引物序列及擴增長度

2、結果

1)肺組織病理學改變

(1)正常對照組(圖1中A)：肺組織結構清晰，管腔通暢，管壁厚度正常，上皮組織結構清晰，細胞排列整齊無脫落，氣道平滑肌厚度正常，黏膜無腫脹、充血，肺泡結構清晰完整，無萎陷，肺間質無明顯炎性細胞浸潤。

(2)哮喘模型組(圖1中B)：氣管壁明顯增厚，管腔狹窄，上皮組織增生、脫落，黏膜腫脹、充血，黏膜下細胞外基質沉積，氣道平滑肌增厚，肺泡萎陷，肺泡間隔增厚，肺間質大量炎性細胞浸潤(嗜酸性粒細胞和淋巴細胞為主)，血管壁增厚。

(3)中藥組合物低、中、高劑量治療組(圖1中C、D、E)：與哮喘模型組比較，中藥低劑量組病理改變無明顯減輕，中、高劑量組病理改變不同程度減輕，其中中藥高劑量組最為明顯，支氣管管腔無明顯狹窄，氣管壁增厚不明顯，上皮組織結構輕度模糊，少量上皮細胞脫落，粘膜腫脹、充血較模型組減輕，粘膜下細胞外基質沉積減少，氣道平滑肌輕度增厚，肺泡結構清晰，無明顯萎陷，部分肺泡結構不完整，肺泡間隔輕度增厚，肺間質可見少量炎性細胞浸潤。

(4)地塞米松組(圖1中F)：肺組織結構清晰，管腔未見明顯狹窄，管壁厚度基本正常，上皮組織結構清晰，細胞排列整齊，少許上皮細胞脫落，氣道平滑肌厚度基本正常，黏膜無明顯腫脹、充血，肺泡結構清晰，擴張良好，部分肺泡結構不完整，肺間質無明顯炎性細胞浸潤。

2)氣道形態(tài)學參數變化

與正常對照組比較，哮喘模型組肺組織切片平滑肌標化面積WAm/Pbm、內管壁標化面積WAi/Pbm數值明顯增高，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；各治療組與哮喘模型組比較WAm/Pbm、WAi/Pbm明顯降低(P<0.05)；與地塞米松組比較，中藥組合物低、中劑量組WAm/Pbm、WAi/Pbm均大于地塞米松組，且差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，中藥高劑量組降低程度與地塞米松組無明顯差異(P>0.05)。結果見表1、圖2。

表1 各組氣道形態(tài)學參數的變化μm²/μm)

注：與正常對照組比較，^*P<0.05；與哮喘模型組比較，^#P<0.05；與地塞米松組比較，^△P<0.05。

3)各組肺組織TGF-β1、Smad2/3 mRNA表達水平

根據擴增曲線(圖3)及溶解曲線(圖4)，正常對照組、哮喘模型組和各治療組的肺組織的目的基因擴增良好，引物特異性好。結果見表2、圖3、圖4。

1.TGF-β₁ mRNA表達水平比較(圖5中a)：與正常對照組比較，哮喘模型組TGF-β₁mRNA表達水平顯著升高(P<0.05)；與哮喘模型組比較，各治療組表達水平均明顯下降，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；中藥中、高劑量組TGF-β₁ mRNA的表達水平與地塞米松組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2.Smad2 mRNA表達水平比較(圖5中b)：與正常對照組比較，哮喘模型組Smad2 mRNA表達水平顯著升高(P<0.05)；與哮喘模型組比較，各治療組Smad2 mRNA表達水平均明顯下降，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；中藥高劑量組Smad2 mRNA的表達水平與地塞米松組接近，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

3.Smad3 mRNA表達水平比較(圖5中c)：與正常對照組比較，哮喘模型組Smad3 mRNA表達水平顯著升高(P<0.01)；與哮喘模型組比較，各治療組Smad3 mRNA表達水平均明顯下降，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；中藥中、高劑量組Smad3 mRNA的表達水平與地塞米松組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表2 各組大鼠肺組織中TGF-β₁、Smad2/3 mRNA表達水平

注：與正常對照組比較，*P<0.05；與哮喘模型組比較，^#P<0.05，與地塞米松組比較，^△P<0.05。

4)各組肺組織Smad2/3磷酸化水平

1.P-Smad2表達量比較(圖6中a，圖7)：與正常對照組相比，哮喘模型組及各治療組P-Smad2表達均顯著升高(P<0.05)；與哮喘模型組相比，中藥低劑量組P-Smad2表達量下降不明顯(P>0.05)，而中藥中、高劑量組及地塞米松組均顯著下降(P<0.05)；與地塞米松組相比，各中藥治療組P-Smad2表達量均高于地塞米松組，且具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.P-Smad3表達量比較(圖6中b，圖7)：與正常對照組相比，哮喘模型組及各治療組P-Smad3表達均顯著升高(P<0.05)；與哮喘模型組相比，中藥低、中、高劑量組及地塞米松組P-Smad3表達量均顯著下降(P<0.05)；與地塞米松組相比，各中藥治療組P-Smad3表達量均高于地塞米松組，且具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結果見表3、圖6和圖7。

表3 各組大鼠肺組織中Smad2/3磷酸化水平

注：與正常對照組比較，^*P<0.05；與哮喘模型組比較，^#P<0.05；與地塞米松組比較，^△P<0.05。