本發(fā)明涉及酵素制備
技術(shù)領(lǐng)域：
，還涉及該酵素在護膚品領(lǐng)域的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：隨著我國社會經(jīng)濟的健康發(fā)展，人們對個人形象方面愈發(fā)的關(guān)注，人類健康的肌膚是滋潤、細膩、柔軟、富有彈性和光澤，具有天然的保護功能，但隨著年齡的增長，色素沉著自由基的積累，使得皮膚黯淡、衰老、失去光澤和彈性。因此抗氧化抗衰老的化妝品有著深遠的市場前景。木槿，為錦葵科木槿屬落葉灌木或小喬，其花、果、根、葉和皮均可入藥。木槿花不僅有觀賞價值，而且具有使用和藥用價值，木槿葉的要用價值在我國早有記載。但木槿花在美容方面的應(yīng)用較少，木槿花酵素在抗衰老抗自由基方面更少。根據(jù)文獻記載，每100g木槿花中含水分92g蛋白質(zhì)2.8g，脂肪0.3g，糖類3.26g，熱量133.98kJ，灰分1.2g，粗纖維0.8g，鈣14mg、磷56mg、鐵1.2mg，此外還有胡蘿卜素、氨基酸、黃酮類以及多種維生素等，具有優(yōu)越的清除自由基、抗氧化、保濕抗皺等護膚作用，是極佳的護膚原材料。目前對于木槿花中活性成分的提取分離研究甚少，且提取方法中較多使用有機溶劑，提取物中有機溶劑的殘留以及處理使其成為提取過程中一種缺陷，提取效率不甚理想，造成了原材料的浪費，不能充分提取木槿花中的抗衰老和護膚成分，同時污染環(huán)境；植物發(fā)酵在獲得所需要發(fā)酵產(chǎn)物同時，保證能夠發(fā)酵產(chǎn)物的安全性以及不產(chǎn)生對環(huán)境有害的物質(zhì)，發(fā)酵產(chǎn)物也不會對人體產(chǎn)生危害。用發(fā)酵工藝對木槿花進行發(fā)酵處理，提高木槿花原料的利用率，避免了原材料的浪費，同時提高了氨基酸、黃酮類等活性物的產(chǎn)量，并且控制了木槿花酵素的分子量，有效提高了活性物成分在皮膚上吸收率。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種木槿酵素的制備方法，還提供該方法制備的木槿酵素的應(yīng)用。本發(fā)明制備的木槿酵素能夠明顯提高產(chǎn)物中的氨基酸和黃酮的含量，具有更顯著的抗衰老、保濕、以及恢復(fù)皮膚彈性的效果。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)：一種木槿酵素的制備方法，制備步驟為：（1）將木槿花、木槿葉、木槿莖按照30-50：10-20：10-20的重量份數(shù)比清洗后搗碎，烘干，過篩；（2）將步驟（1）所得物料采用紫外燈照射法進行滅菌處理，照射時常為30-60min；（3）將步驟（2）所得物料放入發(fā)酵桶中，加入無菌水，攪拌均勻，將溫度控制在27℃-37℃，調(diào)節(jié)pH值至5-7；（4）加入枯草芽孢桿菌0.7-1.2份、氮源5-10份、碳源0.5-3份、質(zhì)量百分比濃度為1%的無機鹽溶液0.01-0.2份發(fā)酵；（5）將步驟（4）所得物料加入酵母菌0.2-0.4份，和乳酸菌1.3-1.8份繼續(xù)進行發(fā)酵，發(fā)酵過程中避免光照，控制搖床轉(zhuǎn)速150-200rpm，發(fā)酵7-10天，直至發(fā)酵桶內(nèi)無新氣泡產(chǎn)生；（6）發(fā)酵結(jié)束進行滅菌處理后，離心過濾出發(fā)酵液和濾渣，得到粗發(fā)酵液；（7）用超濾膜過濾粗發(fā)酵液，得到木槿酵素溶液。進一步的，所述木槿花為花瓣完整，色澤艷麗新鮮并且盛開期的木槿花。進一步的，步驟（4）所述碳源為葡萄糖、乳糖、蔗糖中的一種或多種。進一步的，步驟（4）所述氮源為尿素、NH4Cl中的一種或兩種。進一步的，步驟（4）中的無機鹽溶液為下列溶液的1%水溶液：MgSO4溶液、Na2HPO4溶液,K2SO4溶液,MnSO4溶液中的一種或幾種。進一步的，步驟（4）中枯草芽孢桿菌發(fā)酵時長為12-28小時。進一步的，步驟（4）中發(fā)酵時長優(yōu)選為20小時。進一步的，步驟（6）所述滅菌處理，是將超聲波細胞粉碎儀的超聲波發(fā)生器置于混合液中，超聲功率400-600w，頻率為50-100KHz，工作10-20秒，間隔時間10秒，總超聲時間為20-30min，進行細胞破壁。步驟（7）所述的超濾膜截流分子量小于10000Da。一種上述制備方法制備的木槿酵素在個人護理組合物中的應(yīng)用。本發(fā)明具有如下有益效果：1.選取選用盛開期的木槿花，花瓣中還原糖以及黃酮的含量最高，能夠有效提高制備木槿酵素的質(zhì)量。同時使用木槿葉、木槿莖作為發(fā)酵原料，是因為木槿葉、木槿莖中也含有豐富的氨基酸、黃酮等營養(yǎng)物質(zhì)。2．發(fā)酵步驟中加入枯草芽孢桿菌能為后續(xù)的加入的乳酸菌、酵母菌發(fā)酵提供蛋白酶，優(yōu)選了枯草芽孢桿菌的發(fā)酵時長，提高了枯草芽孢桿菌存活率減少了菌種用量以及增加了蛋白酶的產(chǎn)率，從而提高木槿酵素中氨基酸和黃酮的含量。3．無機鹽、碳源、氮源的加入提高了菌種的存活時間，提高了酵素的活性物含量。通過超聲波進行細胞破壁，保留了發(fā)酵過程中合成分泌的活膚成分以及胞內(nèi)活性產(chǎn)物。其中，無機鹽是微生物生命物質(zhì)的必要成分，適量添加無機鹽可以促進微生物的生長，同時也可以促進微生物分泌多種酶類和營養(yǎng)物質(zhì)。4.通過用超濾膜控制通過產(chǎn)物的分子量范圍，優(yōu)化了木槿酵素質(zhì)量，使產(chǎn)物更易被皮膚吸收利用。5.在生產(chǎn)工藝上利用生物發(fā)酵技術(shù)，不使用任何有機溶劑，同時避免了發(fā)酵過程和提取工程中對環(huán)境的污染問題。具體實施方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明進行詳細的說明，實施例僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，不是對本發(fā)明的限定。實施例1一種木槿酵素的制備方法，制備步驟為：（1）將木槿花、木槿葉、木槿莖按照35：18：13的重量份數(shù)比清洗后搗碎，烘干，過200m篩網(wǎng)；其中木槿花選用花瓣完整，色澤艷麗新鮮并且盛開期的木槿花；（2）將步驟（1）所得物料采用紫外燈照射法進行滅菌處理，照射時常為30-60min；（3）將步驟（2）所得物料放入發(fā)酵桶中，加入無菌水，攪拌均勻，將溫度控制在27℃-37℃，調(diào)節(jié)pH值至5-7；（4）加入枯草芽孢桿菌0.9重量份、氮源（尿素）5重量份、碳源（葡萄糖）0.5重量份、質(zhì)量百分比濃度為1%的無機鹽溶液（MgSO4溶液）0.01重量份發(fā)酵20h；（5）將步驟（4）所得物料加入酵母菌0.3重量份和乳酸菌1.5重量份繼續(xù)進行發(fā)酵，發(fā)酵過程中避免光照，控制搖床轉(zhuǎn)速150-200rpm，發(fā)酵7-10天，直至發(fā)酵桶內(nèi)無新氣泡產(chǎn)生；（6）發(fā)酵結(jié)束進行滅菌處理后，離心過濾出發(fā)酵液和濾渣，得到粗發(fā)酵液；其中滅菌處理，具體是將超聲波細胞粉碎儀的超聲波發(fā)生器置于混合液中，超聲功率400-600w，頻率為50-100KHz，工作10-20秒，間隔時間10秒，總超聲時間為20-30min，進行細胞破壁。（7）用截流分子量小于10000Da的超濾膜過濾粗發(fā)酵液，得到木槿酵素溶液。對比例1對比例1的制備工藝與實施例1相同，但對比例1過程中不添加無機鹽溶液。對比例2對比例2的制備工藝與實施例1相同，但對比例2過程中枯草芽孢桿菌與乳酸菌、酵母菌是同時加入，即步驟（4）和（5）合并，三種菌同時加入，同時發(fā)酵。表1為實施例和對比例所的酵素的氨基酸和黃酮含量測試結(jié)果。試驗編號氨基酸含量（mg/g）黃酮含量（mg/g）實施例11.230.608對比例10.850.481對比例21.020.340可見，實施例1所得酵素種的氨基酸含量和黃酮含量明顯高于對比例1和對比例2，可見，在發(fā)酵過程中加入無機鹽和在發(fā)酵過程中先加入枯草芽孢桿菌先發(fā)酵一段時間再加入酵母菌和乳酸菌，能夠顯著提高所得酵素種的氨基酸含量和黃酮含量。實施例2一種添加有實施例1制備的木槿酵素的膏霜，其制備方法如下：1.將油相：硬脂酸甘油酯/PEG-100硬脂酸酯、辛酸/癸酸甘油三酯、乳木果油，稱量，加熱至75-80℃；2.將水相：甘油與卡波姆，混合分散，加入純水，攪拌加熱值75-80℃；3.將油相倒入水相當中，用均質(zhì)機均質(zhì)5min，均質(zhì)速率為4000r/min4.均質(zhì)結(jié)束后攪拌冷卻至60℃，加入pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)至6.0；5.冷卻降溫至25-30℃，加入實施例1所得木槿酵素，繼續(xù)攪拌至均勻，得到含有木槿酵素的護膚膏霜。對比例3的制備方法與實施例2相同，其中用粗提取木槿酵素（即實施例1步驟（6）所得粗發(fā)酵液）代替木槿酵素；對比例4的制備方法與實施例2相同，其中用采用常規(guī)的超聲提取技術(shù)提取的木槿花提取液代替木槿花酵素；對比例5的制備方法與實施例2相同，其中用市售的具有抗衰老和保濕宣稱的組合物代替木槿酵素；表2實施例2、對比例3、對比例4、對比例5的配方組成（單位：重量份）原料成分實施例2對比例3對比例4對比例5PEG-100硬脂酸酯/硬脂酸甘油酯2222辛酸/癸酸甘油三酯5555乳木果油2222卡波姆0.50.50.50.5甘油5555防腐劑0.60.60.60.6pH0.150.160.170.17木槿花提取液\\2\木槿酵素2\\\市售抗衰老組合物\\\2粗提取木槿酵素\2\\水82.7582.7482.7382.73對所得樣品進行功效評估測試，挑選25-35歲女性志愿者，每組40人，早晚使用，每人連續(xù)使用28天后，用多功能皮膚測試儀分析受試者皮膚，并進行數(shù)據(jù)分析，得出表3的功效測試結(jié)果。表3實施例2、對比例3、對比例4、對比例5的功效測試結(jié)果對比項目空白組實施例2對比例3對比例4對比例5眼周皮膚細紋修復(fù)有效率0%95%75%72.5%65%眼周皮膚水份平均增率12.5%29.5%19.5%22.3%25.3%眼周皮膚彈性增幅0.23%7.83%5.23%6.02%6.58%從表3的結(jié)果對比可以看出，本發(fā)明的木槿酵素比木槿花提取液以及市售產(chǎn)品具有更有效的抗衰老、保濕、以及恢復(fù)皮膚彈性效果。且經(jīng)過超濾膜過濾出的木槿酵素相對粗濾液有更明顯的效果。當前第1頁1 2 3