本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及構(gòu)建兔創(chuàng)傷止血?jiǎng)游锬Ｐ偷姆椒ê屠迷搫?dòng)物模型評(píng)價(jià)止血產(chǎn)品的方法。

背景技術(shù)：

目前市場(chǎng)上有很多用于止血的產(chǎn)品，但是對(duì)于這些止血產(chǎn)品的使用評(píng)價(jià)則沒(méi)有統(tǒng)一的規(guī)定。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明旨在至少在一定程度上解決相關(guān)技術(shù)中的技術(shù)問(wèn)題之一。為此，本發(fā)明的一個(gè)目的在于提出構(gòu)建兔創(chuàng)傷止血?jiǎng)游锬Ｐ偷姆椒ê屠迷搫?dòng)物模型評(píng)價(jià)止血產(chǎn)品的方法，利用該兔創(chuàng)傷止血?jiǎng)游锬Ｐ涂梢杂行У貙?duì)止血產(chǎn)品進(jìn)行評(píng)價(jià)，進(jìn)而為止血藥物的篩選和評(píng)價(jià)提供可靠依據(jù)。

為此，在本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明提出了一種構(gòu)建兔創(chuàng)傷止血?jiǎng)游锬Ｐ偷姆椒ā８鶕?jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該方法包括：將兔禁食不禁水24h；將所述兔進(jìn)行稱重和麻醉處理；將經(jīng)過(guò)所述麻醉處理的所述兔左側(cè)臥，暴露右側(cè)，于肝臟相應(yīng)部位進(jìn)行備皮處理；沿右側(cè)最后肋骨平行處切口3～6cm，鈍性分離腹外斜肌和內(nèi)斜肌，暴露并剪開(kāi)腹膜，暴露肝臟；以及于右葉肝臟的壁面切出小方口，剝離表層，形成出血?jiǎng)?chuàng)面，以便得到兔創(chuàng)傷止血?jiǎng)游锬Ｐ汀?/p>

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過(guò)采用上述構(gòu)建兔創(chuàng)傷止血?jiǎng)游锬Ｐ偷姆椒?，所獲得的動(dòng)物模型可以有效地對(duì)多種止血產(chǎn)品進(jìn)行測(cè)試評(píng)價(jià)，從而對(duì)止血產(chǎn)品的止血性能進(jìn)行評(píng)價(jià)，對(duì)止血產(chǎn)品的研發(fā)提供指導(dǎo)。

另外，根據(jù)本發(fā)明上述實(shí)施例的構(gòu)建兔創(chuàng)傷止血?jiǎng)游锬Ｐ偷姆椒ㄟ€可以具有如下附加的技術(shù)特征：

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述兔的體重為2.8～3.2kg。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述麻醉處理包括：采用3wt％戊巴比妥鈉溶液按照0.5mL/kg的劑量對(duì)所述兔進(jìn)行第一靜脈注射；于3min后采用陸眠寧II按照0.1mL/kg的劑量對(duì)所述兔進(jìn)行第二靜脈注射。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述備皮處理得到的備皮區(qū)域?yàn)?cm×15cm。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，沿右側(cè)最后肋骨平行處切口長(zhǎng)度為3～6cm，優(yōu)選5cm。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述小方口的大小為1cm×1cm。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，剝離所述表層3～4mm。

在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提出了一種用于評(píng)價(jià)止血產(chǎn)品的方法。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該方法包括：根據(jù)前面所述的方法構(gòu)建得到兔創(chuàng)傷止血?jiǎng)游锬Ｐ?；?duì)所述兔創(chuàng)傷止血?jiǎng)游锬Ｐ褪┘铀鲋寡a(chǎn)品。

由此，采用上述實(shí)施例構(gòu)建得到的兔創(chuàng)傷止血?jiǎng)游锬Ｐ涂梢杂行У貙?duì)止血產(chǎn)品進(jìn)行篩選和評(píng)價(jià)。

另外，根據(jù)本發(fā)明上述實(shí)施例的用于評(píng)價(jià)止血產(chǎn)品的方法還可以具有如下附加的技術(shù)特征：

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，對(duì)所述兔創(chuàng)傷出血?jiǎng)游锬Ｐ褪┘铀鲋寡a(chǎn)品按照下列步驟進(jìn)行：用紗布在所述出血?jiǎng)?chuàng)面處按壓止血30s；取下紗布并立即在所述出血?jiǎng)?chuàng)面上施加所述止血產(chǎn)品；用紗布按壓并持續(xù)3min直至無(wú)血液滲出。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，上述實(shí)施例的用于評(píng)價(jià)止血產(chǎn)品的方法進(jìn)一步包括：在施加所述止血產(chǎn)品后，關(guān)閉腹腔，并對(duì)創(chuàng)口進(jìn)行消毒；對(duì)所述兔肌肉注射青霉素鈉注射液，以便預(yù)防感染。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述止血產(chǎn)品為止血粉、止血棉和止血紗布中的至少之一。

本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點(diǎn)將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過(guò)本發(fā)明的實(shí)踐了解到。

具體實(shí)施方式

下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施例。下面描述的實(shí)施例是示例性的，僅用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例中未注明具體技術(shù)或條件的，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過(guò)市購(gòu)獲得的常規(guī)產(chǎn)品。

此外，術(shù)語(yǔ)“第一”、“第二”僅用于描述目的，而不能理解為指示或暗示相對(duì)重要性或者隱含指明所指示的技術(shù)特征的數(shù)量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隱含地包括至少一個(gè)該特征。

在本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明提出了一種構(gòu)建兔創(chuàng)傷止血?jiǎng)游锬Ｐ偷姆椒?。根?jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該方法包括：將兔禁食不禁水24h；將所述兔進(jìn)行稱重和麻醉處理；將經(jīng)過(guò)所述麻醉處理的所述兔左側(cè)臥，暴露右側(cè)，于肝臟相應(yīng)部位進(jìn)行備皮處理；沿右側(cè)最后肋骨平行處切口3～6cm，鈍性分離腹外斜肌和內(nèi)斜肌，暴露并剪開(kāi)腹膜，暴露肝臟；以及于右葉肝臟的壁面切出小方口，剝離表層，形成出血?jiǎng)?chuàng)面，以便得到兔創(chuàng)傷止血?jiǎng)游锬Ｐ汀?/p>

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過(guò)采用上述構(gòu)建兔創(chuàng)傷止血?jiǎng)游锬Ｐ偷姆椒ǎ@得動(dòng)物模型可以有效地對(duì)多種止血產(chǎn)品進(jìn)行測(cè)試評(píng)價(jià)，從而對(duì)止血產(chǎn)品的止血性能進(jìn)行評(píng)價(jià)，對(duì)止血產(chǎn)品的研發(fā)提供指導(dǎo)。

根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，兔的體重為2.8～3.2kg。

根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，將兔進(jìn)行稱重之后對(duì)兔進(jìn)行麻醉處理。具體地，可以根據(jù)兔的體重給以適當(dāng)劑量的麻藥進(jìn)行麻醉。根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，麻醉處理具體可以按照下列步驟進(jìn)行：采用3wt％戊巴比妥鈉溶液按照0.5mL/kg的劑量對(duì)所述兔進(jìn)行第一靜脈注射；于3min后采用陸眠寧II按照0.1mL/kg的劑量對(duì)所述兔進(jìn)行第二靜脈注射。根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，具體可以根據(jù)兔體重，通過(guò)上述二次麻醉進(jìn)行追加麻醉，進(jìn)而有效維持手術(shù)時(shí)間。該手術(shù)時(shí)間約為1小時(shí)。發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，首先采用3wt％戊巴比妥鈉溶液進(jìn)行預(yù)麻醉，然后采用陸眠寧II進(jìn)行二次麻醉，可以有效地達(dá)到手術(shù)需要的時(shí)間麻醉效果，麻醉時(shí)效約為1小時(shí)，進(jìn)而保證手術(shù)順利進(jìn)行完畢。

根據(jù)本發(fā)明的具體示例，在后續(xù)的構(gòu)建模型的過(guò)程中，可以根據(jù)兔的麻醉深度多次追加首次劑量1/4的陸眠寧II進(jìn)行麻醉。由此可以保證構(gòu)建模型的順利完成。

根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，進(jìn)一步地，將經(jīng)上述麻醉處理后的兔左側(cè)臥，暴露右側(cè)，于肝臟相應(yīng)部位進(jìn)行備皮處理。由此可以有效地尋找到兔的肝臟。

根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，備皮處理具體操作為于肝臟相應(yīng)部位進(jìn)行剃毛，得到的備皮區(qū)域?yàn)?cm×15cm，由此可以便于后續(xù)切口暴露出肝臟。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，如果備皮區(qū)域過(guò)小，則無(wú)法獲得足夠大的切口區(qū)域，進(jìn)而無(wú)法有效地暴露肝臟。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，剃毛并清潔皮膚后，用碘酊對(duì)剃除毛的部位進(jìn)行消毒，再用75％的酒精進(jìn)行二次消毒、脫碘。備皮處理完成后，在備皮位置鋪上創(chuàng)巾，暴露切口部位。

根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，備皮處理后，沿右側(cè)最后肋骨平行處切口3～6cm，鈍性分離腹外斜肌和腹內(nèi)斜肌，暴露并剪開(kāi)腹膜，暴露肝臟。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，通過(guò)在沿右側(cè)最后肋骨平行處切口可以有效地暴露肝臟，同時(shí)不會(huì)損傷肋骨。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，鈍性分離腹外斜肌和腹內(nèi)斜肌過(guò)程中如遇可見(jiàn)大血管需結(jié)扎止血，防止出血量較大而影響實(shí)驗(yàn)。

另外，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，根據(jù)兔的體型大小可以適當(dāng)調(diào)節(jié)切口大小，具體長(zhǎng)度控制在3～6cm比較合適。通常采用體重適中的兔，其切口大小可以為5cm。由此可以暴露出適當(dāng)大小的肝臟，且便于后續(xù)在肝臟表面形成出血?jiǎng)?chuàng)面。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，切口過(guò)小，則手術(shù)視野太小，不便于手術(shù)操作，并且無(wú)法暴露出肝臟；切口過(guò)大則會(huì)導(dǎo)致創(chuàng)傷嚴(yán)重，出血過(guò)多，影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)行。

根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，暴露肝臟后，于右葉肝臟的壁面切出小方口，剝離表層，形成出血?jiǎng)?chuàng)面，以便得到兔創(chuàng)傷止血?jiǎng)游锬Ｐ汀?/p>

根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，為了方便操作，選擇在右葉肝臟的壁面進(jìn)行制造出血?jiǎng)?chuàng)面，首先在右葉肝臟的壁面切出小方口。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，小方口的大小可以為1cm×1cm，由此可以形成適當(dāng)大小的出血?jiǎng)?chuàng)面。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，如果小方口的面積大于1cm×1cm會(huì)導(dǎo)致出血面積過(guò)大，出血嚴(yán)重，可能任何止血產(chǎn)品都達(dá)不到理想的效果，進(jìn)而不能夠有效地對(duì)止血產(chǎn)品進(jìn)行評(píng)價(jià)。如果出血面積小于1cm×1cm，出血面積過(guò)小，一般的止血產(chǎn)品都能夠達(dá)到止血效果，進(jìn)而無(wú)法對(duì)止血產(chǎn)品進(jìn)行合理的篩選和評(píng)價(jià)。為此，發(fā)明人通過(guò)反復(fù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，規(guī)定創(chuàng)口面積大小為1cm×1cm，可以有效地對(duì)止血產(chǎn)品進(jìn)行評(píng)價(jià)。

根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，進(jìn)一步地，成功切出小方口后，剝離小方口處的表層，具體地，剝離的厚度為3～4mm。由此可以形成出血量和出血速度合適的出血?jiǎng)?chuàng)面。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，剝離的厚度為3～4mm，首先不會(huì)碰及大動(dòng)脈，同時(shí)3～4mm的深度，小靜脈和小動(dòng)脈血管比較豐富，可以達(dá)到預(yù)期的出血效果。

由此，根據(jù)本發(fā)明上述實(shí)施例的構(gòu)建兔創(chuàng)傷止血?jiǎng)游锬Ｐ偷姆椒ㄊ前l(fā)明人通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)研究得出的，利用上述方法可以有效地在兔的肝臟壁面形成出血?jiǎng)?chuàng)面，該出血?jiǎng)?chuàng)面的面積大小和深度適宜，可以有效地用于止血產(chǎn)品的篩選和評(píng)價(jià)。另外，本發(fā)明上述實(shí)施例構(gòu)建的兔創(chuàng)傷止血?jiǎng)游锬Ｐ涂梢赃m用于上述各止血產(chǎn)品的篩選和評(píng)價(jià)，例如可以用于止血粉、止血棉和止血紗布等。因此，該兔創(chuàng)傷止血?jiǎng)游锬Ｐ偷倪m用性更加廣泛。

在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提出了一種用于評(píng)價(jià)止血產(chǎn)品的方法。根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，該方法包括：根據(jù)前面所述的方法構(gòu)建得到兔創(chuàng)傷止血?jiǎng)游锬Ｐ?；?duì)所述兔創(chuàng)傷止血?jiǎng)游锬Ｐ褪┘铀鲋寡a(chǎn)品。

根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，上述實(shí)施例的用于評(píng)價(jià)止血產(chǎn)品的方法中，對(duì)所述兔創(chuàng)傷出血?jiǎng)游锬Ｐ褪┘铀鲋寡a(chǎn)品按照下列步驟進(jìn)行：用紗布在所述出血?jiǎng)?chuàng)面處按壓止血30s；取下紗布并立即在所述出血?jiǎng)?chuàng)面上施加所述止血產(chǎn)品；用紗布按壓并持續(xù)3min直至無(wú)血液滲出。

根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，利用上述實(shí)施例的方法構(gòu)建得到的兔創(chuàng)傷止血?jiǎng)游锬Ｐ偷某鲅獎(jiǎng)?chuàng)面需要立即用紗布按壓止血，時(shí)間為30s最佳，由此可以暫時(shí)止血并防止大量出血，為準(zhǔn)備止血產(chǎn)品提供時(shí)間。

根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，按壓止血30s后，取下紗布并立即在出血?jiǎng)?chuàng)面上使用待評(píng)價(jià)的止血產(chǎn)品，并用紗布按壓持續(xù)3min。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，在出血?jiǎng)?chuàng)面上使用止血產(chǎn)品后，應(yīng)立即用紗布按壓，由此可以達(dá)到輕微止血和便于止血藥物發(fā)揮止血作用。

根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，按壓持續(xù)3min后，取下紗布觀察滲血情況，若有血液滲出，再給一次止血產(chǎn)品，并輔以按壓，直至無(wú)血液滲出為止。

根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，上述實(shí)施例的用于評(píng)價(jià)止血產(chǎn)品的方法進(jìn)一步包括：在施加所述止血產(chǎn)品后，關(guān)閉腹腔，并對(duì)創(chuàng)口進(jìn)行消毒；對(duì)所述兔肌肉注射青霉素鈉注射液，以便預(yù)防感染。

根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，止血產(chǎn)品為止血粉、止血棉和止血紗布中的至少一種。由此，本發(fā)明上述實(shí)施例構(gòu)建的兔創(chuàng)傷止血?jiǎng)游锬Ｐ涂梢赃m用于上述各止血產(chǎn)品的篩選和評(píng)價(jià)。

根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，根據(jù)上述方法對(duì)兔創(chuàng)傷止血?jiǎng)游锬Ｐ徒o以止血產(chǎn)品并關(guān)閉腹腔后，進(jìn)一步加強(qiáng)護(hù)理，觀察臨床變化，并做好記錄。

根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，在動(dòng)物模型給以止血產(chǎn)品后分別于不同時(shí)間點(diǎn)解剖，觀察肝臟損傷創(chuàng)面的愈合(修復(fù))情況，并取創(chuàng)面組織做病理組織學(xué)檢查。以便進(jìn)一步對(duì)止血產(chǎn)品的藥理作用進(jìn)行比較研究和評(píng)價(jià)。

下面參考具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行描述，需要說(shuō)明的是，這些實(shí)施例僅僅是描述性的，而不以任何方式限制本發(fā)明。

實(shí)施例1

構(gòu)建兔創(chuàng)傷止血?jiǎng)游锬Ｐ?/p>

(1)實(shí)驗(yàn)用新西蘭兔(GB 14922-1994)；體重：3±0.2kg；性別：雌雄不限。

(2)器械和材料：常規(guī)外科手術(shù)器械、麻醉藥品、急救藥品、消毒藥物、手術(shù)室耗材等。

(3)術(shù)前禁飼：動(dòng)物術(shù)前24h禁食不禁水。

(4)麻醉：動(dòng)物稱重，先用3wt％戊巴比妥鈉(sigma,P3761-25g；CAS Number:57-33-0)以0.5mL/kg劑量靜脈注射，進(jìn)行前期麻醉。3min后靜脈注射陸眠寧Ⅱ(吉林省華牧動(dòng)物保健品有限公司；2014.04,12)，以0.1mL/kg的劑量執(zhí)行。

(5)術(shù)前采血

麻醉前于前肢采集2mL靜脈血，用于測(cè)定血相和血清生化。

(6)備皮

根據(jù)麻醉程度，左側(cè)臥，暴露右側(cè)，于肝臟相應(yīng)部位剃毛，備皮區(qū)8cm×15cm，清潔后用先用碘酊消毒，再用75％的酒精消毒、脫碘。鋪上創(chuàng)巾，暴露切口部位。

(7)暴露肝臟制造出血?jiǎng)?chuàng)面

沿右側(cè)最后肋骨平行處切口，長(zhǎng)度為5cm，鈍性分離腹外斜肌和腹內(nèi)斜肌，遇可見(jiàn)大血管需結(jié)扎止血，防止出血量較大而影響實(shí)驗(yàn)。暴露并剪開(kāi)腹膜，暴露肝臟。

于右葉壁面前段切一1cm×1cm的小方口，剝離3～4mm的表層。

實(shí)施例2

利用實(shí)施例1構(gòu)建得到的兔創(chuàng)傷止血?jiǎng)游锬Ｐ蛯?duì)止血產(chǎn)品進(jìn)行評(píng)價(jià)

按照實(shí)施例1的方法構(gòu)建五頭兔創(chuàng)傷止血?jiǎng)游锬Ｐ汀?/p>

止血產(chǎn)品為止血粉。

評(píng)價(jià)方法：

(1)在五頭兔創(chuàng)傷止血?jiǎng)游锬Ｐ偷某鲅獎(jiǎng)?chuàng)口立即用紗布按壓止血30s，取下后立即在創(chuàng)面上使用止血產(chǎn)品，并用無(wú)菌紗布按壓，持續(xù)3min，取下紗布觀察滲血情況，若有血液滲出，再給一次止血產(chǎn)品，并輔以按壓，直至無(wú)血液滲出為止。

(2)止血切實(shí)后，再觀察10min，再無(wú)出血后關(guān)閉腹腔，創(chuàng)口常規(guī)消毒。

(3)術(shù)后，每日以20萬(wàn)IU/kg青霉素鈉，配以0.9％的生理鹽水肌肉注射，預(yù)防感染，1次/d。加強(qiáng)護(hù)理，觀察臨床變化，并做好記錄。

(4)每頭兔分別于創(chuàng)模后的不同時(shí)間點(diǎn)解剖，觀察肝臟損傷創(chuàng)面的愈合(修復(fù))情況，并取創(chuàng)面組織做病理組織學(xué)檢查。以便對(duì)止血粉的止血性能以及藥理作用進(jìn)行評(píng)價(jià)。

在本說(shuō)明書(shū)的描述中，參考術(shù)語(yǔ)“一個(gè)實(shí)施例”、“一些實(shí)施例”、“示例”、“具體示例”、或“一些示例”等的描述意指結(jié)合該實(shí)施例或示例描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點(diǎn)包含于本發(fā)明的至少一個(gè)實(shí)施例或示例中。在本說(shuō)明書(shū)中，對(duì)上述術(shù)語(yǔ)的示意性表述不必須針對(duì)的是相同的實(shí)施例或示例。而且，描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點(diǎn)可以在任一個(gè)或多個(gè)實(shí)施例或示例中以合適的方式結(jié)合。此外，在不相互矛盾的情況下，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以將本說(shuō)明書(shū)中描述的不同實(shí)施例或示例以及不同實(shí)施例或示例的特征進(jìn)行結(jié)合和組合。

盡管上面已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，可以理解的是，上述實(shí)施例是示例性的，不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員在本發(fā)明的范圍內(nèi)可以對(duì)上述實(shí)施例進(jìn)行變化、修改、替換和變型。