本發(fā)明涉及一種治療中風的中藥腦血疏制劑的制備方法，屬中藥制劑技術領域。
背景技術：
腦血管病是當今世界危害人類健康的三大疾病之一，是中老年人的多發(fā)病，死亡率很高，在我國腦血管病占死因的第二位。國內(nèi)報道腦出血死亡率為38％～43％，幸存者約有50％～70％患者留有嚴重的后遺癥，生活不能自理，不僅病人遭受極大痛苦，也給家庭和社會造成負擔。
中藥治療腦血管病有其獨特的優(yōu)勢，如已經(jīng)上市的中藥腦血疏口服液，其配方和工藝描述在中國專利200810100200.9(授權公告號CN 101279018 B)，“一種中藥腦血疏制劑”中，該專利描述了一種由中藥黃芪、水蛭、石菖蒲、牛膝、牡丹皮、大黃、川芎等制成中藥制劑，經(jīng)過實驗發(fā)現(xiàn)，該制劑具有益氣、活血、化瘀作用，主治中風急性期及恢復早期，屬氣虛血瘀證。專利201310002166.2(授權公告號CN 102988643 B)則描述了一種穩(wěn)定，安全，無刺激性，可以滿足臨床需求的腦血疏注射劑。
由于現(xiàn)有技術中的腦血疏制劑的制備工藝為部分藥材提取揮發(fā)油，部分藥材進行水提、醇沉的粗制品，存在有效成分含量低、服用量大、吸收不完全、生物利用度低等不足之處。隨著科學技術的不斷發(fā)展和新藥研發(fā)水平的不斷提高，新理論、新技術、新工藝、新設備的不斷應用，其傳統(tǒng)制備工藝已不完全符合中藥現(xiàn)代化的要求。
技術實現(xiàn)要素：
針對上述現(xiàn)有技術，本發(fā)明在現(xiàn)有技術的基礎上進行了多重改進，特別是在提取工藝上進行了大量的篩選，提供了一種腦血疏的制備方法，通過該方法制備得到的腦血疏制劑，具有有效成分含量高、生物利用度高、更適合人體吸收等優(yōu)點。
本發(fā)明是通過以下技術方案實現(xiàn)的：
一種腦血疏的制備方法，所述腦血疏是由以下重量份的原料藥制成的：黃芪233g～932g，水蛭150g～600g，石菖蒲84g～334g，牛膝84g～334g，牡丹皮84g～334g，大黃33g～132g，川芎84g～334g。
制備方法包括以下步驟：
(1)取石菖蒲和牡丹皮，粉碎，加藥材重量2～8倍的水，加熱回流1～3h蒸餾，收集初蒸餾液后，重蒸餾0.5～1.5h；提取揮發(fā)油；蒸餾液過濾，藥渣備用；
(2)取黃芪、牛膝、川芎和大黃，粉碎，與步驟(1)中的藥渣合并，加入pH值為1.5～2.5的水(向水中加入鹽酸或磷酸調節(jié)至pH值為1.5～2.5)，加熱提取1～3小時，濾過，濾液、濾渣備用；
優(yōu)選的，所述加入水的量為藥材重量(指步驟(1)中藥渣與黃芪等4種原料藥的總重量)的2～4倍；
(3)步驟(2)所得藥渣加pH值為6.5～7.0的水，加熱提取1～3小時，濾過，濾液、濾渣備用；
優(yōu)選的，所述加水量為藥材重量(指步驟(2)中藥渣的重量)的1～3倍；
(4)步驟(3)所得藥渣加pH值為7.8～8.5的水，加熱提取1～3小時，濾過，濾液備用；
優(yōu)選的，所述加水量為藥材重量(指步驟(3)中藥渣的重量)的1～3倍；
(5)取水蛭，粉碎后加入0.5～1.5倍量(重量倍數(shù))的生理鹽水，浸泡12～36h后過濾，濾渣、濾液備用；
(6)步驟(5)所得濾渣加入pH值1.5～2.5的水(向水中加入鹽酸或磷酸調節(jié)至pH值為1.5～2.5)，加熱至40～60℃提取0.5～1.5小時，濾過，濾液、濾渣備用；
優(yōu)選的，所述加水量為藥材重量(指步驟(5)中濾渣的重量)的1～3倍；
(7)步驟(6)所得濾渣加入pH值為6.5～7.0的水，加熱至40～60℃提取0.5～1.5小時，濾過，濾液、濾渣備用；
優(yōu)選的，所述加水量為藥材重量(指步驟(6)中濾渣的重量)的1～3倍；
(8)步驟(7)所得藥渣加pH值為7.8～8.5的水，加熱至40～60℃提取0.5～1.5小時，濾過，濾液備用；
優(yōu)選的，所述加水量為藥材重量(指步驟(7)中濾渣的重量)的1～3倍；
所述pH值為6.5～7.0的水，為自然界自然存在的水，無需進行特殊處理即可常規(guī)途徑得到；所述pH值為7.8～8.5的水，可采用0.1mol/L的NaOH溶液調節(jié)得到；
(9)合并步驟(5)(6)(7)(8)中所得濾液，低溫濃縮至相對密度為1.05～1.10的清膏，加入95％(體積百分數(shù))以上乙醇溶液或無水乙醇至含醇量為85％(體積百分數(shù))，-30℃下靜置12～36小時，離心，取上清液，低溫(25～35℃)干燥，得水蛭素；
(10)合并步驟(2)(3)(4)中所得濾液，濃縮至相對密度為1.20～1.25的清膏，加入步驟(1)中所得揮發(fā)油及步驟(9)所得水蛭素，混勻，加入藥劑學上可接受的載體或輔料，制備成藥物制劑。
優(yōu)選的，所述腦血疏是由以下重量份的原料藥制成的：黃芪466g，水蛭300g，石菖蒲167g，牛膝167g，牡丹皮167g，大黃66g，川芎167g。
所述藥物制劑的劑型可以為口服液、片劑、膠囊、滴丸、顆粒等劑型。
優(yōu)選的，所述制備工藝步驟如下：
(1)取石菖蒲和牡丹皮，粉碎，加藥材重量5倍的水，加熱回流2h蒸餾，收集初蒸餾液后，重蒸餾1h；提取揮發(fā)油；蒸餾液過濾，藥渣備用；
(2)取黃芪、牛膝、川芎和大黃，粉碎，與步驟(1)中的藥渣合并，加入pH值為2.0的水，加熱提取2小時，濾過，濾液、濾渣備用；
優(yōu)選的，所述加入水的量為藥材重量的3倍；
(3)步驟(2)所得藥渣加pH值為6.8的水，加熱提取2小時，濾過，濾液、濾渣備用；
優(yōu)選的，所述加水量為藥材重量的2倍；
(4)步驟(3)所得藥渣加pH值為8.2的水，加熱提取2小時，濾過，濾液備用；
優(yōu)選的，所述加水量為藥材重量的2倍；
(5)取水蛭，粉碎后加入等質量的生理鹽水浸泡24h后過濾，濾渣、濾液備用；
(6)步驟(5)所得濾渣加入pH值2.0的水，加熱至50℃提取1小時，濾過，濾液、濾渣備用；
優(yōu)選的，所述加水量為藥材重量的2倍；
(7)步驟(6)所得濾渣加入pH值為6.8的水，加熱至50℃提取1小時，濾過，濾液、濾渣備用；
優(yōu)選的，所述加水量為藥材重量的2倍；
(8)步驟(7)所得藥渣加pH值為8.2的水，加熱至50℃提取1小時，濾過，濾液備用；
優(yōu)選的，所述加水量為藥材重量的2倍；
(9)合并步驟(5)(6)(7)(8)中所得濾液，低溫濃縮至相對密度為1.05～1.10的清膏，加入95％以上乙醇至含醇量為85％，-30℃靜置24小時，離心，取上清液低溫干燥得水蛭素；
(10)合并步驟(2)(3)(4)中所得濾液，濃縮至相對密度為1.20～1.25的清膏，加入步驟(1)中所得揮發(fā)油及步驟(9)所得水蛭素，混勻，加入藥劑學上可接受的載體或輔料，制備成藥物制劑。
本發(fā)明的腦血疏制劑的半仿生制備方法，本著使制劑達到“三小(劑量小、毒性小、副作用小)、三效(高效、速效、長效)、五方便(生產(chǎn)、運輸、服用、攜帶、貯藏)”的目的，在處方確定的基礎上，對藥材的提取純化工藝進行了全新摸索，綜合考慮了藥材物理性質、有效成分特性及生產(chǎn)成本等因素，并結合現(xiàn)代生物藥劑學的新技術，采用半仿生提取法，創(chuàng)造性的對其進行了提取純化，有效地保留了活性成分。半仿生法是模仿口服藥物在胃腸道的轉運過程而提出的一種中藥提取新技術，其采用選定pH值的酸性水和堿性水依次連續(xù)提取，其目的是提取含指標成分高的“活性混合物”。該法在提取工藝的設計中堅持“有成分論，不惟成分論，重在機體藥效學反應”的觀點，以一種或幾種有效成分、總浸出物及不同極性部分或主要藥理作用做指標，綜合評判，優(yōu)選提取工藝的理論原則，這樣既能充分發(fā)揮混合物成分的綜合作用特點，又有利于用單體成分控制制劑質量，最終得到適合人體吸收的藥效成分。在本發(fā)明中，申請人通過大量的實驗研究，篩選得到了本發(fā)明的技術方案，去掉了藥材中大部分不被人體吸收的雜質并最大限度保留各藥味的有效成分，使得本發(fā)明所得精制腦血疏口服液較原工藝的產(chǎn)品載藥量提高了接近100％(以生藥量計)，同時有效成分含量相對提高，以該有效成分制成口服液、片劑、膠囊、滴丸、顆粒等劑型，能夠更好地滿足心腦血管疾病患者的用藥需求。
具體實施方式
下面結合實施例對本發(fā)明作進一步的說明。
下述實施例中所涉及的儀器、試劑、材料等，若無特別說明，均為現(xiàn)有技術中已有的常規(guī)儀器、試劑、材料等，可通過正規(guī)商業(yè)途徑獲得。下述實施例中所涉及的實驗方法，檢測方法等，若無特別說明，均為現(xiàn)有技術中已有的常規(guī)實驗方法，檢測方法等。
實施例1制備腦血疏口服液
配方為：黃芪466g，水蛭300g，石菖蒲167g，牛膝167g，牡丹皮167g大黃66g，川芎167g。
制備方法如下：
(1)取石菖蒲和牡丹皮，粉碎，加藥材重量5倍的水，加熱回流2h蒸餾，收集初蒸餾液后，重蒸餾1h；提取揮發(fā)油；蒸餾液過濾，藥渣備用；
(2)取黃芪、牛膝、川芎和大黃，粉碎，與步驟(1)中的藥渣合并，加入pH值為2.0的水(向水中加入鹽酸調節(jié)至pH值為2.0)，加入水的量為藥材重量的3倍，加熱提取2小時，濾過，濾液、濾渣備用；
(3)步驟(2)所得藥渣加pH值為6.8的水，加水量為藥材重量的2倍，加熱提取2小時，濾過，濾液、濾渣備用；
(4)步驟(3)所得藥渣加pH值為8.2的水，加水量為藥材重量的2倍，加熱提取2小時，濾過，濾液備用；
(5)水蛭粉碎后加入等質量的生理鹽水浸泡24h后過濾，濾渣、濾液備用；
(6)步驟(5)所得濾渣加入pH值2.0的水(向水中加入鹽酸調節(jié)至pH值為2.0)，加水量為藥材重量的2倍，加熱至50℃提取1小時，濾過，濾液、濾渣備用；
(7)步驟(6)所得濾渣加入pH值為6.8的水，加水量為藥材重量的2倍，加熱至50℃提取1小時，濾過，濾液、濾渣備用；
(8)步驟(7)所得藥渣加pH值為8.2的水，加水量為藥材重量的2倍，加熱至50℃提取1小時，濾過，濾液備用；
所述pH值為6.8的水，為自然界自然存在的水，無需進行特殊處理即可常規(guī)途徑得到；所述pH值為8.2的水，采用0.1mol/L的NaOH溶液調節(jié)得到；
(9)合并步驟(5)(6)(7)(8)中所得濾液，低溫濃縮至相對密度為1.05～1.10的清膏，加入95％乙醇溶液至含醇量為85％，-30℃靜置24小時，離心，取上清液低溫干燥得水蛭素；
(10)合并步驟(2)(3)(4)中所得濾液，濃縮至相對密度為1.20～1.25的清膏，加入步驟(1)中所得揮發(fā)油及步驟(9)所得水蛭素，混勻，加水調整總量至1000ml，攪勻，灌封，滅菌，即得。
實驗1藥效成分含量的檢測及比較
取實施例1制得的精制腦血疏口服液，與現(xiàn)有工藝生產(chǎn)的腦血疏口服液(山東沃華醫(yī)藥科技股份有限公司生產(chǎn)，批號150210，按照專利號為200810100200.9的專利說明書中實施例1的方法制備得到；下同)、腦血疏注射液(山東沃華醫(yī)藥科技股份有限公司生產(chǎn)，批號150451，按照專利號為201310002166.2的專利說明書中實施例1的方法制備得到)比較，采用高效液相色譜法及滴定法測定主要藥效成分含量，結果如表1所示(表1中各百分數(shù)指質量百分數(shù))。
表1
通過表1中的比較可以看出，利用本發(fā)明的方法制備的精制腦血疏口服液，在各藥效成分的含量上，明顯優(yōu)于現(xiàn)有技術中的腦血疏口服液與注射液，尤其是水蛭素的含量有較大提升，差異極其顯著。
實驗2生物利用度的檢測及比較
通過人體試驗測定精制腦血疏口服液和腦血疏口服液在不同時刻血漿中黨參總堿的濃度，繪制血藥濃度-時間曲線，計算精制腦血疏口服液和腦血疏口服液主要藥動學參數(shù)及相對生物利用度。
(一)材料與方法
(1)儀器與藥品
島津高效液相色譜儀(SPD檢測器)，HC2518高速離心機(科大創(chuàng)新股份有限公司)，XW-80A型混合器；精制腦血疏口服液(按照本專利實施例1制備)、腦血疏口服液(批號150731)、去離子水均為本公司自制，四氫呋喃和乙腈為色譜純，其他化學試劑均為分析純。
(2)受試者
健康男性志愿者12名，平均年齡21.4±1.9歲(20-24歲)，64.9±11.3kg，平均身高171.8±10.5cm，試驗前進行體格檢查，心、肝腎功能均為正常。試驗前兩周內(nèi)未服用其它任何藥物，試驗期間禁止服用其它藥物及煙、酒等。
(二)試驗方案
(1)試驗設計
采用單劑量自身對照交叉試驗方法，每個受試者均隨機先后接受精制腦血疏口服液或腦血疏口服液2次試驗。每次試驗間隔為7d。受試前禁食12h，服用藥物4h后給予統(tǒng)一標準餐。
(2)給藥與采血
12名志愿者隨機分成兩組，每組6人，經(jīng)12h禁食后，一組于當日清晨空腹口服精制腦血疏口服液10ml，二組口服腦血疏口服液10ml，用藥4h后統(tǒng)一進標準餐。服藥前及服藥后0h、1h、2h、3h、4h、6h、8h、12h、16h、20h、24h、30h、36h、48h靜脈取血。
(三)結果與討論
(1)血藥濃度測定結果
18名健康受試者口服精制腦血疏口服液或腦血疏口服液后在不同時間的血藥濃度數(shù)據(jù)分別經(jīng)數(shù)學平均，繪制血藥濃度-時間曲線。
(2)主要藥動學參數(shù)
利用軟件求算藥動學參數(shù)，用梯形法以實測濃度計算藥時曲線下面積AUC，相對生物利用度F＝AUC精制腦血疏/AUC腦血疏。
計算結果顯示：精制腦血疏口服液和腦血疏口服液、腦血疏注射液達峰時間tmax分別為(2.11±0.28)h、(2.87±0.35)h，P<0.05，有顯著性差異。峰值血藥濃度cmax分別為(248.35±43.61)ng·L-1及(189.45±35.27)ng·L-1，P<0.05，有顯著性差異。主要藥動學參數(shù)結果見表2。
表2
(3)相對生物利用度
精制腦血疏口服液和腦血疏口服液的AUC0h～48h分別為(2974.53±118.44)ng·h·L-1與(2158±108.52)ng·h·L-1，經(jīng)t檢驗，P<0.05，有顯著差別。精制腦血疏口服液對腦血疏口服液的相對生物利用度為137.82％。
(4)討論
本試驗結果顯示精制腦血疏口服液血藥濃度及藥-時曲線下面積明顯大于腦血疏口服液，且經(jīng)軟件計算得出，精制腦血疏口服液對腦血疏口服液的相對生物利用度為137.82％，精制腦血疏口服液生物利用度明顯大于腦血疏口服液。表明精制腦血疏口服液更利于機體吸收。