本發(fā)明屬于復(fù)蘇液制備方法領(lǐng)域，具體涉及一種應(yīng)用于寵物失血休克急救的復(fù)蘇液及其制備方法。

背景技術(shù)：

輸血是補(bǔ)充動(dòng)物血液或某一成分的一種安全有效的挽救生命療法。成年犬的血液有80～90ml/kg，貓的血液有80～90ml/kg，當(dāng)撞傷或手術(shù)發(fā)生急性失血達(dá)全血量1/5時(shí)，可出現(xiàn)血壓降低，心跳加快。當(dāng)失血達(dá)1/3時(shí)，將危機(jī)生命，此時(shí)及時(shí)輸血是挽救生命的最有效方法。輸血不僅能補(bǔ)充血容量，而且增多的紅細(xì)胞能增加攜氧量，改善心肌和腦的機(jī)能。目前國(guó)際上比較公認(rèn)的是，和人類相似，貓的血型有A型、B型及AB型三種血型。狗不但有血型，而且可分為7種，分別是CEA-1(A)-CEA-8(G)共8個(gè)因子。其中A因子的抗原性最強(qiáng)，是臨診輸血時(shí)主要考慮的因子，否則會(huì)導(dǎo)致受血狗體內(nèi)的紅細(xì)胞大量溶血，迅速休克。臨床上對(duì)寵物輸血不僅需要交叉配血試驗(yàn)，而且獸醫(yī)人員必須掌握適應(yīng)癥和禁忌癥，對(duì)于供血寵物進(jìn)行嚴(yán)格篩選和采血，同時(shí)對(duì)于輸血量和速度都有嚴(yán)格要求，如狗一次最大輸血量為其全血量的10％～20％。輸血速度，急性大出血時(shí)，可按100毫升血用5～6分鐘輸入的速度，除此外，以緩慢輸入為宜。同時(shí)存在著發(fā)熱、過(guò)敏、溶血、循環(huán)負(fù)荷過(guò)重、低鈣血癥以及血凝病等不良反應(yīng)。

國(guó)外一般是由動(dòng)物福利保護(hù)機(jī)構(gòu)來(lái)建血庫(kù)，美國(guó)、澳大利亞等發(fā)達(dá)國(guó)家已有動(dòng)物血庫(kù)，是以中央血庫(kù)的形式建立。在我國(guó)尚未出現(xiàn)類似血庫(kù)，由寵物醫(yī)院建立血庫(kù)暫時(shí)不太現(xiàn)實(shí)，配型和檢測(cè)都需要進(jìn)口設(shè)備，成本太高。血液的保存也是一大難題，同時(shí)建立大型動(dòng)物血庫(kù)則需要找到長(zhǎng)期可靠的血源，還涉及飼養(yǎng)供血?jiǎng)游铩z疫、善終等多個(gè)環(huán)節(jié)，所以暫時(shí)無(wú)法實(shí)現(xiàn)。

因此制備一種能夠供應(yīng)能長(zhǎng)期保留、隨時(shí)運(yùn)用的急救復(fù)蘇液供寵物運(yùn)用，無(wú)需查看血型是不是匹配，也沒(méi)有感染病毒的危險(xiǎn)，并且成本低廉，可以解決寵物輸血急救的難題。

俄羅斯麥德佰歐法姆有限公司的申請(qǐng)專利中基于戊二醛聚合血紅蛋白的血液代用品(CN102026654A)，但組分單一，僅單一供氧，對(duì)于擴(kuò)充血容量作用較少。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有的血液代用品組分單一，僅單一供氧，對(duì)于擴(kuò)充血容量作用較少的問(wèn)題，而提供一種應(yīng)用于寵物失血休克急救的復(fù)蘇液及其制備方法。

本發(fā)明首先提供一種應(yīng)用于寵物失血休克急救的復(fù)蘇液的制備方法，該方法包括：

步驟一：將牛血紅蛋白溶液和戊二醛溶液反應(yīng)，離心，得到戊二醛交聯(lián)后的血紅蛋白粒子；

步驟二：將步驟一得到的戊二醛交聯(lián)后的血紅蛋白粒子與注射液混合，得到應(yīng)用于寵物失血休克急救的復(fù)蘇液；

所述的注射液為HES、HES2000或生理鹽水。

優(yōu)選的是，所述的牛血紅蛋白溶液的濃度為1-40mg/ml。

優(yōu)選的是，所述的戊二醛溶液的濃度為0.025-0.25％。

優(yōu)選的是，所述的牛血紅蛋白溶液和戊二醛溶液的摩爾比為(1-10)：1。

優(yōu)選的是，所述的步驟一反應(yīng)溫度為室溫，反應(yīng)時(shí)間為8-14h。

優(yōu)選的是，所述的離心速度為2000rpm，離心時(shí)間為5-15min。

優(yōu)選的是，所述的戊二醛交聯(lián)后的血紅蛋白粒子與注射液的質(zhì)量比為1:1-1:10。

本發(fā)明還提供上述制備方法得到的應(yīng)用于寵物失血休克急救的復(fù)蘇液。

本發(fā)明的有益效果

本發(fā)明首先提供一種應(yīng)用于寵物失血休克急救的復(fù)蘇液的制備方法，該方法先將牛血紅蛋白溶液和戊二醛溶液反應(yīng)，離心，得到戊二醛交聯(lián)后的血紅蛋白粒子；然后將得到的戊二醛交聯(lián)后的血紅蛋白粒子與注射液混合，得到應(yīng)用于寵物失血休克急救的復(fù)蘇液；所述的注射液為HES、HES2000或生理鹽水。本發(fā)明的制備方法簡(jiǎn)單、原料易得，制備得到的復(fù)蘇液能夠在體內(nèi)可逆地結(jié)合和釋放氧并且同時(shí)擴(kuò)充血容量。

本發(fā)明還提供上述制備方法得到的復(fù)蘇液，所述的復(fù)蘇液氣體轉(zhuǎn)換能力良好，能夠?yàn)槿毖踅M織和器官供氧，本發(fā)明的復(fù)蘇液非細(xì)胞性產(chǎn)品，無(wú)細(xì)胞表面抗原，無(wú)需血液配型，嚴(yán)格控制牛血紅蛋白的來(lái)源，能夠避免相關(guān)傳染病傳播，無(wú)免疫反應(yīng)，可長(zhǎng)時(shí)間保存。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明實(shí)施例1復(fù)蘇液的氣體轉(zhuǎn)換能力圖；

圖2為本發(fā)明實(shí)施例1復(fù)蘇液和代血漿對(duì)失血性休克大鼠模型復(fù)蘇效果圖；

圖3為本發(fā)明實(shí)施例1復(fù)蘇液和代血漿對(duì)失血性休克大鼠模型復(fù)蘇生存曲線圖。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明首先提供一種應(yīng)用于寵物失血休克急救的復(fù)蘇液的制備方法，該方法包括：

步驟一：將牛血紅蛋白溶液和戊二醛溶液反應(yīng)，離心，得到戊二醛交聯(lián)后的血紅蛋白粒子；

步驟二：將步驟一得到的戊二醛交聯(lián)后的血紅蛋白粒子與注射液混合，得到應(yīng)用于寵物失血休克急救的復(fù)蘇液；

所述的注射液為HES、HES2000或生理鹽水。

按照本發(fā)明，先分別制備牛血紅蛋白溶液和戊二醛溶液，所述的牛血紅蛋白溶液的濃度優(yōu)選為1-40mg/ml；所述的戊二醛溶液的濃度優(yōu)選為0.025-0.25％。

按照本發(fā)明，將上述配制好的牛血紅蛋白溶液和戊二醛溶液混合，進(jìn)行反應(yīng)，將反應(yīng)物進(jìn)行離心，得到戊二醛交聯(lián)后的血紅蛋白粒子；

所述的反應(yīng)溫度優(yōu)選為室溫，反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為8-14h，更優(yōu)選為12h，

所述的牛血紅蛋白溶液和戊二醛溶液的摩爾比優(yōu)選為(1-10)：1；更優(yōu)選為4：1；所述的離心速度優(yōu)選為2000rpm，離心時(shí)間優(yōu)選為5-15min。

按照本發(fā)明，將戊二醛交聯(lián)后的血紅蛋白粒子與注射液混合，將配制后的溶液在一氧化碳保護(hù)下進(jìn)行脫氧態(tài)轉(zhuǎn)換，轉(zhuǎn)換后進(jìn)行過(guò)濾除菌消毒，常溫真空條件下保存，得到應(yīng)用于寵物失血休克急救的復(fù)蘇液；

所述的注射液為HES(羥乙基淀粉氯化鈉注射液)、HES2000(羥乙基淀粉氯化鈉2000注射液)或生理鹽水。所述的戊二醛交聯(lián)后的血紅蛋白粒子與注射液的質(zhì)量比優(yōu)選為1:(1-10)，更優(yōu)選為1：4。

本發(fā)明還提供上述制備方法得到的應(yīng)用于寵物失血休克急救的復(fù)蘇液。所述的復(fù)蘇液氣體轉(zhuǎn)換能力良好，能夠?yàn)槿毖踅M織和器官供氧，本發(fā)明的復(fù)蘇液非細(xì)胞性產(chǎn)品，無(wú)細(xì)胞表面抗原，無(wú)需血液配型，嚴(yán)格控制牛血紅蛋白的來(lái)源，能夠避免相關(guān)傳染病傳播，無(wú)免疫反應(yīng)，可長(zhǎng)時(shí)間保存。

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)的描述，實(shí)施例中涉及到原料均采用商購(gòu)獲得。

實(shí)施例1

將牛血紅蛋白溶液(濃度為30mg/ml)和戊二醛溶液(濃度為0.01％)按照摩爾比4：1混合，在室溫下進(jìn)行反應(yīng)12h，將反應(yīng)物進(jìn)行在2000rpm離心10min，得到戊二醛交聯(lián)后的血紅蛋白粒子；

將戊二醛交聯(lián)后的血紅蛋白粒子與HES按照質(zhì)量比1：4混合，將配制后的溶液在一氧化碳保護(hù)下進(jìn)行脫氧態(tài)轉(zhuǎn)換，轉(zhuǎn)換后進(jìn)行過(guò)濾除菌消毒，常溫真空條件下保存，得到應(yīng)用于寵物失血休克急救的復(fù)蘇液。

圖1為本發(fā)明實(shí)施例1復(fù)蘇液的氣體轉(zhuǎn)換能力圖，從圖1可以看出，該復(fù)蘇液能夠攜帶氧氣和釋放氧氣，具備氧氣的結(jié)合和釋放能力。

對(duì)休克大鼠進(jìn)行實(shí)施例1制備的復(fù)蘇液和代血漿輸入進(jìn)行對(duì)比，圖2為本發(fā)明實(shí)施例1復(fù)蘇液和代血漿對(duì)失血性休克大鼠模型復(fù)蘇效果圖；圖3為本發(fā)明實(shí)施例1復(fù)蘇液和代血漿對(duì)失血性休克大鼠模型復(fù)蘇生存曲線圖，從圖2和圖3可以看出，輸入本發(fā)明的復(fù)蘇液后平均動(dòng)脈壓(MP)在放血降至極值，隨液體灌輸血量恢復(fù)，血壓有所升高，70％的大鼠存活超過(guò)2h，說(shuō)明本發(fā)明的復(fù)蘇液可以有效復(fù)蘇休克大鼠。輸入代血漿后，MAP在放血降至極值，血壓未升高，大鼠存活時(shí)間未超過(guò)1小時(shí)，說(shuō)明代血漿未能有效復(fù)蘇休克大鼠。

實(shí)施例2

將牛血紅蛋白溶液(濃度為30mg/ml)和戊二醛溶液(濃度為0.01％)按照摩爾比4：1混合，在室溫下進(jìn)行反應(yīng)12h，將反應(yīng)物進(jìn)行在2000rpm離心10min，得到戊二醛交聯(lián)后的血紅蛋白粒子；

將戊二醛交聯(lián)后的血紅蛋白粒子與HES2000按照質(zhì)量比1：4混合，將配制后的溶液在一氧化碳保護(hù)下進(jìn)行脫氧態(tài)轉(zhuǎn)換，轉(zhuǎn)換后進(jìn)行過(guò)濾除菌消毒，常溫真空條件下保存，得到應(yīng)用于寵物失血休克急救的復(fù)蘇液。

對(duì)休克大鼠進(jìn)行實(shí)施例2制備的復(fù)蘇液，輸入本發(fā)明的復(fù)蘇液后，平均動(dòng)脈壓(MP)在放血降至極值，隨液體灌輸血量恢復(fù)，血壓有所升高，65％的大鼠存活超過(guò)2h，說(shuō)明本發(fā)明的復(fù)蘇液可以有效復(fù)蘇休克大鼠。

實(shí)施例3

將牛血紅蛋白溶液(濃度為30mg/ml)和戊二醛溶液(濃度為0.01％)按照摩爾比4：1混合，在室溫下進(jìn)行反應(yīng)12h，將反應(yīng)物進(jìn)行在2000rpm離心10min，得到戊二醛交聯(lián)后的血紅蛋白粒子；

將戊二醛交聯(lián)后的血紅蛋白粒子與生理鹽水按照質(zhì)量比1：4混合，將配制后的溶液在一氧化碳保護(hù)下進(jìn)行脫氧態(tài)轉(zhuǎn)換，轉(zhuǎn)換后進(jìn)行過(guò)濾除菌消毒，常溫真空條件下保存，得到應(yīng)用于寵物失血休克急救的復(fù)蘇液。

對(duì)休克大鼠進(jìn)行實(shí)施例3制備的復(fù)蘇液，輸入本發(fā)明的復(fù)蘇液后，平均動(dòng)脈壓(MP)在放血降至極值，隨液體灌輸血量恢復(fù)，血壓有所升高，50％的大鼠存活超過(guò)1h，說(shuō)明本發(fā)明的復(fù)蘇液可以有效復(fù)蘇休克大鼠。

實(shí)施例4

將牛血紅蛋白溶液(濃度為30mg/ml)和戊二醛溶液(濃度為0.01％)按照摩爾比1：1混合，在室溫下進(jìn)行反應(yīng)8h，將反應(yīng)物進(jìn)行在2000rpm離心5min，得到戊二醛交聯(lián)后的血紅蛋白粒子；

將戊二醛交聯(lián)后的血紅蛋白粒子與HES按照質(zhì)量比1：1混合，將配制后的溶液在一氧化碳保護(hù)下進(jìn)行脫氧態(tài)轉(zhuǎn)換，轉(zhuǎn)換后進(jìn)行過(guò)濾除菌消毒，常溫真空條件下保存，得到應(yīng)用于寵物失血休克急救的復(fù)蘇液。

對(duì)休克大鼠進(jìn)行實(shí)施例4制備的復(fù)蘇液，輸入本發(fā)明的復(fù)蘇液后，平均動(dòng)脈壓(MP)在放血降至極值，隨液體灌輸血量恢復(fù)，血壓有所升高，60％的大鼠存活超過(guò)1h，說(shuō)明本發(fā)明的復(fù)蘇液可以有效復(fù)蘇休克大鼠。

實(shí)施例5

將牛血紅蛋白溶液(濃度為30mg/ml)和戊二醛溶液(濃度為0.01％)按照摩爾比10：1混合，在室溫下進(jìn)行反應(yīng)14h，將反應(yīng)物進(jìn)行在2000rpm離心15min，得到戊二醛交聯(lián)后的血紅蛋白粒子；

將戊二醛交聯(lián)后的血紅蛋白粒子與HES按照質(zhì)量比1：10混合，將配制后的溶液在一氧化碳保護(hù)下進(jìn)行脫氧態(tài)轉(zhuǎn)換，轉(zhuǎn)換后進(jìn)行過(guò)濾除菌消毒，常溫真空條件下保存，得到應(yīng)用于寵物失血休克急救的復(fù)蘇液。

對(duì)休克大鼠進(jìn)行實(shí)施例5制備的復(fù)蘇液，輸入本發(fā)明的復(fù)蘇液后，平均動(dòng)脈壓(MP)在放血降至極值，隨液體灌輸血量恢復(fù)，血壓有所升高，65％的大鼠存活超過(guò)1h，說(shuō)明本發(fā)明的復(fù)蘇液可以有效復(fù)蘇休克大鼠。