本發(fā)明屬于獸用藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種魚腥草芩藍(lán)口服液及其制備方法和產(chǎn)品質(zhì)量控制方法。

背景技術(shù)：

在家禽的規(guī)?；B(yǎng)殖過程中，家禽常因通風(fēng)不良、溫濕度控制不當(dāng)、疫苗應(yīng)激、轉(zhuǎn)群應(yīng)激、粉塵刺激以及病毒、細(xì)菌感染等引起外感發(fā)熱，一般主要表現(xiàn)為精神萎靡，羽毛松亂無光澤，呼吸困難、伴有咳嗽、甩鼻，食欲不振、飲水量增多，體溫較高?？共《疚魉幒涂股仉m然具有很好的治療效果，但卻容易影響肉禽產(chǎn)品的安全性。中藥制劑安全性高、成本低，針對(duì)家禽呼吸道疾病開發(fā)新的中藥制劑對(duì)家禽養(yǎng)殖業(yè)具有重要意義。現(xiàn)有的中藥制劑雙黃連口服液為解表劑，具有疏風(fēng)解表、清熱解毒之功效，常用于畜禽的外感發(fā)熱治療，但其降體溫效果并不十分理想。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足之處，本發(fā)明的目的旨在提供一種魚腥草芩藍(lán)口服液及其制備方法和產(chǎn)品質(zhì)量控制方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下：

一種魚腥草芩藍(lán)口服液，由下述重量百分比的原料藥制成：魚腥草20-40%、黃芩10-30%、板藍(lán)根10-30%、連翹5-20%、金銀花5-20%、柴胡5-10%、石膏5-10%、大黃5-10%、桔梗5-10%。

本發(fā)明處方機(jī)理：方中魚腥草辛能行散，微寒清熱，主入肺經(jīng)，功善清解肺經(jīng)熱毒，消癰排膿，利咽止痛，故為君藥。黃芩、板藍(lán)根性味苦寒，清熱解毒，涼血利咽，用以為臣藥，以加強(qiáng)君藥清熱解毒，利咽消腫之功。風(fēng)熱外侵，肺經(jīng)藴熱，邪熱攻沖咽喉，故配連翹、金銀花疏散風(fēng)熱，清熱解毒，散癰消腫；柴胡發(fā)表退熱、疏肝解郁、升陽，用于感冒發(fā)燒、寒熱往來，石膏與之配伍，借石膏清氣分熱，阻睪透氣機(jī)作用，可使里熱及半表半里之熱盡透發(fā)而解；用大黃瀉下，不惟通腑，實(shí)重在驅(qū)逐毒穢，通腑泄肺逐瘀，肺與大腸相表里，腑氣下通，肺熱自降；配以桔梗開宣肺氣，祛痰排膿，治外感咳嗽，咽喉腫痛，肺癰吐膿。諸藥合用，共奏清熱解毒，退熱涼血消腫，散結(jié)止痛之功，從而扭轉(zhuǎn)病機(jī)，截?cái)嗖?，切斷向營血的傳變。防止感冒后發(fā)生肺炎、心肌炎等疾病；減輕內(nèi)毒素血癥，減少炎癥介質(zhì)的釋放，從而使熱清、邪散、腫消而咽竅通利等諸病得以緩解。

根據(jù)中獸藥理論進(jìn)行組方后，本發(fā)明處方在治療感冒發(fā)熱之外，具有更強(qiáng)的清熱解毒，抗病毒能力，祛痰能力，臨床使用更有效。本發(fā)明魚腥草芩藍(lán)口服液呈本品為黃棕色至棕褐色的液體，微苦澀，主要用于治療和預(yù)防雞外感發(fā)熱，口服液使用方便，利于吸收。用法用量：自由飲水，每1000ml水中以添加1~2ml魚腥草芩藍(lán)口服液為宜，連用3~5天。

制備方法：按按比例取各原料藥并制成粗粉，將魚腥草、金銀花、柴胡3味原料藥的粗粉加6-10重量倍的水進(jìn)行蒸餾，蒸餾液備用，蒸餾后的煎煮液過濾分離，得藥渣和煎煮液分離液；藥渣與剩余其它原料藥粗粉混合作為待逆流提取物料，煎煮液分離液額外加水制成逆流提取溶劑，逆流提取溶劑是待逆流提取物料的6-10重量倍，待逆流提取物料與逆流提取溶劑在沸騰狀態(tài)下連續(xù)逆流式提取0.5-1.5h，提取后過濾，濾液經(jīng)膜分離后得澄清液，濃縮成50℃相對(duì)密度為1.1-1.2的浸膏；將蒸餾液加占其體積0.5~1%的吐溫80溶解后加入到浸膏中，再加入防腐劑，水定容至原料藥總重量的1-2倍，攪勻，過濾，灌裝，即得。

所述連續(xù)逆流式提取為藥材與溶劑在浸出容器中沿相反方向運(yùn)動(dòng)，連續(xù)而充分地進(jìn)行接觸提取的一種方法。正向進(jìn)料、反向進(jìn)溶劑，物料與溶劑的流動(dòng)為逆向連續(xù)動(dòng)態(tài)流動(dòng)，使藥材和溶媒能保持相對(duì)運(yùn)動(dòng)，使料液濃度擴(kuò)散更新持續(xù)作用，進(jìn)而保證了料液浸出速度快。

較好地，所述膜分離為超濾分離，材質(zhì)為聚丙烯或聚砜，截留分子量為6萬-10萬。

較好地，所述防腐劑為尼泊金乙酯和丙酸鈉，尼泊金乙酯和丙酸鈉的加入量分別加入前藥液總體積的0.05~0.1%、0.1~0.5%。

產(chǎn)品質(zhì)量控制方法：采用tlc法對(duì)所得魚腥草芩藍(lán)口服液中的魚腥草、黃芩、連翹、金銀花、板藍(lán)根和柴胡進(jìn)行鑒別；相對(duì)密度不低于1.02，ph值在4.5~6.5，微生物限度檢查符合《中華人民共和國獸藥典》2010年版二部；采用hplc法測定黃芩苷的含量，色譜條件為：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，以0.6％磷酸溶液-甲醇為流動(dòng)相，0.6％磷酸溶液：甲醇的體積比為53:47，檢測波長為278nm。

有益效果：本發(fā)明方法中，將原料藥破碎成粗粉，有利于有效成分的溶出，比飲片提取縮短提取時(shí)間；連續(xù)逆流式提取有諸多優(yōu)點(diǎn)：提取速度快、有效成分提取充分、提取收得率高、溶劑耗量少、藥液濃度高、減少了蒸發(fā)濃縮等后續(xù)處理藝、滾筒內(nèi)藥材粗粉移動(dòng)速度可調(diào)節(jié)，從而可根據(jù)藥材特點(diǎn)調(diào)節(jié)提取時(shí)間的長短、藥材在溫和的動(dòng)態(tài)環(huán)境下進(jìn)行提取，加熱溫度較低、有效成分破壞較少，使藥液中雜質(zhì)含量少，屬于連續(xù)式生產(chǎn)，處理能力大。總體上，魚腥草芩藍(lán)口服液，符合國家發(fā)布的新獸藥范疇；通過技術(shù)改造，去除了不必要的雜質(zhì)，增加了有效成分含量，利于禽的吸收，從而提高治療療效。此外，本發(fā)明口服液組方合理、吸收率高，可以通過飲水添加，使用方便，通過飲水添加，大大降低了勞動(dòng)強(qiáng)度，有利于集約化、規(guī)?；B(yǎng)殖。

附圖說明

圖1：甲醇-水-冰醋酸（50:50:1，體積比）作為流動(dòng)相后的所得色譜圖。

圖2：甲醇-0.2%（g/ml）磷酸溶液（52:48，體積比）作為流動(dòng)相后的所得色譜圖。

圖3：0.6％（g/ml）磷酸溶液－甲醇（53∶47，體積比）作為流動(dòng)相后的所得色譜圖。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

一種魚腥草芩藍(lán)口服液，其由下述重量百分比原料藥制成：魚腥草20%、黃芩20%、板藍(lán)根20%、連翹10%、金銀花10%、柴胡5%、石膏5%、大黃5%、桔梗5%。

制備方法：按比例取各原料藥并制成粗粉，將魚腥草、金銀花、柴胡3味原料藥的粗粉加6重量倍的水進(jìn)行蒸餾，蒸餾液備用，蒸餾后的煎煮液過濾分離，得藥渣和煎煮液分離液；藥渣與剩余其它原料藥粗粉混合作為待逆流提取物料，煎煮液分離液額外加水制成逆流提取溶劑，逆流提取溶劑是待逆流提取物料的6重量倍，待逆流提取物料與逆流提取溶劑在沸騰狀態(tài)下連續(xù)逆流式提取0.5h，提取后過濾，濾液經(jīng)截留分子量為6萬聚丙烯膜分離后得澄清液，濃縮成50℃相對(duì)密度為1.1的浸膏；將蒸餾液加占其體積0.5%的吐溫80溶解后加入到浸膏中，再加入防腐劑尼泊金乙酯和丙酸鈉，尼泊金乙酯和丙酸鈉的加入量分別加入前藥液總體積的0.05%、0.5%，水定容至原料藥總重量的1倍，攪勻，過濾，灌裝，即得。

實(shí)施例2

一種魚腥草芩藍(lán)口服液，其由下述重量百分比原料藥制成：魚腥草30%、黃芩10%、板藍(lán)根10%、連翹10%、金銀花10%、柴胡10%、石膏10%、大黃5%、桔梗5%。

制備方法：按比例取各原料藥并制成粗粉，將魚腥草、金銀花、柴胡3味原料藥的粗粉加8倍重量的水進(jìn)行蒸餾，蒸餾液備用，蒸餾后的煎煮液過濾分離，得藥渣和煎煮液分離液；藥渣與剩余其它原料藥粗粉混合作為待逆流提取物料，煎煮液分離液額外加水制成逆流提取溶劑，逆流提取溶劑是待逆流提取物料的8重量倍，待逆流提取物料與逆流提取溶劑在沸騰狀態(tài)下連續(xù)逆流式提取1.0h，提取后過濾，濾液經(jīng)截留分子量為8萬聚丙烯膜分離后得澄清液，濃縮成50℃相對(duì)密度為1.1的浸膏；將蒸餾液加占其體積0.8%的吐溫80溶解后加入到浸膏中，再加入防腐劑尼泊金乙酯和丙酸鈉，尼泊金乙酯和丙酸鈉的加入量分別加入前藥液總體積的0.08%、0.4%，水定容至原料藥總重量的1.2倍，攪勻，過濾，灌裝，即得。

實(shí)施例3

一種魚腥草芩藍(lán)口服液，其由下述重量百分比原料藥制成：魚腥草40%、黃芩20%、板藍(lán)根10%、連翹5%、金銀花5%、柴胡5%、石膏5%、大黃5%、桔梗5%。

制備方法：按比例取各原料藥并制成粗粉，將魚腥草、金銀花、柴胡3味原料藥的粗粉加9倍重量的水進(jìn)行蒸餾，蒸餾液備用，蒸餾后的煎煮液過濾分離，得藥渣和煎煮液分離液；藥渣與剩余其它原料藥粗粉混合作為待逆流提取物料，煎煮液分離液額外加水制成逆流提取溶劑，逆流提取溶劑是待逆流提取物料的9重量倍，待逆流提取物料與逆流提取溶劑在沸騰狀態(tài)下連續(xù)逆流式提取1.0h，提取后過濾，濾液經(jīng)截留分子量為10萬聚砜膜分離后得澄清液，濃縮成50℃相對(duì)密度為1.2的浸膏；將蒸餾液加占其體積1%的吐溫80溶解后加入到浸膏中，再加入防腐劑尼泊金乙酯和丙酸鈉，尼泊金乙酯和丙酸鈉的加入量分別加入前藥液總體積的0.1%、0.1%，水定容至原料藥總重量的1.5倍，攪勻，過濾，灌裝，即得。

實(shí)施例4

一種魚腥草芩藍(lán)口服液，其由下述重量百分比原料藥制成：魚腥草40%、黃芩10%、板藍(lán)根10%、連翹5%、金銀花5%、柴胡5%、石膏10%、大黃10%、桔梗5%。

制備方法：按比例取各原料藥并制成粗粉，將魚腥草、金銀花、柴胡3味原料藥的粗粉加10倍重量的水進(jìn)行蒸餾，蒸餾液備用，蒸餾后的煎煮液過濾分離，得藥渣和煎煮液分離液；藥渣與剩余其它原料藥粗粉混合作為待逆流提取物料，煎煮液分離液額外加水制成逆流提取溶劑，逆流提取溶劑是待逆流提取物料的10重量倍，待逆流提取物料與逆流提取溶劑在沸騰狀態(tài)下連續(xù)逆流式提取1.5h，提取后過濾，濾液經(jīng)截留分子量為10萬聚砜膜分離后得澄清液，濃縮成50℃相對(duì)密度為1.15的浸膏；將蒸餾液加占其體積1%的吐溫80溶解后加入到浸膏中，再加入防腐劑尼泊金乙酯和丙酸鈉，尼泊金乙酯和丙酸鈉的加入量分別加入前藥液總體積的0.1%、0.3%，水定容至原料藥總重量的2倍，攪勻，過濾，灌裝，即得。

產(chǎn)品質(zhì)量控制例1：

性狀本品為棕黃色的液體；味微澀。

鑒別

（1）為方中魚腥草的薄層色譜鑒別：

供試品溶液的制備：取本品20ml，用5%（g/ml）氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph值至11~12，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。

對(duì)照藥材溶液的制備：取魚腥草對(duì)照藥材2g，加水50ml，加熱回流30分鐘，濾過，同法制成對(duì)照藥材溶液。

缺魚腥草陰性溶液的制備：按照處方藥材比例與制法，制備缺魚腥草的陰性對(duì)照樣品，取缺魚腥草的陰性樣品20ml，按供試品溶液制備方法，制得缺魚腥草陰性溶液。

展開條件的選擇：吸取上述三種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以二氯甲烷-丙酮（15:1，體積比）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下栓視。

結(jié)論：實(shí)施例1~4供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)，缺魚腥草陰性樣品色譜在相應(yīng)的位置上無干擾。

（2）為方中黃芩的薄層色譜鑒別：

供試品溶液的制備：取本品10ml，加無水乙醇10ml，搖勻，濾過，取濾液作為供試品溶液。

對(duì)照品溶液的制備：取黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

缺黃芩陰性溶液的制備：按照處方藥材比例與制法，制備缺黃芩的陰性對(duì)照樣品，取缺黃芩的陰性樣品5ml，按供試品溶液制備方法，制得缺黃芩陰性溶液。

展開條件的選擇：吸取上述三種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以4%醋酸鈉溶液制備的硅膠g薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5:3:1:1，體積比）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇溶液。

結(jié)論：實(shí)施例1~4供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，缺黃芩陰性樣品色譜在相應(yīng)的位置上無干擾。

（3）為方中連翹的薄層色譜鑒別：

供試品溶液的制備：取本品10ml，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，加在中性氧化鋁柱（100～200目，6g，內(nèi)徑1cm）上，用70v%乙醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。

對(duì)照品溶液的制備：取連翹苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

缺連翹陰性溶液的制備：按照處方藥材比例與制法，制備缺連翹的陰性對(duì)照樣品，取缺連翹的陰性樣品10ml，按供試品溶液制備方法，制得缺連翹陰性溶液。

展開條件的選擇：吸取上述三種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以三氯甲烷-甲醇（5:1，體積比）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至班點(diǎn)顯色清晰。

結(jié)論：實(shí)施例1~4供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，缺連翹陰性樣品色譜在相應(yīng)的位置上無干擾。

（4）為方中金銀花的薄層色譜鑒別：

供試品溶液的制備：取本品2ml，加水20ml，用稀鹽酸調(diào)節(jié)ph值至2，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。

對(duì)照品溶液的制備：取綠原酸對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

缺金銀花陰性溶液的制備：按照處方藥材比例與制法，制備缺金銀花的陰性對(duì)照樣品，取缺金銀花的陰性樣品2ml，按供試品溶液制備方法，制得缺金銀花陰性溶液。

展開條件的選擇：分別吸取上述三種溶液各1μl，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-甲酸-水（8:1:1，體積比）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。

結(jié)論：實(shí)施例1~4供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，缺金銀花陰性樣品色譜在相應(yīng)的位置上無干擾。

（5）為方中板藍(lán)根的薄層研究

供試品溶液的制備：取本品20ml，蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液。

對(duì)照品溶液的制備：取精氨酸對(duì)照品，加無水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

缺板藍(lán)根陰性溶液的制備：按照處方藥材比例與制法，制備缺板藍(lán)根的陰性對(duì)照樣品，取缺板藍(lán)根的陰性樣品溶液20ml，按供試品溶液制備方法，制得缺板藍(lán)根陰性溶液。

展開條件的選擇：吸取上述三種溶液各1μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以正丁醇–冰醋酸–水（19:5:5，體積比）為展開劑，展開，取出，熱風(fēng)吹干，噴以茚三酮試液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。

結(jié)果：實(shí)施例1~4供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照樣品在相應(yīng)的位置上無干擾。

（6）為方中柴胡的薄層研究

供試品溶液的制備：取本品40ml，用乙醚萃取3次，每次50ml，棄去乙醚液，用水飽和正丁醇振搖提取3次，每次50ml，合并正丁醇液，用等體積的氨試液洗滌3次，棄去氨試液，再用等體積的水洗滌3次，棄去水液，分取正丁醇液，濾過，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。

對(duì)照藥材溶液的制備：另取柴胡對(duì)照藥材2g，加水50ml，加熱回流1小時(shí)，濾過，按供試品溶液制備方法，制得對(duì)照藥材溶液。

缺柴胡陰性溶液的制備：按照處方藥材比例與制法，制備缺柴胡的陰性對(duì)照樣品，取缺柴胡的陰性樣品溶液40ml，按供試品溶液制備方法，制得缺柴胡陰性溶液。

展開條件的選擇：吸取上述三種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶7∶2，體積比）10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％對(duì)二甲氨基苯甲醛硫酸乙醇溶液（1→10），在80℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈（365nm）下檢視。

結(jié)果：實(shí)施例1~4供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)，陰性對(duì)照樣品在相應(yīng)的位置上無干擾。

產(chǎn)品質(zhì)量控制例2

【相對(duì)密度】：按照《中國獸藥典》2010年版二部附錄46頁相對(duì)密度項(xiàng)下測定韋氏比重法操作，實(shí)施例1~4四批樣品相對(duì)密度測定結(jié)果在1.04附近，根據(jù)四批樣品相對(duì)密度測定結(jié)果，相對(duì)密度不低于1.02。

【ph值】：按照《中國獸藥典》2010年版二部附錄49頁ph值測定法操作，用酸度計(jì)測定，實(shí)施例1~4四批樣品ph值測定結(jié)果范圍為4.50～6.50。

【微生物限度檢查】

按照《中國獸藥典》2010年版二部附錄97頁微生物限度檢查法項(xiàng)下，測定結(jié)果如表1。

產(chǎn)品質(zhì)量控制例3--測定黃芩苷的含量

測定方法定為：

【儀器與試藥】高效液相色譜儀：agilenttechnologies1260，安捷倫色譜數(shù)據(jù)工作站，紫外可變波長檢測器（安捷倫科技有限公司）。

對(duì)照品：黃芩苷，批號(hào)：110715-201318，含量為93.3%，購自中國食品藥品檢定研究院。

魚腥草芩藍(lán)口服液：實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3、實(shí)施例4的產(chǎn)品。

甲醇、乙腈為色譜純，其它試劑都采用分析純。

【色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)】用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；以0.6％（g/ml）磷酸溶液－甲醇（53∶47，體積比）為流動(dòng)相；檢測波長為278nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)應(yīng)不低于2000。

【對(duì)照品溶液的制備】取黃芩苷對(duì)照品（批號(hào)：110715-201318，含量為93.3%，購自中國食品藥品檢定研究院）適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。

【供試品溶液的制備】精密量取本品2ml，置250ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理20分鐘，放置至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

【測定法】分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

產(chǎn)品含量測定結(jié)果如表2。

產(chǎn)品質(zhì)量控制對(duì)照例3'--流動(dòng)相的選擇

以實(shí)施例1產(chǎn)品為研究對(duì)象，與產(chǎn)品質(zhì)量控制例3的不同之處在于：【色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)】項(xiàng)下的流動(dòng)相，分別為甲醇-水-冰醋酸（50:50:1，體積比）和甲醇-0.2%（g/ml）磷酸溶液（52:48，體積比）。

甲醇-水-冰醋酸（50:50:1，體積比）作為流動(dòng)相后的所得色譜圖見圖1，甲醇-0.2%（g/ml）磷酸溶液（52:48，體積比）作為流動(dòng)相后的所得色譜圖見圖2，0.6％（g/ml）磷酸溶液－甲醇（53∶47，體積比）作為流動(dòng)相后的所得色譜圖見圖3。

可知：甲醇-水-冰醋酸（50:50:1）和甲醇-0.2%磷酸溶液（52:48），所得的色譜圖主峰的分離度較差；流動(dòng)相為0.6%磷酸-甲醇（53:47），所得的色譜圖基線穩(wěn)定，分離度高，重復(fù)性好。

產(chǎn)品質(zhì)量控制對(duì)照例3''--樣品超聲處理方法的選擇

以實(shí)施例1產(chǎn)品為研究對(duì)象，與產(chǎn)品質(zhì)量控制例3的不同之處在于：【供試品溶液的制備】項(xiàng)下的超聲處理時(shí)間，分別為0min（不超聲）、10min、30min。

不同樣品超聲處理方法后的檢測結(jié)果如表3。

從測定結(jié)果看，超聲處理30分鐘與超聲20分鐘處理樣品，含量結(jié)果無差別，依據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，選擇超聲20分鐘。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)例

1材料與方法

1.1試驗(yàn)藥物

陽性對(duì)照組一：雙黃連口服液，河北瑞高動(dòng)物藥業(yè)有限公司，批號(hào)：15052001。

陽性對(duì)照組二：復(fù)方魚腥草口服液，本申請人申請的申請?zhí)枮椤癱n201410754034.x”，發(fā)明名稱為“獸用復(fù)方魚腥草口服液及其制備方法”的專利中實(shí)施例3制備的產(chǎn)品。

試驗(yàn)一～試驗(yàn)五組：實(shí)施例1魚腥草芩藍(lán)口服液。

1.2試驗(yàn)動(dòng)物

挑選患病雞140只，28日齡麻雞，臨床癥狀為觸診皮膚灼熱，體溫≥42℃，雞冠發(fā)紺；精神沉郁，食欲下降，不愿走動(dòng)，羽毛松亂，張口呼吸，鼻流清液或粘涕，有的甩頭咳嗽。試驗(yàn)前病雞均未給任何藥物治療。試驗(yàn)地點(diǎn)為永登縣大同鎮(zhèn)養(yǎng)雞場。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1試驗(yàn)動(dòng)物分組及處理

將挑選的患病雞140只，隨機(jī)分為7組，分別為魚腥草芩藍(lán)口服液（試驗(yàn)一～試驗(yàn)五）組、陽性對(duì)照組，每組20只。給藥方式：兌水，具體給藥方案見表4。

1.4臨床療效的觀察

1.4.1臨床癥狀及記錄

試驗(yàn)期間，每天觀察并記錄雞臨床表現(xiàn)，如精神狀態(tài)、飲食欲、呼吸道癥狀等。觀察期間，對(duì)死亡病例逐只剖檢，觀察記錄肺臟等器官的病理變化。

1.4.2體溫測定

于給藥前和停藥后，分別測量各組試驗(yàn)雞的體溫值（肛溫），計(jì)算各組平均體溫，比較用藥后雞的體溫變化。

1.5療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

試驗(yàn)期間每天觀察各試驗(yàn)組雞的精神狀態(tài)、平均采食情況、呼吸和臨床癥狀等指標(biāo)。試驗(yàn)期間按照中獸醫(yī)證候療效標(biāo)準(zhǔn)，觀察和記錄各組的臨床治愈雞數(shù)、有效雞數(shù)、無效雞數(shù)和死亡雞數(shù)。

1.5.1體溫變化

于給藥前，給藥72h后，每組試驗(yàn)雞全部測量體溫（肛溫），計(jì)算各組平均體溫，比較給藥后雞的體溫變化。

1.5.2臨床癥狀積分評(píng)定

試驗(yàn)期間觀察試驗(yàn)雞的精神狀態(tài)、體溫、呼吸、采食情況和糞便性狀等臨床指標(biāo)。為更加客觀評(píng)定藥物效果，臨床癥狀采用積分制進(jìn)行評(píng)價(jià)。選取外感發(fā)熱診斷標(biāo)準(zhǔn)中主要癥狀進(jìn)行量化分級(jí)打分，觀察雞只治療前后的積分變化。分別于給藥前，停藥后各記錄一次。積分標(biāo)準(zhǔn)見表5。

1.5.3中獸醫(yī)證候療效標(biāo)準(zhǔn)

各試驗(yàn)組存活雞根據(jù)治療前后積分計(jì)算證候療效率，并按照下表6中中獸醫(yī)證候療效評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)判定雞治療效果并記錄。各組統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)整理后進(jìn)行差異性分析。

1.6數(shù)據(jù)分析與處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用spss18.0統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì)分析，試驗(yàn)結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間數(shù)據(jù)差異性采用單因素方差分析。

2試驗(yàn)結(jié)果

2.1臨床治療效果

魚腥草芩藍(lán)口服液對(duì)雞外感發(fā)熱的療效結(jié)果見表7。

可知：本發(fā)明魚腥草芩藍(lán)口服液對(duì)患病雞的臨床癥狀均有改善效果，用藥后發(fā)病雞的病情減輕，精神以及食欲好轉(zhuǎn)，咳嗽癥狀減輕。且試驗(yàn)二組～試驗(yàn)五組對(duì)臨床癥狀的有效率與陽性對(duì)照組一、二比較差異顯著（p＜0.05），陽性對(duì)照組一和二之間差異不顯著（p＞0.05）。

2.2魚腥草芩藍(lán)口服液對(duì)雞體溫的影響

魚腥草芩藍(lán)口服液對(duì)體溫影響結(jié)果見表8。

根據(jù)養(yǎng)殖場觀察記錄，麻雞正常體溫在40.5℃~41.6℃之間。陽性對(duì)照組一和二之間差異不顯著（p＞0.05），試驗(yàn)一組的體溫變化與陽性對(duì)照組一和二比較差異顯著（p＜0.05）；試驗(yàn)二組～試驗(yàn)五組的體溫變化與陽性對(duì)照組一和二比較差異極顯著（p＜0.01）；試驗(yàn)四組～試驗(yàn)五組的體溫變化與試驗(yàn)一組比較差異極顯著（p＜0.01）。說明本發(fā)明魚腥草芩藍(lán)口服液可以降低發(fā)病雞的體溫，陽性對(duì)照組一和二降體溫效果卻不明顯。

3結(jié)論

通過上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出魚腥草芩藍(lán)口服液對(duì)雞外感發(fā)熱所引起的臨床癥狀有較好的治療效果，可以改善病雞精神狀態(tài)，提高采食量，減輕呼吸道癥狀，降低體溫等。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果得出，用法用量：魚腥草芩藍(lán)口服液1～2ml兌水1l，自由飲水，連用3～5天。。

上述實(shí)施例為本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明所作的改變均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。