本發(fā)明屬于向口腔輸送活性物質(zhì)的領(lǐng)域，并且涉及粘膜粘附活性組合物以及相應(yīng)的粘膜粘附劑型，其可以在口腔內(nèi)輸送活性物質(zhì)，尤其是用于輸送益生菌物質(zhì)的口腔分散片。本發(fā)明還涉及一種生產(chǎn)所述組合物的方法以及一種將該組合物加工為粘膜粘附劑型，尤其是口腔分散片的方法。此外本發(fā)明涉及一種測試劑型粘膜粘附性能的系統(tǒng)和方法。
現(xiàn)有技術(shù)
口服給藥是吞服活性物質(zhì)從而將其釋放至人類和動物胃腸道(GI)的方法。胃腸道主要包括胃、小腸和大腸。在藥物/健康保健領(lǐng)域口服輸送是最常使用的方法，并且由于低成本，施用時能緩解和避免疼痛，以及減小與腸胃外劑型相關(guān)的感染風險，是最受歡迎的活性物質(zhì)施用途徑。此外，相對大的可用液體量，吸收可用的增大的粘膜面積以及供應(yīng)至胃黏膜的豐富血液輔助更多藥物的吸收。
然而，許多活性物質(zhì)的弱溶解性、穩(wěn)定性和生物有效性使得通過胃腸道難以實現(xiàn)治療水平?？诜o藥必須克服大量障礙，包括酸性的胃環(huán)境和持續(xù)分泌的保護胃腸道的粘液。
為了克服與口服給藥相關(guān)的上述問題并實現(xiàn)更有效方便的施用活性物質(zhì)，許多研究集中在研發(fā)新的口腔粘膜給藥系統(tǒng)。
與所述傳統(tǒng)口腔劑型不同，其將活性成分輸送至病人/消費者的胃腸道，用于通過胃或腸上皮吸收活性成分，口腔/舌下劑型用于保持在口腔中或舌下直到活性物質(zhì)被完全釋放至口中。
很明顯通過口腔和/或舌下劑型施用的主要問題是生理和藥理活性物質(zhì)、可食用化妝品以及食品，尤其是那些不能快速與口腔黏膜相互作用的，會由于口腔內(nèi)連續(xù)分泌唾液被大量沖走。適當?shù)目谇缓?或舌下劑型與口腔粘膜接觸的時間必須足以使所含活性物質(zhì)與口腔黏膜相互反應(yīng)。因此有必要向劑型中加入粘膜粘附制劑從而延長在口腔中的保留時間并提高活性物質(zhì)在口腔粘膜上的持久性。相關(guān)技術(shù)已經(jīng)在以下出版物中公開。
US 2014/0234212 A1(MASSACHUSETTS INSTITUTE OF TECHNOLOGY)公開了一種口腔輸送設(shè)備，含有粘膜粘附聚合基質(zhì)，分散其中的納米顆粒和非滲透墊層，其中活性物質(zhì)被負載至納米顆粒。使用時該口腔輸送設(shè)備被放置于粘膜層上并通過粘膜粘附性被粘附至口腔上皮，其中納米顆粒穿過粘膜并控制地釋放負載的活性物質(zhì)。所采用的納米顆粒生產(chǎn)方法在含有活性物質(zhì)和相應(yīng)聚合物的溶液中進行。
US 2013/0337022 A1(UNIVERSITY OF THE WITWATERSRAND)涉及藥物劑型，含有粘膜粘附層、水不溶層和負載活性物質(zhì)的中間層，其中活性物質(zhì)為微結(jié)構(gòu)和/或納米 結(jié)構(gòu)形式，并通過直接溶解、懸浮或以乳液形式加至中間層。使用質(zhì)地分析儀，通過測定由模擬胃膜分離制劑膜所需的拉力測試劑型的粘膜粘附性。
US 20110028431 A1(ZERBE ET AL)涉及一種直接壓制制劑，其通過混合粘膜粘附聚合物、藥物活性物質(zhì)、崩解劑和其他成分，隨后壓制所得混合物而制備。得到的壓制制劑可以被進一步制成固體口服劑型。通過使用該劑型，提高了活性物質(zhì)通過口腔粘膜的吸附并且降低了活性物質(zhì)的消化。
US 2010/0063110 A1(MEYER ET AL)公開了含有堿性物質(zhì)的口腔崩解膜，其可以在1至10分鐘內(nèi)在口內(nèi)崩解并粘附至口腔粘膜。使用抗拉強度試驗機測試該膜的粘膜粘附性。
US 2009/0110717 A1(SINGH ET AL)涉及一種含有兩個組件的穿粘膜片用于施用活性物質(zhì)，優(yōu)選地活性物質(zhì)在內(nèi)組件，粘膜粘附劑在外組件。在使用過程中部分內(nèi)組件和部分外組件粘附至粘膜從而通過口腔粘膜輸送活性物質(zhì)。實現(xiàn)活性物質(zhì)想要的效果后，可以簡單撕除該片劑。
在本發(fā)明中益生菌作為最常用活性物質(zhì)中的一種被特別采用。益生菌是活的無毒性可消化微生物，其可通過提供：(1)菌群正?；?例如抑制PPMs，腸粘膜完整性，調(diào)節(jié)腸運動，IBS等)；(2)免疫調(diào)節(jié)(例如強化免疫，緩解食物過敏癥狀，控制IBD等)；(3)代謝作用(例如生產(chǎn)維生素改善消化，減小乳糖不耐，降低膽固醇，促進膽汁酸分解等)和許多其他益處改進宿主腸道微生物平衡而不導致任何疾病，從而有益的影響宿主。
益生菌應(yīng)當在儲存穩(wěn)定的制劑中輸送。細菌菌落數(shù)和活性應(yīng)當穩(wěn)定并且在到達小腸和結(jié)腸前必須經(jīng)受住上胃腸道的酸性和膽汁性環(huán)境。由于沒有調(diào)節(jié)益生菌的質(zhì)量和含量，很難精確評估其功效和安全性。益生菌輸送系統(tǒng)可以分為常規(guī)藥用制劑和非常規(guī)，主要是商業(yè)食品基產(chǎn)品。盡管兩種系統(tǒng)差別極大，益生菌的吸收位點主要位于胃腸道。
例如在WO 2014152338 A1中，公開了一種用于向回腸和近端結(jié)腸輸送益生菌制劑的口服輸送系統(tǒng)，其包括：含有益生菌制劑的核，其中益生菌制劑包含于可生物降解的第一膠囊內(nèi)，其涂布有第一腸溶衣，尺寸可用于包覆涂布的第一膠囊的第二膠囊，其中第二膠囊在回腸釋放第一膠囊，一旦釋放，第一膠囊在近端結(jié)腸溶解并釋放所含的益生菌制劑。
然而，由于益生菌對溫度/濕度特別敏感并且功效取決于其生理活性和生存能力，活細菌的生產(chǎn)在整個過程中都需要專門技術(shù)和嚴格的質(zhì)量管控。世界上僅有一些公司具備生產(chǎn)活益生菌并將其加工為純的、活的、穩(wěn)定的并且一致的益生菌制劑的工業(yè)能力。特別是用于在口腔內(nèi)長時間釋放的益生菌制劑，幾乎沒有公司報道相關(guān)信息和研究進展。
因此，基于益生菌通過影響人類體內(nèi)菌群對人類健康所產(chǎn)生的已知重要益處，本發(fā)明解決的主要問題是提供粘膜粘附活性組合物以及相應(yīng)的粘膜粘附劑型，尤其是用于輸送益生菌物質(zhì)的口腔分散片，其可以將益生菌的應(yīng)用延伸至口腔，由此通過在口腔內(nèi)的各種效果如抗炎、抗菌、粘附促進和微生物影響效果防止或治療牙齦炎和牙周炎。本發(fā)明解決的另一個問題是生產(chǎn)所述顆粒并將該顆粒加工為粘膜粘附劑型，尤其是口腔分散片。此外本發(fā)明解決的另一個問題是提供一種測定劑型粘膜粘附性的系統(tǒng)和方法，從而評價劑型的粘膜粘附性并得到穩(wěn)定可靠的結(jié)果。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是向口腔直接提供活的益生菌菌群并保持足夠量的益生菌粘附在口腔粘膜上從而實現(xiàn)益生菌對口腔健康的效果。因此本發(fā)明提供粘膜粘附活性顆粒以及由這些顆粒加工得到的相應(yīng)的粘膜粘附劑型，其可在口腔內(nèi)輸送活性物質(zhì)，尤其是用于輸送益生菌物質(zhì)的口腔分散片。所述口腔分散片可以在短時間內(nèi)完全崩解并釋放活的減毒益生菌，其可借助具備粘膜粘附性的成分被固定至口腔粘膜。
本發(fā)明的粘膜粘附活性組合物含有
(i)粘膜粘附聚合物，和
(ii)固態(tài)活性制劑。
令人驚異地觀察到本發(fā)明的粘膜粘附活性組合物與純活性制劑相比具備顯著的生物活性和更好的可用性。此外所要求的組合物也為工業(yè)應(yīng)用提供可能性，因為它們作為活性底物可以被容易地加工為各種粘膜粘附口服劑型，如片劑或膠囊。根據(jù)本發(fā)明的粘膜粘附益生菌口服分散片的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)示于圖1。
在本發(fā)明中固體活性制劑優(yōu)選為抗炎劑、皮質(zhì)類固醇、抗腹瀉劑、類鴉片、免疫抑制劑、抗生素、止吐劑、抗真菌劑、抗病毒劑、抗瘧藥、抗結(jié)核藥、抗逆轉(zhuǎn)錄病毒劑、抗高血壓藥、蛋白質(zhì)、肽、化療藥、診斷劑、益生元、多種維生素、礦物質(zhì)、微量元素、植物營養(yǎng)素等。
更優(yōu)選地，在本發(fā)明中使用的固態(tài)活性制劑是有益微生物(益生菌)及其衍生物。應(yīng)當注意這是第一次借助粘膜粘附聚合物實現(xiàn)將益生菌粘附至口腔粘膜。
益生菌及其衍生物
在本發(fā)明中益生菌是指活的微生物，其具備有益于宿主的性能。根據(jù)FAO/WHO的定義，它們是“適當劑量下為宿主帶來健康益處的活的微生物”。益生菌通常作為添加特定活菌群的發(fā)酵食品的成分被消化，例如酸奶、酸豆奶或其他益生菌食品，此外，也可以使用含有凍干形式的微生物的片劑、膠囊、粉末和袋劑。
根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選使用的益生菌在下文中列出：
植物乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)299V
植物乳酸桿菌Heal 9(DSM 15312)
植物乳酸桿菌Heal 52A(Heal 19)(DSM 15313)
植物乳酸桿菌Heal 99(DSM 15316)
發(fā)酵乳酸桿菌35 D[沒有數(shù)據(jù)庫編號]，
發(fā)酵乳酸桿菌GOS 51[沒有數(shù)據(jù)庫編號]，
植物乳酸桿菌GOS 42[沒有數(shù)據(jù)庫編號]，
副干酪乳酸桿菌GOS 63[沒有數(shù)據(jù)庫編號]
除了益生菌，其衍生物如熱處理益生菌，其片段例如抗原決定部位可以被加工為本發(fā)明中所述的活性制劑。
粘膜粘附聚合物
“粘膜粘附性”是能夠粘附至人體粘膜的材料的性能。在本發(fā)明中優(yōu)選使用的粘膜粘附聚合物包括親水性聚合物和天然膠。優(yōu)選的親水性聚合物實例是纖維素類聚合物如羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥乙基甲基纖維素、乙基羥乙基纖維素、羧甲基纖維素及其鹽，及其兩種或多種的混合物；乙烯基聚合物如聚乙酸乙烯酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮；以及丙烯酸聚合物和共聚物如聚丙烯酸及其鹽、聚卡波非等。天然橡膠是天然源多糖。一些天然膠實例是卡拉膠、魔芋、海藻酸鈉和海藻酸鈣、瓊脂糖、瓜爾膠、果膠、黃芪膠、阿拉伯膠、右旋糖酐、結(jié)冷膠、黃原膠、硬葡聚糖、透明質(zhì)酸、殼聚糖、香豆膠、刺槐豆膠等。也可以使用上述粘膜粘附聚合物的結(jié)合物。也可以使用其他粘膜粘附聚合物或粘膜粘附聚合物的結(jié)合物。
在本發(fā)明中最優(yōu)選的粘膜粘附聚合物選自組包括Carbopol 971P NF(聚丙烯酸)、Tylopur 615(羥丙甲纖維素，羥丙基甲基纖維，HPMC)、Metolose 65SH50(羥丙甲纖維素，羥丙基甲基纖維，HPMC)和殼聚糖。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中粘膜粘附聚合物和固態(tài)活性制劑的使用比例為約10:1至約1:50，優(yōu)選約2:1至約1:20，更優(yōu)選約1:1至約1:10。
在另一個優(yōu)選實施方案中使用的固態(tài)活性制劑可以先造粒，隨后與粘膜粘附聚合物混合。得到的固態(tài)活性制劑的顆粒直徑為50至1000μm。
在本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的粘膜粘附活性組合物可以被加工為直徑為50至1000μm的顆粒。本發(fā)明的另一個主題是粘膜粘附劑型，尤其是用于在口腔內(nèi)輸送益生菌物質(zhì)的口腔分散片。
根據(jù)本發(fā)明口腔分散片，含有
(i)根據(jù)本發(fā)明的粘膜粘附活性組合物，和
(ii)含有至少一種崩解劑的輔料，
(iii)混合并壓縮形成片劑。
本發(fā)明的口腔分散片根據(jù)歐洲藥典采用所記載的方法“片劑和膠囊的崩解”(2.9.1)測定出在3分鐘內(nèi)完全崩解。在美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)的“工業(yè)口服崩解片劑指南”中，推薦崩解時間小于30秒。釋放的粘膜粘附益生菌可以粘附至口腔粘膜。
口腔分散片
口腔分散片(ODT)也可以被稱為口服崩解劑、口溶片劑、速溶片劑、速崩片劑、速熔片劑和速溶片劑。最近，歐洲藥典使用術(shù)語口腔分散片。ODT與傳統(tǒng)片劑的區(qū)別在于被設(shè)計為在口腔中，例如在舌頭上于短時間如3分鐘內(nèi)溶解，而不是被整個吞入。ODT是用于直接在口腔中輸送活性成分的替代劑型，并影響位于口腔粘膜的活性位點。
輔料
在本發(fā)明中輔料可以被定義為非生理學和藥理學活性成分、可食用化妝品以及食品的非活性成分，其可在生產(chǎn)過程中加入或包含于最終藥物產(chǎn)品劑型中。除了將活性成分運送至體內(nèi)位點，在該位點藥物施加作用，輔料在制備過程中同樣重要。它們對于防止活性成分在同化過程中過早釋放同樣重要。另一些幫助藥物足夠快地崩解為顆粒從而釋放活性成分，而另一些保證產(chǎn)品的穩(wěn)定性使其在使用時保持最佳效率。此外，一些輔料用于輔助藥物產(chǎn)品識別。最后但并非最不重要的一點是，一些敷料簡單用于改善產(chǎn)品的味道和外觀。這提高了病人，特別是兒童的依從性。盡管治療意義上技術(shù)“無活性”，藥物輔料是現(xiàn)代藥物產(chǎn)品關(guān)鍵并且必要的成分。在許多產(chǎn)品中，輔料構(gòu)成了整個劑型的整體。
在本發(fā)明中使用的輔料包括至少一種崩解劑。
崩解劑
崩解劑是加入片劑或膠囊的輔料，用于當壓實體被放入液體環(huán)境時輔助其碎裂。這對于需要快速釋放活性物質(zhì)的立即釋放產(chǎn)品尤其重要?？诜苿?，尤其是本發(fā)明的口腔分散片含有足以實現(xiàn)想要的并且有效的崩解速率的崩解制劑(崩解劑)如交聯(lián)羧甲基纖維素納、羧甲基纖維素鈣、交聚維酮、羥丙基纖維素(低取代)、淀粉、羥基乙酸淀粉鈉、海藻酸、海藻酸鈣、膨潤土、纖維素、瓜爾豆半乳甘露聚糖等，從而優(yōu)化生理和藥理活性物質(zhì)，可食用化妝品以及食品的釋放，減小消費者的不適和不便，或?qū)崿F(xiàn)釋放效率與降低的不適和/或不便之間的平衡。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中使用交聚維酮(例如Kollidon CL‐SF)作為崩解劑生產(chǎn)口腔分散片。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中粘膜粘附活性組合物的含量為約0.1至約80重量％，優(yōu)選約10至約40重量％，基于口腔分散片的重量計。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中崩解劑的含量為約1至約15重量％，優(yōu)選約2至約5重量％，基于口腔分散片的重量計。
在另一個優(yōu)選實施方案中得到的本發(fā)明的口腔分散片在約3分鐘內(nèi)，優(yōu)選約30秒或更短時間內(nèi)完全崩解。
在一個優(yōu)選實施方案中粘膜粘附活性組合物含有固態(tài)活性制劑，尤其是顆粒形式的益生菌。對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，所用成分的顆?；瘜Φ玫降目谇环稚⑵谋澜鈺r間有不利影響。因此本領(lǐng)域技術(shù)人員會避免將活性制劑與粘膜粘附聚合物造粒，從而實現(xiàn)口腔分散片的有效藥物釋放。然而，已經(jīng)令人驚異地發(fā)現(xiàn)，通過將活性制劑，尤其是益生菌與粘膜粘附聚合物，如羥丙甲纖維素、聚丙烯酸或殼聚糖顆?；?，得到的口腔分散片的崩解時間對于羥丙甲纖維素有所降低，對于聚丙烯酸大幅降低。因此與未使用粘膜粘附聚合物顆?；钠瑒┫啾?，益生菌和粘膜粘附聚合物的顆粒化加速了片劑崩解。含有顆?；瘹ぞ厶堑钠瑒┍澜饪焖?。
在另一優(yōu)選實施方案中，粘膜粘附活性組合物被加工為直徑為50至1000μm，優(yōu)選75至700μm的顆粒。
歐洲藥典將“完全崩解”定義為一種狀態(tài)，其中任何停留在測試儀器屏上的單元物殘余物，不包括不溶涂層或膠囊殼層的片段，是無明顯堅硬硬心的軟質(zhì)。
崩解時間是口腔分散片的重要參數(shù)。片劑的崩解時間根據(jù)歐洲藥典記載的方法進行測定(片劑崩解(歐洲藥典2.9.1))，其為標準方法。為了精確的測定崩解時間，一次僅測量一片片劑。水溫為35℃至39℃。完全更換燒杯中的水之前，每輪最多測定三片。每批測定6片的樣品尺寸。對于凍干片，根據(jù)歐洲藥典，使用磁片壓載片劑，因為由于其低重力片劑易于漂浮。
從實際的觀點來看，本發(fā)明的口服崩解片劑在所述時間范圍內(nèi)在體外完全分散，從嚴格的科學觀點來看前提是，明顯地在唾液中不溶的片劑成分不會溶解而是分散并保持固體狀態(tài)。
除了崩解劑根據(jù)本發(fā)明的口腔分散片中使用的輔料還可以包括填料和潤滑劑。
填料
稀釋劑或填料是可以顯著影響最終片劑的化學和物理性能從而影響釋放性能的惰性成分。此外通常需要粘合劑和填料從而通過直接壓制制備ODT以實現(xiàn)足夠硬度。纖維素產(chǎn)品是用于此目的的典型物質(zhì)。特別地微晶纖維素是有利的，因為它們也輔助ODT的快速崩解，包括溶脹和芯吸效果。在本發(fā)明的壓制和口服劑型中可以使用其他填料，包括水溶糖類，如乳糖、葡萄糖、蔗糖、右旋糖、異麥芽糖醇和糖醇如乳糖甘露醇、山梨糖醇、木糖醇和赤蘚糖醇。也可以使用其他水溶糖類和糖醇以及水溶糖類和糖醇的結(jié)合?？梢允褂玫钠渌盍习ǖ幌抻诹蛩徕}、碳酸鈣、二堿式磷酸鈣、硬脂酸、淀粉和微晶纖維素。本發(fā)明的口腔分散片中填料的含量為口腔分散片的約10至約90重量％。
潤滑劑
在藥物操作如混合、碾壓、片劑生產(chǎn)和膠囊填充中，潤滑是必要的，從而減小生產(chǎn)設(shè)備表面和活性顆粒表面之前的摩擦，從而防止成分結(jié)聚在一起以確保操作的連續(xù)性。藥物潤滑劑是少量(通常0.25％–5.0％，w/w)添加至片劑從而改善劑型加工性能的制劑。可以在本發(fā)明的壓制和口服劑型中使用的潤滑劑包括硬脂酸鈣和硬脂酸鎂、雙二十二烷酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、硬脂富馬酸鈉、油酸、氫化蓖麻油、蔗糖脂肪酸酯、硬脂酸、己二酸、富馬酸、聚乙二醇、苯甲酸鈉、十二烷基硫酸鈉、泊洛沙姆等。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中使用的潤滑劑是硬脂富馬酸鈉
本發(fā)明的粘膜粘附劑型可以進一步含有其他想要的任選成分，包括天然和/或人工甜味劑如阿斯巴甜、掩味劑和/或香料如薄荷醇，以及染料(例如紅色氧化鐵染料)?？寡趸瘎?、穩(wěn)定劑、溶解劑、防腐劑、染料和其他加工助劑也可以按需求使用從而輔助加工和/或壓制為片劑或其他口服劑型。
粘膜粘附
本發(fā)明的另一個主題是一種生產(chǎn)本發(fā)明的粘膜粘附活性顆粒的方法，更具體地，一種生產(chǎn)粘膜粘附活性顆粒的方法，包括
(i)將固態(tài)活性制劑和粘膜粘附聚合物與粘合劑溶液混合得到潤濕混合物；
(ii)將步驟(i)的潤濕混合物顆?；玫綕櫇耦w粒；
(iii)將步驟(ii)的潤濕顆粒干燥并過篩得到粘膜粘附活性顆粒。
在上述方法中使用的固態(tài)活性制劑優(yōu)選是益生菌。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中益生菌物質(zhì)的直徑<500μm，優(yōu)選<400μm，更優(yōu)選<300μm。
在上述方法中優(yōu)選使用的粘膜粘附聚合物選自組包括Carbopol 971P NF(聚丙烯酸)、Tylopur 61(羥丙甲纖維素、羥丙基甲基纖維素、HPMC)、Metolose 65SH501(羥丙甲纖維素、羥丙基甲基纖維素、HPMC)和殼聚糖。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中粘膜粘附聚合物和固態(tài)活性制劑的使用比例為約10:1至約1:50，優(yōu)選約2:1至約1:20，更有選約1:1至約1:10。
粘合劑
粘合劑是在(固態(tài)口服劑型)藥物制劑中用于將活性成分和非活性成分保持在一起的制劑。在本發(fā)明中粘合劑特別用于將固態(tài)活性成分，尤其是益生菌與粘膜粘附聚合物結(jié)合在一起。粘合劑的典型實例是阿拉伯膠、明膠、聚乙烯吡咯烷酮和共聚維酮、聚乙烯醇、淀粉(糊狀和預膠化)、海藻酸鈉和海藻酸鹽衍生物、山梨糖醇、葡萄糖和其他糖類、黃芪膠和可溶纖維素衍生物如甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和羥丙基纖維素、麥芽糊精、聚甲基丙烯酸酯共聚物，例如甲基丙烯酸銨共聚物、甲基丙烯酸甲基丙烯酸甲酯共聚物、丁基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸丙烯酸乙酯共聚物、醋酞纖維素、醋酸琥珀酸羥丙甲纖維素、羥丙甲纖維素酞酸酯、聚醋酸乙烯鄰苯二甲酸酯、聚乙烯醇‐聚乙二醇共聚物、蟲漆。此外粘膜粘附聚合物也可以用作粘合劑。
使用顆?；樗釛U菌菌株生產(chǎn)的片劑明顯比純細菌崩解更快。該效果與使用的菌株無關(guān)。
在本發(fā)明中優(yōu)選使用的粘合劑是陰離子甲基丙烯酸丙烯酸乙酯共聚物( L‐Types)。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中可以將粘合劑溶解于溶劑，該溶劑必須能揮發(fā)從而可通過干燥移除，并且非毒性。典型的溶劑包括水、乙醇和異丙醇，單獨或結(jié)合。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中粘合劑用量相對于固態(tài)活性制劑為0.5‐20重量％，優(yōu)選2‐15重量％。
在本發(fā)明的另一實施方案中固態(tài)活性制劑可以在干燥條件下，例如加入裝干燥劑袋，首先與粘膜粘附聚合物混合得到干燥混合物。
在本發(fā)明的另一優(yōu)選實施方案中，得到的干燥混合物伴隨連續(xù)通入氮氣被調(diào)溫至約15至25℃，優(yōu)選20℃。隨后在攪拌下將粘合劑溶液加入干燥混合物。
在本發(fā)明的另一優(yōu)選實施方案中，可以在干燥前將潤濕顆粒過篩從而移除粒徑>3500μm，優(yōu)選>1000μm，更優(yōu)選>700μm的大顆粒。
此外，在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中在干燥器中通過用壓縮空氣吹掃干燥潤濕顆粒。
根據(jù)本發(fā)明的方法生產(chǎn)的粘膜粘附活性顆粒優(yōu)選具備水活性(aw)<0.1。在本發(fā)明中水活性定義為材料中水的蒸氣壓與相同溫度下純水的蒸氣壓之比。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中最后將干燥顆粒過篩從未移除直徑>1000μm，優(yōu)選>500μm，更優(yōu)選>250μm的大顆粒。
加工
本發(fā)明的另一個主題是加工口腔分散片的方法，包括
(i)將本發(fā)明的粘膜粘附活性組合物與輔料混合得到混合物，其中輔料含有至少一種崩解劑，
(ii)將步驟(i)的混合物壓制得到口腔分散片。
在一個優(yōu)選實施方案中粘膜粘附活性顆粒的直徑為約50至約1000μm，優(yōu)選約75至約700μm，更優(yōu)選約100至約600μm，并且甚至更優(yōu)選約500μm。
在另一個優(yōu)選實施方案中輔料首先過篩以得到直徑<500μm，優(yōu)選<400μm，更優(yōu)選<200μm的小顆粒輔料。
通過本發(fā)明的方法制備的口腔分散片優(yōu)選重量為20‐1000mg。
通過本發(fā)明的方法制備的口腔分散片優(yōu)選直徑為5‐18mm，更優(yōu)選直徑為10mm。
本發(fā)明的另一個主題是提供一種用于測試粘膜粘附制劑并定量其粘膜粘附性的系統(tǒng)，更具體地一種用于測試制劑粘膜粘附性的系統(tǒng)，包括
(i)包含底部部件(1)、封口膜(2)、金屬盤(3)和固定圈(4)的金屬單元；
(ii)包含內(nèi)部支撐部件(5)和具備孔(7)的頂部封蓋(6)的第一容器，其中支撐部件(5)的高度大于第一容器(B)的一半高度并且支撐部件(5)的上表面足以支撐金屬單元(A)；其中
(iii)金屬單元(A)位于支撐部件(5)的上表面，并且孔(7)在金屬單元(A)正上方。
在另一優(yōu)選實施方案中該系統(tǒng)還包括第二容器(C)，包括具備孔(9)的頂部封蓋(8)和泵(D)，其通過穿過孔(7)和(9)的管(10)與第一容器(B)相連。
在根據(jù)本發(fā)明的另一優(yōu)選實施方案中安置水浴(E)從而將第一容器(B)和第二容器(C)的溫度保持在約37℃。
本發(fā)明的另一主題是一種測試劑型粘膜粘附性的方法，其中該方法在本發(fā)明的系統(tǒng)上進行，包括以下步驟：
(i)使用固定圈(4)將一片粘膜(M)固定于金屬單元(A)的底部部件(1)和封口膜(2)之間，使用人造唾液潤濕粘膜并將粘膜粘附制劑(F)放置于粘膜(M)上；
(ii)通過孔(7)將人造唾液滴至第一容器(B)中的粘膜粘附制劑(F)上，
(iii)由金屬單元(A)移出粘膜(M)和封口膜(2)并使用稀釋制劑清洗從而測定粘附于粘膜的活菌數(shù)量；
(iv)使用稀釋制劑清洗金屬單元(A)的剩余部件并與加入第一容器(B)的人造唾液結(jié)合從而測定使用人造唾液洗下的活菌數(shù)量。
在本發(fā)明中使用的粘膜優(yōu)選厚度為1至5mm并且直徑與金屬單元(A)類似的一片豬粘膜。
測試的粘膜粘附制劑，或其部分如四分之一通常重量為約10‐200mg。
在本發(fā)明中使用的人造唾液被制成模擬自然唾液，但不模擬唾液腺活性。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中人造唾液通過管(10)由第二容器(C)被泵至第一容器(B)中的粘膜粘附制劑(F)，其中人造唾液的泵流速為0.05ml/分鐘至1.0ml/分鐘，優(yōu)選0.1ml/分鐘至0.5ml/分鐘并且泵送持續(xù)30至120分鐘，優(yōu)選60分鐘。
在本發(fā)明中粘附于粘膜或使用人造唾液洗下的活菌數(shù)量通過菌落形成單元(CFU)測定。CFU是樣品中活菌或真菌細胞數(shù)量的粗略估算。
使用本發(fā)明的測試方法可以測定一系列制劑的粘膜粘附性，包括，但不限于固體制劑，如片劑、糖衣劑、膠囊、顆粒、粉末和口香糖、棒劑、液態(tài)制劑，如溶液、懸浮液、乳液、糖漿、噴霧劑、泡沫劑和半固態(tài)制劑，如軟膏、溶膠、糊劑。
優(yōu)選地根據(jù)本發(fā)明待測定的組合物或產(chǎn)品可以選自組包括牙膏、牙膠、牙粉、牙齒清潔劑、牙齒清潔泡沫、漱口水、口腔噴霧、牙線、口香糖和止咳糖。
該組合物或產(chǎn)品可以含有磨料系統(tǒng)(研磨和/或拋光成分)如硅酸鹽、碳酸鈣、磷酸鈣、氧化鋁和/或羥基磷灰石、表面活性劑如月桂基硫酸鈉、月桂基肌氨酸鈉和/或椰油酰胺丙基甜菜堿、潤濕劑如甘油和/或山梨糖醇、增稠劑例如羧甲基纖維素、聚乙二醇、卡拉膠和/或甜味劑如糖精、香料和用于不佳味道印象的味道矯正劑、味道改變物質(zhì)(例如肌醇磷酸、核苷酸類例如單磷酸鳥苷、單磷酸腺苷或其他物質(zhì)，例如谷氨酸鈉或2‐苯氧基丙酸)、清涼劑如薄荷醇衍生物(例如L‐乳酸薄荷酯、L‐碳酸烷基薄荷酯、薄荷縮酮)、icilin和icilin衍生物、穩(wěn)定劑和活性制劑如氟化鈉、單氟磷酸鈉、二氟化錫、氟代季銨鹽、檸檬酸鋅、硫酸鋅、焦磷酸錫、二氯化錫、不同焦磷酸鹽的混合物、三氯生、氯化十六烷基呲啶、乳酸鋁、檸檬酸鉀、硝酸鉀、氯化鉀、氯化鍶、過氧化氫、香料物質(zhì)、碳酸氫鈉和/或氣味矯正劑。
口香糖或牙齒保健口香糖可以含有口香糖膠基，包括彈性體，例如聚乙酸乙烯酯(PVA)、聚乙烯、(低或中等分子量)聚異丁烷(PIB)、聚丁二烯、異丁烯/異戊二烯共聚物、聚乙烯乙基醚(PVE)、聚乙烯丁基醚、乙烯基醚和乙烯基酯的共聚物、苯乙烯/丁二烯共聚物(SBR)或乙烯彈性體，例如基于乙酸乙烯酯/月桂酸乙烯酯、乙酸乙烯酯/硬脂酸乙烯酯或乙烯/乙酸乙烯酯以及所述彈性體的混合物，如例如記載于EP 0 242 325、US 4,518,615、US 5,093,136、US 5,266,336、US 5,601,858或US 6,986,709 的實例。此外口香糖膠基可以含有其他成分，例如(礦物)填料，例如碳酸鈣、二氧化鈦、二氧化硅、滑石粉、氧化鋁、磷酸氫鈣、磷酸三鈣、氫氧化鎂及其混合物、塑化劑(例如羊毛脂、硬脂酸、硬脂酸鈉、乙酸乙酯、雙乙酰(二乙酸甘油酯)、三醋精(三乙酸甘油酯)和檸檬酸三乙酯)、乳化劑(例如磷脂，如卵磷脂和脂肪酸的單和雙甘油酯，例如單硬脂酸甘油酯)、抗氧化劑、蠟(例如石蠟、小燭樹蠟、巴西棕櫚蠟、微晶蠟和聚乙烯蠟)、脂肪或脂肪油(例如硬化(氫化)植物或動物脂肪)以及單、雙或三甘油酯。
通過使用根據(jù)本發(fā)明的測試系統(tǒng)和方法各種制劑的粘膜粘附性可以簡單、穩(wěn)定并且低成本地測定，得到的結(jié)果具備高精確性和良好的可重復性。
本發(fā)明的另一個主題是本發(fā)明的系統(tǒng)用于測試制劑粘膜粘附性的用途。
附圖說明
圖1示出了根據(jù)本發(fā)明的粘膜粘附益生菌口服分散片的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)。
實施例
___________________________________________________________________________
實施例1
制備含有粘膜粘附(Metolose 65SH50)益生菌(植物乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)299V)顆粒的粘膜粘附口腔分散片
制備粘膜粘附益生菌顆粒。首先篩分植物乳酸桿菌299V移除直徑>200μm的顆粒。隨后將過篩的和Metolose 65SH50加入Turbula混合機并在加入干燥劑袋后以30轉(zhuǎn)/分鐘混合5分鐘，得到干燥均勻混合物，隨后將其轉(zhuǎn)移至Somakon實驗混合機并在通入干燥氮氣下調(diào)溫至20℃。在280轉(zhuǎn)/分鐘攪拌下將5mlEudragit L異丙醇溶液(12.5％)加入混合物，隨后使用削刮器將潤濕混合物攪拌1分鐘，最后在330轉(zhuǎn)/分鐘攪拌下將剩余Eudragit L異丙醇溶液加入。在370轉(zhuǎn)/分鐘下用削刮器攪拌2分鐘后形成潤濕顆粒并通過710μm篩進行篩分，隨后放入干燥器并用壓縮空氣吹掃直達顆粒的水活性<0.1。通過500μm篩將得到的干燥顆粒進行篩分得到粘膜粘附益生菌顆粒。
制備粘膜粘附口腔分散片。首先通過315μm篩分別篩分244FP和AL‐1FP二氧化硅(1:1)的混合物，香料檸檬萊姆和 PH 112并與 100SD和 CL‐SF混合。隨后將混合物加入Turbula混合機中由步驟(1)得到的粘膜粘附顆粒以及過篩的加入干燥劑袋以30轉(zhuǎn)/分鐘混合10分鐘得到干燥均勻混合物。在片劑壓制前，使用壓縮空氣吹掃單沖壓機中環(huán)繞壓片機的罩殼，直到濕度小于15％。隨后將200mg最終混合物加入模具并壓制混合物得到粘膜粘附口腔分散片Ex1。片劑的表征數(shù)據(jù)列于表5。各種材料的用量列于表1。
表1：片劑組成
對比實施例C1
首先在Turbula混合機中使用干燥袋(預混)將與Metolose 65SH50以30轉(zhuǎn)/分鐘混合10分鐘。通過315μm篩分別篩分244FP和AL‐1FP二氧化硅(1:1)的混合物，香料檸檬萊姆和 PH 112并與100SD和 CL‐SF混合。加入細菌預混物并在Turbula混合機中以相同條件再混合10分 鐘。最后加入過篩的并混合5分鐘。如實施例1將最終混合物壓縮為對比粘膜粘附口腔分散片Cp1。片劑的表征數(shù)據(jù)列于表4。
實施例2
制備含有粘膜粘附(Metolose 65SH50)益生菌(副干酪乳酸桿菌(Lactobacillus paracasei)8700:2)顆粒的粘膜粘附口腔分散片
制備步驟如實施例1，但在造粒前不篩分細菌粉末。各種材料的用量列于表2。
表2：片劑組成
在實施例2中得到粘膜粘附口腔分散片Ex2并將片劑表征數(shù)據(jù)列于表4。
對比實施例C2
制備步驟如對比實施例1。各種材料的用量列于表2。在對比實施例2中得到粘膜粘附口腔分散片Cp2并將片劑表征數(shù)據(jù)列于表4。
實施例3
制備含有粘膜粘附(食品級殼聚糖)益生菌(副干酪乳酸桿菌8700:2)顆粒的粘膜粘附口腔分散片
制備步驟如實施例1，但在造粒前不篩分細菌粉末。各種材料的用量列于表3。
表3：片劑組成
在實施例3中得到粘膜粘附口腔分散片Ex3并將片劑表征數(shù)據(jù)列于表4。
對比實施例C3
制備步驟如對比實施例1。各種材料的用量列于表3。在對比實施例3中得到粘膜粘附口腔分散片Cp3并將片劑表征數(shù)據(jù)列于表4。
表征
根據(jù)歐洲藥典8.2，第2.9.7章測定樣品的易碎性。
根據(jù)歐洲藥典8.2，第2.9.8章測定樣品的斷裂強度。
根據(jù)歐洲藥典8.2，第2.9.1章測定樣品的崩解時間。
根據(jù)歐洲藥典8.2，第2.9.5章測定單劑量制劑的質(zhì)量均一性。
相應(yīng)數(shù)據(jù)列于下表4。
表4：表征數(shù)據(jù)
表4的數(shù)據(jù)顯示，在根據(jù)本發(fā)明的實施例1、2和3中得到的片劑與對比實施例1、2和3的片劑相比表現(xiàn)出更短的崩解時間。這些結(jié)果說明根據(jù)本發(fā)明制備的口腔分散片，即首先生產(chǎn)粘膜粘附活性顆粒并進一步加工為口腔分散片，與現(xiàn)有技術(shù)的片劑相比具備更好的性能
實施例4
通過凍干制備含有粘膜粘附(Carbopol 971P NF)益生菌(植物乳酸桿菌HEAL9)的粘膜粘附口腔分散片
將除了植物乳酸桿菌HEAL9的所有輔料混合為均勻懸浮液。隨后加入解凍的益生菌并攪拌10分鐘從而使輔料均勻分散。將500μl制劑移液至各個氣泡穴(blister well)并凍干22‐24h。一片片劑(凍干)的各種材料用量列于表5。
表5：片劑組成
對比實施例C4
通過凍干制備含有益生菌(植物乳酸桿菌HEAL9)的口腔分散片。制備步驟如實施例4并且各種材料的用量列于表6，但是用水替換Carbopol。
實施例5
測試得到的粘膜粘附口腔分散片的粘膜粘附性
在以下系統(tǒng)中測試得到的粘膜粘附口腔分散片的粘膜粘附性：
(i)準備一片厚度約2mm，直徑為2.5cm的深凍豬粘膜并置于金屬單元(A)的底部部件(1)，隨后將封口膜(2)和金屬盤(3)順序置于粘膜上。借助固定圈(4)將粘膜固定于金屬單元(A)并用2或3滴人造唾液潤濕其表面。將金屬單元(A)放置于第一容器(B)內(nèi)的支撐部件(5)的上表面，隨后使用鑷子將由實施例和對比實施例得到的片劑的四分之一(約10‐50mg)壓在粘膜上。
(ii)封閉第一容器(B)的頂部封蓋(6)并以0.1或0.5ml/分鐘的速率由第二容器(C)向片劑泵送人造唾液。60分鐘后停止泵送并由第一容器(B)移出金屬單元(A)。
(iii)松開固定圈(4)并和金屬盤(3)一起放回第一容器(B)。隨后用鑷子將粘膜和封口膜(2)由底部部件(1)移出并放入第一無菌玻璃燒杯，而將底部部件(1)放入第一容器(B)。將100g稀釋劑(8.5g/l氯化鈉，1g/l蛋白胨，10ml/l吐溫80)加入玻璃燒杯并將得到的溶液A以500rpm磁力攪拌30分鐘。
(iv)首先將第一容器(B)的人造唾液倒入第二無菌玻璃燒杯。隨后使用500ml稀釋劑(8.5g/l氯化鈉，1g/l蛋白胨)清洗容器(B)和金屬單元(A)的剩余部件，隨后也倒入第二無菌玻璃燒杯。通過加入稀釋劑(8.5g/l氯化鈉，1g/l蛋白胨)將玻璃燒杯中的液體加至1000g。得到的溶液B以200rpm磁力攪拌5分鐘。
(v)制備各個玻璃燒杯的稀釋系列并計算乳酸菌數(shù)。
使用的人造唾液根據(jù)Matzker/Schreiber 1972制備(不含CaCl2)，其組成列于下表6。
表6：人造唾液
得到的溶液A和B分別用于測定粘附至粘膜的活菌數(shù)和用人造唾液洗去的活菌數(shù)。用下式計算CFU：
結(jié)果示于表7。
表7：活菌
表7中的數(shù)據(jù)顯示在實施例1、2、3和4中得到的片劑的活性益生菌成分與對比實施例1、2、3和4相比更易于粘附至粘膜。加入粘膜粘附聚合物導致細菌更高的粘膜粘附性，因為使用不含粘膜粘附聚合物的片劑在測試后僅有10％的益生菌停留在粘膜上。實施例表現(xiàn)出比對比實施例1、2、3高10％的粘膜粘附性，因為他們含有粘膜粘附聚合物。與對比實施例4(不含粘膜粘附聚合物)相比粘膜粘附聚合物的有效作用在實施例4中更明顯。此外細菌與粘膜粘附聚合物顆粒化(實施例1‐3)與僅與輔料混合(對比實施例1‐3)相比導致更高的粘膜粘附性。