本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種中藥組合物聯(lián)合抗生素在制備治療胸腺疾病藥物方面的應(yīng)用。

技術(shù)背景

胸腺(thymus)胸腺位于胸腔前縱隔，為機(jī)體的重要淋巴器官。其功能與免疫緊密相關(guān)，是T細(xì)胞分化、發(fā)育、成熟的場所，其還可以分泌胸腺激素及激素類物質(zhì)，具內(nèi)分泌機(jī)能的器官。胸腺被喻為人的“壽命時(shí)鐘”，近年的研究表明與人的壽命長短密切相關(guān)。

胸腺是人體免疫特別是細(xì)胞免疫的重要器官，故胸腺有病變時(shí)，將對機(jī)體免疫功能帶來嚴(yán)重影響，使機(jī)體免疫自穩(wěn)功能紊亂并伴發(fā)自身免疫性疾病。胸腺疾病可按其大小分類，小于正常的胸腺分原發(fā)性先天性胸腺發(fā)育不全，繼發(fā)于腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)、妊娠、授乳、營養(yǎng)不良、類固醇和細(xì)胞毒藥物治療及放射線照射等；大于正常的胸腺有胸腺瘤、胸腺其他腫瘤、轉(zhuǎn)移瘤、胸腺囊腫、創(chuàng)傷后出血等。

很多疾病可引起胸腺增生，如：嚴(yán)重或反復(fù)的感染、燒傷、結(jié)節(jié)病、單純紅細(xì)胞再生障礙性貧血和一些復(fù)雜的全身內(nèi)分泌疾病(包括：腎上腺、胰腺、卵巢、腎等)。

阿奇霉素適用于敏感細(xì)菌所引起的感染，包括支氣管炎、肺炎等下呼吸道感染，皮膚和軟組織感染，急性中耳炎，鼻竇炎、咽炎、扁桃體炎等上呼吸道感染。近年也有見使用于治療盆腔炎。

目前未見中藥組合物與阿奇霉素聯(lián)合應(yīng)用于制備治療胸腺疾病藥物的相關(guān)技術(shù)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是填補(bǔ)現(xiàn)有中藥組合物聯(lián)合阿奇霉素的應(yīng)用技術(shù)不足，提供一種中藥組合物聯(lián)合抗生素在制備治療胸腺疾病的藥物方面的應(yīng)用。

本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：

提供中藥組合物聯(lián)合抗生素在制備治療胸腺疾病的藥物方面的應(yīng)用，尤其是應(yīng)用于制備治療改善胸腺充血、水腫和/或增生肥大藥物方面的應(yīng)用；所述抗生素為阿奇霉素；所述中藥組合物的活性成分由千斤拔、穿心蓮、金櫻根、功勞木(十大功勞)、單面針、雞血藤和黨參組成。

所述中藥組合物聯(lián)合抗生素在制備降低胸腺臟器指數(shù)藥物方面具有良好的應(yīng)用。

優(yōu)選地，所述中藥組合物中，黨參、穿心蓮和單面針的摻入量各為藥材總重量的9％；金櫻根、雞血藤、功勞木和千斤拔的摻入量各為藥材總重量的16％。

優(yōu)選地，所述中藥組合物中，穿心蓮和單面針的摻入量各為藥材總重量的9％；金櫻根、功勞木和千斤拔的摻入量各為藥材總重量的16％。

所述中藥組合物的制備方法可參照株洲千金藥業(yè)股份有限公司婦科千金片的制備方法。

本發(fā)明的有益效果是：

本發(fā)明提供了一種新的中藥組合物聯(lián)合阿奇霉素的聯(lián)合應(yīng)用，阿奇霉素適用于敏感細(xì)菌所引起的感染，包括支氣管炎、肺炎等下呼吸道感染，皮膚和軟組織感染，急性中耳炎，鼻竇炎、咽炎、扁桃體炎等上呼吸道感染。本發(fā)明將其與由千斤拔、穿心蓮、金櫻根、功勞木、單面針、雞血藤和黨參七味藥組成的中藥組合物聯(lián)合應(yīng)用，在治療胸腺疾病尤其是改善胸腺充血、水腫以及增生肥大方面具有良好的應(yīng)用效果，并通過大量動物實(shí)驗(yàn)證明所述中藥組合物和阿奇霉素發(fā)揮協(xié)同作用，對改善胸腺臟器指數(shù)趨向正常方面具有確切的影響作用，為中藥組合物和阿奇霉素的新領(lǐng)域應(yīng)用都提供了有力技術(shù)支持。

附圖說明

圖1 AZM、AZMQR、AZMDG、AZMFF組治療前后子宮臟器系數(shù)變化情況。

圖2 AZM、AZMQR、AZMDG、AZMFF組治療前后胸腺臟器系數(shù)變化情況。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。下述實(shí)施例僅用于示例性說明，不能理解為對本發(fā)明的限制。除非特別說明，下述實(shí)施例中使用的原料為常規(guī)市購或商業(yè)途徑獲得的原料，除非特別說明，下述實(shí)施例中使用的方法和設(shè)備為本領(lǐng)域常規(guī)使用的方法和設(shè)備。

實(shí)施例1

1.實(shí)驗(yàn)菌種：金黃色葡萄球菌(ATCC25923)，大腸埃希菌(ATCC25922)購

買于中國國家菌種庫。受試菌株凍干粉用無菌M-H(B)培養(yǎng)基混懸后均勻鋪于無菌M-H(A)平板表面，35℃孵育過夜復(fù)活，18h后平板表面生長出菌苔，選取其中長勢良好的單一菌團(tuán)，重新涂抹于M-H(A)斜面，相同條件下孵育18h，密封，4℃條件下冷藏保存；試驗(yàn)前一天取斜面菌涂抹于M-H(A)平板，35℃孵育過夜，即可使用。所有操作均在超凈工作臺完成。

2.菌液制備方法

方法一：(高濃度菌液制備)

挑3-4個(gè)單菌落于40毫升的M-H(B)培養(yǎng)基中。受試菌隔夜增菌培養(yǎng)16小時(shí)(37℃，水浴搖床振搖16小時(shí))，次日取出原菌液用全波長多功能讀數(shù)議測OD值(細(xì)菌生長飽和期)；取20mL，分裝于離心管中，每管2mL，離心10000-15000rpm/min，10分鐘，棄取上清液之中的M-H(B)，用2mL生理鹽水混勻后，再離心15000rpm/min，10分鐘，棄取上清液中的生理鹽水，收集細(xì)菌細(xì)胞菌體2mL。將相同方法培養(yǎng)的金色葡萄球菌和大腸埃希菌按1：1混合即獲得4mL混合菌液。將該菌液為100菌液濃度，用生理鹽水進(jìn)行10倍稀釋，稀釋至0.1×100，0.01×100，備用(共3個(gè)劑量)。

方法二：(低濃度菌液制備)

挑單一菌落(包括金色葡萄球菌和大腸埃希菌)于2毫升的生理鹽水中，分別配制成為0.5麥?zhǔn)蠞舛?約1×108CFU·mL^－1)細(xì)菌混懸液，將金色葡萄球菌和大腸埃希菌混懸液混合，即得到混合菌液4mL。將該菌液設(shè)置成為10A菌液濃度，用生理鹽水進(jìn)行對倍稀釋，稀釋至0.5×10^A，0.25×10^A，備用(共3個(gè)劑量)。

3.藥品與試劑：M-H(A)培養(yǎng)基(OXOID公司，生產(chǎn)批號：CM0337A)；M-H(B)培養(yǎng)基(OXOID公司，生產(chǎn)批號：CM0405B)；烏拉坦溶液(20％)；生理鹽水(四川科倫藥液股份有限公司，生產(chǎn)批號：M12012004)；其他試劑和耗材均由成都雅榮生化設(shè)備經(jīng)營部購買提供。

4.儀器：電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海一恒科技有限公司，BPH-9162)；優(yōu)普系列超純水機(jī)(成都超純科技有限公司，UpK-1-10T)；微量加樣器(EppendorfResearch，10、100、100uL)；空氣浴振蕩器(哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)，HZQ-C)；自動電熱壓力蒸汽滅菌鍋(上海申安醫(yī)療器械廠，LDZX-40BI)；全波長多功能讀數(shù)議(美國Thermo)；菌落計(jì)數(shù)儀。

5.模型制備

具體操作方法：大鼠稱重標(biāo)記，腹部常規(guī)消毒，20％烏拉坦0.5mL/100g腹腔注射麻醉，用1mL注射器抽取預(yù)先制備的混合菌液，左手持鼠尾提起大鼠，用10mL注射器磨去針頭尖，于陰道底部的子宮頸分叉處小心進(jìn)入一側(cè)宮腔內(nèi)，針頭在宮腔內(nèi)來回抽拉2次以機(jī)械性損傷子宮內(nèi)膜組織，然后朝卵巢方向推注菌液0.1mL，同樣操作步驟將0.1mL菌液注入另一側(cè)子宮，注射完畢后，倒置大鼠5min，以防菌液漏出。分別于24h，48h觀察記錄各組大鼠感染情況，以大鼠無死亡，于造模后24h、72h、96h后分別陰道刮片，進(jìn)行菌落培養(yǎng)，選擇菌落計(jì)數(shù)≥30，≤100的感染菌量作為最佳感染菌量。將該菌量作為體內(nèi)感染的菌量。受試大鼠感染菌量為：

表1

所有實(shí)驗(yàn)動物于造模后24h、72h和96h，麻醉，常規(guī)消毒腹部，用無菌棉簽伸入宮口，來回抽拉2次后，將棉簽放入含2mL生理鹽水的試管中，獲得含測試品混懸液，取出棉簽，再用新的無菌棉簽充分蘸取混合液均勻涂抹于無菌M-H(A)平板表面，35℃孵育過夜，18h后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。240h犧牲動物，觀察子宮感染情況。各組典型鼠感染菌落計(jì)數(shù)，結(jié)果如下表2：

表2受試大鼠感染菌量

所有實(shí)驗(yàn)動物于造模后24h、72h和96h，麻醉，常規(guī)消毒腹部，用無菌落計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，3組鼠所感染菌量符合實(shí)驗(yàn)要求。同時(shí)，解剖后可見子宮等直觀可見炎性充血與炎性水腫。

6.試驗(yàn)過程

模型及分組150只大鼠(雌性SPF級SD大鼠，220g±20g，由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物研究所購得，實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(川)2008-24)。16只用于空白，另行飼養(yǎng)。其余均采用造模方法麻醉后注射混合菌液。觀察5日，每日均隨機(jī)抽取6只及空白組2只麻醉后采集陰道分泌物用于細(xì)菌涂片。5日后存活大鼠隨機(jī)分為5組，即model、AZM、AZMQR、AZMDG、AZMFF(分別表示不予治療的模型組、單獨(dú)使用阿奇霉素組、阿奇霉素清熱合并組、阿奇霉素缺當(dāng)歸合并組、阿奇霉素全方合并組)。

model：不予治療的模型組；

AZM：阿奇霉素

model：不予治療的模型組；

AZM：阿奇霉素治療的模型組。

AZMQR：阿奇霉素+中藥組合物(以千斤拔、穿心蓮、金櫻根、功勞木、單面針參照株洲千金藥業(yè)婦科千金片的配方比例和方法制得組合物)聯(lián)合治療模型組。

AZMDG：阿奇霉素+中藥組合物(以千斤拔、穿心蓮、金櫻根、功勞木、單面針、雞血藤、黨參參照株洲千金藥業(yè)婦科千金片的配方比例和方法制得組合物)聯(lián)合治療模型組。

AZMFF：阿奇霉素+中藥組合物(以千斤拔、穿心蓮、金櫻根、功勞木、單面針、雞血藤、當(dāng)歸、黨參參照株洲千金藥業(yè)婦科千金片的配方比例和方法制得組合物)聯(lián)合治療模型組。

1.受試劑量

(1)AZM劑量：本實(shí)施例對阿奇霉素(AZM)的可選受試劑量進(jìn)行了分析和確定，目的為選擇一個(gè)試用后作用強(qiáng)度適中、時(shí)長適中的受試劑量，同時(shí)明確同中藥合并用藥時(shí)的時(shí)程長度。預(yù)試60、30、20、10mg/kg.d三天，發(fā)現(xiàn)原設(shè)定劑量過高，最終采用10mg/kg.d。

(2)受試藥物劑量：

原設(shè)定各中藥組合物的劑量為2.058g/kg.d，但預(yù)試發(fā)現(xiàn)，此劑量采用最大給容積配制的給藥液為稀漿狀，無法通過灌胃針頭。隨調(diào)整最終全方AZMFF給藥劑量為最大給藥量1.66g/kg.d，調(diào)整缺當(dāng)歸組劑量AZMDG為1.41g/kg.d、清熱組劑量AZMQR為1.16g/kg.d。

2.給藥時(shí)間

除空白和模型外，造模后第六日開始給予相應(yīng)藥物。AZM與各中藥分別給予，相差時(shí)間約2小時(shí)。所有給藥組在8點(diǎn)左右均先給予相應(yīng)劑量的AZM，兩個(gè)小時(shí)后開始給予相應(yīng)的中藥生理鹽水水混物。

3.樣本收集

第1日給予AZM兩小時(shí)后，經(jīng)尾靜脈采集各組大鼠末梢靜脈血。從第二日始各給藥組大鼠每日兩次采血，于給予阿奇前和給予中藥前各經(jīng)尾靜脈采集一次，每次采集血量約0.3mL，取樣時(shí)間誤差約30min。于給藥第2、4、6、8日給予AZM兩小時(shí)后，各組麻醉后犧牲約2～4只大鼠，采集下腔動脈抗凝全血，并同時(shí)收集犧牲大鼠的靶器官(子宮、孵巢、胸腺、脾臟)。

4.送樣測試

所有時(shí)間點(diǎn)0.3mL及末次全血，分取約0.2mL血漿用于UPLC-MS檢測AZM濃度。末次抗凝全血送檢血細(xì)胞計(jì)數(shù)、血流變。子宮從子宮體中部切分，取1/2福爾馬林固定后用于病理送檢。子宮、孵巢、胸腺、脾臟稱重并計(jì)算臟器系數(shù)。臟器系數(shù)又稱臟體比，是實(shí)驗(yàn)動物某臟器的重量與其體重之比值。正常時(shí)各臟器與體重的比值比較恒定。動物染毒后，受損臟器重量可以發(fā)生改變，故臟器系數(shù)也隨之而改變。臟器系數(shù)增大，表示臟器充血、水腫或增生肥大等；臟器系數(shù)減小，表示臟器萎縮及其他退行性改變。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖1和圖2所示。圖1和圖2中，從左至右分別顯示為AMZ、AMZDG、AZMFF、AZMQR、Model和正常組normal的指數(shù)變化情況。結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)動物造模后，子宮和胸腺均充血、水腫，臟器系數(shù)與正常組比較均升高，給予不同的藥物組合治療后，各系數(shù)都降低，趨向于回復(fù)正常水平。各治療組之間的治療效果比較，子宮臟器系數(shù)：AZMDG>AZMQR>AZMFF>AZM；胸腺臟器系數(shù)：AZMFF>AZMDG>AZM>AZMQR。本發(fā)明中藥組合物聯(lián)合阿奇霉素在改善子宮充血、水腫、增生等方面具有良好的應(yīng)用效果，本發(fā)明中藥組合物聯(lián)合阿奇霉素在降低胸腺臟器指數(shù)方面的應(yīng)用效果接近婦科千金片聯(lián)合阿奇霉素的應(yīng)用效果。

實(shí)施例2本發(fā)明中藥組合物聯(lián)合阿奇霉素在胸腺相關(guān)疾病輔助治療方面的試驗(yàn)

重癥肌無力(MG)是一種神經(jīng)肌肉接頭傳遞功能障礙的獲得性自身免疫學(xué)疾病。其確切的發(fā)病機(jī)理目前仍不明確，但有關(guān)該病的研究比較多，其中，研究最多的是有關(guān)重癥肌無力與胸腺的關(guān)系。研究證明，血清中的抗Achr抗體的增高和突觸后膜上的沉積所引起的有效的Achr數(shù)目的減少，是本病發(fā)生的主要原因。而胸腺是Achr抗體產(chǎn)生的主要場所，因此，本病的發(fā)生一般與胸腺有密切的關(guān)系。本實(shí)施例基于前期對胸腺臟器指數(shù)的影響作用研究，旨在了解本發(fā)明中藥組合物聯(lián)合重癥肌無力疾病治療過程中作為輔助性治療所起到的作用。

病例選擇標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)1997年全國神經(jīng)免疫學(xué)大會制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)：①臨床表現(xiàn)：活動后加重、休息后減輕的隨意肌無力，呈晨輕暮重；②藥理學(xué)：膽堿酯酶抑制劑治療有效和箭毒類藥物使之加重；③電生理學(xué)：低頻重復(fù)電刺激示復(fù)合動作電位波幅遞減大于10％和單纖維肌電圖示顫抖增寬；④免疫學(xué)：血清乙酰膽堿受體抗體增高；⑤免疫病理學(xué)：神經(jīng)肌肉接頭處突觸后膜皺折減少、變平坦和乙酰膽堿受體減少。以上五項(xiàng)中，第一項(xiàng)和第二項(xiàng)符合即可診斷，后三項(xiàng)可作為研究酌情增加。再參照《實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合診斷治療學(xué)》的中醫(yī)辨證分型，脾腎氣虛證：主癥為眼瞼下垂，復(fù)視，四肢無力，甚或抬頸無力，聲嘶；次癥為面色少華，氣短神疲，納差，或畏寒肢冷，腰膝酸軟，大便稀溏；舌淡，苔白膩或薄白膩；脈緩或沉弱無力者，均符合者，排除年齡<5歲或年齡>65歲者、有藥物過敏史或高敏體質(zhì)者、合并肝、腎、心血管系統(tǒng)、造血系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)等嚴(yán)重疾病者；孕婦及哺乳期婦女、病人及家屬非自愿或不能積極配合及參與其他藥物研究者。

共治療觀察31例，其中確定20例伴有胸腺均充血、水腫，胸腺臟器系數(shù)與正常組比較均升高，將所述20例隨機(jī)分為兩組。兩組在性別、年齡、病程、疾病性質(zhì)、兼癥等方面統(tǒng)計(jì)學(xué)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，，有可比性。

治療方法：

治療組：予強(qiáng)的松片30～50mg晨起頓服，2個(gè)月后隔周減2.5mg，直至停藥。同時(shí)配合服用胃黏膜保護(hù)劑等。同時(shí)給予本發(fā)明中藥組合物(以千斤拔、穿心蓮、金櫻根、功勞木、單面針、雞血藤、黨參參照株洲千金藥業(yè)婦科千金片的配方比例和方法制得組合物，湯劑或片劑)和阿奇霉素(參照阿奇霉素規(guī)定劑量)，阿奇霉素與本發(fā)明中藥組合物分開服用，相差時(shí)間約2小時(shí)。

對照組：予強(qiáng)的松片30～50mg晨起頓服，2個(gè)月后隔周減2.5mg，直至停藥。同時(shí)配合服用胃黏膜保護(hù)劑等。

療效觀察：3個(gè)月為一個(gè)療程。連續(xù)用藥3個(gè)療程后觀察癥狀、體征改善情況及不良反應(yīng)。

試驗(yàn)結(jié)果：療效方面，

對照組(10例)臨床痊愈1例(10％)，基本痊愈2例(20％)，顯效3例(30％)，好轉(zhuǎn)3例(30％)，無效1例(10％)。

治療組(10例)臨床痊愈1例(10％)，基本痊愈3例(30％)，顯效4例(40％)，好轉(zhuǎn)2例(20％)，無效0例(0％)。治療組最短見效10天。治療組10例復(fù)查胸腺，充血、水腫情況顯著改善，胸腺臟器系數(shù)基本回復(fù)正常水平。

治療組愈顯率、有效率均高于對照組，P＜0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

本發(fā)明中藥組合物和阿奇霉素的聯(lián)合使用可明顯靶向改善胸腺充血水腫，在于胸腺相關(guān)的疾病治療中可探尋聯(lián)合用藥機(jī)制。