本發(fā)明涉及藥學(xué)領(lǐng)域，尤其是柏花草膠囊在制備抗腫瘤藥物中的新用途。

背景技術(shù)：

柏花草膠囊是一種中成藥，主要成分包括黃柏、靈芝、仙鶴草、紅花及百合,具有清熱利濕、活血消腫止痛的作用，被用于Ⅰ，II期內(nèi)痔濕熱下注證，痔見便血、肛門腫痛、肛門潮濕、墜脹，舌紅苔黃、脈弦細(xì)數(shù)。黃柏含有生物堿、黃酮、萜類及甾體、鞣質(zhì)等，黃柏中所分離出來的小檗堿、β-谷甾醇、豆甾醇對(duì)胃癌、宮頸癌細(xì)胞增殖有較好的抑制活性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是：發(fā)現(xiàn)了柏花草膠囊的有效成分在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：柏花草膠囊在制備抗腫瘤藥物中的新用途。

將柏花草膠囊的有效成分制備成片劑、注射劑、口服液或滴丸劑。

由于采用了上述技術(shù)方案，與現(xiàn)有技術(shù)相比，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)已知的中成藥柏花草膠囊對(duì)多種腫瘤細(xì)胞具有良好的抑制作用，為老藥的新用途提供理論基礎(chǔ)，為開發(fā)柏花草膠囊的抗癌作用提供了新思路。而且柏花草膠囊是已上市的成品藥，應(yīng)用于人體的概率更大，具有很好的臨床開發(fā)前景。本發(fā)明材料來源廣泛，成本低廉，使用效果理想。

附圖說明

附圖1為50μg/mL的柏花草膠囊對(duì)PC3、WM9、K562和HEL細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用；

附圖2為不同濃度梯度的柏花草膠囊(200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL、12.5μg/mL)對(duì)PC3、WM9、K562和HEL細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明的實(shí)施例：

柏花草膠囊MTT法抗癌活性檢測(cè)

細(xì)胞及其它試劑

前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C3、白血病細(xì)胞株K562、黑色素瘤細(xì)胞株WM9、人紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞HEL均為貴州省中國(guó)科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室保存。DMEM培養(yǎng)基及胰酶購(gòu)于Hyclone公司，胎牛血清(FBS)購(gòu)于浙江天杭生物科技有限公司，四甲基偶氮哩鹽(MTT)購(gòu)于Solarbio Life Science公司，二甲基亞颯(DMSO)及青鏈霉素混合液購(gòu)于北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

體外抗腫瘤活性檢測(cè)

MTT溶液配制：稱取MTT粉末0.2g，加入滅菌的PBS 40ml,60℃溶解，0.22μm過濾膜過濾除菌，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

從液氮罐取出前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C3、白血病細(xì)胞株K562、黑色素瘤細(xì)胞株WM9、人紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞株HEL復(fù)蘇培養(yǎng)。

分別取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，將細(xì)胞濃度調(diào)整成5000個(gè)/孔，接種于96孔板中(190種升/孔)，在37℃，5％二氧化碳的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24個(gè)小時(shí)。每種細(xì)胞設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，并設(shè)同等數(shù)量的對(duì)照孔。首先檢測(cè)50μg/mL的柏花草膠囊對(duì)四種癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。每孔加藥10μL,37℃、5％CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h，加MTT溶液20μL(避光操作)，置入CO₂培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h，離心(1500rpm，8min)，棄去上清液，每孔加150μL DMSO，放入搖床搖晃(10min，180rpm，25℃)，用酶標(biāo)儀波長(zhǎng)490nm下測(cè)OD值，根基以下公式計(jì)算藥物的抑制率。

Inhibitory activity＝[(OD_control-OD_sample)/OD_control]×100％

根據(jù)初篩的結(jié)果檢測(cè)不同濃度的柏花草膠囊(200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL、12.5μg/mL)對(duì)WM9、PC3、K562、HEL四種細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用，每個(gè)細(xì)胞每組3個(gè)平行。研究結(jié)果表明，柏花草膠囊對(duì)WM9，HEL，K562細(xì)胞的生長(zhǎng)均有很好的抑制作用，50μg/mL時(shí)其抑制率分別為61.39％，61.16％和54.34％。對(duì)PC3細(xì)胞的生長(zhǎng)也有較好的抑制作用，其抑制率為34.42％(圖1)。

進(jìn)一步通過濃度梯度的形式研究柏花草膠囊對(duì)各細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。由圖2可看出，柏花草膠囊對(duì)PC3、WM9、K562、HEL四種細(xì)胞的生長(zhǎng)均有很好的抑制作用，且隨藥物濃度的增加抑制作用增強(qiáng)，200μg/mL時(shí)其抑制率分別為77％，89％，83％，77％，其IC50值分別為99μg/mL，62μg/mL，49μg/mL，49μg/mL。由以上數(shù)據(jù)可看出，柏花草膠囊可作為抗前列腺癌、黑色素瘤及白血病的潛在藥物。

表1

表1為附圖2中不同濃度梯度的柏花草膠囊(200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL、12.5μg/mL)對(duì)PC3、WM9、K562和HEL細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率及IC50值。