本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及一種培美曲塞二鈉的注射劑及其制備方法。

背景技術(shù)：

培美曲塞二鈉(Pemetrexed disodium)，化學(xué)名稱(chēng)為N-[4-[2-(2-氨基-4，7-二氫-4-氧-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-烷基)乙基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸二鈉。

培美曲塞二鈉為多靶點(diǎn)葉酸拮抗劑，由美國(guó)禮來(lái)公司開(kāi)發(fā)用于治療腫瘤，聯(lián)合順鉑可治療無(wú)法手術(shù)的惡性胸膜間皮瘤，目前，培美曲塞二鈉是世界上唯一治療惡性胸膜間皮瘤(MPM)的藥物，同時(shí)用于轉(zhuǎn)移性非小細(xì)胞肺癌二線治療。培美曲塞單藥或聯(lián)合化療對(duì)多種腫瘤有明顯的治療作用，尤其對(duì)既往治療失敗的患者，培美曲塞二鈉給他們帶來(lái)了新的機(jī)會(huì)和希望。培美曲塞二鈉的穩(wěn)定性較差，在高溫、氧化條件下易發(fā)生降解，產(chǎn)生可能引發(fā)毒副作用的雜質(zhì)，不適合制成需要高溫滅菌的注射液，因而培美曲塞二鈉通常制成凍干粉針劑，但現(xiàn)有的培美曲塞二鈉的凍干粉針劑在運(yùn)輸和貯藏的過(guò)程中，也常因?yàn)闇囟瓤刂撇粐?yán)格而導(dǎo)致凍干粉針劑中雜質(zhì)含量明顯增加。

CN102106833A公開(kāi)一種培美曲塞二鈉凍干粉針劑及其制備方法，該培美曲塞二鈉凍干粉針劑由培美曲塞二鈉和甘露醇組成，所述甘露醇和培美曲塞二鈉的質(zhì)量比為0.6～2.0∶1。CN101411710A公開(kāi)了一種培美曲塞二鈉凍干粉針劑及其制法，該粉針劑由培美曲塞二鈉、甘露醇和亞硫酸鈉組成，其中原料質(zhì)量份配比：培美曲塞二鈉50，甘露醇10～50，亞硫酸鈉0.1～1；所述的培美曲塞二鈉凍干粉針劑的pH值為7.0～8.0。亞硫酸鈉為常用的抗氧劑，具有較強(qiáng)的活血活性，對(duì)主藥有一定的影響。

在藥物載體輸送系統(tǒng)中，脂質(zhì)體的研究較為廣泛，脂質(zhì)體在體內(nèi)具有良好的靶向性和生物相容性。作為一種新型藥物制劑，脂質(zhì)體制劑具有以下優(yōu)點(diǎn)：（1）具有緩釋作用：活性成分緩慢釋放，延緩腎排泄和代謝，從而延長(zhǎng)作用時(shí)間，提高質(zhì)量效果；（2）降低藥物毒性；（3）增加藥物的溶解性，提高制劑質(zhì)量；（4）具有靶向性：脂質(zhì)體所載的藥物在肝、脾網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)臟器局部維持高濃度，從而起到藥物器官靶向性作用；（5）具有對(duì)活性藥物成分的保護(hù)作用。

隨著生物技術(shù)的不斷進(jìn)展，脂質(zhì)體制備工藝逐步完善，脂質(zhì)體作用機(jī)制進(jìn)一步闡明，加之脂質(zhì)體適合體內(nèi)降解、無(wú)毒性和無(wú)免疫原性，特別是大量試驗(yàn)數(shù)據(jù)證明脂質(zhì)體作為藥物載體可以改變藥物在體內(nèi)的分布，增加藥物在靶器官的分布量，提高藥物治療指數(shù)、降低藥物毒性和減少藥物副作用，并減少藥物劑量等優(yōu)點(diǎn)。

CN201210551378.1公開(kāi)了一種培美曲塞二鈉脂質(zhì)體注射劑，該脂質(zhì)體注射劑由培美曲塞二鈉、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、PEG600、膽固醇和甘露醇制成。該脂質(zhì)體注射劑具有脂質(zhì)體粒徑小且分布均勻、包封率高、滲漏率低、穩(wěn)定性好。雖然CN201210551378.1公開(kāi)的培美曲塞二鈉脂質(zhì)體注射劑具有在“體內(nèi)的消除速度減緩，在體循環(huán)中分布時(shí)間延長(zhǎng)，達(dá)到了部分緩釋效果，生物利用度增加”的技術(shù)效果，但仍然沒(méi)有實(shí)現(xiàn)靶向給藥的效果。

由于培美曲塞二鈉注射劑和脂質(zhì)體注射劑的不足，目前存在培美曲塞二鈉靶向給藥制劑的需求。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種更有優(yōu)勢(shì)的培美曲塞二鈉脂質(zhì)體注射劑。

本發(fā)明提供的培美曲塞二鈉脂質(zhì)體注射劑含有培美曲塞二鈉、中性磷脂、帶電荷磷脂、膽固醇、抗氧劑，任選的含有助懸劑，脂質(zhì)體的粒徑控制在100-150nm。

所述的培美曲塞二鈉和中性磷脂的質(zhì)量比為0.01～0.2:1，帶電荷磷脂和中性磷脂的質(zhì)量比為0.01～0.4:1；膽固醇與中性磷脂質(zhì)量比為0.1～0.3:1；抗氧劑與中性磷脂質(zhì)量比為0～0.02:1；優(yōu)選培美曲塞二鈉:帶電荷磷脂:膽固醇:抗氧劑:中性磷脂=0.1～0.2: 0.1～0.4:0.1～0.3 : 0.01～0.02:1。膽固醇可使脂質(zhì)體雙分子層膜固化，從而減少自由基的生成，降低了氧化水平，使脂質(zhì)體穩(wěn)定性顯著增強(qiáng)。為了進(jìn)一步降低形成脂質(zhì)體的磷脂和脂質(zhì)體所包裹藥物的化學(xué)降解，抗氧劑通過(guò)與磷脂過(guò)氧化自由基反應(yīng)并猝滅單一態(tài)的氧分子和對(duì)磷脂的雙分子層進(jìn)行排序（如限制類(lèi)脂層分子的流動(dòng)性）等分子機(jī)制而發(fā)揮其抗氧化作用。本發(fā)明的抗氧劑選自維生素E或維生素C。

進(jìn)一步地，所述的中性磷脂為蛋黃卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂、雙硬脂酸卵磷脂、大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、雙軟脂酸卵磷脂或雙肉豆寇酸卵磷脂；

所述的帶電荷磷脂為帶負(fù)電荷磷脂或帶正電荷磷脂；其中負(fù)電荷磷脂選自雙肉豆寇酸磷脂酰甘油、雙月桂酸磷脂酰甘油、雙軟脂酸磷脂酰甘油、雙硬脂酸磷脂酰甘油、雙肉豆寇酸磷脂酸、雙硬脂酸磷脂酸、雙月桂酸磷脂酸、雙軟脂酸磷脂酸、雙油酸磷脂酰絲氨酸或雙亞油酸磷脂酰肌醇其中一種或多種；

所述帶正電荷磷脂選自為二棕櫚?；字；一被?L-賴(lài)氨酸、二油酸磷脂酰絲氨酸、二硬脂酰磷脂酸或十八胺中一種或多種。目前脂質(zhì)體制備主要選用中性的卵磷脂，但由于含有卵磷脂的脂質(zhì)體的粒徑在貯存期間會(huì)發(fā)生改變而影響其藥效，本發(fā)明在配方中加入帶電荷的磷脂可使脂質(zhì)體粒徑在貯存期間的變化減小到最小低程度。

本發(fā)明在配方中加入的助懸劑選自羧甲基纖維素、甲基纖維素或聚乙二醇。助懸劑選自聚乙二醇時(shí)，聚乙二醇的分子量為200至400，優(yōu)選300。本發(fā)明通過(guò)加入助懸劑尤其是優(yōu)選的聚乙二醇300，增加了注射劑體系的黏度，降低微粒的沉降速度，減少了微粒之間相互聚集，使得脂質(zhì)體穩(wěn)定性顯著增強(qiáng)。

本發(fā)明所述的脂質(zhì)體注射劑，主要由培美曲塞二鈉、雙軟脂酸卵磷脂、雙硬脂酸磷脂酰甘油、膽固醇、維生素E和聚乙二醇組成。

本發(fā)明所述的脂質(zhì)體注射劑，優(yōu)選主要由培美曲塞二鈉、雙軟脂酸卵磷脂、雙硬脂酸磷脂酰甘油、膽固醇、維生素E和聚乙二醇300組成。

本發(fā)明的目的還在于提供一種培美曲塞二鈉脂質(zhì)體注射劑的制備方法，步驟如下：

(1)將培美曲塞二鈉、中性磷脂、 帶電荷磷脂、膽固醇和抗氧劑制成脂質(zhì)薄膜；

(2)加入助懸劑的水溶液水化；

(3)均化脂質(zhì)體至所需粒徑和均勻度；

(4)定容、除菌、分裝。

更為具體的，培美曲塞二鈉脂質(zhì)體注射劑的制備方法步驟如下：

1）制備培美曲塞或培美曲塞二鈉脂質(zhì)體：根據(jù)配方選用培美曲塞二鈉、中性磷脂、帶電荷磷脂、膽固醇和抗氧劑溶于甲醇中，混合均勻；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶液中溶劑減壓除去，形成脂質(zhì)薄膜；2）加入助懸劑的水溶液水化，水化溫度一般在30℃-50℃ 之間，得培美曲塞或培美曲塞二鈉懸浮液；3)均化脂質(zhì)體：水化完全后用高壓均粒機(jī)制備脂質(zhì)體至所需粒徑和均勻度，脂質(zhì)體的粒徑控制在100-150nm，脂質(zhì)體粒徑和均勻度用多角度納米粒子分析器來(lái)檢測(cè)；4)定容、除菌、分裝、保存：用注射用水定容；將培美曲塞或培美曲塞二鈉脂質(zhì)體懸浮液用微孔膜過(guò)濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存至使用。

本發(fā)明培美曲塞二鈉脂質(zhì)體制劑控制脂質(zhì)體粒徑在100-150nm，將水溶性的培美曲塞二鈉包裹在脂質(zhì)體內(nèi)環(huán)境中，通過(guò)控制脂質(zhì)體粒徑控制，使得脂質(zhì)體選擇性的腫瘤組織中的血管壁，把藥物輸送到病灶部位，達(dá)到靶向給藥的目的。本發(fā)明培美曲塞二鈉脂質(zhì)體制劑能夠?qū)⑴嗝狼c靶向分布在癌變器官，顯著提高了培美曲塞二鈉的療效，減少了毒副作用。

本發(fā)明的培美曲塞二鈉脂質(zhì)體注射劑包封率高、穩(wěn)定性好，生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單可靠，避免了生產(chǎn)和存儲(chǔ)過(guò)程培美曲塞二鈉降解產(chǎn)生的有關(guān)物質(zhì)提高，顯著放寬了培美曲塞二鈉脂質(zhì)體注射劑的保存條件。

附圖說(shuō)明

圖1是大鼠靜脈注射3mg/kg實(shí)施例2培美曲塞二鈉脂質(zhì)體注射劑后的組織分布圖

具體實(shí)施例

以下所述僅是本發(fā)明的部分優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。

實(shí)施例1

制劑處方

制劑工藝如下：

根據(jù)配方選用培美曲塞二鈉、磷脂、膽固醇和維生素E溶于甲醇中混合均勻；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶液中甲醇減壓除去，形成脂質(zhì)薄膜；將PEG300溶于注射用水10ml，并水化脂質(zhì)薄膜，水化溫度為40℃，得培美曲塞二鈉脂質(zhì)體懸浮液；水化完全后用高壓均粒機(jī)制備脂質(zhì)體至平均粒徑為130±10nm，脂質(zhì)體粒徑和均勻度用多角度納米粒子分析器來(lái)檢測(cè)；用注射用水定容并調(diào)節(jié)至的濃度為2.0mg/ml溶液，將培美曲塞二鈉脂質(zhì)體懸浮液用0.22微米孔徑的微孔膜過(guò)濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存。

實(shí)施例2

制劑處方

制劑工藝如下：

根據(jù)配方選用培美曲塞二鈉、磷脂、膽固醇和維生素E溶于甲醇中混合均勻；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶液中甲醇減壓除去，形成脂質(zhì)薄膜；將PEG300溶于注射用水10ml，并水化脂質(zhì)薄膜，水化溫度為30℃，得培美曲塞二鈉脂質(zhì)體懸浮液；水化完全后用高壓均粒機(jī)制備脂質(zhì)體至平均粒徑為120±10nm，脂質(zhì)體粒徑和均勻度用多角度納米粒子分析器來(lái)檢測(cè)；用注射用水定容并調(diào)節(jié)至的濃度為2.0mg/ml溶液，將培美曲塞二鈉脂質(zhì)體懸浮液用0.22微米孔徑的微孔膜過(guò)濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存。

實(shí)施例3

制劑處方

制劑工藝如下：

根據(jù)配方選用培美曲塞二鈉、磷脂、膽固醇和維生素E溶于甲醇中混合均勻；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶液中甲醇減壓除去，形成脂質(zhì)薄膜；將PEG300溶于注射用水10ml，并水化脂質(zhì)薄膜，水化溫度為50℃，得培美曲塞二鈉脂質(zhì)體懸浮液；水化完全后用高壓均粒機(jī)制備脂質(zhì)體至平均粒徑為110±10nm，脂質(zhì)體粒徑和均勻度用多角度納米粒子分析器來(lái)檢測(cè)；用注射用水定容并調(diào)節(jié)至的濃度為2.0mg/ml溶液，將培美曲塞二鈉脂質(zhì)體懸浮液用0.22微米孔徑的微孔膜過(guò)濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存。

實(shí)施例4

制劑處方

制劑工藝如下：

根據(jù)配方選用培美曲塞二鈉、磷脂、膽固醇溶于甲醇中混合均勻；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶液中甲醇減壓除去，形成脂質(zhì)薄膜；將PEG300溶于注射用水10ml，并水化脂質(zhì)薄膜，水化溫度為30℃，得培美曲塞二鈉脂質(zhì)體懸浮液；水化完全后用高壓均粒機(jī)制備脂質(zhì)體至平均粒徑為120±10nm，脂質(zhì)體粒徑和均勻度用多角度納米粒子分析器來(lái)檢測(cè)；用注射用水定容并調(diào)節(jié)至的濃度為2.0mg/ml溶液，將培美曲塞二鈉脂質(zhì)體懸浮液用0.22微米孔徑的微孔膜過(guò)濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存。

試驗(yàn)例1

采用經(jīng)氣管穿刺方法，將人非小細(xì)胞肺癌H460SM細(xì)胞接種于輻射后的裸大鼠左肺內(nèi)，構(gòu)建人非小細(xì)胞肺癌原位動(dòng)物模型。隨機(jī)將動(dòng)物分成5組，每組8只，雌雄各半，分別單次靜脈注射3mg/kg實(shí)驗(yàn)例二制備的培美曲塞二鈉脂質(zhì)體注射劑，測(cè)定在給藥后0.25h、2h、8h、24h各主要組織和血漿中培美曲塞二鈉的濃度，評(píng)價(jià)其分布情況，分布圖如圖1所示。

試驗(yàn)例2

將本發(fā)明實(shí)施例1-4的樣品分別置于高溫40℃、相對(duì)濕度75%的條件下6個(gè)月，進(jìn)行加速穩(wěn)定性試驗(yàn)考察，考察結(jié)果見(jiàn)下表：