本發(fā)明屬于心腦血管疾病治療藥物領(lǐng)域，具體地說(shuō)是涉及一種以工業(yè)大麻為主要原料制備的防治心腦血管疾病的藥物組合物。
背景技術(shù)：
：大麻的種植歷史悠久，古代大麻主要用于制作加工繩索、漁網(wǎng)、服裝和造紙?jiān)?，以及油脂、食品等。隨著社會(huì)的發(fā)展和進(jìn)步，人們發(fā)現(xiàn)大麻中含有一種毒性成分(四氫大麻酚)可使人致幻成癮，歐美許多國(guó)家曾在相當(dāng)長(zhǎng)時(shí)期內(nèi)禁種大麻。由于大麻的經(jīng)濟(jì)利用價(jià)值高，到20世紀(jì)80年代，一些歐洲國(guó)家研究培育出了低毒大麻品種并獲得推廣種植。1990年歐共體率先緊急修訂農(nóng)業(yè)政策，廢除了禁種大麻的禁令，開(kāi)始恢復(fù)大麻的生產(chǎn)和研究。隨后美國(guó)、加拿大、澳大利亞等國(guó)解除了大麻種植的禁令，全球大麻種植面積和纖維產(chǎn)量有了迅速增長(zhǎng)，歐美國(guó)家對(duì)工業(yè)大麻的開(kāi)發(fā)利用再次掀起，國(guó)際市場(chǎng)對(duì)生態(tài)大麻的需求也在迅速增長(zhǎng)。根據(jù)大麻的經(jīng)濟(jì)屬性，為充分利用其為人類(lèi)服務(wù)，1988年聯(lián)合國(guó)明確規(guī)定不具備提取毒性成分(四氫大麻酚THC)價(jià)值或直接作為毒品吸食的，專(zhuān)供工業(yè)用途的原料大麻，工業(yè)大麻(其生長(zhǎng)期大麻花葉中的四氫大麻酚含量小于0.3％)，可以合法進(jìn)行規(guī)?；N植與工業(yè)化開(kāi)發(fā)利用。工業(yè)大麻是獨(dú)具特色、比較優(yōu)勢(shì)突出的生物資源。工業(yè)大麻與傳統(tǒng)有毒大麻具有本質(zhì)差別，工業(yè)大麻是一類(lèi)無(wú)毒化的工業(yè)原料產(chǎn)品，具有極高的經(jīng)濟(jì)利用價(jià)值。到2003年末世界各國(guó)先后一共選育出25個(gè)工業(yè)大麻品種，而且歐盟的法、德、英等七國(guó)也都成為工業(yè)大麻主要種植生產(chǎn)國(guó)，以工業(yè)大麻纖維和麻籽及其花、葉、根、莖為原料進(jìn)行系列產(chǎn)品研發(fā)與產(chǎn)業(yè)化綜合開(kāi)發(fā)，已在工業(yè)大麻初級(jí)加工主產(chǎn)品麻皮纖維、稈芯纖維、麻籽油脂和籽粕蛋白、藥用標(biāo)準(zhǔn)化提取物實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步進(jìn)行深加工利用，派生出來(lái)的產(chǎn)品已達(dá)到二萬(wàn)五千種以上，包含了人類(lèi)的衣、食、住、行、用各大類(lèi)產(chǎn)品。工業(yè)大麻產(chǎn)業(yè)的研究、開(kāi)發(fā)和生產(chǎn)主要集中在歐洲、加拿大、美國(guó)等技術(shù)發(fā)達(dá)國(guó)家。工業(yè)大麻產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，首先是從選育無(wú)毒或低毒化的工業(yè)大麻新品種開(kāi)始的，并以此為基礎(chǔ)實(shí)現(xiàn)了規(guī)?；姆N植和高技術(shù)產(chǎn)業(yè)化的綜合開(kāi)發(fā)利用，形成了一個(gè)“新興綠色產(chǎn)業(yè)群”和新型工業(yè)經(jīng)濟(jì)的快速增長(zhǎng)點(diǎn)。火麻仁為大麻干燥成熟果實(shí)，古代通常將火麻仁入藥，食療亦有記載。國(guó)家衛(wèi)生部已將火麻仁納入“既是藥品又是食品”——“藥食兩用”名單。火麻仁的藥性及藥理為：甘，平。歸脾、胃、大腸經(jīng)。功能主治：潤(rùn)燥，滑腸，通淋，活血。治腸燥便秘，消渴，熱淋，風(fēng)痹，痢疾。月經(jīng)不調(diào)，疥瘡，癬癩。在醫(yī)書(shū)中有詳細(xì)療效記載，如《本經(jīng)》：“補(bǔ)中益氣?！?；《唐本草》：“主五勞?！?；《肘后方》：“治大渴，日食數(shù)斗，小便赤澀者：麻子一升，水三升，煮三、四沸，取汁飲之?！?；《日華子本草》：“補(bǔ)虛勞，長(zhǎng)肌肉，下乳，止消渴，催生。治橫逆產(chǎn)?！保弧侗静菔斑z》：“下氣，利小便，去風(fēng)痹皮頑，炒令香搗碎，小便浸取汁服；婦人倒產(chǎn)吞二七枚?！保弧妒朝煴静荨罚骸叭≈笾?，去五臟風(fēng)、潤(rùn)肺。治關(guān)節(jié)不通、發(fā)落，通血脈?！?。大麻的花葉均供藥用。麻葉的藥性及藥理為：辛；有毒。歸肺；膀胱；大腸經(jīng)。功能主治：止痛，定喘，驅(qū)蛔。主治氣喘，跌撲疼痛，蛔蟲(chóng)病。麻花的藥性及藥理為：苦；辛；性溫；有毒。功能主治：祛風(fēng)；活血；生發(fā)。主風(fēng)病肢體麻木；遍身瘙癢；婦女經(jīng)閉。心腦血管疾病是當(dāng)今世界上對(duì)人類(lèi)威脅最大的疾病之一，其發(fā)病率和死亡率已超過(guò)癌癥而躍居世界第一。2008年中國(guó)衛(wèi)生部公布的資料顯示，中國(guó)人口的總死亡率中心腦血管疾病死亡率高居首位，城市居民心臟病死亡率為19.65％，腦血管疾病死亡率為19.62％。其中，具有“發(fā)病率高、致殘率高、死亡率高、復(fù)發(fā)率高，并發(fā)癥多”特點(diǎn)的腦血管疾病，即使采用最先進(jìn)、最完善的治療手段，仍可有半數(shù)以上的腦血管疾病幸存者生活不能完全自理。目前，腦血管疾病的藥物治療包括抗氧化、抗炎、抗凝血、抗血小板聚集、和溶栓治療等。但已上市的大部分藥物作用途徑單一，療效不佳，甚至導(dǎo)致病情的加劇，因此尋找能有效作用于多個(gè)病理生理環(huán)節(jié)的藥物成為當(dāng)今發(fā)展的方向。大麻二酚(CBD)是從大麻花葉中萃取的一種無(wú)毒的可用于藥品、化妝品、保健食品的一種高附加值的酚類(lèi)物質(zhì)。目前，以色列、美國(guó)、英國(guó)等發(fā)達(dá)國(guó)家已用其做原料并開(kāi)發(fā)出多種特效藥品和化妝品。CBD是大麻中的非成癮性成分，能阻礙THC對(duì)人體神經(jīng)系統(tǒng)影響，并具有抗痙攣、抗風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗焦慮等藥理活性，亦有在心腦血管疾病方面的報(bào)道。但單獨(dú)使用大麻二酚(CBD)的治療效果并不理想。因此開(kāi)發(fā)新的活性高，毒副作用小的治療藥物顯得非常必要。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種以工業(yè)大麻為主要原料制備的防治心腦血管疾病的藥物組合物。本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)。除非另有說(shuō)明，本發(fā)明所采用的百分?jǐn)?shù)均為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)。一種防治心腦血管疾病的藥物，其特征在于，由下述重量份的原料混勻制成：工業(yè)大麻火麻仁提取物0.3份～99.7份，工業(yè)大麻火麻素99.7份～0.3份。所述藥物的原料組成優(yōu)選為工業(yè)大麻火麻仁提取物40份和工業(yè)大麻火麻素60份。所述的工業(yè)大麻火麻仁提取物通過(guò)以下方法制備而成：(1)取成熟的工業(yè)大麻火麻仁，經(jīng)烘干、除雜，粉碎后備用；(2)在20～85℃條件下，用乙醇對(duì)粉碎火麻仁料進(jìn)行提取，乙醇濃度為95％～100％(V/V)，料液比為1:5～1:20；(3)濾出浸提液，減壓濃縮后即為工業(yè)大麻火麻仁提取物。在用乙醇對(duì)工業(yè)大麻火麻仁進(jìn)行提取時(shí)，可采用以下多種方式進(jìn)行：如室溫下浸提，每批物料浸提2次，每次7～10天；在60～85℃條件下，加熱提取2次，每次1～3小時(shí)；超聲波輔助提取，超聲波頻率30～60kHz，功率100～1000W，提取時(shí)間30～60min，浸提溫度25～50℃；亦可采用微波輔助提取等其它現(xiàn)有技術(shù)。所述的工業(yè)大麻火麻素通過(guò)以下方法制備而成：(1)取工業(yè)大麻的花、葉、麻糠或三者的混合物，經(jīng)烘干、除雜、粉碎至10～60目；(2)超臨界二氧化碳萃取：將上述粉碎好的工業(yè)大麻原料投入超臨界二氧化碳萃取裝置中，控制萃取溫度40～50℃，萃取時(shí)間30～90min，萃取壓力25～35Mpa，二氧化碳流量40kg/h，分離釜出口收集萃取物；(3)萃取物用0.2～10倍體積的95％～100％(V/V)的乙醇洗脫，洗脫次數(shù)為1～3次；(4)收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，粉碎后即得工業(yè)大麻火麻素。所述的工業(yè)大麻的花、葉、麻糠三者混合物的優(yōu)選配比為1:3:2。普通的麻葉、麻花均具有毒性(含有四氫大麻酚THC—毒品大麻的至幻物質(zhì))。為排除原料藥的毒性，本發(fā)明優(yōu)選采用云南生長(zhǎng)的工業(yè)大麻品種——“云麻1號(hào)”的花、葉、麻糠和火麻仁作為原料。按我國(guó)相關(guān)法律文件規(guī)定，“云麻1號(hào)”只能在云南境內(nèi)種植，并且其花、葉、麻糠只能在云南境內(nèi)加工。本發(fā)明的藥物組合物可進(jìn)一步制成不同的藥物制劑，包括口服劑和針劑，其中口服劑包括膠囊劑、口服液、片劑、滴丸、顆粒劑等，針劑包括注射液劑型及注射用凍干粉針劑型等。在制備口服制劑時(shí)可選用的輔型劑可以是淀粉、糊精或環(huán)糊精、蔗糖、硬脂酸鹽等常規(guī)充填劑。凍干粉針劑可以通過(guò)無(wú)菌噴霧干燥、低溫真空干燥、冷凍干燥等方法制備。各制劑的后期制備工藝及設(shè)備均屬制藥領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)，本發(fā)明對(duì)此不作限定，故在此不予詳述。本發(fā)明的藥物組合物對(duì)防治心腦血管疾病有明確作用，可顯著降低局部性腦缺血大鼠腦壞死百分率，改善缺血大鼠的行為學(xué)評(píng)分；能使缺血再灌注損傷大鼠明顯減輕腦水腫及腦梗死體積，提示本發(fā)明對(duì)腦缺血損傷具有明顯保護(hù)作用。本發(fā)明可顯著降低異丙腎上腺素(ISO)所致的J點(diǎn)位移和血漿中LDH水平；能明顯縮小冠脈結(jié)扎引起的大鼠心肌缺血心肌梗塞范圍，降低心肌缺血大鼠血漿中LDH水平。本發(fā)明可明顯抑制大鼠血小板聚集，可降低大鼠全血粘度、血漿粘度和紅細(xì)胞壓積，能明顯延長(zhǎng)小鼠凝血時(shí)間，從而有利于防治血栓形成。本發(fā)明可提高小鼠的SOD和GSH-PX等抗自由基酶活性，從而可起到清除自由基，保護(hù)心腦血管及組織的作用。本發(fā)明各作用效果均優(yōu)于大麻二酚。本發(fā)明可用于防治包括腦缺血、心肌缺血、缺氧—復(fù)氧所致的神經(jīng)元損傷、腦梗塞(中風(fēng))、腦血栓、腦出血、冠心病、心肌梗塞等心腦血管疾病。在治療或預(yù)防心腦血管疾病方面具有良好的應(yīng)用前景。具體實(shí)施方式下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但實(shí)施例并不是對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的限定。實(shí)施例1采用云南生長(zhǎng)的工業(yè)大麻品種——“云麻1號(hào)”的花、葉、麻糠和火麻仁作為原料。取成熟的工業(yè)大麻火麻仁，經(jīng)烘干、除雜，粉碎后備用；用乙醇對(duì)粉碎火麻仁料進(jìn)行提取(在60～85℃條件下，加熱提取2次，每次1～3小時(shí))，乙醇濃度為95％～100％(V/V)，料液比為1:5～1:20；濾出浸提液，減壓濃縮后即為工業(yè)大麻火麻仁提取物。取工業(yè)大麻的花、葉、麻糠1:3:2質(zhì)量比的混合物，經(jīng)烘干、除雜、粉碎至10～60目；超臨界二氧化碳萃取：將上述粉碎好的工業(yè)大麻原料投入超臨界二氧化碳萃取裝置中，控制萃取溫度40～50℃，萃取時(shí)間30～90min，萃取壓力25～35Mpa，二氧化碳流量40kg/h，分離釜出口收集萃取物；萃取物用0.2～10倍體積的95％～100％(V/V)的乙醇洗脫，洗脫次數(shù)為1～3次；收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，粉碎后獲得工業(yè)大麻火麻素。取工業(yè)大麻火麻仁提取物40份，工業(yè)大麻火麻素60份，混勻，得本發(fā)明藥物B。實(shí)施例2重復(fù)實(shí)施例1，有以下不同點(diǎn)：在用乙醇對(duì)工業(yè)大麻火麻仁進(jìn)行提取時(shí)，室溫下浸提，每批物料浸提2次，每次7～10天。取工業(yè)大麻的花、葉、麻糠1:1:1質(zhì)量比的混合物作為工業(yè)大麻火麻素的提取原料。取工業(yè)大麻火麻仁提取物0.3份，工業(yè)大麻火麻素99.7份，混勻，得本發(fā)明藥物A。實(shí)施例3重復(fù)實(shí)施例1，有以下不同點(diǎn)：在用乙醇對(duì)工業(yè)大麻火麻仁進(jìn)行提取時(shí)，采用超聲波輔助提取，超聲波頻率30～60kHz，功率100～1000W，提取時(shí)間30～60min，浸提溫度25～50℃。取工業(yè)大麻的花、葉、麻糠3:2:1質(zhì)量比的混合物作為工業(yè)大麻火麻素的提取原料。取工業(yè)大麻火麻仁提取物99.7份，工業(yè)大麻火麻素0.3份，混勻，得本發(fā)明藥物C。實(shí)施例4取實(shí)施例1所得藥物100克(過(guò)80目篩)，加入60克微晶纖維素，過(guò)80目篩三遍，混合均勻，噴入95％乙醇溶液，制軟材，過(guò)40目篩制粒，60℃干燥半小時(shí)，分裝于3#膠囊中，鋁塑復(fù)合包裝，制得本發(fā)明藥物膠囊劑。實(shí)施例5取實(shí)施例2所得藥物，加入物料量5～20％的干淀粉及1～5％的硬脂酸鎂等，經(jīng)混合，制粒，干燥，壓片，制得本發(fā)明藥物片劑。實(shí)施例6取實(shí)施例3所得藥物，加入蔗糖水及常規(guī)量的防腐劑，穩(wěn)定劑等輔料。過(guò)濾、滅菌，分裝入10mL瓶中，制成本發(fā)明藥物口服液。實(shí)施例7取實(shí)施例1所得藥物，加入注射用水溶解，加入2.0‰活性炭，攪拌，過(guò)濾，繼以用0.45μm、0.22μm微孔濾膜分級(jí)過(guò)濾，補(bǔ)充注射用水，分裝于西林瓶中，冷凍干燥，回充高純度氮?dú)?，加塞，壓蓋，包裝，制得本發(fā)明藥物注射液。應(yīng)用實(shí)施例1本發(fā)明對(duì)大鼠局灶性腦缺血的治療作用選取體重180～220gWistar雄性大鼠50只，隨機(jī)平均分成5組，每組10只，即對(duì)照組、本發(fā)明A、B、C組(20mg/kg)和大麻二酚組。按Tamura的方法(TumuraA，etal：JCerebBloodFlowandMetab，1981，1：53)制備腦缺血模型。對(duì)照組腹腔注射等體積溶劑，本發(fā)明組和大麻二酚組，給藥劑量為20mg/kg。給藥時(shí)間為缺血后立即腹腔注射，給藥體積為1ml。于術(shù)后24小時(shí)進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分，評(píng)分采用單盲法；在大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈阻斷24小時(shí)，斷頭取腦，在顯微鏡下進(jìn)一步確證右側(cè)大腦中動(dòng)脈已在嗅束與大腦下靜脈之間燒斷且腦實(shí)質(zhì)無(wú)損害者，將其進(jìn)行切片染色，分別稱(chēng)壞死區(qū)及大腦右半球重量，計(jì)算壞死百分率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1：表1本發(fā)明對(duì)腦缺血大鼠的組織學(xué)和行為學(xué)影響組別劑量(mg/Kg)行為學(xué)評(píng)分(24h)大腦壞死百分率(％)對(duì)照組-7.74±1.8817.75±3.39大麻二酚組206.25±1.59*10.65±2.90*本發(fā)明A組203.55±1.35**##5.64±2.59**#本發(fā)明B組203.36±1.46**##5.19±3.61**#本發(fā)明C組204.42±1.27*#6.53±2.48**注：與對(duì)照組比較：*P＜0.05，**P＜0.01；與大麻二酚組比較：#P＜0.05，##P＜0.01。從表1可以看出，與對(duì)照組相比，本發(fā)明能明顯改善局部性腦缺血大鼠的神經(jīng)行為學(xué)缺陷(P＜0.05～0.01)，優(yōu)于大麻二酚組；本發(fā)明能減少局部性腦缺血大鼠的腦梗死重量(P＜0.01)，優(yōu)于大麻二酚組。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明于缺血后立即腹腔注射給藥，能明顯改善局部性腦缺血大鼠的神經(jīng)行為學(xué)缺陷，減少局部性腦缺血大鼠的腦梗死重量；本發(fā)明對(duì)急性局部性腦缺血能發(fā)揮很好的治療作用。應(yīng)用實(shí)施例2本發(fā)明對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用選取體重180～220gWistar雄性大鼠50只，隨機(jī)平均分成5組，每組10只，即假手術(shù)組，對(duì)照組(注射等量溶劑)，本發(fā)明A、B、C組(20mg/kg)和大麻二酚組(給藥劑量20mg/kg)。給藥時(shí)間為缺血后立即腹腔注射，給藥體積為1ml。參照LongaEZ報(bào)道的線栓模型制備腦缺血再灌注損傷模型(LongaEZ，etal：Reversablemiddlecerebralarteryocclusionwithoutcraniectomyinrat.Stroke，1989，20：84)。缺血2小時(shí)再灌注24小時(shí)后進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分，斷頭取腦，TTC染色，留取樣本進(jìn)行腦梗塞體積測(cè)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2：表2本發(fā)明對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用注：與對(duì)照組比較：*P＜0.05，**P＜0.01；與大麻二酚組比較：#P＜0.05，##P＜0.01。從表2可以看出，本發(fā)明可顯著降低大鼠行為評(píng)分，縮小腦梗死面積，減輕缺血側(cè)腦半球水腫程度，效果優(yōu)于大麻二酚。表明本發(fā)明對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷有較強(qiáng)保護(hù)作用。應(yīng)用實(shí)施例3本發(fā)明對(duì)大鼠體內(nèi)血栓形成的影響選取體重180～220gWistar雄性大鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，即本發(fā)明A、B、C組(20mg/kg)，大麻二酚組(20mg/kg)和空白對(duì)照組。各組動(dòng)物連續(xù)給受試樣品15天，第16天禁食12小時(shí)，給受試樣品1小時(shí)后，用4％戊巴比妥鈉42mg/kg腹腔注射麻醉，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈及左頸外靜脈，在聚乙烯管中放入一根長(zhǎng)5cm已稱(chēng)重的七號(hào)絲線，以含肝素鈉(50U/ml)的生理鹽水溶液充滿(mǎn)聚乙烯管，聚乙烯管的一端插入左頸外動(dòng)脈，另一端插入右頸總動(dòng)脈。打開(kāi)夾閉的血管的動(dòng)脈夾，使血液從右總靜脈流入聚乙烯管后返回左頸外靜脈，開(kāi)放血流15min后迅速取出絲線稱(chēng)重，減去絲線重量即血栓濕重。表3本發(fā)明對(duì)大鼠體內(nèi)血栓形成的抑制作用組別劑量(mg/Kg)血栓濕重(mg)血栓抑制率(％)空白對(duì)照組等容量0.5％CMC‐Na88.4±5.5‐大麻二酚組2056.6±3.8***31.3本發(fā)明A組2050.4±3.8***38.8本發(fā)明B組2049.5±4.9***39.9本發(fā)明C組2053.3±4.1***35.3注：與空白對(duì)照組比較：***P＜0.001。實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明可明顯抑制大鼠體內(nèi)血栓的形成，效果優(yōu)于大麻二酚。應(yīng)用實(shí)施例4本發(fā)明對(duì)大鼠血小板聚集的影響選取體重180～220gWistar雄性大鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，即本發(fā)明A、B、C組(20mg/kg)，大麻二酚組(20mg/kg)和空白對(duì)照組。各組動(dòng)物連續(xù)給受試樣品5天，第6天禁食12小時(shí)，給受試樣品1小時(shí)后，用4％戊巴比妥鈉42mg/kg腹腔注射麻醉。每只大鼠心臟取血3ml，以3.8％枸櫞酸鈉抗凝，650r/min離心10分鐘，移出上層血漿即富血小板血漿(PRP)0.5ml，余下部分再以3000r/min離心10分鐘，取上層清液即為貧血小板血漿(PPP)。用PPP調(diào)整PRP，使血小板數(shù)記數(shù)為60-90萬(wàn)/mm2，移取0.3ml調(diào)整好濃度的PRP至比濁管內(nèi)，將比濁管放入用PPP調(diào)零后的血小板聚集儀中，加入10μlADP誘導(dǎo)血小板聚集，10min內(nèi)測(cè)定血小板聚集率。表4本發(fā)明對(duì)大鼠血小板聚集率的影響注：與空白對(duì)照組比較：*P＜0.05，***P＜0.001；與大麻二酚組比較：#P＜0.05。實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明對(duì)大鼠血小板聚集具有明顯的抑制作用，效果優(yōu)于大麻二酚。應(yīng)用實(shí)施例5本發(fā)明對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響選取體重18～22g昆明種小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只，即本發(fā)明A、B、C組(20mg/kg)，大麻二酚組(20mg/kg)和空白對(duì)照組。各組動(dòng)物分別于尾靜脈注射相應(yīng)的藥物，15min后，眼眶取血，用玻片法測(cè)定凝血時(shí)間。表5本發(fā)明對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響組別劑量(mg/Kg)凝血時(shí)間(秒)空白對(duì)照組等容量生理鹽水58.52±10.95大麻二酚組20393.80±44.98***本發(fā)明A組20491.80±26.07***#本發(fā)明B組20505.41±34.27***#本發(fā)明C組20485.37±22.75***#注：與空白對(duì)照組比較：***P＜0.001；與大麻二酚組比較：#P＜0.05。實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明能明顯延長(zhǎng)小鼠凝血時(shí)間，效果優(yōu)于大麻二酚。應(yīng)用實(shí)施例6本發(fā)明對(duì)大鼠血液流變性的影響選取體重180～220gWistar雄性大鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只，即本發(fā)明素A、B、C組(20mg/kg)，大麻二酚組(20mg/kg)和空白對(duì)照組。各組動(dòng)物水合氯醛(350mg/kg)麻醉，于舌下靜脈注射給藥，15min后，心臟采血5ml/只，以0.5％肝素鈉抗凝，用血液流變學(xué)測(cè)試儀測(cè)定全血粘度、血漿粘度等指標(biāo)。表6本發(fā)明對(duì)大鼠血液流變性的影響注：與空白對(duì)照組比較：**P＜0.01。實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明可降低大鼠全血粘度、血漿粘度和紅細(xì)胞壓積，效果優(yōu)于大麻二酚。因此，本發(fā)明通過(guò)顯著降低全血粘度、血漿粘度和紅細(xì)胞積壓，而有利于防治血栓形成。應(yīng)用實(shí)施例7本發(fā)明對(duì)異丙腎上腺素(ISO)所至大鼠心肌缺血治療作用選取體重180～220gWistar雄性大鼠60只，隨機(jī)平均分成6組，每組10只，即正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、本發(fā)明A、B、C組(20mg/kg)和大麻二酚組(20mg/kg)。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組分別預(yù)先腹腔注射生理鹽水(與給藥組等容量)，本發(fā)明組和大麻二酚組分別腹腔注射給藥，每日1次，體積為2ml/kg體重，連續(xù)給藥三天。模型對(duì)照組、本發(fā)明各組和大麻二酚組第二天和第三天給藥0.5h后皮下注射給予ISO(0.15ml/100g體重)，正常對(duì)照組給予等容量的生理鹽水，分別記錄最后一次給受試藥物前及第2次注射ISO后30min的心電圖(標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián))，測(cè)量J點(diǎn)值，計(jì)算注射ISO后各組大鼠J點(diǎn)位移的絕對(duì)值。大鼠腹主動(dòng)脈采血，肝素抗凝后離心分離血漿，分光光度法測(cè)定血漿中LDH活性單位。各給藥組統(tǒng)計(jì)結(jié)果和模型組比較進(jìn)行t檢驗(yàn)。各組對(duì)ISO致大鼠心肌缺血II導(dǎo)聯(lián)心電圖J點(diǎn)位移變化見(jiàn)表7。各組對(duì)ISO致大鼠心肌缺血LDH活性單位變化見(jiàn)表8。表7本發(fā)明對(duì)ISO所致大鼠心肌缺血J點(diǎn)位移的影響組別劑量(mg/Kg)J點(diǎn)位移(mv)正常對(duì)照樣‐0.66±0.36**模型對(duì)照樣‐1.55±0.32大麻二酚組200.86±0.27**本發(fā)明A組200.65±0.25**本發(fā)明B組200.63±0.29**本發(fā)明C組200.72±0.24**注：與模型對(duì)照組比較：**p＜0.01。表8本發(fā)明對(duì)ISO大鼠LDH活性單位的影響組別劑量(mg/Kg)LDH活性單位(U/L)正常對(duì)照樣‐3093±393**模型對(duì)照樣‐4397±361大麻二酚組203741±368*本發(fā)明A組203068±351**本發(fā)明B組203003±280**本發(fā)明C組203252±355**注：與模型對(duì)照組比較：*p＜0.05，**p＜0.01。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在大鼠皮下注射ISO后，模型組動(dòng)物出現(xiàn)J點(diǎn)位移增大，血漿中LDH活力單位增加的顯著性心肌缺血改變，本發(fā)明腹腔注射給藥可以顯著性降低J點(diǎn)位移和血漿中LDH水平，本發(fā)明呈現(xiàn)抗心肌缺血作用，作用效果優(yōu)于大麻二酚。由此可見(jiàn)，本發(fā)明對(duì)ISO引起的大鼠心肌缺血有顯著的抑制作用，并可減輕缺血心肌的損傷，因此對(duì)心肌缺血有明顯保護(hù)作用。應(yīng)用實(shí)施例8本發(fā)明對(duì)大鼠冠狀動(dòng)脈結(jié)扎所致急性心肌缺血的保護(hù)作用。選取體重180～220gWistar雄性大鼠50只，隨機(jī)平均分成5組，每組10只，即模型對(duì)照組(生理鹽水10ml/kg)、本發(fā)明A、B、C組(20mg/kg)和大麻二酚組(20mg/kg)。所有樣品經(jīng)灌胃給藥，每天1次，連續(xù)2天。于末次給藥后1h，腹腔注射12％水合氯醛3ml/kg進(jìn)行麻醉，記錄正常心電圖，胸部去毛、消毒，沿左鎖骨中線縱行切開(kāi)皮膚約2cm，在第4或第5肋間鈍性分離肌層，打開(kāi)胸腔，剪開(kāi)心包，輕壓右側(cè)胸廓，擠出心臟，在右側(cè)圓錐與左心耳之間冠狀靜脈處結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈后，把心臟放回胸腔，充分排出胸腔內(nèi)空氣，縫合關(guān)閉胸腔，呼吸機(jī)輔助呼吸，頻率20次/分，潮氣量5ml。于結(jié)扎后即刻，1h，24h，48h分別描記一段心電圖，并于24h、48h分別灌胃給藥。在冠脈結(jié)扎50h后，大鼠再次麻醉，腹主動(dòng)脈采血，肝素抗凝，3000轉(zhuǎn)離心10min后采血漿，測(cè)定LDH，并于取血后迅速取出心臟，用生理鹽水沖洗，除去血污，剔除血管、脂肪等非心肌組織，用吸水紙吸去水分，稱(chēng)全心濕重。沿冠狀溝切除心房，留下心室，稱(chēng)重，順?lè)渴覝蠌男募獾叫幕科叫袑⑿氖壹M切成厚約0.1cm的心肌片4片，用生理鹽水沖洗干凈，將心肌片放在0.1％的N-BT溶液中，在37℃水浴條件下染色15min，染色后立即用水沖洗去多余的染料。梗死區(qū)不著色，非梗死區(qū)被N-BT溶液染成藍(lán)色。剪去梗死心肌，稱(chēng)濕重，以梗死區(qū)濕重占全心濕重的百分比表示心肌梗死范圍。各給藥組統(tǒng)計(jì)結(jié)果和模型組比較進(jìn)行t檢驗(yàn)。本發(fā)明對(duì)冠狀動(dòng)脈結(jié)扎致大鼠急性心肌缺血LDH活性單位變化的影響見(jiàn)表9，對(duì)冠狀動(dòng)脈結(jié)扎致大鼠心肌缺血范圍的影響見(jiàn)表10。表9本發(fā)明對(duì)冠狀動(dòng)脈結(jié)扎致大鼠急性心肌缺血模型LDH活性的影響組別劑量(mg/Kg)LDH活性單位(U/L)模型對(duì)照樣-4479±514.5大麻二酚組203563±374.2**本發(fā)明A組203081±413.5**本發(fā)明B組202962±395.6**本發(fā)明C組203302±441.3**注：與模型對(duì)照組比較：**p＜0.01。表10本發(fā)明對(duì)冠狀動(dòng)脈結(jié)扎致大鼠急性心肌缺血模型缺血范圍的影響組別劑量(mg/Kg)心肌梗塞范圍(％)模型對(duì)照樣-20.11±4.63大麻二酚組2013.07±1.13**本發(fā)明A組2010.76±1.85**本發(fā)明B組209.64±1.04**本發(fā)明C組2011.02±3.69**注：與模型對(duì)照組比較：**p＜0.01。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明能顯著降低LDH活性(P＜0.01)和心肌梗塞范圍(P＜0.01)，效果優(yōu)于大麻二酚。由此可見(jiàn)，本發(fā)明灌胃給藥對(duì)冠脈結(jié)扎引起的大鼠心肌缺血有明顯的保護(hù)作用，能顯著降低心肌缺血引起的組織壞死，對(duì)缺血組織有明顯的保護(hù)作用。應(yīng)用實(shí)施例9本發(fā)明消除血中自由基研究選取體重18～22g昆明種小鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分為6組，每組10只，即正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、本發(fā)明A、B、C組(20mg/kg)和大麻二酚組(20mg/kg)。將雌鼠雄鼠分籠飼養(yǎng)。試驗(yàn)期間食物及水供應(yīng)足量。本發(fā)明或滅菌生理鹽水灌胃在試驗(yàn)期間每天進(jìn)行，每天兩次；造型在第四天開(kāi)始，每天一次，共造型6周。各劑量及次數(shù)①正常對(duì)照組：每天頸背部注射生理鹽水0.18mL/只，0.5小時(shí)后滅菌生理鹽水灌胃0.2mL/只。②模型對(duì)照組：頸背部皮下注射2％的D-半乳糖生理鹽水注射液150mg/(kg·天)，0.5小時(shí)后滅菌生理鹽水灌胃0.2mL/只。③本發(fā)明組和大麻二酚組：每天頸背部皮下注射2％的D-半乳糖生理鹽水注射液150mg/(kg·天)，0.5小時(shí)后本發(fā)明灌胃0.2mL/只。完成造模和用藥后以脫臼法處死小白鼠，分別取小鼠的腦、心組織，冰浴中洗凈制備成組織勻漿冷藏備用。將上述勻漿3500r/min離心后，取上清液按照試劑盒說(shuō)明書(shū)的方法分別測(cè)定腦、心組織中的SOD、GSH-PX、MDA。結(jié)果見(jiàn)表11和表12。表11各組小鼠腦組織中SOD、MDA、GSH‐PX的比較注：與正常對(duì)照組對(duì)比，*P＜0.01；與模型對(duì)照組對(duì)比，ΔΔP＜0.01。表12各組小鼠心臟組織中SOD、MDA、GSH‐PX的比較注：與正常對(duì)照組對(duì)比，*P＜0.01；與模型對(duì)照組對(duì)比，ΔΔP＜0.01。由表11、12可知：模型對(duì)照組小鼠腦、心組織中的SOD、GSH-PX及MDA的含量與正常對(duì)照組相比有顯著性差異，說(shuō)明造模成功；本發(fā)明能顯著地提高模型小鼠腦和心臟中的SOD、GSH-PX活性，優(yōu)于大麻二酚；本發(fā)明極顯著地降低腦和心臟組織的MDA水平，優(yōu)于大麻二酚。心腦血管疾病的發(fā)病起因與自由基參與組織損傷有關(guān)，其產(chǎn)物為丙二醛(MDA)等過(guò)氧化脂質(zhì)(LPO)，引起、加重血管內(nèi)皮損傷，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化和血栓形成。研究結(jié)果提示本發(fā)明具有提高SOD和GSH-PX等抗自由基酶活性，清除自由基，保護(hù)心腦血管及組織，預(yù)防和治療心腦血管疾病發(fā)生和發(fā)展的作用。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3