本發(fā)明涉及中藥提取物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種防治痛風(fēng)的中藥組合物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
痛風(fēng)(gout)是嘌呤代謝紊亂和/或尿酸排泄減少所引發(fā)的一種晶體性關(guān)節(jié)炎，臨床表現(xiàn)為高尿酸血癥(hyperuricemia)和尿酸鹽結(jié)晶沉積所致的特征性急、慢性關(guān)節(jié)炎。痛風(fēng)石除在關(guān)節(jié)、肌腱及其周?chē)练e外，還可在腎臟沉積，并可發(fā)生尿酸鹽腎病、尿酸性尿路結(jié)石等，嚴(yán)重者可出腎功能不全。痛風(fēng)的臨床治療以化學(xué)藥為主，如秋水仙堿(colchicine)、非甾類(lèi)抗炎藥(nsaids)、糖皮質(zhì)激素、別嘌醇(allopurinol)等。
中醫(yī)認(rèn)為，痛風(fēng)的病因是由于過(guò)食肥甘，酗酒、過(guò)勞、緊張或感受風(fēng)寒濕熱等邪，致氣血凝滯，痰瘀痹阻，骨節(jié)經(jīng)氣不通而發(fā)病。辨證分型包括：(1)風(fēng)濕熱痹癥狀：足趾關(guān)節(jié)紅腫熱痛，或游走痛，或有發(fā)熱、汗出、煩熱、咽痛。舌紅苔薄，脈弦數(shù)；(2)風(fēng)寒濕痹癥狀：足趾關(guān)節(jié)冷痛而腫，遇寒益劇，得溫則減，局部皮膚微紅或不紅。舌淡紅，苔薄，脈弦緊；(3)痰瘀痼結(jié)癥狀：關(guān)節(jié)刺痛，夜晚加劇，發(fā)作頻繁，伴結(jié)節(jié)，關(guān)節(jié)畸形腫脹，活動(dòng)受限。舌黯紅，或有瘀斑，脈細(xì)弦或澀；(4)脾腎陽(yáng)虛癥狀：面色蒼白，手足不溫，腰隱痛，腿酸軟，遇勞更甚，臥則減輕，夜尿頻多，少氣無(wú)力。舌淡，苔薄白，脈沉細(xì)。痛風(fēng)的中醫(yī)治療以臨床辨證施治為主，中成藥比較少，主要有痛風(fēng)定膠囊、痛風(fēng)舒片等。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的旨在提供一種防治痛風(fēng)的中藥組合物及其制備方法和應(yīng)用。
具體地說(shuō)，本發(fā)明的第一方面是提供了一種防治痛風(fēng)的中藥組合物，它是用下列重量配比的中藥原料制成：
廣金錢(qián)草20～40份、虎杖5～15份、川牛膝5～15份、生地10～30份、廣王不留行殼3～9份、蒼術(shù)5～15份、車(chē)前子10～30份、黃柏3～9份、黃芪8～18份、絡(luò)石藤5～15份、狗脊5～15份。
在一優(yōu)選例中，所述中藥原料的重量配比為：
廣金錢(qián)草30份、虎杖9份、川牛膝9份、生地20份、廣王不留行殼6份、蒼術(shù)9份、 車(chē)前子20份、黃柏6份、黃芪12份、絡(luò)石藤9份、狗脊9份。
本發(fā)明的第二方面是提供了上述中藥組合物的制備方法，它包括下列步驟：
取各原料藥混合，水煎2～3次，每次加水4～20倍量，每次1～3小時(shí)，將煎液濾過(guò)合并即得。
本發(fā)明還提供了上述中藥組合物在制備防治高尿酸血癥的藥物或食品中的應(yīng)用。
本發(fā)明還提供了上述中藥組合物在制備防治痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的藥物或食品中的應(yīng)用。
本發(fā)明還提供了上述中藥組合物在制備具有鎮(zhèn)痛作用的藥物或食品中的應(yīng)用。
本發(fā)明各個(gè)方面的細(xì)節(jié)將在隨后的章節(jié)中得以詳盡描述。通過(guò)下文以及權(quán)利要求的描述，本發(fā)明的特點(diǎn)、目的和優(yōu)勢(shì)將更為明顯。
具體實(shí)施方式
痛風(fēng)的病因是由于過(guò)食肥甘，酗酒、過(guò)勞、緊張或感受風(fēng)寒濕熱等邪，致氣血凝滯，痰瘀痹阻，骨節(jié)經(jīng)氣不通而發(fā)病。方中廣金錢(qián)草清熱利濕，利尿通淋，歸肝、腎、膀胱經(jīng)，引導(dǎo)肥甘濕熱從下而出，川牛膝逐瘀通經(jīng)，通利關(guān)節(jié)，二者共為君藥，共奏本方清熱利濕、逐瘀通絡(luò)之功效；廣王不留行殼活血通絡(luò)，消腫散結(jié)，虎杖清熱利濕，散瘀止痛，可助川牛膝通絡(luò)止痛，黃柏清熱燥濕，瀉火除蒸，車(chē)前子清熱利尿，滲濕止瀉，可助廣金錢(qián)草清熱利尿，增加尿酸排泄，四者共同加強(qiáng)本方利濕通絡(luò)功效，故為臣藥；蒼術(shù)燥濕健脾，祛風(fēng)散寒，可緩解痛風(fēng)患者寒濕痹痛，黃芪益氣利水，消腫托毒，生地滋陰養(yǎng)血，逐血除痹，狗脊祛風(fēng)濕，補(bǔ)肝腎，強(qiáng)腰膝，三者補(bǔ)氣滋陰，養(yǎng)血強(qiáng)腎，既可免除君臣清熱利濕過(guò)甚傷陰之虞，又可補(bǔ)肝腎而除痹痛，數(shù)味共為佐藥；絡(luò)石藤通絡(luò)止痛，清熱消腫，引諸藥通絡(luò)而行為使藥。諸藥合用，共奏本方清熱利濕、逐瘀通絡(luò)、補(bǔ)腎除痹之功效。
本發(fā)明的中藥組合物可以單獨(dú)使用，或者按本領(lǐng)域的常規(guī)方法加入適量輔料制成各種口服制劑如煎膏劑、片劑、口服液等。
本發(fā)明的中藥組合物可通過(guò)如下方法制備，即取各原料藥混合，水煎2～3次，每次加水4～20倍量，每次1～3小時(shí)，將煎液濾過(guò)合并即得。亦可再加入適量輔料，按常規(guī)方法進(jìn)一步制成各種劑型，包括但不限于：顆粒劑、膠囊劑、片劑等制劑。也可以在煎液中加入常規(guī)輔料濃縮后制成口服溶液或膏劑等。除了制成藥劑之外，亦可在本發(fā)明的中藥組合物中加入各種食品原料和抗氧化劑、色素、酶制劑等各種食品添加劑，按本領(lǐng)域的常規(guī)方法制成保健食品。
本發(fā)明各個(gè)方面的細(xì)節(jié)將在隨后的章節(jié)中得以詳盡描述。通過(guò)下文以及權(quán)利要求的描述， 本發(fā)明的特點(diǎn)、目的和優(yōu)勢(shì)將更為明顯。
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說(shuō)明，否則所有的百分?jǐn)?shù)、比率、比例、或份數(shù)按重量計(jì)。
除非另行定義，文中所使用的所有專(zhuān)業(yè)與科學(xué)用語(yǔ)與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明方法中。文中所述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。
本發(fā)明提到的上述特征，或?qū)嵤├岬降奶卣骺梢匀我饨M合。本專(zhuān)利說(shuō)明書(shū)所揭示的所有特征可與任何組合物形式并用，說(shuō)明書(shū)中所揭示的各個(gè)特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特別說(shuō)明，所揭示的特征僅為均等或相似特征的一般性例子。
實(shí)施例1
稱(chēng)取藥材：廣金錢(qián)草30kg、虎杖9kg、川牛膝9kg、生地20kg、廣王不留行殼6kg、蒼術(shù)9kg、車(chē)前子20kg、黃柏6kg、黃芪12kg、絡(luò)石藤9kg、狗脊9kg，加水煎煮3次，第一次加水1400升，煎煮2小時(shí)，第二次加水1100升，煎煮1小時(shí)，第三次加水1100升，煎煮1小時(shí)，合并煎液，濃縮至相對(duì)密度1.1左右，噴霧干燥，得浸膏粉32.5kg。
實(shí)施例2
稱(chēng)取藥材：廣金錢(qián)草20kg、虎杖15kg、川牛膝15kg、生地10kg、廣王不留行殼3kg、蒼術(shù)5kg、車(chē)前子30kg、黃柏9kg、黃芪8kg、絡(luò)石藤15kg、狗脊15kg，加水煎煮2次，第一次加水2900升，煎煮2小時(shí)，第二次加水580升，煎煮1小時(shí)，煎液合并，加入蜂蜜50kg，濃縮至相對(duì)密度1.2～1.4左右，制成煎膏劑。
實(shí)施例3
稱(chēng)取藥材：廣金錢(qián)草40kg、虎杖5kg、川牛膝5kg、生地30kg、廣王不留行殼9kg、蒼術(shù)15kg、車(chē)前子10kg、黃柏3kg、黃芪8kg、絡(luò)石藤5kg、狗脊5kg，加水煎煮2次，第一次加水2000升，煎煮3小時(shí)，第二次加水1000升，煎煮1小時(shí)，煎液合并，濃縮干燥，粉碎成細(xì)粉，加入乳糖8kg，混勻，壓制成片劑100000片。
實(shí)施例4
稱(chēng)取藥材：廣金錢(qián)草27kg、虎杖9kg、川牛膝9kg、生地21kg、廣王不留行殼9kg、蒼術(shù)9kg、車(chē)前子21kg、黃柏6kg、黃芪12kg、絡(luò)石藤9kg、狗脊9kg，加水煎煮2次，第一次加水1500升，煎煮2小時(shí)，第二次加水900升，煎煮1小時(shí)，煎液合并，濃縮至相對(duì)密度1.1左右，過(guò)濾，加入適量口服溶液劑常用添加劑，如蔗糖、甜菊苷等常用矯味劑，以及對(duì)羥基苯甲酸酯、苯甲酸鈉、山梨酸鉀等常用抑菌劑，高壓蒸汽滅菌，制成口服溶液1000000ml。
實(shí)施例5
按本發(fā)明的痛風(fēng)方處方用量取藥材，按實(shí)施例1的方法制備浸膏粉，進(jìn)行藥效學(xué)試驗(yàn)研究。
1.痛風(fēng)方對(duì)小鼠高尿酸血癥的藥效作用
1.1試驗(yàn)?zāi)康?/p>
目前用于高尿酸血癥治療研究的動(dòng)物模型中，氧嗪酸鉀作為抑制尿酸產(chǎn)生的化學(xué)誘導(dǎo)劑建立的高尿酸血癥模型，以其靈敏簡(jiǎn)便、重復(fù)性好，在國(guó)際上被普遍采用。本研究采用氧嗪酸鉀作為抑制尿酸產(chǎn)生的化學(xué)誘導(dǎo)劑建立小鼠高尿酸血癥模型，用以評(píng)價(jià)痛風(fēng)方對(duì)高尿酸血癥的藥效作用。
1.2試驗(yàn)材料
動(dòng)物：
雄性昆明種小鼠(km小鼠)，購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：scxk(滬)2012－0002
試劑：
氧嗪酸鉀：sigma
別嘌醇片，重慶青陽(yáng)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，0.1g*100片/盒。
非布索坦片，加拿大takeda生產(chǎn)，80mg*30片/瓶。
尿酸(uric)試劑盒：beckman公司
黃嘌呤氧化酶(xo)測(cè)定試劑盒，南京建成生物工程研究所。
儀器：
beckmancoulterau480全自動(dòng)生化分析儀；
1.3試驗(yàn)方法
昆明小鼠，按體重隨機(jī)平均分組，每組12只，設(shè)立空白對(duì)照組、高尿酸血癥模型組、別 嘌呤醇陽(yáng)性藥物組、非布索坦片陽(yáng)性藥物組、痛風(fēng)方低中高劑量組。別嘌呤醇陽(yáng)性藥物組灌胃給予別嘌呤醇，劑量為15mg·kg-1；非布索坦陽(yáng)性藥物組給予非布索坦片，劑量為10mg·kg-1。痛風(fēng)方各劑量實(shí)驗(yàn)組灌胃給予各樣品，低劑量2.5g/kg；中劑量5g/kg；高劑量10g/kg。其余各組給予蒸餾水，連續(xù)給藥7d。記錄各組動(dòng)物體重。末次給藥前0.5h腹腔注射氧嗪酸鉀，劑量為300mg·kg-1，空白對(duì)照組腹腔注射0.5％羧甲基纖維素鈉(cmc-na)，1.5h后摘眼球采血，血樣采集后于室溫放置約1h，待血液完全凝固后于3500r·min-1、4℃條件下離心10min，取血清用生化分析儀(beckmancoulterau480)檢測(cè)血清尿酸含量?？焖偃「闻K并于冰浴中勻漿，試劑盒測(cè)定血清和肝臟中黃嘌呤氧化酶(xo)水平。
1.4試驗(yàn)結(jié)果
如表1所示，腹腔注射氧嗪酸鉀導(dǎo)致高尿酸血癥模型小鼠血清尿酸值相比于空白對(duì)照組顯著提高，兩者相比具有極顯著性意義(p<0.01)，顯示造模成功。陽(yáng)性藥物別嘌呤醇和非布索坦均可以顯著降低高尿酸血癥小鼠的尿酸至正常對(duì)照組的水平。痛風(fēng)方中、高劑量組均可降低血清尿酸，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和模型組相比具有顯著(p<0.05)和極顯著性差異(p<0.01)。痛風(fēng)方低劑量組亦具有較低尿酸的趨勢(shì)。痛風(fēng)方低中高劑量組可劑量依賴(lài)性的降低高尿酸血癥模型小鼠的血清尿酸水平。
表1：痛風(fēng)方對(duì)高尿酸血癥模型小鼠血清尿酸的影響
注：與空白對(duì)照比較△△p<0.01；與模型對(duì)照組比較*p＜0.05，**p＜0.01
分別對(duì)各組小鼠的血清和肝臟黃嘌呤氧化酶(xo)活性進(jìn)行檢測(cè)，如表2所示，相比于空表對(duì)照組，腹腔注射了氧嗪酸鉀后，模型組小鼠的血清和肝臟xo活性分別提高65.3％和65.5％，具有極顯著性差異(p<0.01)。陽(yáng)性藥物別嘌呤醇和非布索坦均是xo的抑制劑，陽(yáng)性藥物組小鼠血清和肝臟xo水平均基本降至正常水平。痛風(fēng)方各劑量組也表現(xiàn)出體內(nèi)抑制xo活性的作用，相比于模型組，低中高劑量組分別降低血清xo水平9.8％、15.0％和23.2％，降低肝臟xo水平8.0％、11.2％和18.9％。中高劑量組表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
表2：痛風(fēng)方對(duì)高尿酸模型小鼠的血清黃嘌呤氧化酶(xo)和肝臟xo活性的影響
注：與空白對(duì)照比較△△p<0.01；與模型對(duì)照組比較*p＜0.05，**p＜0.01
通過(guò)應(yīng)用氧嗪酸鉀誘導(dǎo)的高尿酸血癥小鼠模型，研究了痛風(fēng)方對(duì)高尿酸血癥的藥效作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，痛風(fēng)方可劑量依賴(lài)性的降低高尿酸血癥小鼠的血清尿酸水平，降低血清和肝臟黃嘌呤氧化酶活性。
2.痛風(fēng)方對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型大鼠的藥效作用
2.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>
臨床約90％以上的病人會(huì)由于高尿酸血癥引發(fā)急慢性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎，其原因是血清尿酸水平高于其飽和濃度，關(guān)節(jié)會(huì)出現(xiàn)慢性尿酸鈉結(jié)晶沉積，誘發(fā)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎。
本實(shí)驗(yàn)采用大鼠尿酸鈉結(jié)晶急性足跖腫脹模型，考察痛風(fēng)方對(duì)尿酸鈉導(dǎo)致的大鼠足跖腫脹的抑制，及對(duì)相關(guān)炎癥因子和細(xì)胞因子的影響，以評(píng)價(jià)痛風(fēng)方抗痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎作用。
2.2試驗(yàn)材料
痛風(fēng)方浸膏粉真空密封包裝，4℃冷藏保存。
動(dòng)物：sd大鼠，由上海slac有限公司提供。合格證號(hào)：scxk(滬)2012-0002。
吲哚美辛：白色粉劑，sigma出品，批號(hào)：26h0807。稱(chēng)取吲哚美辛75mg，置研缽。研磨成細(xì)粉后，加0.5％cmc研磨混勻。轉(zhuǎn)移至量筒，加0.5％cmc至22.48ml。配成濃度為6.667mg/ml混懸液備用。
yls-7b足趾容積測(cè)量?jī)x：淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司出品。
2.3試驗(yàn)方法
2.3.1尿酸鈉結(jié)晶及尿酸鈉溶液的制備
194ml蒸餾水加6ml1mnaoh，煮沸，加1g尿酸，用1nhc1調(diào)ph至7.2，攪拌冷卻，4℃冰箱保存24h，去上清，用濾紙將沉淀物水分吸干，放入70℃干燥箱烘2h，取出，刮下粉末，放入研缽內(nèi)研成細(xì)末，用孔徑250um的金屬篩過(guò)篩，裝瓶備用。取500mg尿酸鈉晶 體加18ml生理鹽水，再加2ml吐溫80，加熱攪拌，配制成20ml尿酸鈉溶液。
2.3.2尿酸鈉結(jié)晶誘導(dǎo)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型
60只雄性sd大鼠(240-260g)分為正常對(duì)照組、模型組、吲哚美辛組(5mg/kg)和痛風(fēng)方低中高三個(gè)劑量組(1.25、2.5、5g/kg)共6組，每組10只。造模前2天開(kāi)始灌胃給予受試物，每日1次。模型組、正常組大鼠以同體積純凈水灌胃。試驗(yàn)當(dāng)日灌胃給予受試物1h后用6號(hào)注射針在受試大鼠右后肢脛跗骨關(guān)節(jié)背側(cè)45°角方向插入脛骨前面肌腱內(nèi)側(cè)，將0.2ml(25mg/ml)尿酸鈉結(jié)晶(msu)混懸液注入踝關(guān)節(jié)腔，致急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎。正常組大鼠用無(wú)菌生理鹽水代替msu混懸液。每天記錄大鼠體重。
2.3.3關(guān)節(jié)腫脹度測(cè)量
各組大鼠在造模前、造模后4h、8h、12h、24h、48h、72h分別測(cè)試受試足趾容積。以致炎前后足趾容積之差為腫脹率，進(jìn)行組間差異性比較。
vn、vt分別代表致炎前后足趾容積值
2.3.4大鼠步態(tài)分級(jí)：造模24h后按coderre等(1988)的方法觀察大鼠步態(tài)，0級(jí)：正常行走；1級(jí)：輕微跛行，受試下肢略有彎曲；2級(jí)：中度跛行，受試下肢剛觸及地面；3級(jí)：重度跛行，受試下肢離開(kāi)地面，三足著地行走。
2.3.5腫脹組織(踝關(guān)節(jié))炎癥因子、細(xì)胞因子和外周疼痛介質(zhì)的測(cè)定：末次給藥1h后，水合氯醛麻醉大鼠，快速在大鼠右踝關(guān)節(jié)上方0.5cm處剪斷，剪去足爪。稱(chēng)重，在盛有5ml生理鹽水的燒杯中剝?nèi)テつw，剪開(kāi)關(guān)節(jié)周?chē)M織，將液體和組織一同移至試管，振蕩10min，浸泡1h，4500rpm離心5min，然后4℃離心，取上清液分成兩份，-20℃保存。用于il-1β、il-6、il-8、tnf-α和pge2的elisa測(cè)定。
2.3.6痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)周軟組織的病理學(xué)觀察：造模48h后快速取下大鼠受試關(guān)節(jié)及周?chē)浗M織，稱(chēng)重，用10％福爾馬林固定，切片，he染色，觀察關(guān)周軟組織的病理學(xué)變化。
2.4試驗(yàn)結(jié)果
2.4.1痛風(fēng)方對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎步態(tài)及關(guān)節(jié)腫脹度的影響
觀察各組大鼠在造模后的步態(tài)變化，模型組大鼠踝關(guān)節(jié)腔注入尿酸鈉結(jié)晶后出現(xiàn)活動(dòng)減少，右后肢經(jīng)常抬起，彎曲，三足著地行走。與模型組相比，痛風(fēng)方高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照藥吲哚美辛組大鼠步態(tài)明顯好轉(zhuǎn)，造模48h時(shí)表現(xiàn)為受試下肢略有彎曲，輕微跛行。痛風(fēng)方中劑量組大鼠表現(xiàn)為中度跛行，受試下肢剛觸及地面。痛風(fēng)方低劑量組大鼠步態(tài)并無(wú)明顯好轉(zhuǎn)。
各組動(dòng)物的體重、給藥前足趾體積無(wú)顯著差別。從足趾腫脹率看，后足皮下注射滅菌生 理鹽水僅使足趾體積發(fā)生微量改變。注射msu后，大鼠足趾在48h內(nèi)持續(xù)腫脹。給藥48h時(shí)，體積增加約35％。痛風(fēng)方具有抑制足趾腫脹的作用。低劑量組在給藥后的第24h，足趾腫脹率顯著小于造模組；中劑量組在給藥的第8h，足趾腫脹率顯著小于造模組；而高劑量組在觀察的所有時(shí)間內(nèi)足趾腫脹率均顯著小于造模組，其作用與8mg/kg吲哚美辛相當(dāng)。痛風(fēng)方的作用具有明顯的量效關(guān)系。陽(yáng)性藥吲哚美辛也顯著抑制足趾腫脹。見(jiàn)下表。
表3：痛風(fēng)方對(duì)msu引起大鼠足趾腫脹的作用
*p<0.05；**p<0.01,與模型組比較
2.4.2痛風(fēng)方對(duì)腫脹組織中炎癥因子與細(xì)胞因子的影響
如表4所示，與正常對(duì)照組相比，模型組大鼠關(guān)節(jié)及關(guān)節(jié)周?chē)[脹組織中多種炎癥因子和細(xì)胞因子如白細(xì)胞介素-1β(il-1β)、白細(xì)胞介素-6(il-6)、白細(xì)胞介素-8(il-8)、腫瘤壞死因子-α(tnf-α)和前列腺素e2(pge2)水平均出現(xiàn)了顯著升高(p<0.01)。與模型組相比，痛風(fēng)方能顯著降低痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)及關(guān)節(jié)周?chē)[脹組織中所有測(cè)定的炎癥因子和細(xì)胞因子的水平(p<0.01或p<0.05)，且呈劑量依賴(lài)關(guān)系。
在所有受試物中，陽(yáng)性對(duì)照藥吲哚美辛降低腫脹組織中il-1β和il-6的能力是最強(qiáng)的，降幅分別為47.1％和81.8％；但在降低腫脹組織中il.8、tnf-α和pge2方面，與高劑量痛風(fēng)方的降低幅度相近，均沒(méi)有顯著差異(p>0.05)。這說(shuō)明痛風(fēng)方具有良好的抑制急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)及關(guān)節(jié)周?chē)[脹組織中炎癥因子和細(xì)胞因子的能力，在一定程度上與陽(yáng)性對(duì)照藥吲哚美辛相近，顯示其在抗炎方面活性。
表4：對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)及其周?chē)[脹組織中炎癥因子與細(xì)胞因子的影響
*p<0.05；**p<0.01,與模型組比較
2.5試驗(yàn)小結(jié)
對(duì)大鼠關(guān)節(jié)處注射msu引起的足趾腫脹，造成痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型。痛風(fēng)方具有劑量依賴(lài)性抑制作用。藥物劑量越大，其作用強(qiáng)度越大，起效越快，維持時(shí)間越長(zhǎng)。痛風(fēng)方也可劑量依賴(lài)性的抑制痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)及關(guān)節(jié)周?chē)[脹組織中炎癥因子和細(xì)胞因子。以上實(shí)驗(yàn)證實(shí)，痛風(fēng)方具有抑制痛風(fēng)性炎癥的藥效作用。
3.痛風(fēng)方鎮(zhèn)痛效應(yīng)研究
3.1小鼠熱板鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)
熱板法是國(guó)內(nèi)外常用的篩選鎮(zhèn)痛藥的方法，該實(shí)驗(yàn)用事先加熱到55度的熱板鎮(zhèn)痛儀。以踢腿、舔后足、跳躍等作為痛反應(yīng)的指標(biāo)。其中舔后足常常作為一種急性不適的異?；顒?dòng)，因此多選作為“疼痛”反應(yīng)的指標(biāo)，鎮(zhèn)痛藥可以明顯推遲舔后足的時(shí)間。本次實(shí)驗(yàn)依據(jù)經(jīng)典的小鼠熱板法(由徐叔云主編的《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》第二版(人民衛(wèi)生出版社，1991年)對(duì)藥物進(jìn)行鎮(zhèn)痛效應(yīng)的評(píng)價(jià)。
3.1.1材料與方法
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：昆明種小鼠(雌性，18-22g)，中科院上海動(dòng)物中心提供。
熱板鎮(zhèn)痛儀：浙江寧海白石電子醫(yī)藥儀器廠生產(chǎn)，型號(hào)為gj-8402。
實(shí)驗(yàn)方法：
1)稱(chēng)取一定量痛風(fēng)方，充分溶解于生理鹽水中，配成合適的濃度痛風(fēng)方溶液。實(shí)驗(yàn)設(shè)對(duì)照組及痛風(fēng)方高、中、低劑量組(10g/kg，5g/kg，2.5g/kg)，口服給藥。
2)正常小鼠挑選：實(shí)驗(yàn)室溫度控制在22度左右，測(cè)痛儀熱板溫度調(diào)節(jié)至55度，記錄小鼠自投入熱板至出現(xiàn)舔后足時(shí)間作為該小鼠的痛域值，共測(cè)2次，每次間隔20分鐘，以平均值不超過(guò)30秒為合格小鼠。
3)實(shí)驗(yàn)組小鼠：將合格小鼠隨機(jī)分組，每組10只。皮下給藥。各組均在給藥后0.5h、1.0h、1.5h、2.0h、2.5h、3.0h測(cè)定小鼠痛反應(yīng)時(shí)間一次，記錄小鼠自投入熱板至出現(xiàn)舔后足時(shí)間，超過(guò)1分鐘認(rèn)為該藥有效。
3.1.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
表5：痛風(fēng)方低劑量組小鼠的痛閾
表6：痛風(fēng)方中劑量組小鼠的痛閾
表7：痛風(fēng)方高劑量組小鼠的痛閾
從以上結(jié)果可知，痛風(fēng)方低劑量組中12個(gè)小鼠中2個(gè)有鎮(zhèn)痛作用；中劑量組中12個(gè)小鼠中 7個(gè)有鎮(zhèn)痛作用；高劑量組中12個(gè)小鼠中10個(gè)有鎮(zhèn)痛作用。痛風(fēng)方作用高峰在1-1.5小時(shí)，3小時(shí)左右大部分小鼠恢復(fù)正常。
以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，痛風(fēng)方在熱板鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)中有鎮(zhèn)痛作用。
3.2小鼠醋酸扭體實(shí)驗(yàn)
許多外源性的化學(xué)物質(zhì)接觸到完整的皮膚和粘膜時(shí)，即能引起疼痛。因此，將某些化學(xué)刺激物涂布于開(kāi)口的皮泡基部暴露的神經(jīng)末梢或注入動(dòng)脈、靜脈或腹腔內(nèi)，均可造成疼痛模型，作為研究疼痛生理及篩選鎮(zhèn)痛藥物的方法。醋酸溶液即是一種有效的鎮(zhèn)痛溶液，將醋酸溶液注入小白鼠腹腔內(nèi)，引起深部的、大面積而較持久的疼痛刺激，致使小白鼠產(chǎn)生“歪扭”反應(yīng)(腹部?jī)?nèi)凹、軀干與后腿伸張、臀部高起)。鎮(zhèn)痛藥有抑制作用，可明顯的減少發(fā)生“歪扭”反應(yīng)的小白鼠數(shù)。
3.2.1材料與方法
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：昆明種小鼠48只，雌雄各半，由中國(guó)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，體重為18-20g。昆明小鼠按需要隨機(jī)分為4組，每組12只。
實(shí)驗(yàn)方法：
稱(chēng)取一定量痛風(fēng)方，使之充分溶解于生理鹽水中，配成合適濃度的痛風(fēng)方溶液。
實(shí)驗(yàn)設(shè)對(duì)照組及痛風(fēng)方低、中、高劑量組(2.5g/kg、5g/kg、10g/kg)，每組小鼠分別口服灌胃生理鹽水或不同劑量的痛風(fēng)方溶液，60min后腹腔給予0.6％冰醋酸溶液(10ml/kg,ip)，記錄15min內(nèi)小鼠扭體次數(shù)，并按下列公式計(jì)算痛風(fēng)方的鎮(zhèn)痛能力。
鎮(zhèn)痛能力(％)＝100％×(對(duì)照組扭體次數(shù)-給藥組扭體次數(shù))/對(duì)照組扭體次數(shù)。
3.2.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果
在小鼠醋酸扭體實(shí)驗(yàn)中，痛風(fēng)方表現(xiàn)出鎮(zhèn)痛能力，鎮(zhèn)痛能力隨痛風(fēng)方劑量增加而增加。當(dāng)痛風(fēng)方低劑量時(shí)，鎮(zhèn)痛能力為31.15±6.30％；當(dāng)痛風(fēng)方中劑量時(shí)，鎮(zhèn)痛能力為55.14±2.75％；當(dāng)痛風(fēng)方高劑量時(shí)，鎮(zhèn)痛能力為71.65±2.88％。
表8：痛風(fēng)方對(duì)小鼠扭體試驗(yàn)的鎮(zhèn)痛能力
3.3研究小結(jié)
本實(shí)驗(yàn)選用經(jīng)典的小鼠熱板鎮(zhèn)痛模型和小鼠醋酸扭體模型，對(duì)痛風(fēng)方的鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行了相關(guān)研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明痛風(fēng)方在低、中、高劑量時(shí)對(duì)熱板鎮(zhèn)痛模型的鎮(zhèn)痛陽(yáng)性率分別為2/12、7/12、10/12；對(duì)小鼠醋酸扭體模型的鎮(zhèn)痛能力分別為31.15±6.30％、55.14±2.75％和71.65±2.88％。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，痛風(fēng)方具有一定的鎮(zhèn)痛作用。
本發(fā)明所涉及的多個(gè)方面已做如上闡述。然而，應(yīng)理解的是，在不偏離本發(fā)明精神之前提下，本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員可對(duì)其進(jìn)行等同改變和修飾，所述改變和修飾同樣落入本申請(qǐng)所附權(quán)利要求的覆蓋范圍。