本發(fā)明涉及2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate的結(jié)構(gòu)、制備方法，以及2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate在制備治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoidarthritis，ra)是以對(duì)稱(chēng)性多關(guān)節(jié)炎為主要臨床表現(xiàn)的異質(zhì)性、系統(tǒng)性、自身免疫性疾病，是在環(huán)境因素、遺傳背景以及兩者交互作用下，高度異質(zhì)性的自身免疫性疾病。ra是造成人類(lèi)喪失勞動(dòng)能力和致殘的主要原因之一，全世界平均發(fā)病率為0.2％～1.2％，我國(guó)患病率為0.2％～0.93％。ra患者的治療需要長(zhǎng)期服藥以控制病程并改善癥狀，治療成本高、社會(huì)負(fù)擔(dān)重。目前臨床用于治療ra的藥物主要有非甾體抗炎藥(non-steroidalanti-inflammatorydrugs，nsaids)、糖皮質(zhì)激素、改變病情抗風(fēng)濕藥、生物制劑與植物藥制劑等，雖然具有一定的療效，卻大都有較強(qiáng)的毒副作用，這與需要長(zhǎng)期服藥的理想抗類(lèi)風(fēng)濕藥物尚存較大差距。因此更安全、更高效的具有抗ra活性的化合物，在研制ra治療藥物方面，具有重大價(jià)值。

本發(fā)明所涉及的化合物2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate是本發(fā)明申請(qǐng)人從傳統(tǒng)中藥珍珠梅sorbariasorbifolia(l.)a.brown.中純化制備的一個(gè)新化合物，研究發(fā)現(xiàn)該化合物具有明顯的抗ra活性，具有新型抗ra藥物開(kāi)發(fā)的價(jià)值。該化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、制備方法及其抗ra活性均為首次公開(kāi)，因此具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供一種新化合物的制備方法，及其在制備治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明所涉及的用于制備類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的化合物為2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate，其化學(xué)式是：c20h23no9，結(jié)構(gòu)式是：

本發(fā)明所涉及的2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate的制備方法為：

取珍珠梅藥材，粉碎成最粗粉，加入20倍量的適當(dāng)濃度的有機(jī)醇水溶液作提取溶劑，浸泡提取1～3次，每次10小時(shí)左右，合并提取液，過(guò)濾，脫醇濃縮至有機(jī)醇濃度20％左右，加樣于大孔吸附樹(shù)脂柱，先用20％左右有機(jī)醇水溶液洗脫5個(gè)柱體積去除雜質(zhì)，再用50～95％ 有機(jī)醇洗脫4個(gè)柱體積，收集50～95％有機(jī)醇洗脫部分，減壓干燥后上100～200目的硅膠柱，選擇合適的硅膠層析洗脫體系進(jìn)行洗脫，收集含2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate的洗脫部位，濃縮，結(jié)晶，過(guò)濾，即得到2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate粗晶。粗晶溶于重結(jié)晶溶劑后形成過(guò)飽和溶液，重結(jié)晶，可得純度達(dá)98％以上的2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate樣品。

本工藝中所涉及的用作提取溶劑的有機(jī)醇，為甲醇、乙醇中的一種，優(yōu)選為乙醇。

本工藝中所涉及的大孔吸附樹(shù)脂柱，為弱極性或非極性的大孔吸附樹(shù)脂，優(yōu)選弱極性。

本工藝中所涉及的硅膠層析洗脫體系，為二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇、石油醚中的一種或幾種，優(yōu)選二氯甲烷-甲醇體系。

本工藝中所涉及的重結(jié)晶溶劑，可用甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿等溶劑中的一種或幾種，優(yōu)選甲醇或乙酸乙酯。

本發(fā)明還提供了該化合物在制備治療抗風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明涉及的化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)、制備方法及其抗類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的活性，均為首次公開(kāi)，不存在由其他化合物給出任何啟示的可能，具備突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)，且有望用于一種新型抗類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療藥物的開(kāi)發(fā)。

附圖說(shuō)明

圖1是2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate正離子質(zhì)譜圖(hr-esi-ms)。

圖2是2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate紫外光譜圖(溶劑：cd3od)。

圖3是2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate¹hnmr譜圖(溶劑：cd3od)。

圖4是2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate¹³cnmr譜(溶劑：cd3od)。

圖5是2s-cardiospermin-5-cis-p-coumaratedept譜(溶劑：cd3od)。

圖6是2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate¹h-¹hcosy譜(溶劑：cd3od)。

圖7是2s-cardiospermin-5-cis-p-coumaratehmqc譜(溶劑：cd3od)。

圖8是2s-cardiospermin-5-cis-p-coumaratehmbc譜(溶劑：cd3od)。

具體實(shí)施方式

下面的實(shí)施例用以解釋本發(fā)明，但是并非對(duì)本發(fā)明實(shí)質(zhì)內(nèi)容的限制。

實(shí)施例1.2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate的制備

取珍珠梅藥材，粉碎成最粗粉，加入20倍量95％乙醇，浸泡提取1～3次，每次10小時(shí)左右，合并提取液，過(guò)濾，脫醇濃縮至乙醇濃度20％左右，加樣于ab-8型弱極性大孔吸附樹(shù)脂柱，先用20％的乙醇溶液洗脫5個(gè)柱體積去除雜質(zhì)，再用95％乙醇洗脫4個(gè)柱體積，收 集95％乙醇洗脫部分，減壓干燥后上100～200目的硅膠柱，以二氯甲烷-甲醇為洗脫體系，按甲醇濃度由低到高進(jìn)行階段洗脫，收集甲醇濃度10～20％的洗脫部分，濃縮，結(jié)晶，過(guò)濾，減壓干燥，得到2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate粗晶。將粗晶溶于乙酸乙酯，形成過(guò)飽和溶液進(jìn)行重結(jié)晶，過(guò)濾，減壓干燥，即得。

實(shí)施例2.2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate的制備

取珍珠梅藥材，粉碎成最粗粉，加入20倍量甲醇，浸泡提取1～3次，每次10小時(shí)左右，合并提取液，過(guò)濾，脫醇濃縮至適當(dāng)體積，補(bǔ)水至醇濃度20％左右，加樣于d-101型非極性大孔吸附樹(shù)脂柱，先用20％的甲醇溶液洗脫5個(gè)柱體積去除雜質(zhì)，再用90％甲醇洗脫4個(gè)柱體積，收集90％甲醇洗脫部分，減壓干燥后上100～200目的硅膠柱，以二氯甲烷-甲醇為洗脫體系，按甲醇濃度由低到高進(jìn)行階段洗脫，收集甲醇濃度10～20％的洗脫部分，濃縮，結(jié)晶，過(guò)濾，減壓干燥，即得到2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate粗晶。將粗晶溶于乙酸乙酯，形成過(guò)飽和溶液進(jìn)行重結(jié)晶，過(guò)濾，減壓干燥，即得。

實(shí)施例3.2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate的結(jié)構(gòu)確證

1.儀器與材料

jascop-1020數(shù)字式旋光儀，agilenttof/6500高分辨率質(zhì)譜，島津uv-2401型可見(jiàn)-紫外分光光度計(jì)，核磁為brukeavanceiii500nmrspectrometer，熔點(diǎn)測(cè)定儀為yanacomp53型(熔點(diǎn)未校正)。2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate樣品為按上述實(shí)施例1步驟制備。

2.化合物結(jié)構(gòu)鑒定

無(wú)色粘稠油狀物(甲醇),易溶于二甲亞砜、甲醇，微溶于乙酸乙酯、丙酮、氯仿、水，不溶于石油醚，正離子esi-msm/z：444[m+na]⁺，865[2m+na]⁺；負(fù)離子esi-msm/z：420[m-h]^-，456[m+cl]^-，841[2m-h]^-。正離子hr-esi-msm/z：實(shí)測(cè)值444.1264[m+na]⁺，計(jì)算值444.1271(c20h23no9na[m+na]⁺)；負(fù)離子hr-esi-msm/z：實(shí)測(cè)值420.1299[m-h]^-，計(jì)算值420.1295(c20h22no9[m-h]^-)。uvλmaxnm(logε)inmeoh：312(3.42)，226(sh)，211(3.35)。¹h-nmr(500hz,cd3od)δ：7.66(2h,brd,j＝8.7hz,h-5',9')，6.93(1h,d,j＝12.8hz,h-3')，6.78(2h,brd,j＝8.7hz,h-6',8')，5.85(1h,d,j＝12.8hz,h-2')，5.68(1h,brs,ha-4)，5.55(1h,brs,h-2)，5.48(1h,brs,hb-4)，4.82(1h,brd,j＝13.9hz,ha-5)，4.79(1h,brd,j＝13.9hz,hb-5)，4.57(1h,d,j＝7.7hz,h-1”)，3.90(1h,dd,j＝12.0,2.1hz,ha-6”)，3.67(1h,dd,j＝12.0,6.1hz,hb-6”)，3.43(1h,t,j＝9.2hz,h-3”)，3.37(1h,ddd,j＝9.8,6.1,2.1hz,h-5”)，3.30(1h,dd,j＝9.8,9.2hz,h-4”)，3.26(1h,dd,j＝9.2,7.7hz,h-2”)。¹³c-nmr(125hz,cd3od)δ：167.4(s,c-1')，160.1(s,c-7')，146.0(d,c-3')，138.7(s,c-3)，133.7(d,c-5',9')，127.5(s,c-4')，119.1(t,c-4)，117.2(s,c-1)，116.0(s,c-2')，115.8 (d,c-6',8')，102.0(d,c-1”)，78.4(d,c-5”)，77.7(d,c-3”)，74.5(d,c-2”)，71.3(d,c-4”)，67.5(d,c-2)，63.8(t,c-5)，62.6(t,c-6”)。以上nmr數(shù)據(jù)根據(jù)dept譜以及¹h-¹hcosy、hmqc和hmbc等二維譜數(shù)據(jù)解析結(jié)果予以歸屬。經(jīng)過(guò)與2s-cardiospermin-5-p-hydroxybenzoate的碳譜數(shù)據(jù)和cd譜進(jìn)行對(duì)比，確定該化合物c-2的絕對(duì)構(gòu)型為s。據(jù)此推斷該化合物結(jié)構(gòu)為：

實(shí)施例4.2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate片劑的制備

取2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate10克，加入適量95％乙醇，形成浸膏，然后加入環(huán)糊精或多孔淀粉，混勻，形成軟材，造粒機(jī)造粒，真空干燥，整粒，然后加入潤(rùn)滑劑、矯味劑混合壓片，片重250mg～500mg,每片含2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate5～10mg。

實(shí)施例5.2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate膠囊劑的制備

取2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate10克，加入淀粉、羧甲基纖維素鈉，混勻，灌裝膠囊，即得。每粒膠囊重含2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate5～10mg。

實(shí)施例6.2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate對(duì)佐劑關(guān)節(jié)炎大鼠血清中peg2與no水平的影響

1.儀器與材料

ex1800型酶聯(lián)免疫分析儀(biotek)；uv-2450型分光光度計(jì)(日本島津)?？ń槊纾虾Ｉ镏破费芯克?；羊毛脂、石蠟油、no試劑盒、前列腺素e2(pge2)試劑盒，購(gòu)于南京建成試劑公司；雷公藤多苷片，上海復(fù)旦復(fù)華藥業(yè)產(chǎn)品，批號(hào)141001。wistar大鼠，spf級(jí)，雌性，體質(zhì)量120～150g，由山東綠葉制藥實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2.建模與給藥

將大鼠隨機(jī)分為4組(每組8只)，分別為對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照雷公藤多苷片組、模型組及2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate組。對(duì)照組大鼠右后足跖皮內(nèi)注射生理鹽水，其他各組右后足跖皮內(nèi)注射弗氏完全佐劑(每10mg卡介苗溶解于1ml石蠟油中，混勻后高壓滅菌)0.1ml，記錄大鼠左后足踝關(guān)節(jié)的周長(zhǎng)。各給藥組于造模后第9天開(kāi)始ig給藥，氰苷組與雷公藤多苷均按10mg/kg給藥，模型組和對(duì)照組給予等量生理鹽水，各組連續(xù)給藥13d。

3.指標(biāo)檢測(cè)

末次給藥(造模后第21天)lh后心臟采血、取血清，-20℃保存，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)分別測(cè)量血清中no和pge2的量。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1.2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate對(duì)佐劑關(guān)節(jié)炎大鼠血清中peg2與no水平的影響

4.結(jié)論：2s-cardiospermin-5-cis-p-coumarate可顯著抑制佐劑關(guān)節(jié)炎大鼠血清中peg2與no的水平，且其活性強(qiáng)于同等劑量的雷公藤多苷，可以用來(lái)制備治療抗類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥物。

以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實(shí)施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。