醫(yī)學(xué)組織工程學(xué)。
背景技術(shù)：
瓣膜置換術(shù)是治療嚴(yán)重心臟瓣膜疾病的有效手段，目前臨床使用的生物瓣膜多為戊二醛處理的豬生物瓣和牛心包瓣，因其具有良好的血流動(dòng)力學(xué)特性，組織相容性好，抗凝時(shí)間短，可減少血栓栓塞或出血并發(fā)癥及長(zhǎng)期口服抗凝藥帶來的不便，在臨床上應(yīng)用日益廣泛。然而，與之相隨的是老化衰敗及鈣化問題，大大制約了其遠(yuǎn)期效益。組織工程的興起為心血管補(bǔ)片、人工心臟瓣膜的研制提供了新的思路。
正常牛心包的中層是由細(xì)胞、基質(zhì)、纖維三部分組成。纖維是維持牛心包生物力學(xué)特性的主要因素，細(xì)胞存在于纖維空隙中，其周圍借基質(zhì)成份與纖維形成連接?；|(zhì)在這里指細(xì)胞和纖維以外的結(jié)構(gòu)，主要由蛋白多糖和糖蛋白組成。經(jīng)過對(duì)牛心包組織結(jié)構(gòu)的深入研究，結(jié)果證實(shí)導(dǎo)致臨床上常用戊二醛處理的牛心包瓣膜植入體內(nèi)產(chǎn)生排異反應(yīng)、鈣化、血栓形成和力學(xué)性能不滿意的原因如下：1.傳統(tǒng)的戊二醛固定方法雖能一定程度上能降低免疫源性，但仍有異種細(xì)胞成分殘留，具有細(xì)胞毒性，可誘發(fā)免疫排異反應(yīng)的發(fā)生，進(jìn)一步引起組織鈣化、衰?。?，中層空隙較小，機(jī)體細(xì)胞難以長(zhǎng)入，并且誘發(fā)排斥反應(yīng)的表位暴露；3，殘留的醛基有細(xì)胞毒性，機(jī)體的細(xì)胞很難在戊二醛處理后的牛心包內(nèi)存活有，再生能力較低。為有效解決上述問題，我們?cè)谌ゼ?xì)胞基礎(chǔ)上再行類基質(zhì)填充、交聯(lián)，形成“嵌合型”組織工程牛心包片。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
嵌合型組織工程牛心包片，可作為制備人工心臟生物瓣膜的理想材料。
附圖說明圖1：一種嵌合型組織工程牛心包片結(jié)構(gòu)示意圖（脫細(xì)胞-類基質(zhì)填充-交聯(lián)示意圖）
具體實(shí)施方式采用tritonx-100＋脫氧膽酸鈉鹽＋edta去細(xì)胞方法，在徹底去除組織中細(xì)胞的同時(shí)也能夠最大程度地去除組織中的基質(zhì)成份，僅保留牛心包片內(nèi)的膠原纖維、彈力纖維，維持肺動(dòng)脈支架的完整性，然后用類基質(zhì)明膠進(jìn)行填充，最后用edc/nhs交聯(lián)，得到“嵌合型”組織工程牛心包片。
基本步驟：將新鮮牛心包片充分修剪后，置于0.25%tritonx-100+0.25%脫氧膽酸鈉鹽+0.02%edta的去細(xì)胞溶液中，恒溫恒速（37℃，200r/min）振蕩24小時(shí)去細(xì)胞處理；去細(xì)胞結(jié)束后置于1%青鏈霉素+2ug/ml兩性霉素b的滅菌pbs中，恒溫恒速（37℃，200r/min）振蕩24小時(shí)充分漂洗，每4小時(shí)換液一次；將去細(xì)胞的牛心包片逐級(jí)降溫-80℃凍存，然后置于冷凍干燥機(jī)中脫水處理24小時(shí)；將脫水處理后的牛心包片置于經(jīng)紫外線照射滅菌的2%的明膠溶液中，恒溫恒速（37℃，200r/min）振蕩24小時(shí)，然后將明膠嵌合的牛心包片置于1%青鏈霉素+2ug/ml兩性霉素b的滅菌pbs中，逐級(jí)降溫至-80℃凍存，然后置于冷凍干燥機(jī)中脫水處理24小時(shí)；將脫水處理后的牛心包片置于edc+nhs中，4℃下靜置交聯(lián)24小時(shí)，然后用0.1mol/l磷酸氫鈉清洗2小時(shí)，終止交聯(lián)，最后用滅菌pbs溶液充分漂洗，得到“嵌合型”組織工程牛心包片。